ハムスターを用いて行つた日本脳炎の病毒実験

23 （東京女医大恥 第25巻 第8号頁315−318昭和30年8月）

ハムスター一be用いて行つアこ日本脳炎の病毒実験

東京女子医科大学細菌学教室 （主任 平野憲正教授）

助教授 中

ナカ 福 フク 小 オ 西 9シ 永 ナが 野 ノ 清 キヨ 慶 ケイ

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シコーウ （受付

_{昭和30年3月29目）}

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コ ン Schabelは脳炎に罹患して発病したマウスの 脳をハムスターに飼食させる事により，容易に脳 炎に感染させる事が出来たと癸表している。ハム スターは諸種の病原菌やビールスに対して，他の 小動物に比較すると感受性が大であると云われて いるので，私共は日本脳炎病毒の研究をハムスタ ー・ 用いて行ってみたQ嘗て当教室に於て小山が 日本脳炎病毒の普遍性を研究し，病毒は不潔な塵 埃と往k’共存する事を証明したので，私共は小山 の実験と同様な方法でハムスターに就ての実験の 継続を志したが，ハムスd7 一一の親は出産後，寝わ らを取替える事により興奮して仔を噛み殺すの で，無菌的飼育は不成功であった。そこで普通の 方法で飼育したハムスターに就て腸管及び腸内容 に於ける日本脳炎病毒の検索と血清に於ける補体 結合反応とを行い，またハムスターに於て日本脳 炎病毒の塵埃伝染及び飛沫伝染が実験的に成立す るや否やを試みた。実験に用いた日本脳炎病毒は 総て中山株である。 実 験 1｛ 普通の方法で飼育したハムスタymの腸管及び 腸内容に於ける日本脳炎病毒の検索 生後半年から1年の体電10⑪∼1209の雄のハ ムスター10匹をエーテルで殺し，腸管を細切，腸 内容と共に109を乳鉢で磨回し，普通ブイヨv30 ccを加えて乳剤を作り，300rpm 30分間，遠心沈 澱し，その上清をベルケフエルドNで濾過し，そ の濾液0．025ccを89前後の10匹宛のマウスの脳 内に接種したが，発症マウスは全然認められなか った。それ故にハムスターの腸管及び腸内容には マウスと異り，脳炎病毒は自然には存在しないの ではないのだろうかと考えられる。 実 験 童 普通の方法で飼育したハムスタ・・血清に於け る補体結合反応 生後3ヵ月のハムス、ター一 28匹の1血清を56。Cで 20分聞加温して非働性とし，これを1：2より 1：16まで稀釈して使用した。抗原としては日本 脳炎病毒中山株より作ったもの，溶．疽係としては 山羊．血球及びそれで免疫した家兎免疫一血清を使用 し，Casalsの術式によって補体結合反応を行っ た。その成績はハムスター28匹の晦れに於ても陰 性であった。 実 験 ］Ji 発症マウス脳の乾燥粉未をハムスターに吸入 せしめた実験 発症マウス脳を無水燐酸入りのデシケーターで 16∼20日間乾燥させ，それを乳鉢に入れて磨砕 し，粉未：にしたものを生後13∼23日のハムスター の鼻腔に入れ更に撒粉器で鼻腔内に充分吸人され る様に言式みた。

A，第1群の実験成績

第1群のハムスターは生後23日のものであって 10匹使用し，．L記の方法で実験したが，その成績 は表1に示す様に：No． 1， No．2及びNo．4が 9日から12日の間に発症して死亡した。No．3は 11日後に，No．5は14日後に発症した。これらの 動物はエーテル温語で殺して脳を摘出し，一部を 普通ブ■ヨンで10倍乳剤とし，0．025ccを8鍔前 後の5匹のマウスの脳内に接種し，他の一部は病 理標本とし，その変化を観察した。 それによるとハムスター：No．2， No．4及び 一 31b’ 一L

24 No．5に於ては1血管周囲の細胞浸潤及びダリア 細胞の増殖等が認められたがNo．1の変化は不 鮮明であり，No、3に於ては全く変化を認める事 が出来なかった。

ハムスターNo．1からNo．5迄の脳乳剤を接

種：したマウスは，直れ，も4日から5日にかけて定 型的に発症した。：No・1， No．2及びNo．4のハ ムスターの脳乳剤を接種して発症したマウスに於 ては’病理組織学的に定型的の日本脳炎の病変が認 められ，No．5のそれに於ては不鮮明，：No。3の それに於ては全然認められなかった。 猶：No，6からNo．10迄のハムスターは発症 しなかったので実験30日後に補体結合反応を試み た。その結果No．7のハムスタ ・一 ta於ては1血清稀 釈1：2に於て陽性成績がみられ疫。

