岡 山 医 誌 (1993) 105, 475∼487
甲状 腺腫瘍 の核DNA量
と
生物 学的 悪性 度 に関す る研 究
岡 山 大 学 医 学 部 第 二 外 科 学 教 室(指 導:寺 本 滋 教 授) 小 野 田 裕 士 (平 成5年2月18日 受 稿) Key words:甲 状 腺 癌,フ ロ ー サ イ トメ ト リー,生 物 学 的 悪 性 度, プ ロ イ デ ィパ ター ン,増 殖 期 細 胞 緒 言 従 来 よ り腫 瘍 の 良 悪 性 の 鑑 別,悪 性 度 の 解 析 は病 理 組 織 学 的 な 形 態 学 的 検 索 に よ っ て 行 わ れ て き た.し か し,一 般 に 予 後 良 好 な 甲 状 腺 分 化 癌 の 中 に も,組 織 型 や 組 織 学 的 進 行 度 か ち 推 測 さ れ る 臨 床 経 過 と異 な り,速 く進 行 し不 幸 な 転 帰 を た ど る症 例 が み られ る.ま た,形 態 学 的 に 濾 胞 癌 と 濾 胞 腺 腫 の 鑑 別 が 困 難 な 症 例 も存 在 す る.こ の よ う な 点 を考 慮 す る と,甲 状 腺 癌,特 に分 化 癌 の 生 物 学 的 悪 性 度 を 判 定 す る 場 合,病 理 組 織 学 的 所 見 の み で は 困 難 と考 え ち れ る. 一 方,近 年Flow cytometry(以 下FCM) に よ る核DNA量 の 測 定 が種 々 の 腫 瘍 に つ い て 行 わ れ,腫 瘍 細 胞 の 診 断 や 悪 性 度 な ど の 観 点 か ら研 究 が 進 め られ て い る1)-9).甲状 腺 腫 瘍 に 関 す る報 告10)-20)も 散 見 さ れ る が,良 悪 性 の 鑑 別,予 後 判 定 な ど生 物 学 的 悪 性 度 の 指 標 と し て の 有 用 性 に 関 す る結 果 は 必 ず し も一 定 し て い な い. そ こで 今 回 著 者 は,甲 状 腺 分 化 癌 の核DNA量 と生 物 学 的 悪 性 度 の 関 連 を知 る 目 的 で,甲 状 腺 分 化 癌 を 中心 に 各 種 甲状 腺 腫 瘍 の 核DNA量 を FCMに よ り測 定 し,臨 床 病 理 学 的 諸 因 子 及 び 予 後 との 関 連 を 検 討 した. 対 象 と 方 法 1. 対 象 1971年 ∼1991年 ま で に 岡 山 大 学 医 学 部 第 二 外 科 で 手 術 され た 甲 状 腺 腫 瘍 初 回手 術 症 例 の う ち 80例 を 対 象 と し た.甲 状 腺 腫 瘍 の 内 訳 は,濾 胞 腺 腫11例,乳 頭 癌42例,濾 胞 癌18例,未 分 化 癌 6例,髄 様 癌3例 で あ っ た(表1). 表1 対 象 2. 方 法 1) 試 料 の 作 製 法 試 料 の 作 製 は切 除標 本 の パ ラ フ ィ ン 包 埋 組 織 を 用 い て, Schutteち の 方 法21)に 準 じて 行 っ た (表2).使 用 した 試 薬 及 び 溶 液 の 組 成 は 表3の とお りで あ る.す な わ ち,組 織 学 的 に確 認 さ れ た病 変 部 よ り ミ ク ロ トー ム を 用 い て50μmの 切 片 を5枚 切 り出 し,こ れ を 包 埋 か ご に 入 れ,キ シ レ ンに て1時 間脱 パ ラ フ ィ ン を行 っ た.同 じ操 作 を繰 り返 し た の ち,キ シ レ ン を捨 て100%, 95 %, 70%と 濃 度 の 異 な る エ タ ノー ル に て 各 々30 分 間 再 水 和 を行 っ た.さ ち に3次 蒸 留 水 中 で30 分 の 再 水 和 を2回 行 った の ち, Vindelφvのstock solution22)に 溶 解 し た0.25% trypsin bufferの入 った 試 験 管 に移 した.こ れ を37℃ のwater bath 中 で,約15時 間over night incubationを 行 い 裸 核 化 し,ボ ル テ ッ ク ス ミキ シ ン グ後 静 置 し,
表2 パ ラフ ィ ン包埋 組 織 を用 い た試 料 作 製 法 (Schutteち の 方 法)
42μmの ナ イ ロ ン メ ッ シ ュ を用 い て 濾 過 し,単 離 細 胞 浮 遊 液 を得 た.DNA染 色 はpropidium iodide (PI)を 用 い たVindelφvの 方 法22)に よ
っ て行 っ た.す な わ ち,得 られ た 単 離 細 胞 浮 遊 液 を1200rpm,5分 間 遠 沈 後,上 清 を 除 去 し, solution-Aを500μl加 え 室 温 で10分 間,更 に こ れ にsolution-Bを500μl加 え 室 温 で10分 間,最 後 にsolution-Cを500μl加 え ア イ ス バ ス 内 の 暗 所 で10分 間 作 用 さ せPI染 色 を行 っ た. 2) FCMに よ る測 定 及 びDNA histogram の 解 析
核DNA量 の 測 定 に は, Becton Dickinson社 製FACScan Flow cytometerを 用 い,一 検 体
