Contents トランスフェクション選択ガイド 3 トランスフェクション試薬 ( リポフェクション ) 3 Transfection Reagent 4 MessengerMAX Transfection Reagent 6 RNAiMAX Transfection Reagent 8 CRISP

トランスフェクション製品カタログ

Lipofectamine 3000 Transfection Reagent

Lipofectamine MessengerMAX Transfection Reagent

Lipofectamine RNAiMAX Transfection Reagent

Lipofectamine CRISPRMAX Cas9 Transfection Reagent

Neon Transfection System

トランスフェクション選択ガイド

3

トランスフェクション試薬（リポフェクション）

Lipofectamine 3000 Transfection Reagent

4

Lipofectamine MessengerMAX Transfection Reagent

6

Lipofectamine RNAiMAX Transfection Reagent

8

Lipofectamine CRISPRMAX Cas9 Transfection Reagent

9

Expi293 Expression System

10

ExpiCHO Expression System

11

トランスフェクション装置（エレクトロポレーション）

Neon Transfection System

12

In vivo

トランスフェクション試薬

Invivofectamine 3.0 Reagent

14

トランスフェクション関連試薬

Opti-MEM I Reduced-Serum Medium

16

Gibco

選択用抗生物質

16

Ordering information

18

導入の目的は

何ですか？ siRNA, miRNA

RNAi

Plasmid DNA

Cas9 DNA, GFP, Luc, shRNA

co-transfection

Lipofectamine

RNAiMAX

推奨トランスフェク ション試薬 結果 改善策 Lipofectamine

2000, 3000

Lipofectamine

3000

TRY リバーストランス フェクション 細胞密度の最適化 siRNA濃度の増加 1 2 3 TRY TRY Neon System ウイルスによるshRNA の導入 1 2 TRY mRNA + Lipofectamine MessengerMAX reagent Plasmid DNA + Neon System mRNA + Neon System ウイルスによる導入 1 2 3 4

Neon

Transfection System

mRNA

Cas9 mRNA, GFP mRNA

Lipofectamine Messenger

MAX

良好 まあまあ 不良 良好 まあまあ 不良 DNA濃度の最適化 細胞密度の最適化 1 2

Transfection Decision Tree

トランスフェクション選択ガイド

トランスフェクションとは、核酸を真核細胞に導入するプロセスです。手法は多

岐にわたり、脂質トランスフェクションやエレクトロポレーションのような物理的

手法が用いられます。

Invitrogen

™

_{Lipofectamine}

™

_{シリーズは、広範囲の細}

胞に対して優れた性能を発揮するため、市販されているトランスフェクション

の中で最も引用文献数が多く、最も信頼されている製品です。当社のトランス

フェクション製品の中から、お客様に最適なソリューションをお選びください。

5,000 10,000 15,000 20,000 25,000 30,000 35,000 40,000 45,000 50,000 0 19961997199819992000200120022003200420052006200720082009 20102011201220132014

トランスフェクション製品 DNA mRNA RNAi Co-delivery 一般的な細胞 導入困難な細胞 初代細胞 幹細胞 浮遊細胞

リポフェクション試薬      

Lipofectamine 3000 Lipofectamine RNAiMAX Lipofectamine MessengerMAX

Expi293 system Expi293F cell 専用

ExpiCHO system ExpiCHO cell 専用

Lipofectamine 2000

エレクトロポレーション      

Neon Transfection System

In vivo delivery      

Invivofectamine 3.0 尾静脈注射による肝臓へのin vivo導入

細胞タイプ別推奨ガイド

1996年発売以来、Lipofectamine 製品が引用された文 献の累積数 多くの文献で 引用されている ロングセラー製品 DNAの導入に 最適な リポフェクション試薬 siRNAの導入に 最適な リポフェクション試薬 mRNAの導入に 最適な リポフェクション試薬 Cas9 Proteinの 導入に最適な リポフェクション試薬 試薬では導入困難な 細胞のための エレクトロポレーション装置

製品名

Lipofectamine

₂₀₀₀

Lipofectamine

₃₀₀₀

Lipofectamine

_RNAiMAX

_MessengerMAX

Lipofectamine

Lipofectamine

_CRISPRMAX

Transfection

Neon

System

サンプル タイプ ・プラスミド

DNA

・

siRNA

・

DNA

と

siRNA

の ・

co-transfection

・プラスミド DNA ・

siRNA

・

DNA

と

siRNA

の ・

co-transfection

・siRNA

・

microRNA

・mRNA ・

Cas9 Protein

・プラスミド

DNA

・

siRNA

・

microRNA

・タンパク質 導入効率

★★

★★★

★★★

★★★

★★★

★★★★

トライアル サイズ

-

（製品番号

0.1 mL

L3000001

サイズ ）（製品番号

0.1 mL

13778-100

サイズ ）（製品番号

0.1 mL

LMRNA001

サイズ ）（製品番号

0.1 mL

CMAX00001

サイズ ） デモ受付中 推奨する トランスフェクション 試薬＆機器 CRISPR 導入フォーマット

DNA mRNA protein Lenti-Viral production Lipofectamine CRISPRMAX ✓ Lipofectamine 3000 ✓ ✓ Neon Transfection system ✓ ✓ ✓ ✓ Lipofectamine MessengerMAX ✓

ゲノム編集における

トランスフェクション法の選択

HEK 293

HeLa

LNCaP

HepG2

A549

Lipofectamine

3000

Lipofectamine2000 他社製品

FH

Lipofectamine 2000 Lipofectamine3000 他社製品FH 他社製品XH Western blot, HepG2

GST-STAT -actin Lipofectamine® ₂₀₀₀ 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Lipofectamine® _LTX Lipofectamine® ₃₀₀₀

% Transfection

% T

ransfection

Dose (µL)

0.1 0.2 0.3 0.4

Lipofectamine 3000

Transfection Reagent

Invitrogen

™

_{Lipofectamine}

™

_{3000 Reagent}

は、弊社がもつ

最新の脂質ナノ粒子テクノロジーを利用しており、優れたトラ

ンスフェクション性能と再現性の高い結果を実現します。さま

ざまな導入困難な細胞および一般的な細胞において、非常に

優れた導入効率をもたらし、細胞生存率も向上させます。

図1. Lipofectamine 3000の使用により、従来のトランスフェクション試薬よりも導入 効率が向上

Lipofectamine 3000、Lipofectamine 2000および他社製品FHを使用して、HEK 293、 HeLa、LNCaP、HepG2およびA549細胞株に96ウェルフォーマットでトランスフェク ションを行ない、48時間後にGFP発現を解析しました。5種類すべての細胞株において、 Lipofectamine 3000はInvitrogen™ Lipofectamine™ 2000および他社製品FHよりも 高いGFPのトランスフェクション効率をもたらしました。 図2. HepG2細胞株におけるGST-STATタンパク質発現 （ウェスタンブロッティング） Lipofectamine 2000、Lipofectamine 3000、他社製品FH、 他社製品XHを使用し、24 ウェルプレートで細胞にGST-STATプラスミドをトランスフェクションしました。トランス フェクションから48時間後 に細胞を回収し、ウェスタンブロット解析を行いました。コント ロール であるβ-アクチンのブロットの結果から、4サンプルは等量にロードされた こと が分かります。 図3. Lipofectamine 3000は幅広い使用量で安定した高い導入効率を維持 各試薬を用い、96-ウェルフォーマットにて、グラフに示される用量でHeLa細胞にエメ ラルドグリーン蛍光タンパク質（ GFP）発現ベクターをトランスフェクションしました。ト ランスフェクションから48時間後、フローサイトメトリーを使用してトランスフェクション 効率および GFP の発現強度を解析しました。Lipofectamine 3000は、Lipofectamine 2000およびInvitrogen™ Lipofectamine™ LTXよりも高いトランスフェクション効率お よびタンパク質発現を示しました。

