苑でたアブラガニの鰓腔から出てきた異物

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(2015) Carcinological Socie

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茄でたアブ‘ラガニの鯨腔から出てきた異物

Foreign body found in gill cavity of boiled blue king crab (Paralithodes pla

砂

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柳 本 車

l Takashi Yanagimoto 細 川 口 Foreignbodywas found in gillcav町ofboiled . 材 料 と 方 法 blue kingcrab(Paralithodes platypus)

，

and was similarto clustered eggs. Average size was 3.71mm， and was almost 2014年 8月にアブラカ"ニの鯨から出てきた異物を the same as egg size ofCareproclussp. For10drops ofthe 冷凍品として受け取った.異物は魚の卵塊のようで foreignbody， sequences of the mitochondrial16Sand COI あり，これらをほぐして 10粒の大きさを測定した. genes were estimated. These sequences were similar tothose また，顕微鏡で形態を観察した.その後，これら ofCareproclussp. fromtheresult ofblastanalysis. From these results

，

it was consideredthatthe foreign body in gill cavity ofblue kingcrab wasclusteredeggs ofCareproclus sp Key Words:Foreignbody， blue kingcrab， COI， 16S， Care -P'官clus 園 は じ め に アブラガニ CParalithodesplatypus)はタラノfガニ の近縁種で， 北太平洋に広く分布している CSakai， 1976). 日本では， オホーツク海の北見大和堆にお いてカニかごで 漁 獲 さ れ (村上，1999)，水産上， 重要な甲殻類の一つである. 2014年8月に，

I

茄でたアブラガニを食べていた ところ， 鯨から異物が出てきたが，これはいったい 何なのか

J

，という問い合わせがあった CFig.IA). ここでは，この異物について外部形態とDNA分析 を行い，どのような生物種であるのかを調べたので 報告する. !国立研究開発法人水産総合研究センター中央水産研 究所水産遺伝子解析センター・干236-8648 神奈川 県横浜市金沢区福浦2-12-4 Research Center of Aquatic genomics， National Research Instituteof Fisheries Science， 2-12-4 Fuk:uura， Kanazawa， Yokohama

，

Kanagawa 236-8648

，

Japan E-mail: [email protected] Fig.1. Photographof foreignbody found ingill cavity of boiledblue king crab. A) Foreign body and boiledblueking crab， white a町owindicateforeign body， blackaπow indicate dorsalview of carapace ofboiledblueking crab.

B) Enlarged picture of foreignbody.

10f立について， QuickGene CF

吋

iCo.) を用いてDNA を抽出した.mtDNAの16S領域と COI領 域 に つ い て， PCR増幅をおこなった. 16S領域にはユニバー サ ル プ ラ イ マーである16SarL(5'-cgcctgtttatcaaaaa -cat-3')と 16SaH(5'-ccggtctgaactcaggtcacgt・3')，COI領 域にはユニバーサルプライマーであるL5956C5'-ca -caaagacattggcaccct-3')とH6558C5'-cctcctgcagggtcaaa -gaa-3')を用いた CPa1umbiet a，.l1991). サーマルサ イクラーにはABI9700(Applied Biosystems) を用い た.940 C 2分加熱後， 940 C 30秒， 550 C 30秒，

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2分 を 30サ イ ク ル 行 い ， 最 後 に

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で7分 加 熱 し て， PCR反応を行った.DNA溶液lμ1， 2.5mMdNTP 溶液2.5μ1，10X Buffer(TaKaRa) 2.5μ1，50μMの各プ

ラ イ マ ー0.5μ1，TaKaRa Ex Taq PolymeraseO.125U，

総 量 が25μlに な る よ う に 超 純 水 を 加 えPCR反 応 溶 液 と し た .PCR産 物 を1.5% ア ガ ロ ー ス ゲ ル (NuSieve3: 1， TaKaRa) で電気泳動し，エチ ジウム ブロマイド染色によって増幅産物の確認をした.増 幅産物をQuickPCR Purification

K

i

t (Qiagen) を用い て精製した.精製した増幅産物をテンプレートとし て， BigDye TerminatorKit Ver3.1(Applied Biosys -tems) を用いてシーケンス反応を行った.シーケン ス反応には， PCRで用いたのと同じプライマーを用 いた. シーケンス反応物をExo-SapIT(GEヘルスケ

ア)で精製した後， ABI PRISM 3130XL Genetic Ana-1)司 rCApp1iedBiosystems) にて電気泳動して塩基配 列を決定した.インターネット上の遺伝子相向性検 索ソフトBlastCAltschuletal.， 1990) によって， 塩 基配列がどのような種と近いかを検討した.

園 詰 果

送 ら れ て き た 異 物 を ほ ぐ し て ， そ の10粒の大き さを測定したところ，小さいもので2.99mm，大き なもので4.36mm，平 均3.71mmであった.異物は カニと一緒に茄でられて，その後冷凍，解凍，冷凍 されているので，形態の観察は難しかったが，各粒 には眼のようなものが観察された (Fig.1B). 16S領 域557bpとCOI領 域598bpを決定したとこ ろ， 10粒ともすべて同じ配列であった.16S領域と COI領 域の 塩 基 配 列 をDNAデ ー タ パ ン ク に LC0002656とLC002657で登録した.