あ た り2×104個 の 細 胞 数 を 測 定 し た.測 定 に 際 して 標 準 試 料 を 用 い て,変 動 係 数 が3%以 下 と な る よ う に機 器 の 調 整 を 行 っ た.な お,検 体 に 内 部 標 準 は加 え ず,同 一 標 本 内 に 含 ま れ る リ ン パ 球,上 皮 細 胞 あ る い は繊 維 芽 細 胞 を 内部 標 準 と し て 用 い た. DNA histogramの 解 析 は,変 動 係 数9%以 上 の も の を 除 い た 残 り を評 価 可 能 と し,G0G1期 表3 試 料 作 製 に使 用 した 試薬,溶 液
甲 状 腺 分 化 癌 を 中 心 に フ ロ ー サ イ トメ ト リー に よ る解 析 477
表4 検 討 項 目 表5 各 検 討 に 用 い た症 例 の 内 訳
に 単 一 の ピ ー ク を有 す る もの をDNA diploidy (以下diploidy)と し,二 つ 以 上 の ピ ー ク を有 す る もの をDNA aneuploidy(以 下aneuploidy)
と し た.さ ら に,SOBR (Sum of Broaded Rectangles)モ デ ル23)を 用 い て,細 胞 周 期 の 解 析 を行 い,増 殖 期 細 胞 の 割 合 と してS期 の 割 合, G2M期 の 割 合 及 びS+G2M期 の 割 合 を 算 出 し, 各 々%S, %G2M, %S+G2Mと 表 現 し た. 3) 検 討 項 目 検 討 項 目 に は 背 景 因 子,組 織 型,腫 瘍 の 進 行 度 と予 後 を用 い た.背 景 因 子 と し て は 年 齢,性 別 を 用 い,組 織 型 の検 討 は 良 悪 性,癌 の 組 織 型 に 分 け て 検 討 し,腫 瘍 の 進 行 度 と して は 組 織 学 的 腫 瘍 径(t),甲 状 腺 外 浸 潤 の 有 無(Ex),組 織 学 的 リン パ 節 転 移 の 有 無(n),遠 隔転 移 の 有 無 (M)を 用 い た.こ れ らの 検 討 項 目 と核DNA量 の 関 係 を,各 々ploidy pattern及 び 細 胞 周 期 に お け る増 殖 期 細 胞 の 割 合 との 関 連 か ら検 討 し た (表4). 4) 検 討 方 法 年 齢 に つ い て はUICCの 分 類24)に 従 い,45 歳 で2群 に 分 け てploidy patternに よ る検 討 及 び 増 殖 期 細 胞 の 割 合 の 比 較 を行 い,さ らに 年 齢 と増 殖 期 細 胞 の 割 合 と の 相 関 も検 討 し た.組 織 型 及 び 腫 瘍 の 進 行 度 と し て の 組 織 学 的 腫 瘍 径 (t),甲 状 腺 外 浸 潤 の 有 無(Ex),組 織 学 的 リン パ 節 転 移 の 有 無(n),遠 隔 転 移 の 有 無(M)は 甲 状 腺 癌 取 扱 い 規 約25)の それ ぞれ 組 織 学 的 分 類, t分 類,Ex分 類,n分 類,M分 類 に 準 じて, 2∼4群 に分 け 同 様 にploidy pattern,増 殖 期 細 胞 の 割 合 に つ い て検 討 し た,た だ しt-number に 関 して はtisはt1と と もに 処 理 した.Exに 関 し て はEx0をEx(-)と し,Ex 1, Ex 2 をEx(+)と 一 括 し て 検 討 した.nに 関 して も 同 様 にn0をn(-),n 1, n 2, n 3は 一 括 し てn(+)と して 検 討 した.予 後 に 関 して は分 化 癌 に お け るploidy pattern別 の 累 積 生 存 率 を Kaplan-Meier法 に よ り算 出 し比 較 す る と ともに, 再 発 の 徴 候 な く10年 以 上 生 存 中 の 症 例 を 無 再 発 生 存 例(乳 頭 癌10例,濾 胞 癌1例),術 後5年 以 内 に再 発 を認 め た が,生 存 中 の症 例 を再 発 生 存 例(乳 頭 癌7例,濾 胞 癌3例),術 後5年 以 内 に 再 発 死 亡 し た 症 例 を早 期 死 亡 例(乳 頭 癌10例, 濾 胞癌3例)と し,予 後 に よ り3群 に 分 け て, ploidy pattern及 び 増 殖 期 細 胞 の 割 合 との 関 係 を検 討 した. な お,各 項 目 の 検 討 に 用 い た 症 例 は,背 景 因 子,腫 瘍 の 進 行 度 及 び 予 後 に 関 し て は 分 化 癌 で あ る 乳 頭 癌 と濾 胞 癌 に 限 定 し,組 織 型 の 検 討 に お い て の み,良 性 腫 瘍 で あ る 濾 胞 腺 腫 と分 化 癌 以 外 の 未 分 化 癌,髄 様 癌 を加 え て検 討 し た.ま た 増 殖 期 細 胞 の 割 合 との 関 係 の 検 討 に は, aneu ploidy症 例 で は 細 胞 周 期 の 解 析 が 困 難 で あ っ た た め, diploidy症 例 の み を用 い た(表5). 統 計 学 的 有 意 差 の検 定 は, ploidy patternの 検 討 に はx2検 定 を 用 い,増 殖 期 細 胞 の 割 合 の 検 討 に は 一 元 配 置 法 及 びt検 定 を用 い て 行 っ た. Kaplan-Meier法 に よ り算 出 した 累 積 生 存 率 の 有