Lipofectamine 3000 Reagent

を使用することで、我々の導入困 難な細胞株で

10

倍以上のトランスフェクション効率を得られたこ とにとても喜んでいますし、驚いています。それだけでなく細胞 死も低減しました。 素晴らしい結果です！

リスボン大学

Rui Eduardo Castro, PhD

優れたパフォーマンス

導入困難な細胞から一般的な細胞まで、非常に広範囲の細胞

で高い導入効率が得られます

細胞生存率が改善

細胞に優しく、低毒性です

高い汎用性

1

つの試薬で

DNA, RNA, co-transfection

が可能です

Lipofectamine

3000

によりタンパク質発現量が増加

向上した細胞生存率、低毒性

Lipofectamine 3000

は、トランスフェクションの過程における全ての

ステップを最適化して開発されました。安定した高いトランスフェク

ション性能をもつため、より高い細胞生存率を求める場合には、試薬

の量を減らすことで毒性のリスクを低減することができます。

Transfection efficiency in cancer cell line panel H s-578 T S K -M E L-28 4T 1 S W 48 0 NC I-H 23 P ANC -1 S ao s-2 R D B T -54 9 L6 S K -O V -3 DU -14 5 HCC 193 7 M DA -M B -46 8 S W 62 0 NC I-H 46 0 C ak i-1 0 20 40 60 80 100 Lipofectamine3000 Lipofectamine2000 Cell line % T ra ns fec ti on e ffi ci en cy

Mean OFP intensity 0 50,000 100,000 150,000

Mean OFP intensity 0 50,000 100,000 150,000 200,000

Lipofectamine 2000 Lipofectamine 3000 Lipofectamine 2000 Lipofectamine 3000

Day 14 Day 17 BJ HDFn HDFa

Lipofectamine 3000 reagent Neon system electroporation A A A B B 図4. がん細胞株パネルにおけるトランスフェクション効率 Lipofectamine 2000およびLipofectamine 3000を用い、17種類の細胞株に24ウェル プレートフォーマットで1ウェルあたり0.5 µg のGFP発現プラスミドを、各試薬の推奨プ ロトコールに従ってトランスフェクトしました。トランスフェクションから48時間後にGFP 発現を解析しました。各条件についてトリプリケートで実験を行い、データポイントは平 均トランスフェクション効率+ SDで示しています。

図6. Invitrogen™ _GeneArt™ _{CRISPR Nuclease Vectorのトランスフェクショ} ン効率およびタンパク質発現 OFPレポーター遺伝子を含むベクターをLipofectamine 2000またはLipofectamine 3000により（A）U2OSおよび（B）HepG2細胞株にトランスフェクトしました。棒グ ラフはレポーター遺伝子の発現を示しており、画像はOFP遺伝子を発現している細 胞です。 図7. 幹細胞へのトランスフェクション Lipofectamine 3000を用いて、H9胚性幹細胞（ESC）（A）またはiPS細胞（B）にト ランスフェクションを行いました。蛍光顕微鏡により細胞を可視化し、フローサイトメト リーを用いた解析によりトランスフェクション効率を求めました。

製品詳細および細胞別データについてはウェブページをご覧ください。

　

www.thermofisher.com/3000

図5. Lipofectamine 3000によるリプログラミングの効率性をエレクトロポレー ションと比較

Lipofectamine 3000 または Invitrogen™ _Neon™ _{Transfection Systemを用いて}

Epi5ベクターをトランスフェクションすることにより、BJ繊維芽細胞および、新生児 （HDFn）または成人（HDFa）ヒト皮膚繊維芽細胞をiPS細胞にリプログラミングし ました。コロニーは（A）明視野顕微鏡および （B）アルカリフォスファターゼ染色に より観察しました。

がん研究を増進

Lipofectamine 3000

は、多岐にわたる細胞でより高いトランスフェ

クション効率を示すため、がん研究に用いる細胞株の選択肢が大き

く広がります。

人工多能性幹細胞の作製

人工多能性幹細胞（

iPSC

）は、無数の疾患および症状に対する未

来の再生医療および個別化治療につながる大きな可能性を秘めて

います。

Lipofectamine 3000

に

Invitrogen

™

_Epi5

™

_{Episomal iPSC}

Reprogramming Kit

を組み合わせて使用することにより、優れたト

ランスフェクション効率が得られ、エレクトロポレーションを使用せず

に高効率な体細胞のリプログラミングを実現できます（図

5

）

ゲノム編集の成果を向上

Lipofectamine 3000

は、従来の遺伝子導入法の限界を打開し、ゲ

ノム編集のような新しいテクノロジーを利用した研究をより促進す

ることを可能にしました。このトランスフェクション試薬を用いて、

Invitrogen

™

_GeneArt

™

_CRISPR

_により、

_HepG2

_および

_U2OS

_細胞

において

AAVS1

遺伝子座のターゲティングを行ったところ、トラン

スフェクション効率、蛍光強度、およびゲノム切断に向上が見られま

した。この高い導入効率とゲノム編集効率は、

Invitrogen

™

_GeneArt

™

Precision

™

_TALs

_{においても同様に認められました。導入効率が向}

上することにより、ゲノムに対する部位特異的な挿入が促進され、ダ

ウンストリーム解析に進むための手間が軽減し、幹細胞の操作がより

容易となります。

幹細胞へのトランスフェクション

Lipofectamine 3000

は、幹細胞の有用性を最大限に引き出すため

に、エレクトロポレーションに代わる高効率で低コストな核酸導入法と

して開発されました（図

7

）。細胞ストレスの高いエレクトロポレーショ

ンに代わり、高度な脂質ナノ粒子テクノロジーが、リプログラミング

のワークフローを簡略化し、新しいゲノム編集技術を可能にします。

B DNA: 1.0 µg Lipofectamine 3000 SSEA4+/GFP+: 42% GFP MFI 247344 DNA: 1.3 µg Lipofectamine 3000 SSEA4+/GFP+: 69% GFP MFI 456741 H9胚性幹細胞 iPS細胞 Lip ofe ct am ine 3 00 0 T ra ns fe ct ion R ea ge nt ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 装置