B，第2群の実験成績

第2群のハムスfi 一一は生後13日のものを5匹使 用し，第1群と同様な方法で実験したがその成績 は乾燥病毒を吸入せしめてから7日より22日後に 表 3匹のハムスターが発症して死亡し，2匹は生存 した。死亡ハムスターに就ては第1群に於けると 同様に，脳の…部は病理標本とし一部をマウスに 接種した。 ハムスfi ・一の脳の病理標本ではNo．1に於て日 本脳炎の定型的病変がみられたが，No． 2に於て は不鮮明，No．3に於ては全く認められなかっ た。ハムスターの脳乳剤をマウスへ接種した成績 は接種後4日から5日にマウスが溌症して死亡し た。これらのマウスの脳の病理標本．に干て，No． 1の脳乳剤を接種：したマウスには，定型的の病変 がみられ，No．3の脳乳剤を接種したマウスに於 ては不鮮明，No．2の脳乳剤を接種したマウスに 於ては全く病変が認められなかった。 No．4， No．5のハムスターは何等の症状も呈 する事なく発育したので，実験30・日後に採血し， その一血清に捨て補体結合反応を行った。をの成績 はNo．5の一血清稀釈1：2に於て陽性を示し， No．4に於ては陰性であったo 1 日半脳炎発症マウス脳の乾燥粉末をハムスターに吸入せしめた実験 ノ、 ム ス タ 1 番 号 第 1 群 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 死 亡 日 夢 9 日 後 10 日 後 11 日 後 （エーテル） 12 目 後 14 日 後 （エーテル） 生 生 生 生 生 存 存 存 存 存 1 第 2 2 3 4

1群 5

Lr

7 日 後 10 日 後 22 日 後

生 存

生 存 ハ 病 ム 理 ス タ 的 1 変

脳化

土 十 十 十 士 マ ウ ス 発 症 数 5／5 5f5 3f3 5f5 6／6 6／6 5／5 4／4

ハ 接病

斐蓮理

・奪的

彪宴変

を 脳 化 十 十 十 土 十 ± 補 体 結 合 反 応 十 （1 ： 2） 十 （1 ； 2） 感 染 判 定 十 十 ？ 十 十 十・ （不二三） 十 ？ ？ 十 （不顕性） 以上の実験によって脳炎マウスの乾燥脳の粉末 をハムスターに吸入せしめると，これらの動物が re o”P6 pm

25 脳炎に罹患する事が明かとなった。且，発症しな かったハムスターのうちにも補体結合反応が陽性 に現れ，るものがあったので不顕性感染の存在が疑 われ．る。 ．案 験 IV 発症マウス脳乳剤を寝わらに噴霧しそれにハ ムスターを飼育した実験 発症マウスの脳を生理的食塩水で10倍の乳剤と し，それの20ccを寝わら1509に噴霧：し，その 中に生後20日前後のハムスターを3匹入れ，対照 としては同期のハムスター3匹を普通の方法で飼 育した。その結果は表2に示す如ぐNo．1が4日 後に，No．2が10日後に， No．3は14日後に発 症して死亡し，対照は3匹執れも生存した。発症 後死亡したハムスターの脳の一部はマウスの脳内 に接種し，他の一一部を病理標本に使用した。 皇 ・￥ 奪 表 2 日本脳炎発症マウス脳乳剤を噴霧した 寝わらにハムスターを飼育しtこ笑験 死 亡 実 1 験 2 群 3 対 1 照 2 群 3 日