意 差 検 定 に は, generalized Wilcoxon testを 用 い た.い ず れ も 危 険 率5%未 満 を も っ て 有 意
差 あ り と判 定 し た. 結 果 1. 背 景 因 子 と核DNA量(表6, 7) 1) 年 齢 aneuploidyの 出 現 率 は,45歳 以 上 の 群 で16.7 % (6/36),45歳 未 満 の 群 で12.5% (3/24)で あ り,両 群 間 に 有 意 差 を 認 め な か っ た. 増 殖 期 細 胞 の 割 合 は,45歳 以 上 の 群 で% S 17.4±13.0, %G2M 5.5±3.0, %S+GZM 22.9±12.6, 45歳 未 満 の 群 で%S8.1±6.2, % G2M6.0±2.9, %S+G2M 14.1±6.1で, %S, %S+G2Mが45歳 以 上 の 群 で 有 意 に(p<0.01) 高 値 を 示 し た.%G2Mは 両 群 間 で 差 を認 め な か っ た.年 齢 と増 殖 期 細 胞 の 割 合 と の相 関 を み る と,高 齢 に な る ほ ど%S, %S+G2Mが 高 くな り, 有 意 な 相 関(p<0.001, p<0.005)を 認 め た(図 1).%G2Mは,年 齢 と の 間 に 有 意 な相 関 を認 め な か っ た. 2) 性 別 aneuploidyの 出 現 率 は 男 性 で20% (2/10), 女 性 で14% (7/50)で あ り,男 性 に や や 高 い傾 向 を認 め た が,有 意 で は な か っ た. 増 殖 期 細 胞 の 割 合 は, %S, %G2M, %S+G2 Mの い ず れ も 男 女 間 に 有 意 差 は 認 め ちれ な か っ た. 表6 背 景 因 子(年 齢 ・性 別)とploidy patternの 関 係 2. 組 織 型 と核DNA量(表8, 9) 1) 良 悪 性 濾 胞 腺 腫 症 例 を 良 性 群 と し,癌 症 例 を悪 性 群 と し て 両 群 のplodiy patternの 検 討 を行 う と, 良 性 群 にaneuploidyを 示 し た 症 例 は な く,全 例diploidyを 示 し,悪 性 群 は69例 中15例(21.7 %)にaneuploidyを 認 め た.良 悪 性 間 で のaneu ploidyの 出 現 率 に 統 計 学 的 有 意 差 は 認 め ちれ な か っ た が,良 性 の 濾 胞 腺 腫 は す べ てdiploidyで あ り, aneuploidyを 示 し た症 例 は 全 例 悪 性(癌) で あ っ た. 増 殖 期 細 胞 の 割 合 は,良 性 群 で は%S11.2± 10.2, %G2M 2.3±1.3, %S+G2M 13.5±11.0, 悪 性 群 で は%S13.2±11.4, %G2M 5.7±2.9, %S+G2M 18.9±11.0で あ っ た.良 性 群 に 比 べ 図1 年 齢 と増 殖 期 細 胞 の 割合 の相 関 表7 背 景 因子(年 齢 ・性 別)と 増殖 期 細 胞 の割 合 の 関 係 平 均 値 ±標 準 偏 差 *p<0.01
甲 状 腺 分 化 癌 を 中 心 に フ ロー サ イ トメ ト リー に よ る解 析 479 悪 性 群 の 増 殖 期 細 胞 の 割 合 が 高 い 傾 向 を認 め, %G2Mは 両 群 間 に 有 意 差 を認 め た(p<0.01). 2) 癌 の 組 織 型 未 分 化 癌 は 全 例aneuploidyで あ り,以 下 乳 頭 癌,濾 胞 癌,髄 様 癌 の 順 にaneuploidyの 出 現 率 は14.3% (6/42), 16.7% (3/18), 0% (0/ 3)で あ っ た.未 分 化 癌 は 乳 頭 癌,濾 胞 癌,髄 様 癌 の い ず れ と比 べ て も有 意 に(p<0.005) aneu ploidyの 出 現 率 が 高 か っ た.乳 頭 癌,濾 胞 癌, 髄 様 癌 の 間 で はaneuploidyの 出 現 率 に 有 意 差 を認 め な か っ た. 増 殖 期 細 胞 の 割 合 は,乳 頭 癌 で は, %S10.8± 10.5, %G2M 5.6±2.9, %S+GZM 16.4±10 .6, 濾 胞 癌 で は, %S20.3±11.6, %G2M5.9±3.2, %S+G2M 26.2±9.8,髄 様 癌 で は, %S6.0± 1.0, %G2M6.7±0.6, %S+G2M12.7±0.6で あ り,濾 胞 癌 の%S, %S+G2Mが 乳 頭 癌,髄 様 癌 に 比 べ 有 意 に 高 か っ た. %G2Mは,髄 様 癌 に や や 高 い 傾 向 を 認 め た が 有 意 差 は 認 め な か った. 