Or

dering information

In vivo ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 関連試薬

mRNA

_{トランスフェクション}

DNA

トランスフェクション

2. Endocytosis into cell 1. Attachment to cell 3. Escape from endosome 4. Nuclear

entry expressionProtein

Reagent– mRNA complex Endosome DNA Protein mRNA Reagent– DNA complex Nucleus

Lipofectamine MessengerMAX

Transfection Reagent

Invitrogen

™

_{Lipofectamine}

™

_MessengerMAX

™

_{mRNA Transfection}

Reagent

は、

mRNA

導入用トランスフェクション試薬で、神経細

胞および幅広い種類の初代細胞において、一般的な

DNA

の導

入試薬に比べて、トランスフェクション効率を大幅に改善するこ

とが期待できます。アプリケーションの結果を改善し、より生物

学的な意味を持つ細胞実験を行うことができます。これらの導

入困難な細胞における導入効率の改善は、

mRNA導入効率を

最大限に高めるように最適化された弊社が持つ最新の脂質ナノ

粒子テクノロジーと、

DNA

導入で必要となる

DNA

の核への取

り込みステップを省くことにより実現しています。

Lipofectamine MessengerMAX

試薬は、骨髄由来間葉系幹細 胞へのトランスフェクションを高効率に行うことができます。ウイ ルスベクターの毒性の影響を受けることもありません。 ペンシルベニア大学

Dr. Daniel Cohen

一般的な

DNA

_{の導入に比べて、トランスフェクション効率を大幅に改善}

核に入る必要が無く、細胞質で迅速にタンパク質発現

ゲノム組込みのリスクなし

神経細胞、初代細胞、幹細胞を用いた研究を促進

ゲノム組み込みのリスクがなく、迅速にタンパク質を発現

Lipofectamine MessengerMAX

を用いた

mRNA

導入では、全般的にタンパク質が迅速に発現され、トランスフェクションされた細胞間で発

現に非常に高い均一性が認められました。また

mRNA

の導入では、

DNA

の核への取り込みステップがないため（ステップ

4

）、ゲノム組み込

みのリスクが排除されており、トランスフェクション効率は細胞周期による影響を受けません。

Lipofectamine MessengerMAX mRNA reagent DNA 導入用試薬 他社mRNA 導入用試薬 神経細胞 hNSC BJ線維芽細胞 RAW 264.7 Expression vector DNA T7 ORF

Cloning option

PCR option

Gateway®

pcDNA™-DEST40 Vector

SV₄₀ ori f1 o_ri BGH pA P CMV A m pic illinR pUC ori SV40 p A Neo myc in

T7 attR1 CmR ccdB attR2 V5 epitope 6xHis

ARCA-capped mRNA with poly(A) tail

Timeline

Steps

Day 0 1 Seed cells to be 70–90% confluent at transfection Day 1 2

Diluted MessengerMAX Reagent

Vortex 2–3 sec

Dilute MessengerMAX reagent in Opti-MEM medium (2 tubes)

—mix well

3

Diluted mRNA

Prepare diluted mRNA master mix by adding mRNA to

Opti-MEM medium—mix well

4 Add diluted mRNA to each tubeof diluted MessengerMAX reagent (1:1 ratio)

5 Incubate

6 Add mRNA-lipid complex to cells

Day 2–4 7 Visualize/analyze transfected cells

神経細胞や初代細胞でトランスフェクション効率が改善

Lipofectamine MessengerMAX

による

mRNA

導入例

mRNA

導入を行うための

3

つのステップ

DNA

鋳型の調製

T7プロモーター配列を含むDNA鋳型を調製します。

DNA鋳型の調製は、目的遺伝子をInvitrogen™ Gateway™ pcDNA™-DEST40 ベク ターにクローニングするか、もしくはそのベクターを鋳型にT7プロモーター配列を含む プライマーを用いてPCR増幅するか、いずれかの方法により行います。

mRNA

の合成

Invitrogen™ _{mMESSAGE mMACHINE}™ _{T7 ULTRA Transcription Kitを 使 用 し て、}

調製した鋳型DNAから転写によりmRNAを合成します。

mRNA

の導入

Lipofectamine MessengerMAXのシンプルなプロトコールに従って、目的のmRNAを 導入します。 トランスフェクション効率 （%）: <30%　　　　　　　30–50% 51–79%　　　　　　　　 >80% 図8. Lipofectamine MessengerMAX は、初代マウス皮質神経細胞、hNSC、BJ 線維芽細胞、およびRAW 264.7細胞において、主要なDNA導入試薬や従来の 他社mRNA導入試薬に比べてより優れた導入効率を実現

hNSCを除くすべての細胞では、Lipofectamine MessengerMAX および他社mRNA導 入試薬を用いて、24-ウェルフォーマットで1ウェルあたり500 ng のGFP mRNA を各 細胞に導入しました。 また、主要なDNA 導入試薬を用いて、1ウェルあたり500 ng の GFP DNA を各細胞に導入し、トランスフェクションから24時間後にGFP発現を観察しま した。

hNSCでは、Lipofectamine MessengerMAX および他社mRNA導入試薬を用いて、48 ウェルフォーマットで1ウェルあたり250 ng のGFP mRNA を各細胞に導入しました。 また、主要なDNA 導入試薬を用いて、1ウェルあたり250 ng のGFP DNA を各細胞に 導入し、トランスフェクションから24時間後にGFP発現を観察しました。

1

2

3

細胞タイプ _{トランスフェクション効率（%）}Lipofectamine MessengerMAX の

MDA-MB-231

A431

A549

bEnd.3

BJ

線維芽細胞

H9 ESC

初代肝細胞

Hep G2

HT-29

iPSC

初代ケラチノサイト

L929

LNCaP

hNSC

MCF7

Neuro-2a

初代神経細胞

RAW 264.7

RBL

SK-N-SH

SH-SY5Y

Li po fec ta m ine M es sen ger M A X T ra ns fec tio n R ea gen t ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 装置

Or

dering information

In vivo ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 関連試薬

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.2 1.0 1.4 1.6 10 nM + Lipofe ctami ne RNAiM AX 10 nM + B社 製品 10 nM + T社 製品 10 nM + Q社 製品 1 nM + Lipofe ctami ne™ RNAiM AX 1 nM + B社製 品 1 nM + T社製 品 1 nM + Q社製 品 Nontr ansfe cted p53, relati ve to nont rans fec ted

Scrambled control p53 siRNA

1 nM 10 nM 0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100% Pri m ar y co rt ex P rim ar y hi pp oc am pu s G lia l p rec ur sor NS C Rat astrocytes Human astrocytes P C -1 2 M EG -0 1 JA W S II TF -1 R A W 2 64.7 HUVE C RH 30 -JN DSRC T-1 TC 71 Negative control

Neuronal and glial precursor Blood cell Soft tissue cell

Average GAPDH mRNA remaining

細胞生存率 （ ％ ） p53 発現 レ ベル Lipofectamine RNAiMAX試薬量 p53 発現レベル 細胞生存率（％） μ μ μ μ μ μ μ μ