4H後

10日後 14日後 生 存 生 存

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十 十 4f4 5／5 5／5

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十 十 省 略 感 染 判 「走 十 十 十 病理組織学的に及びNo．2No．3に於ては日本 脳炎の病変が認められ，No・ 1に於ては証明され なかった。 No．1，：No．2及びNo．3のハムスク・一・・の脳 乳剤を接種したマウスは由れも4日から7日の聞 に発症した。これらのマウスの脳の病理標本に於 て，ハムスターNo．1及びNo・2より接種したマ ウスには病変が認められた。No． 3脳乳剤を接種 したマウスに於ては病理組織学的変化の観察を省 略した。 実 験 V 発症マウス脳乳剤を噴霧し乾燥させた寝わら にハムスターを飼育した実験 実験Wの方法で作った血症Vウス脳乳剤を寝わ らに噴霧し，室温で5．日間，自然に乾燥せしめ， その中に生後2週のハムスターを飼育して，脳炎 に感染するや否やを実験した。ハムスターは7群 28匹を使用し，普通の方法で飼育した4匹を対照 群とした。その結果湿れのハムスターも罹患しな かったので，30日後に採血し，補体結合反応を試 みたが総て陰性に終ったQ 実 験 vr 発症マウス脳乳剤乏噴霧し低岨面乾燥せしめ た寝おらにハムスターk飼育した実験 実験IV， Vの材料と同様な方法で作った発症マ ウス脳乳剤を寝わらに噴霧／．t，此を無水燐酸入り のデシ・e・ ・一ターに納め，4℃の電気冷蔵庫に4 日間おいて乾燥させた寝わらの中に生後2週越ハ ムスターを飼育し，此等のハムスターが脳炎に罹 患するや否やを実験した。ハムスターは9群54匹 を使用し，猶普通の方法で飼育した5匹を対照と した。その成績は実験Vの成績と同様，敦れのハ ムスターも罹患しなかったので，30日後に採」血 し，補休結合反応を試みたが，総て陰性であっ た。 総括及び老按 小山は不潔な：方法でマウスを飼育して，その腸 内容に日本脳炎病毒を認めたが，私共は普通の方 法で飼育したハムスターの腸管及び腸内容に日本 脳炎病毒を認める事が出来なかった。そこで普通 の：方法で飼育したハムスター・’の血紅に就て，補体 結合反応を試みたが，総て陰性であった。以上の 実験がらハムスターの間には，マウスの場合と異 り日本脳炎の自然感染はないものの様に推察され る。 次に日本脳炎の感染経路の究明の一一一一助として， ハムスターを用いて日本脳炎病毒の塵埃感染及び 飛沫感染の実験を試みた。即ち日本脳炎発症マウ ス脳の粉末をハムスターの鼻腔に吸入せしめる事 により，日本脳炎の感染がみられ，また日本脳炎 罹患マウス脳乳剤を噴霧：し，湿潤した寝わらに， ハムスターを飼育する事により，脳炎：に罹患せし める事が出来た。然し脳乳剤を噴霧後，室温或は 4QCの電気冷蔵庫の中で乾燥させた寝わらに飼 育しfcハムスターに於ては感染をみなかった。依 って日本脳炎病毒は，寝わらに噴霧後，乾燥させ 一 317 一．

26 る事によって，如何なる機転によってか不活化さ れるものと考えられる。 結 論 1）普通の方法で飼育したハムス、タ・一一の腸管及 び腸内容には日本脳炎病毒を認める事が出来なか った。 2）普通の方法で飼育したハムスタ 一一 tc就て日 本脳炎病毒との補体結合反応を行ったが陰性であ った。 3） 日本脳炎遜症マウス脳を乾燥後，乳鉢で粉 末にして，ハムスターの鼻腔内に吸入せしめる事 により感染可能であった。 4） 日本脳炎発症マウス脳乳剤を噴霧した寝わ ら中に飼育したハムスターに於ては：感染がみられ た。 5） 日本脳炎発症vウス脳乳剤を噴霧した寝わ らを室温で乾燥させ，その中でハムスターを飼育 しブヒ際には感染がみられなかった6 6） 日本脳炎発症マウス脳乳剤を噴霧した寝わ らを4QCの氷室内で無水燐酸を入れて乾燥し， その中でハムスタP一を飼育した際にも室温乾燥の 場合と同じく感染がみられなかった。． 本研究1こ際し御懇篤なる御指導と御校閲を賜った恩 師平野教授に衷心より感謝の意を表，し併せて病理組 織学的研究に於て御教示をうけた今井教授に対し深甚 の謝意を捧げる1 筒本研究は文部省科学研究費に負うところ大であ る。ここに厚く謝意を表する。 （本稿の前半は昭和27年4月，後半は28年5月，日本 細菌学会に於て報告したものである。） 女 献

1） Casals， J． and Palacius， R．：J． Exp． Med．

74 409−426 （1941）

2）小山千代：日本細菌学雑誌23（昭和22）

3） Schabel， F， M． Jr：J． lnf． Dis． 88 32−49

（1951）