表8 組 織 型 とploidy patternの 関 係 3. 腫 瘍 の 進 行 度(表10, 11) 1) 組 織 学 的 腫 瘍 径(t) aneuploidyの 出 現 率 はt1群 で は18.2% (2/ 11),以 下t2群,t3群,t4群 の 順 に10.5% (2/ 19), 0%(0/8), 22.7% (5/22)で あ っ た. t3 以 下 の 群 に 比 べt4群 のaneuploidyの 出 現 率 が や や 高 い 傾 向 を 認 め た が,有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た.ま た,t1群,t2群,t3群 の 中 で はt 1群 のaneuploidyの 出 現 率 が 最 も 高 く,t3群 に はaneuploidyは 認 め ち れ な か っ た. 増 殖 期 細 胞 の 割 合 は,t1群 で は%S6.4±3.4, %G2M5.2±3.0, %S+G2M 11.7±3.9, t2群 で は%S14.5±9.2, %G2M6.6±3.8,%S+G2 M21.1±7.9, t3群 で は%S21.6±15.1, %G2 M4.3±2.3, %S+G2M 25.9±14.1, t4群 で は%S12.7±13.0, %G2M5.6±1.8, %S十G2 M18.3±13.3で あ り,%S, %S+G2Mはt1 群 が 最 も 低 値 を 示 しt2群,t3群 と の 間 に 有 意 差 を 認 め た.し か し,t1群 とt4群 と の 間 に は 有 意 差 は 認 め ら れ ず,ま たt4群 の%S, %S+ G2Mはt2群,t3群 よ り低 値 を 示 し, t-number と の 間 に 一 定 の 関 連 は 認 め ち れ な か っ た. %G, Mは い ず れ の 群 間 に も 有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た. 2) 甲 状 腺 外 浸 潤 の 有 無(Ex) aneuploidyの 出 現 率 は, Ex(-)群 で10.5% (4/38), Ex(+)群 で22.7% (5/22)と, Ex (+)群 のaneuploidyの 出 現 率 が 高 い 傾 向 を 認 め た が,有 意 差 は 認 め な か っ た. 増 殖 期 細 胞 の 割 合 は,両 群 間 に 差 を 認 め な か っ た. 表9 組 織型 と増 殖期 細 胞 の 割合 の関 係 平 均 値 ± 標 準 偏 差 * p<0.01, ** p<0.05
3) 組 織 学 的 リ ン パ 節 転 移 の 有 無(n) aneuploidyの 出 現 率 は, n(-)群 で4 .8% (1/ 21), n(+)群 で20.5% (8/39)と, n(+)に aneuploidyの 出 現 率 が 高 い 傾 向 を 認 め た が,有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た. 増 殖 期 細 胞 の 割 合 は, n(-)群 で%S16.8± 10.8, %G2M5.4±3.1, %S+G2M 22.2±10.4, n(+)群 で%S11.5±11.8, %G2M5.8±2.8, %S+G2M 17.4±11.5で あ り, n(+)群 に 比 べ てn(-)群 の%S, %S+G2Mが わ ず か に 高 か っ た が,い ず れ も 有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た. 4) 遠 隔 転 移 の 有 無(M) aneuploidyの 出 現 率 は, M(-)群 で14.3% (8/56), M(+)群 で25.0% (1/4)と, M(+) 群 にaneuploidyの 出 現 率 が や や 高 い 傾 向 を 認 め た が,有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た. 増 殖 期 細 胞 の 割 合 は, M(-)群 で%S13.9± 11.8, %G2M 5.6±3.0, %S+G2M 19.5±11.3, M(+)群 で%S8.3±8.5, %G2M 6.3±1.5, %S+G2M 14.7±10.0で あ り, M(+)群 に 比 べ てM(-)群 の%S, %S+G2Mが 高 い 傾 向 を 認 め た が,い ず れ も 有 意 と は 言 え な か っ た. 4. 予 後 と 核DNA量(表12, 13) 甲 状 腺 分 化 癌 の み を 対 象 と したploidy pattern に よ る 生 存 率 の 比 較 で は, aneuploidy群 の 生 存 率 はdiploidy群 と 比 較 し て 有 意 に(p<0.0001) 不 良 で あ っ た(図2). 表10 腫 瘍 の 進 行 度 とploidy patternの 関 係 表12 予 後 とploidy patternの 関 係 表11 腫 瘍 の進 行 度 と増殖 期 細 胞 の割 合 の 関係 平 均 値 ± 標 準 偏 差 * p<0.01, ** p<0.05