Lipofectamine RNAiMAX

Transfection Reagent

Invitrogen

™

_{Lipofectamine}

™

_{RNAiMAX Transfection}

Reagent

は、

siRNA

導入用に特化して開発されたトランスフェ

クション試薬です。幅広い細胞株において、高効率で低毒性

な遺伝子導入が可能です。また、

microRNA

（

miRNA

）の

導入にも適しており、

siRNA/miRNA

を用いた

RNAi

実験には

Invitrogen

™

_{Lipofectamine}

™

_RNAiMAX

_{が最もお奨めの試薬}

になります。

siRNA

_{の導入に適したトランスフェクション試薬}

少ない

siRNA

量でも高いノックダウン効率

幅広い試薬レンジにおいて高い細胞生存率を維持

さまざまな細胞株で使用可能

図9. Lipofectamine RNAiMAXと他社試薬との比較 RNAiMAX および他社試薬（B社, T社, Q社）の計4種類のトランスフェクション試薬を 用いて、10 nMまたは1 nMのp53 siRNA を導入した場合のp53遺伝子の抑制効果を 確認しました。

少ない

siRNA

量でも効率よくノックダウン

高効率な遺伝子ノックダウンを達成するためには、

Lipofectamine

RNAiMAX Transfection Reagent

をぜひご使用ください。わずか

1

nM

の

siRNA

で、ターゲット遺伝子を高効率でノックダウンすることが

可能です。

さまざまな細胞株で使用可能

細胞毒性が低く、最適化が容易

Lipofectamine RNAiMAX Reagent

は、

10

倍の濃度範囲にわたっ

て、高いノックダウン効率と優れた細胞生存率が保たれます（図

10

）。このため、

Lipofectamine RNAiMAX

試薬は、低濃度の

siRNA

で容易に最適化でき、同時に実験系に対する細胞毒性を抑えます。

トランスフェクション時の細胞毒性によって、ターゲット遺伝子による

表現系が隠れてしまう可能性があるため、トランスフェクション試薬

量を最小限に抑えることは

RNAi

実験を成功させるための一つの重

要な要素となります。

図10. Lipofectamine RNAiMAXは幅広い試薬レンジにおいて、高いノックダウン効果 と細胞生存率が得られる 0.1 ～ 1.0 μL のRNAiMAX試薬量を用いて実験を行なったところ、p53遺伝子レベルが 効果的に抑制されていること、試薬量が多い条件においても優れた細胞生存率が得られ ていることが確認されました。 図11. Lipofectamine RNAiMAXを用いた

Silencer Select siRNAの導入例

Lipofectamine RNAiMAXを用いて各種細胞に30 nM/well のSilencer Select siRNAをトランスフェクションし、GAPDH mRNAのノックダウン効率をqPCRで評価しました。

Lipofectamine CRISPRMAX Cas9

Transfection Reagent

Invitrogen

™

_{Lipofectamine}

™

_CRISPRMAX

™

_Cas9

Transfection Reagent

は、タンパク質フォーマットの

Cas9

Nucleaseで行うCRISPR

のゲノム編集に最適な導入試薬です。

脂 質 ベ ースのトランスフェクション試 薬として 定 評 ある

Lipofectamine

シリーズとして開発され、

Cas9 Nuclease

タン

パク質と

RNA

の複合体を高い効率で細胞に導入します。

多くの細胞で、

CRISPR

_{によるゲノム編集の効率を最大化}

導入された

Cas9 Nuclease

タンパク質は、細胞内で速やかに働き、

代謝されるため、オフターゲットが最小化

Invitrogen

™

_GeneArt

™

_{Platinum Cas9 Nucrease}

_{を始め、一般的な}

Cas9 Nuclease

_{タンパク質}

& gRNA

_{複合体導入に対応}

CRISPR

導入フォーマット

Plasmid

（

GCD%

）

mRNA

（

GCD%

） タンパク質（

GCD%

） トランスフェクション試薬

Lipofectamine

₃₀₀₀

_MessengerMAX

Lipofectamine

Lipofectamine

_CRISPRMAX

293FT

49

70

85

U2OS

15

21

55

マウス

ES

細胞

30

45

75

ヒト

iPS

細胞

0

66

55

N2A

66

66

70

Jurkat

0

0

19

K562

0

0

20

A549

15

23

48

HepG2

N/A

N/A

30

3T3

N/A

N/A

57

HCT116

N/A

N/A

85

推奨するトランスフェクション 試薬＆機器

CRISPR

導入フォーマット

DNA

mRNA

protein Lenti-Viral

_production

Lipofectamine

CRISPRMAX

✓

Lipofectamine 3000

✓ ✓

Neon Transfection system

✓ ✓ ✓ ✓

Lipofectamine

MessengerMAX

✓ 表1. DNA、mRNA、タンパク質フォーマットでの ゲノム編集効率の比較 多くの細胞でタンパク質フォーマットのゲノム編集の 効率が高いことを確認しました。ゲノム編集の効率は、 Invitrogen™ _GeneArt™ _{Genomic Cleavage Detection}

Kitを使って、ターゲット部位で切断された効率で評価し ました（GCD%）。

図12. iPS細胞とES細胞での切断効率を検証

Gibco™ _{Human iPS細 胞（左 ）、及 び H9 ES 細 胞（右 ）へ、GeneArt}™ _Cas9/gRNA

リボヌクレオタンパク質（ RNP）複合体をトランスフェクトしました。トランスフェクション 48～72時間後に、GeneArtGenomic Cleavage Detection Kitを用いて標的部位の切断 効率を確認しました。

ゲノム編集におけるトランスフェクション法の選択

ゲノム編集効率が高いタンパク質フォーマットでのゲノム編集には、

Lipofectamine CRISPRMAX

が最適です。また、レンチウイルスのパッ

ケージングには、

Lipofectamine 3000

（

4

ページ）が推奨です。リンパ

球系など、浮遊細胞などでは、

Neon Transfection system

（

12

ページ）

によるエレクトロポレーションをお試しください。

ゲノム編集効率の高いタンパク質フォーマット

iPS

細胞や

ES

細胞でも優れたゲノム編集効率を実現

Gibco iPSCs H9 ESCs

Control Cas proteingRNA+ Control Cas proteingRNA+

Cleavage % 0 0 71 83 83 0 0 58 64 58 Lip ofe ct am ine R N A iM A X T ra ns fe ct ion R ea ge nt Lip ofe ct ami ne C R IS PR M A X C as 9 T ra ns fect ion R ea ge nt ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 装置

Or

dering information

In vivo ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 関連試薬

8 16 Expi293 medium Test medium 1 Test medium 2 Test medium 3 14 12 10 100 75 50 25 0 2 3 4 5 6 7 8 8 6 4 2 0 0 1 2 3 4 5 6 7 Days in culture Days in culture Viability （ % ）

Viable cell density _（cells/mL

×

10

6）

1 mL

EPO

Crypto

human lgG

10 8 6 4 2 0 30 mL 1000 mL 1 mL FreeStyle 293 Expi293 1200 1000 800 600 400 200 0 30 mL 1000 mL 1 mL 1200 1000 800 600 400 200 0 30 mL 1000 mL