甲 状 腺 分 化 癌 を 中 心 に フ ロ ー サ イ ト メ ト リー に よ る解 析 481
表13 予 後 と増殖 期 細 胞 の 割合 の 関係
図2 Ploidy pattern別 累 積 生 存 率(Kaplan-Meier法) さ ら に,予 後 に よ り分 け た3群 でaneuploidy の 出 現 率 を 比 較 す る と,無 再 発 生 存 群 に はaneu ploidyを 示 した 症 例 は な く,再 発 生 存 群 で10% (1/10),早 期 死 亡 群 で53.8% (7/13)にaneu ploidyの 出 現 をみ た.早 期 死 亡 群 は 無 再 発 生 存 群,再 発 生 存 群 と比 べ 有 意 にaneuploidyの 出 現 率 が 高 か っ た. ま た,こ の3群 に 属 す るdiploidy症 例 の 増 殖 期 細 胞 の 割 合 は,無 再 発 生 存 群 で%S7.5±7.1, %G2M 5.5±3.3, %S+G2M 13.0±7.1,再 発 生 存 群 で%S13.8±11.5, %G2M 5.7±1.7,% S+G2M 19.4±11.3,早 期 死 亡 群 で%S 18.8± 17.9, %G2M 6.7±1.4, %S+G2M 25.5±17.4 で あ り,い ず れ も早 期 死 亡 群 が 最 も高 値 を 示 し, 以 下 再 発 生 存 群,無 再 発 生 存 群 の 順 で あ っ た. 統 計 学 的 有 意 差 は 認 め ら れ な い もの の, %S, % S+G2Mで は こ の 傾 向 が 顕 著 で あ っ た. 考 察 近 年,FCMの 急 速 な普 及 に よ り固 形 癌 の 核 DNA量 の 解 析 が 多 く試 み られ,癌 の 生 物 学 的 悪 性 度 の 観 点 か ら注 目 さ れ る よ うに な っ た.と く に1983年Hedleyら26)が パ ラ フ ィ ン 包 埋 ブ ロ ッ ク を使 用 し たFCMに よ る核DNA量 の 測 定 方 法 を 報 告 し て 以 来,臨 床 経 過 の 判 明 し た 症 例 の retrospectiveな 検 討 が 容 易 と な り,各 種 悪 性 腫 瘍 の 予 後 と核DNA量 の 関 係 に つ い て の 研 究 が 数 多 く報 告1)-7)さ れ て きた.一 般 にaneuploidy を示 す 腫 瘍 あ る い は 増 殖 期 細 胞 の 割 合 の 高 い 腫 瘍 は 予 後 が 悪 く腫 瘍 の 生 物 学 的 悪 性 度 の 指 標 の 一 つ と して 有 用 で あ る と い う見 解 が 多 い . 甲 状 腺 癌 の 核DNA量 に 関 す る研 究10)-20)も 散 見 さ れ る が,生 物 学 的 悪 性 度 との 関 連 に つ い て の 結 果 は 必 ず し も一 定 し て い な い.
甲状 腺 分 化 癌 の 予 後 とploidy patternに 関 し て, Joensuuら11)はaneuploidyを 示 す 症 例 は diploidyを 示 す 症 例 よ り有 意 に 生 存 率 が 悪 い と 報 告 し,山 下 ら17)は 再 発 例,死 亡 例 な ど の 予 後 不 良 例 でaneuploidyが 高 率 に 認 め ち れ た と報 告 し て い る.ま た 予 後 と増 殖 期 細 胞 の 割 合 に 関 し て, Cohnら10)は 甲 状 腺 乳 頭 癌 で2.5C以 上 の 細 胞 の 占め る比 率 が,死 亡 例 で70%以 上 で あ っ た が,10年 以 上 生 存 例 で は60%以 下 で あ り, 予 後 の 推 測 が 可 能 で あ る と述 べ,吉 田14)は 甲状 腺 分 化 癌 の 再 発 例 で は,術 後 早 期 に再 発 を認 め た もの ほ ど 手 術 時 のDNA histogram上 高 倍 体 域 の 細 胞 が 増 加 し て お り,3C以 上 の 細 胞 出 現 率 と再 発 ま で の期 間 に は 負 の 相 関 が 認 め ちれ た と報 告 して い る. 今 回 の 検 討 に お い て,甲 状 腺 分 化 癌 の 予 後 と ploidy patternと の 間 に は一 定 の 関 連 を 認 め, ま た 増 殖 期 細 胞 の 割 合 との 間 に も統 計 学 的 有 意 差 は 認 め な い もの の 一 定 の 傾 向 を認 め た. す な わ ち,甲 状 腺 分 化 癌 を対 象 と し た 検 討 に お い て, aneuploidy群 はdiploidy群 よ り明 ら か に 生 存 率 が 低 く,さ ち に 予 後 に よ り分 け た3 群 間 の 検 討 で も,早 期 死 亡 群 は 無 再 発 生 存 群, 再 発 生 存 群 の い ず れ と比 べ て も有 意 にaneu ploidyの 出 現 率 が 高 か っ た.