Expi293 Expression System

哺乳類細胞系タンパク質発現システム

Gibco

™

_Expi293

™

_{Expression System}

は、哺乳類細胞による

一過性タンパク質発現システムです。発現量を高めるために特

別に開発された

“

細胞 + 培地 +

トランスフェクション”

から構

成されたトータルシステムです。高い増殖能を誇る

Expi293F

細胞、高密度でも培養可能な

Gibco

™

_Expi293

™

_Expression

Medium

、さ ら に 高 密 度 培 養 用 に 開 発 さ れ た

Gibco

™

ExpiFectamine

™

₂₉₃

_{トランスフェクション試薬が相互に作用}

し、これまでにない大量発現を可能にしています。

従来法よりも

2

～

10

倍の大量発現　（培養

1 L

あたり最大

1

グラム）

培養容量は

1 mL

_～

10 L

_{以上まで幅広いスケール調整が可能}

従来の低密度

HEK 293

システムから

Expi293 Expression System

への移行も有効

Expi293

システム専用のトランスフェクション試薬

ExpiFectamine 293 Transfection Kit

ExpiFectamine 293 Transfection Kit

は、

Expi293

Expression System

の主要な構成品の１つです。本製

品は、高密度に培養した

HEK293

細胞の一過性トランス

フェクションを行うための試薬です。高効率な陽イオン

性脂質ベースのトランスフェクション試薬およびトランス

フェクションエンハンサーが含まれています。

Expi293

Expression Medium

で培養された

Expi293F

細胞のタン

パク質発現量を最大限に高めるように設計されています。

私がこれまで使用してきた

HEK293

一過性発現システムの中で、

2.3 g/L

の発現量を達成したのは

Expi293 Expression System

が初めてです。

Jelte-Jan Reitsma Research associate

グラムレベルの高い発現量

大量発現のための高密度培養を実現

Expi293 システム によるタンパク質発現

ヒトエリスロポエチン（EPO）、Crypto、および ヒト IgG を FreeStyle 293 Expression System （■）とExpi293 Expression System（■）で発

現させ、比較しました。 タンパク質の発現は、1 mL、30 mLおよび 1 Lの培養液中で行い、タンパク質の回収は 遺伝子導入後5日から7日後に行いました。 それぞれの収量はすべて、1 Lの培養液当た りのタンパク質量（ mg）で示しています （mg/L）

Expi293

システムの詳細はウェブページも合わせてご覧ください。

　

www. thermofisher.com/expi293

図14. 培養日数の経過による生細胞率および生存細胞密度について、Expi293 Expression Mediumおよび他の293培養培地で増殖した細胞を比較

3 2 1 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 培養日数 力 価（ タ ン パ ク 質 収 量 ）（

g

/L

）

Max titerプロトコール High titerプロトコール Standardプロトコール

100 60 20 0 40 80 フラスコ サイズ 培地量 35 mL 70 mL 140 mL 280 mL 1 L 125 mL 250 mL 500 mL 1 L 3 L コ ン ト ロ ー ル に 対 す る 割 合 4 2 3

160x

3x

95x

4x

25x

2x

1 0 _FreeStyle CHO Expi293 ヒトIgG ExpiCHO 力 価（ タ ン パ ク 質 収 量 ）（ g /L ） 2 1 0 _FreeStyle CHO Expi293 ウサギIgG ExpiCHO 力 価（ タ ン パ ク 質 収 量 ）（ g /L ） 600 400 200 0 _FreeStyle

CHO Expi293 ExpiCHO

力 価（ タ ン パ ク 質 収 量 ） (m g /L ) ヒトエリスロポエチン

ExpiCHO Expression System

哺乳類細胞系タンパク質発現システム

Gibco

™

_ExpiCHO

™

_{Expression System}

は、

CHO

細胞による

哺乳類系タンパク質発現システムです。細胞・培地・遺伝子導

入試薬を厳選し、従来の一過性システムを凌ぐ発現量を達成し

ました。また、

ExpiCHO

システムは、創薬プロセスの初期段

階のスクリーニング用に、迅速かつ効率的な一過性

CHO

発現

タンパク質を入手できます。

既存の一過性システムよりも優れた発現量（最大

3 g/L

_）

シンプルでスケーラブルなタンパク質産生（用途に応じて

3

_{種類のプロトコールから選択可能）}

創薬プロセスの初期段階から一貫して

CHO

_{細胞で開発に取り組むことが可能}

既存の一過性システムよりも優れた発現量

図15. FreeStyle CHO、Expi293、およびExpiCHOシステムによる組換えタンパク質発現 ヒトIgG、ウサギIgG、およびエリスロポエチンをFreeStyle CHO、Expi293、およびExpiCHO一過性発現システムで発現させた際の発現量を示しています。ExpiCHOシステムにお けるタンパク質発現量は、FreeStyle CHOシステムを用いた場合の25 ～160倍 、Expi293システムを用いた場合の 2～ 4倍となりました。

シンプルでスケーラブルなタンパク質産生

ExpiCHO

システムは、

“

Standard

”

“

High titer

”

“

Max titer

”の

3

種類のプロトコールを提供しています。

お客様の研究ニーズ、タンパク質収量、時間、および装置の利用可能性に応じてお選びいただけます。

図16. 異なるプロトコールオプションにおけるヒトIgG発現の速度 Standard プロトコール：1回のフィード添加＋温度シフトなし High titer プロトコール：1回のフィード添加＋32℃への温度シフト Max titer プロトコール：2回のフィード添加＋32℃への温度シフト 図17. ExpiCHOシステムのスケーラビリティ ExpiCHOシステムは、125 mL（コントロール）から3 Lのフラスコサイズまで、タンパ ク質発現量の割合が15％の範囲内でスケール調整可能です。35 mL未満の容量および バイオリアクタースケール用の追加のプロトコールはオンラインで入手できます。 E xp i2 93 E xp re ss io n S ys te m E xpi C HO E xp re ssi on S ys te m ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 装置

Or

dering information

In vivo ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 関連試薬

A B

Pulse Number/Pulse Width/Pulse Voltage 120 100 80 60 40 20 0 100 4 4 8 3 0 0 0 1 20msec 1400V 1 20msec 1600V 1 30msec 1200V 3 10msec 1400V Percent(%)

Pulse Number/Pulse Width/Pulse Voltage 120 100 80 60 40 20 0 0 100 7 ₅ 6 0 0 1 20msec 1500V 1 20msec 1700V 3 10msec 1500V Percent(%) A B A B

Neon Transfection System

Invitrogen

™

_Neon

™

_{Transfection System}

は、ピペットチップ

型電極（特許）を採用した次世代エレクトロポレーション装置

です。浮遊細胞や血球系細胞など、リポフェクション試薬では

じゅうぶんな導入効率が得られない、またはさらに導入効率を

向上させたい場合、

Neon

システムが最良のソリューションとな

ります。

私がこのシステムを推奨する理由は、とにかく使い易いというこ とです。実際、コストも私たちが以前に使用していたシステムよ り若干安価ですし、何よりもデータベースなどの特長が気に入っ ています。 マンチェスター大学　

Dr. Lydia Wunderley

リポフェクション試薬では導入が困難な細胞に最適なツール

ピペットチップ型電極により、高効率・低毒性な

エレクトロポレーションが実現

10

4

～

5

_×

10

6

個の細胞に、

DNA

_、

RNA

_{、タンパク質が導入可能}

細胞の種類によって試薬を使い分ける必要なし

Neon システムによるJurkat細胞へのプラスミド導入結果 Neon システムを用いてJurkat細胞へEGFP遺伝子を導入後、 24時間でレポーター遺伝子の発現を観察しました。 （A）位相差顕微鏡での細胞像 （B）蛍光顕微鏡での細胞像 図18. Jurkat細胞とPC12細胞でのsiRNA効果の検証 （A）細胞種： Jurkat （B）細胞種：PC12

Neon システムにより50 pmol のGAPDH siRNAを導入し、24時間後にノックダウン効 果を検証しました。Jurkat細胞は、実施した4条件すべて90%以上のノックダウン効率 が観察され、1400 V,10 ms,3 pulseの条件で最大97%のノックダウン効率が見られま した。PC12細胞は、3条件実施し、1700 V, 20 ms, 1 pulseの条件で最大95%のノッ クダウン効率が確認されました。最高のノックダウン効率が確認された時の生存率は、 alamarBlue™ 試薬で確認した結果、それぞれ約80%と約83%でした。 新しいNeon Transfection Systemのピペットチップ型 電極（A）と従来のキュベッ トタイプ（B）との比較

表

2. Neon

システムと他社システムとの比較

Neon システム 従来法

画期的なピペットチップ型電極

を採用

Neon

システムによるエレクトロポレーションは、従来の

キュベットタイプではなく、ピペットチップ型チェンバー

にて、サンプル採取およびエレクトロポレーションを行

ないます。この革新的技術は、操作性を向上させるだけ

でなく、

チップ内で均一な電界を形成することで導入効

率を高め、電極に金メッキを施すことで細胞へのダメー

ジを軽減しています。

細胞毒性の低減

+

高い導入効率

+

操作性の向上

エレクトロポレーション

インビトロジェン Neon_システム L_社 遺伝子導入システム Neonシステムのメリット システム仕様 金メッキを施した電極をもつ長く細いピペット チップをチャンバーとして使用するエレクトロ ポレーション装置 アルミニウム電極をもつ従来のプラスチッ ク製キュベットを使用したエレクトロポレー ション装置 チップの形状により、温度上昇や細胞に有害なイオン成分 の流出が抑えられ、毒性が低く効率の高いトランスフェク ションが可能（Biosens Bioelectron 23:1353 （2008））. サンプル調製 Neonピペットチップ （10 μL または100 μL サイズ） プラスチックキュベット （100 μLサイズ） 少ない細胞数からトランスフェクション可能 消耗品 すべての細胞で共通の消耗品を使用可能。 室温保存 50種類以上の異なる消耗品から細胞のタイプによって使い分けが必要。 冷蔵保存 異なる複数のキットを買い揃える必要が無い。 冷蔵庫のスペースの確保や廃棄リスクも減り、無駄なく経 済的に使用可能

バッファー を入れる セットする 1. Neonシステムのセットアップ 2.サンプルの調製 Neonピペットに チップをセットし、 サンプルを吸引 3.サンプルをNeonシステムにセット ピペットステーションに Neonピペットをセット 4.エレクトロポレーション実行 タッチパネルで 選ぶだけ 本体画面の スタートボタンを選択 5.細胞を培地へ 導入を終えた サンプルを 培地に移す 細胞懸濁液と 核酸溶液を混合 Neon チューブに バッファーを入れ、 ピペットステーションに セット

* Transfection efficiency is calculated from total population of live and dead cells.

上記以外にも、多くの細胞タイプで良好な結果が得られています。実績のある細胞名および各導入条件に関する情報は、弊社ウェブサイトからご覧いただけます。 www.thermofisher.com/neon

操作の流れ

どなたでも簡単にご使用いただけます。

Neon

システムによるプラスミド導入例

Neon

_{システム用消耗品キット}

・電極チップのサイズにより、

10

µ

L

用と

100

µ

L

用の

2

種類があります。

・すべての細胞で共通の消耗品を使用できます。細胞の種類によって消耗品を使い分ける

必要がありません。

キットには、反応に必要なものがすべて含まれています。

（

電極チップ、サンプル調製液、バッファー、チューブ）

* Neon チップは、1本2回まで使用可能です（サンプルが同じ場合）。 ** Neon チューブは、1本10回まで使用可能です（サンプルが同じ場合）。

キットタイプ

製品番号

10 µL

_用

100 µL

_用

（MPK1096） （MPK1025） （MPK10096） （MPK10025）

Neon チップ*（最大回数） 96 tips （192回） 25 tips （50回） 96 tips （192回） 25 tips （50回）

Neon チューブ** 20 5 20 5 Resuspension Buffer R 3 × 1 mL 1 mL 30 mL 10 mL Resuspension Buffer T 3 × 1 mL 1 mL 30 mL 10 mL Electrolytic Buffer E 2 × 150 mL 75 mL - -Electrolytic Buffer E2 - - 2 × 150 mL 75 mL _{*** MPK1096} またはMPK10096を使用した場合

Cell line

Cell type

Transfection efficiency

_（%）*

Viable cells

_（%）

Astrocyte primary cells

Brain neuron

76

88

Dendritic primary cells

Blood

50

70

HL-60

Human acute myeloid leukemia

55

70

Human neural stem cell

ES

53

97

Jurkat

T-cell leukemia

94

97

KG-1a

Blood

76

83

MEF primary cell

Embryo

80

75

Mesenchymal stem cells

Bone marrow

54

90

Mouse embroynic stem cells

Embryo

88

96

Vero

Kidney

93

59

消耗品ランニングコスト***

Neon

チップ

使用回数

1

反応あたりの

コスト

1

回

￥

1,927

2

回

￥

964

N eo n T ra ns fe ctio n S ys te m ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 装置