ま た この3群 間 で diploidyを 示 し た 症 例 の 増 殖 期 細 胞 の 割 合 を比 較 す る と%S, %G2M, %S+G2Mは い ず れ も 早 期 死 亡 群 が 最 も高 値 を示 し,以 下 再 発 生 存群, 無 再 発 生 存 群 の 順 で あ り,予 後 の 悪 い もの ほ ど 増 殖 期 細 胞 の 割 合 が 高 い傾 向 を 認 め た. 従 っ て,甲 状 腺 分 化 癌 に お い て も,こ れ ま で の 他 臓 器 に お け る 報 告1)7)20)と同 様aneuploidy を示 す も の は 予 後 不 良 で あ り,甲 状 腺 分 化 癌 の 生 物 学 的 悪 性 度 と強 い 関 連 が あ る と考 え られ た. ま た,増 殖 期 細 胞 の 割 合 に 関 して も,予 後 不 良 の もの に 増 殖 期 細 胞 の 割 合 が 高 い 傾 向 を 認 め, 増 殖 期 細 胞 の 割 合 と 甲状 腺 分 化 癌 の 生 物 学 的 悪 性 度 と の 関 連 性 が 示 唆 され た. 一 方,従 来 よ り甲状 腺 癌 の 予 後 因 子27)-33)と し て 検 討 さ れ て い る年 齢,性 別,組 織 型,腫 瘍 の 進 行 度 な ど の 臨 床 病 理 学 的 諸 因 子 と核DNA量 の 関 連 を検 討 し た 結 果,こ れ ち の 因 子 の う ち ploidy patternあ る い は 増 殖 期 細 胞 の 割 合 との 間 に一 定 の 関 連 を認 め た の は 組 織 型 と年 齢 の み で あ り,腫 瘍 の 進 行 度 はploidy pattern,増 殖 期 細 胞 の 割 合 の い ず れ と も有 意 な 関 連 を認 め な か っ た. 年 齢,性 別 な どの 背 景 因 子 と核DNA量 に 関 す る これ ま で の 報 告 で,Klemiら12)は 甲状 腺 未 分 化 癌 の検 討 でaneuploidyの 出 現 頻 度 は,年 齢 が 上 昇 す る に従 っ て 高 くな っ て くる と報 告 し, 土 屋 ら16)は 種 々 の 甲状 腺 癌 の核DNA量 を測 定 し, ploidy patternと 年 齢 との 間 に 一 定 の 関 連 は 認 め な か っ た と報 告 して い る.ま た,元 村15)は, FCMに よ り 甲状 腺 腫 瘍 内DNA量 を 測 定 し, 甲状 腺 癌 に お け る 年 齢,性 別 とDNA index, %S+G2M (proliferative index,以 下PI値)
と の 関 連 を検 討 し,年 齢 とDNA index, PI値 と の 間 に 特 徴 的 な 関 連 は み ち れ ず,性 別 との 関 連 で はDNA index, PI値 は 男 性 例 に 高 値 を示 す 傾 向 を 認 め た と し,吉 田14)は 甲状 腺 腺 癌 の 性, 年 齢 と 高 倍 体 域 の 細 胞 の 割 合 との 間 に 一 定 の 関 連 は 認 め な か っ た と報 告 して お り,結 果 は さ ま ざ ま で あ る. 今 回 の 著 者 の 結 果 は,年 齢 に 関 して はploidy patternと の 間 に は 一 定 の 関 連 は 認 め ちれ な か っ た が,増 殖 期 細 胞 の 割 合 は 高 齢 に な る ほ ど%S, %S+G2Mが 増 加 し て い た.高 齢 に な るほ ど% S, %S+G2Mが 高 値 を示 す 理 由 は 明 ちか で な い が,高 齢 に な る ほ ど腫 瘍 が そ の 生 物 学 的 悪 性 度 を増 す 可 能 性 が 考 え られ た.ま た,性 別 に 関 し て はploidy pattern,増 殖 期 細 胞 の 割 合 の い ず れ と も一 定 の 関 連 は 認 め られ な か っ た. 次 に 甲 状 腺 腫 瘍 の 組 織 型 と核DNA量 の 開 係 に 関 して,核DNA量 を 良 悪 性 間 で 比 較 した こ れ ま で の 報 告 で,土 屋 ら16)は癌 と腺 腫 の 比 較 で, 腺 腫 は すべ てdiploidyで あ り, aneuploidyは 癌 に の み 認 め ら れ た と報 告 し て い るが,良 性 腫 瘍 や 非 腫 瘍 性 病 変 にaneuploidyが 出 現 し た と い う報 告11)14)18)もあ る.さ ら に 癌 の 組 織 型 別 で 検 討 し た 報 告 を み る と,吉 田14)は 蛍 光 顕 微 測 光 法 で核DNA量 を 測 定 し,未 分 化 癌 は ほ とん ど がaneuploidyで あ り,分 化 癌 よ りaneuploidy の 出 現 率 が 高 か っ た と報 告 し,土 屋 ち16)は 未 分 化 癌4例 中3例 がdiploidyを 示 し,臨 床 所 見 と の 食 い 違 い を示 す 結 果 で あ っ た と報 告 して い る .