Or

dering information

In vivo ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 関連試薬

Complexation buffer Complex

1

2

3

4

5

siRNA duplex Invivofectamine 3.0 Reagent Lateral caudal vein Dorsal vein 30 min 50ºC Diluted siRNA Complex !"!!#$ %!"!!#$ &!"!!#$ '!"!!#$ (!"!!#$ )!"!!#$ *!"!!#$ +!"!!#$ ,!"!!#$ -!"!!#$ %!!"!!#$ ./0$1234$563.7$889:$563.7$ ;<99$563.7$ !"#$%&'!()*)*+% =3.7$>/=?6@6@0$ 0% 20% 40% 60% 80% 100% 120% No Treat. Neg CTRL

siRNA PPIB siRNA FVII siRNA

mRN

A

expression % remaining

Invivofectamine 3.0

Reagent

Invitrogen

™

_{Invivofectamine}

™

_{3.0 Reagentは、大幅に性能が}

改良された

in vivoRNAi

導入用の画期的な試薬です。マイクロ

グラムレベルの

siRNA

を用いて最大

85

％のノックダウンを達成

します。

シンプルな操作で使いやすい

わずか数ステップの作業で、導入用の

siRNA

複合体を調製するこ

とができます。

高いノックダウン効果

ターゲットのノックダウン検証において、最大

85%

のノックダウ

ンが観察されています。

siRNA使用量を削減

従来の試薬と比べ、使用する

siRNA

を最大

90%

まで削減できます。

ノックダウンの持続性

一回の投与で、長期間のノックダウン効果が観察されました。

低毒性

複合体は、極めて低い

in vivo

毒性を示します。

図20. Invivofectamine 3.0 Reagentを用いると、一回の静脈投与により肝臓における 標的ノックダウンが可能です。

Invivofectamine 3.0 ReagentとFactor VII (FVII)またはPPIBをターゲットとするsiRNA との複合体を、マウス体重1 kgあたり1 mgの用量(mg/kg)で投与しました。ターゲッ ト遺伝子のmRNAレベルのノックダウン効率は、85%でした。(Applied Biosystems™ TaqMan™ assayによる測定) 図19. 投与するためのRNAi/Invivofectamine 3.0 Reagent複合体は、わずか 数 ス テップの操作で迅速に調製できます。

In vivo

_{トランスフェクション試薬}

シンプルな操作で使いやすい

導入用の

Invivofectamine 3.0 Reagent

と

RNAi

の複合体は、

“試薬の

混合→

30

分インキュベート→希釈”の簡単な操作で調製が完了します。

(

図

19)

高いノックダウン効果

Invivofectamine 3.0 Reagent

と

Factor VII

を タ ー ゲ ット す る

Invitrogen

™

_Ambion

™

_{in vivo siRNA}

_または

_PPIB

_{をターゲットとす}

る

Invitrogen

™

_Stealth

™

_RNAi

_{との複合体は、肝臓組織へマウス尾静}

脈注射によって導入されました（図

20

）。

mRNA

レベルで

Factor VII

および

PPIB

の高いノックダウン効果が確認されました。

!"##$%&'(#$

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

0.01

0.1

1

10

mRN

A

remaining %

FVII siRNA mg/kg

Invivofectamine 3.0

Invivofectamine 3.0

Units

1 0.1

GLU

1 3 U

ALP

1 3 U

ALT

1 3 U

AST

1 3 U

TBIL

1 3 U

CHOL

1 3 U

TRIG

1 3 U 10 100 1,000

Blood chemistry markers

図21. Invivofectamine 3.0 ReagentおよびFVII をターゲットとするsiRNA では、単回静脈内注射後に肝臓において用量反応ノックダウンが生じま した。

Invivofectamine 3.0 ReagentとFVII をターゲットとするInvitrogen™ _{in vivo}

siRNAとの複合体を、用量0.02 ～ 2 mg/kgの範囲で投与しました。血清を分離 し、FVIIタンパク質レベルについてアッセイしました。(Biophen™ _chromogenic

assay)

図22. 時間経過および各投与量におけるin vivo 毒性マーカーの評価

Invivofectamine 3.0 ReagentとFVII をターゲットとするInvitrogen™ in vivo siRNAとの複合体をマウスに1 mg/kgまたは3 mg/kgの用 量で投与しました。血液サンプルを2、24、48時間後に採取し、臨床化学アッセイを用いていくつかのバイオマーカー（Antech）について 評価しました。

ノックダウンに使用する

siRNA

量を削減

尾静脈注射により、

Invivofectamine 3.0 Reagent

と

siRNA

の複合体を含有量の範囲内で導入しました。投与から

24

時間後に、発色アッセイを用い

て血清中の

FVII

タンパク質レベルを測定しました（図

21

）。ノックダウン効果の高さは、複合体中の

siRNA

量と相関しました。

Invivofectamine 3.0

Reagent

の

ED

50

は、

0.1 mg/kg

です（これまでの導入試薬では、

1.0 mg/kg

でした）。

in vivo

_{毒性が低い}

Invivofectamine 3.0

試薬の

in vivo

毒性を評価するために、複数回の試薬の投与時点における血液化学分析およびサイトカイン測定を行いました（図

22

）。

Invivofectamine 3.0 Reagent

を用いてトランスフェクションを行なった個体中のバイオマーカーの値は、トランスフェクション未処理の場合と比

較して大きな差異は認められませんでした。

In viv ofe ct ami ne 3 .0 R ea ge nt ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 装置 In vivo ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬

Or

dering information

ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 関連試薬

Opti-MEM I Reduced-Serum Medium

Gibco

_{選択用抗生物質}

Gibco

™

_Opti-MEM

™

_{I Reduced Serum Medium}

は、

Eagle

’

s

Minimum Essential Medium

を改良した組成となっています。

HEPES

と重炭酸ナトリウムで緩衝され、ヒポキサンチン、チミ

ジン、ピルビン酸ナトリウム、L-グルタミン酸、微量元素、およ

び増殖因子が添加されています。血清を添加した培地中で増殖

している細胞の大部分は

Opti-MEM

培地に移行させ、血清を

50%

以上低減させることができます。

Opti-MEM

培地は、複合体形成前のトランスフェクション試薬と

核酸の希釈に適しており、

Lipofectamine

試薬シリーズを用い

た実験時の必需品となります。

Gibco

™

ブランドの高品質な選択用試薬は、安定発現株の樹立、

二重セレクションの手法などに有用です（表

2

）。

トランスフェクション関連製品

表

3.

真核生物用抗生物質

選択用抗生物質 一般的な用途 一般的な使用濃度 サイズ（粉末タイプ） サイズ（液体タイプ） ブラストサイジン 真核細胞、バクテリア

1–20 µg/mL

50 mg

10 x 1 mL, 20 mL

ジェネティシン（

G418

） 真核細胞

100–200 µg/mL

_{200–500 µg/mL}

（バクテリア）_{（哺乳類細胞）}

1 g, 5 g, 10 g, 25 g

20 mL, 100 mL

ハイグロマイシン

B

真核細胞、二重選択実験

200–500 µg/mL

–

20 mL

ミコフェノール酸 哺乳類細胞、細胞性細胞

25 µg/mL

500 mg

–

ピューロマイシン 真核細胞、バクテリア

0.2–5 µg/mL

–

10 x 1 mL, 20 mL

ゼオシン 哺乳類、昆虫、酵母、_{バクテリア、植物細胞}

50–400 µg/mL

–

8 x 1.25 mL, 50 mL

ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 装置

Or

dering information

O pti -M EM I Re du ce d-Se ru m M edi um Gibco 選択用抗生物質 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 関連試薬 In vivo ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬

Ordering information

トランスフェクション試薬および機器

製品名

サイズ

製品番号

価格

Lipofectamine 3000

Lipofectamine 3000 Transfection Kit

0.1 mL

L3000001

¥9,900

0.75 mL

L3000008

¥70,800

1.5 mL

L3000015

¥106,400

1.5 mL

×

5

L3000075

¥471,300

15 mL

L3000150

¥789,200

Lipofectamine MessengerMAX Reagent

Lipofectamine MessengerMAX Reagent

0.1 ml

LMRNA001

¥10,400

0.3 ml

LMRNA003

¥30,000

0.75 ml

LMRNA008

¥72,600

1.5 ml

LMRNA015

¥103,100

15 ml

LMRNA150

¥845,900

Lipofectamine RNAiMAX

Lipofectamine RNAiMAX Transfection Reagent

0.1 mL

13778100

¥10,400

0.3 mL

13778030

¥30,100

0.75 mL

13778075

¥72,700

1.5 mL

13778150

¥103,300

15 mL

13778500

¥847,900

Lipofectamine CRISPRMAX

Lipofectamine CRISPRMAX Cas9 Transfection Reagent

0.1 mL

CMAX00001

　

¥10,800

0.3 mL

CMAX00003

　

¥29,800

0.75 mL

CMAX00008

　

¥71,800

1.5 mL

CMAX00015

　

¥102,000

Expi293 Expression System

Expi293 Expression System Kit

*

1

_{1 kit}

_A14635

_¥236,900

ExpiFectamine 293 Transfection Kit

1 x 1 L culture

A14524

¥107,400

1 x 10 L culture

A14525

¥913,800

5 x 10 L culture

A14526

¥3,906,800

pcDNA 3.4 TOPO TA Cloning Kit

1 kit

A14697

¥146,600

* 1 Expi293 Expression System （A14635）の構成品

・ Expi293F Cells（1 mL）× 2 ・ Expi293 Expression Medium（1000 mL）× 1 ・ ExpiFectamine 293 Transfection Kit × 1（1 L Culture）

・ Antibody-Expressing Positive Control Vector × 1 ・ Opti-MEM Reduced-Serum Medium（100 mL）× 1

ExpiCHO Expression System

ExpiCHO Expression System Kit

*

2

_{1 kit}

_A29133

_¥276,000

ExpiFectamine CHO Transfection Kit

1 x 1 L culture

A29129

¥105,000

1 x 10 L culture

A29130

¥878,000

5 x 10 L culture

A29131

¥3,698,000

pcDNA 3.4 TOPO TA Cloning Kit

1 kit

A14697

¥146,600

* 2 ExpiCHO Expression System Kit（A29133）構成品

・ ExpiCHO-S Cells, （1×107 _{cells）× 2 ・ ExpiCHO Expression Medium （1000 mL）× 1}

・ ExpiFectamine CHO Transfection Kit （1 L Culture）× 1 ・ Antibody Expressing Positive Control Vector （A14662） ・ OptiPRO SFM （100 mL）× 1

Neon

_システム

Neon Transfection System*

3

₁

_ユニット

_MPK5000

_¥1,000,000

Neon Transfection System Starter Pack*

4

₁

_セット

_MPK5000S

_¥1,164,000

* 3 Neon Transfection System（MPK5000）は、Neon システム本体、Neon Pipette（MPP100）、Neon Pipette Station（MPS100）で構成されています。

* 4 Starter Pack（MPK5000S）には、Neon Transfection System（MPK5000）に、Transfection Kit（MPK10096、MPK1096 各 1 キット）が添付されています。

Neon

_{消耗品キット}

Neon Transfection System Kit

（100 μL）

1

キット（

Neon

チップ：

96

本）

MPK10096

¥185,000

1

キット（

Neon

チップ：

25

本）

MPK10025

¥61,700

Neon Transfection System Kit

（10 μL）

1

キット（

Neon

チップ：

96

本）

MPK1096

¥185,000

1

キット（

Neon

チップ：

25

本）

MPK1025

¥61,700

Neon Transfection Tubes

1

パック

（

100

本）

MPT100

¥55,000

Neon Pipette

１ユニット

MPP100

¥78,800

記載の価格は2016 年7月現在の価格です。消費税は含まれておりません。価格は予告なしに変更する場合がありますので、予めご了承ください。

製品名

サイズ

製品番号

価格

Invivofectamine 3.0

Invivofectamine 3.0 Reagent

1 mL

IVF3001

¥158,400

5 x 1 mL

IVF3005

¥588,000

その他のトランスフェクション試薬

Lipofectamine 2000

0.3 mL

11668030

¥27,500

0.75 mL

11668027

¥67,300

1.5 mL

11668019

¥101,200

5

×

0.75 mL

11668027SP

¥305,000

5

×

1.5 mL

11668019SP

¥454,700

Lipofectamine LTX

0.1 mL

A12621

¥9,900

（

0.1 ml

、

0.3 ml

、

1 ml

サイズには

Plus

試薬が添付されています）

0.3 mL

15338030

¥27,600

1 mL

15338100

¥82,500

15 mL

15338500

¥1,026,500

Plus Reagent

0.85 mL

11514015

¥34,600

その他の関連試薬

Opti-MEM I Reduced Serum Medium

Opti-MEM I Reduced Serum Medium

100 mL

31985062

¥1,900

500 mL

31985070

¥3,900

mRNA

_{転写キット}

mMESSAGE mMACHINE T7 ULTRA Transcription Kit*

5

₁₀

_反応

_AM1345

_¥96,800

50

反応

AMB13455

¥401,300

* 5 Lipofectamine MessengerMAX Reagent （6ページ）を用いたトランスフェクション実験において、mRNA転写産物を作製するための推奨試薬です。

Gibco

選択用抗生物質

ブラストサイジン

Blasticidin S HCl

_{（10 mg/mL）}

10 x 1 mL

A1113903

¥61,900

20 mL

A1113902

¥118,500

Blasticidin S HCl, Powder

50 mg

R21001

¥34,700

ジェネティシン（G418）

Geneticin Selective Antibiotic

_{（G418 Sulfate）}

_{（50 mg/mL）}

20 mL

10131035

¥31,500

100 mL

10131027

¥109,000

Geneticin Selective Antibiotic

_{（G418 Sulfate）, Powder}

1 g

11811023

¥18,100

5 g

11811031

¥54,700

25 g

11811098

¥227,000

ハイグロマイシン B

Hygromycin B

（50 mg/mL）

20 mL

10687010

¥35,000

ミコフェノール酸

Mycophenolic Acid

500 mg

11814019

¥39,000

ピューロマイシン

Puromycin Dihydrochloride

10 x 1 mL

A1113803

¥33,400

20 mL

A1113802

¥62,100

ゼオシン

Zeocin Selection Reagent

8 x 1.25 mL

R25001

¥43,000

50 mL

R25005

¥182,300

ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 装置

Or

dering information

In vivo ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試薬 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 関連試薬

テクニカルサポート 0120-477-392 [email protected] オーダーサポート TEL：03-6832-6980 FAX：03-6832-9584 営　業　部 TEL：03-6832-9300 FAX：03-6832-9580

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