甲 状 腺 分 化 癌 を 中心 に フ ロ ー サ イ トメ ト リー に よ る 解 析 483 ま た,増 殖 期 細 胞 の 割 合 に 関 して も,癌 と腺 腫 の 間 で%S, %G2Mに 差 は 見 ちれ な か っ た と い う報 告16)が あ る 反 面,%Sに 差 は な い が,% G2Mは 癌 に お い て2倍 高 か った とい う報 告19)や 癌 腫 の%S+G2M(PI値)は 濾 胞 腺 腫 よ り も有 意 に高 い とい う報 告14)15)もみ ちれploidy pattern 同 様,結 果 は 一 定 して い な い.癌 の 組 織 型 別 の 検 討 で 吉 田14)は,未 分 化 癌 は 高 倍 体 域 の 細 胞 が 分 化 癌 よ り有 意 に 高 く,ま た 分 化 癌 で あ る乳 頭 癌 の 比 較 で は,濾 胞 癌 で 増 殖 相 ま た は 高 倍 体 域 の 細 胞 が 増 加 し て い る傾 向 を認 め た と報 告 し, 元 村15)はPI値 で 比 較 し,PI値 は 髓 様 癌 が 最 も高 く,つ い で 濾 胞 癌,乳 頭 癌 の 順 に 高 値 を示 し た と報 告 し て い る. 今 回 の 著 者 の 結 果 で は,良 悪 性 間 のploidy patternの 比 較 に お い て 良 性 腫 瘍 で あ る 濾 胞 腺 腫 にaneuploidyは 認 め ち れ ず, aneuploidyを 示 した 症 例 は す べ て 悪 性(癌)で あ り,土 屋 ち16)の 結 果 と同 様 で あ っ た.さ ちに 癌 の 組 織 型 に よ る 比 較 で は,き わ め て 悪 性 度 が 高 い と考 え ち れ て い る未 分 化 癌 は 全 例aneuploidyを 示 し,乳 頭 癌,濾 胞 癌,髓 様 癌 の い ず れ と比 べ て もaneu ploidyの 出 現 率 が 高 か っ た. こ の こ とはaneuploidyを 示 す 腫 瘍 は 予 後 が 悪 く,生 物 学 的 悪 性 度 が 高 い の で は な い か と い う予 後 とploidy patternの 関 係 か ら考 え る と 当 然 の 結 果 で あ り,濾 胞 腺 腫 の 良 性 腫 瘍 と して の 性 格 と未 分 化 癌 の 臨 床 的 悪 性 度 を 裏 づ け る 結 果 と な っ た. ま た, diploidy症 例 に お け る増 殖 期 細 胞 の 割 合 に 関 し て,良 悪 性 間 で は%S, %G2M, %S+ G2Mの い ず れ も癌 症 例 に 比 べ 濾 胞 腺 腫 が低 値 を 示 す 傾 向 を認 め, %G2Mで は 有 意 差 を認 め た(p< 0.01).癌 の 組 織 型 に 関 し て は 濾 胞 癌 の%S, % S+G2Mが 高 い 傾 向 を示 し,乳 頭 癌 との 間 で は 有 意 差 を認 め た(p<0.05). 良 悪 性 間 で の 増 殖 期 細 胞 の 割 合 に 関 す る 著 者 の 結 果 は, Mattfeldtら の 報 告19)と 類 似 す る も の で あ り,濾 胞 腺 腫 に は%G2Mが5%を 越 え る も の は 認 め ら れ ず,良 悪 性 の 鑑 別 の 一 つ の 指 標 に な り得 る と考 え ちれ た.さ ら に 癌 の 組 織 型 に 関 して は,こ れ ま で の 報 告 と同 様 に,乳 頭 癌 と 比 べ 濾 胞 癌 の 方 が 増 殖 期 細 胞 の 割 合 が 高 い と い う結 果 で あ っ た.予 後 不 良 の もの に 増 殖 期 細 胞 の 割 合 が 高 い 傾 向 を 認 め た予 後 と の 関 係 か ら推 察 す る と,こ の 結 果 は 濾 胞 癌 の 方 が 乳 頭 癌 よ り 生 物 学 的 悪 性 度 が 高 い こ と を示 す の で は な い か と考 え られ,一 般 に 濾 胞 癌 は 乳 頭 癌 に 比 較 して や や 予 後 が 悪 い と さ れ る 濾 胞 癌 の 臨 床 的 悪 性 度 を裏 づ け る 結 果 で あ っ た. 甲 状 腺 癌 の 進 行 度 と核DNA量 に 関 して,こ れ ま で の 報 告 を み る と,元 村15)は,甲 状 腺 癌 に お い て病 理 学 的 進 行 度(腫 瘍 体 積,リ ンパ 節 転 移 率)とDNA index, PI値 の 間 に 関 連 は 認 め られ な か っ た と し,吉 田14)も 甲状 腺 腺 癌 の 腫 瘤 の 長 径,リ ンパ 節 転 移 の程 度 と高 倍 体 域 の 細 胞 の 割 合 との 間 に 一 定 の 関 連 は 認 め なか っ た と報 告 し て い る. 今 回 の 著 者 の 結 果 も 同様 で,組 織 学 的 腫 瘍 径 (t),甲 状 腺 外 浸 潤 の 有 無(Ex),リ ン パ 節 転 移 の 有 無(n),遠 隔 転 移 の 有 無(M)は い ず れ も ploidy pattern,増 殖 期 細 胞 の 割 合 との 間 に 一 定 の 関 連 は 認 め ら れ な か っ た.従 っ てploidy pat tern,増 殖 期 細 胞 の 割 合 は 腫 瘍 の 進 行 度 とは 別 の 観 点 か ち 甲状 腺 分 化 癌 の特 性 を表 す 指 標 とな り 得 る と考 え られ た. 以 上,単 変 量 解 析 の み に よ る検 討 で は あ るが, 甲 状 腺 分 化 癌 の 悪 性 度 を 判 定 す る に あ た っ て の ploidy patternお よ び 増 殖 期 細 胞 の 割 合 の 重 要 性 が 示 さ れ た.特 に,こ の 内 の 増 殖 期 細 胞 の 割 合 は,甲 状 腺 分 化 癌 に お け るaneuploidyの 出 現 率 を 考 慮 し た 場 合,よ り有 用 で あ る と考 え ち れ る.す な わ ち,今 回 の 検 討 に お い てaneuploidy の 出 現 率 が15.0% (9/60)と 低 く,こ れ ま で の 15∼30%と の 報 告11)16)19)20)と同 様 で あ っ た こ と は,甲 状 腺 分 化 癌 の 生 物 学 的 悪 性 度 の 低 さ を物 語 る と と もに,そ の 悪 性 度 の 判 定 はploidy pat ternの み は で き な い こ と を示 して い るか ち で あ る.し たが っ て,今 回 の 検 討 で 甲 状 腺 分 化 癌 の 増 殖 期 細 胞 の 割 合 が, ploidy patternと 同 様 に 予 後 と関 係 し て お り,そ して 腫 瘍 の進 行 度 とは 異 な っ た独 立 し た指 標 で あ る こ とが 示 唆 さ れ た こ と か ら,甲 状 腺 分 化 癌 の 悪 性 度 を知 る上 で 細 胞 周 期 を調 べ る こ とは 有 用 か つ 不 可 欠 で あ る と 思 わ れ た. 今 後 症 例 を増 や し て,甲 状 腺 分 化 癌 の 生 物 学
的 悪 性 度 の 指 標 と して のploidy patternあ る い は 増 殖 期 細 胞 の 割 合 の 意 義 を よ り明 確 に す る と と も に,抗bromodeoxyuridine (BrdU)抗 体 Ki-67な ど を 利 用 した 新 鮮 標 本 に よ るprospec tiveな 検 討 も 必 要 と思 わ れ た. 結 論 1. 甲 状 腺 分 化 癌 の う ちaneuploidyを 示 す も の は,生 物 学 的 悪 性 度 が 高 い と考 え ら れ た. 2. diploidyを 示 す 甲状 腺 分 化 癌 の う ち 増 殖 期 細 胞 の 割 合 の 高 い もの に,生 物 学 的 悪 性 度 が 高 い 傾 向 が 認 め ちれ た. 3. FCMに よ る核DNA量 の 測 定 に よ っ て 得 ちれ るploidy pattern及 び 増 殖 細 胞 の 割 合 は, 甲状 腺 分 化 癌 の 生 物 学 的 悪 性 度 を 知 る 上 で 有 用 な 指 標 とな る可 能 性 が 示 唆 さ れ た. 4. 特 に 甲 状 腺 分 化 癌 の8割 以 上 を 占 め た diploidy症 例 の 生 物 学 的 悪 性 度 の 判 定 に は,細 胞 周 期 の 解 析 に よ る増 殖 期 細 胞 の 割 合 を知 る こ とが 不 可 欠 で あ る と考 え ちれ た. 5. 今 後 の 臨 床 応 用 に あ た っ て は,増 殖 期 細 胞 の 割 合 を よ り正 確 に 測 定 す る た め にBrdU, Ki-67な ど を利 用 し, prospectiveな 検 討 を 行 う こ と が 必 要 で あ る. 稿 を終 え るに あた り,こ 指 導,ご 校 閲 を賜 っ た寺 本 滋教 授 に厚 く御 礼 申 し上 げ ます.ま た,直 接 ご 指 導 くだ さい ま した小 松 原正 吉 講 師,臼 杵 尚志 助 手 に深 く感 謝 い た します. 本 論 文 の要 旨は,平 成4年9月 第9回 国際 内分 泌 学 会(NICE)に お い て発 表 した.
文
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