26

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24 (初旬}

16S領域の塩基配列についてB1ast分析を行った結 果，アイビクニンCareproctuscypselurus， ヒガシコ ンニャクウオCareproctusmelanurus

，

Careproctussp.， Careproctus reinhardti

，

Careproctus sp.が 塩基 配 列 の 一致率が高い上位種であった (Table1). COI領 域 の 塩基 配 列 に つ い てBlast分 析 を 行 っ た 結果，アイビクニンCareproctuscypselurus

，

オグロ コンニャクウオCareproctus

ル

rcellus

，

Careproctus ca -nus

，

ヒ ガ シ コ ン ニ ャ ク ウ オCareproctusmelanurus が 塩 基 配 列 の 一 致 率 が 高 い 上 位 種 で あ っ た (Ta -ble 1).

園 奇 麗

一般的に，不明な卵が見つかった場合，勝化させ て ， 仔 稚 魚 の 形 態 か ら 魚 種 を 調 べ る (Hunter， 1969). しかし，本報告では宿主であるアブラガニ と一緒に茄でられていたため， mtDNAの16SとCOI 領域の塩基配列を調べることにより種を推測した. アブラカ。ニの鯨腔から出てきた異物は複数の小さ な粒状のものからなり，粒の大きさはクサウオ科の コンニャクウオ属の卵とほほ、同じ大きさであった (ex.Poltev& Mukhametov， 2009).異 物 は 損 傷 が 激 しく，詳細な形態を調べることができなかった. し かし，粒の中に眼のようなものが観察されたことか ら， 各 粒 は 魚 類 の 卵 で あ る と 考 え ら れ た . ま た ， DNA分 析 の 結 果 ， 両 領 域 の 塩 基 配 列 は ク サ ウ オ 科 のコンニャクウオ属の塩基配列と似ていたので，コ ン ニ ャ ク ウ オ 属 の 卵 塊 で あ っ た と 考 え ら れ た . Blast分 析 の 結 果 ， ア イ ビ ク ニ ン の 塩 基 配 列 が 最 も 似 て い た が ， そ の 一 致 率 はCOI領 域 で は 94%で あ っ た . 一 般 的 に ， 生 物 種 に も よ る がCOI領 域 で 2%以 上差がある場合， 別 種 で あ る 可 能 性 がある (Heb巴同etal.

，

2003). そのため， 他のクサウオ類を 対象に，更に検討する必要がある. 古くからクサウオ類がタラバガニ類の鯨へ産卵す ることは知られていた (ex.中津， 1915; Rass， 1950; Vinogradov， 1950; Hunter， 1969). しかし，アブラガ ニの鯉腔からクサウオ類の卵が見つかったのは初め ての事例である.また，今後，販売されているアブ ラ ガ ニ か ら 同 様 に 異 物 が 発 見 さ れ た と し て も ， DNA分析によって容易にコンニャクウオ属の卵か

Table1. The resultsofblast analysis for sequences offoreign body.

A) 16S

Order Acc. No. Speciesname Japanese name Identities(%) EF508343 Careprocluscypselurus アイビクニン 99 2 AY539044 Careproclus me/anurus ヒガシコンニャクウオ 99 3 EF508344 Careproclusme/anurus ヒカ‘シコンニャクウオ 98 4 EF508347 Careproclussp.J 8WK-2007 97 5 EF458486 Careproc/us cypse/urus アイビクニン 99 6 EF508346 Careproc/usreinhardli 96 7 EF508345 J 68 ribosoma/ RNA

…

96 8 AY835655 Careproclusme/anurus ヒ力、シコンニャクウオ 99 9 EF508359 Paraliparis copei 93 10 EF458398 Lipαrisfiorae 93 B)COI

Order Acc. No. Speciesname Japanese name Identities(%) GU440261 Cαreproclus cypse/urus アイビクニン 94 2 FJI64447 Cαreproclus force//us オグロコンニャクウオ 94 3 FJl64446 Careproclus

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e//us オグロコンニャクウオ 94 4 FJI64445 Careproclus

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rce//us オグロコンニャクウオ 94 5 FJ1 64444 Careproclus

ル

rce//us オグロコンニャクウオ 94 6 FJ164443 Careproclus force//us オグロコンニャクウオ 94 7 FJ 1 64442 Careproclus

ル

rce//us オグロコンニャクウオ 94 8 FJl6444 1 Careproclus furce//us オグロコンニャクウオ 94 9 FJl64432 Careproclllscanus 93 10 FJl6443 1 Careproclllscanlls 93 どうか判断できる. ofMolecularBiology

，

215:403-410. 最 後 に ， ア ブ ラ ガ ニ の 鯨 か ら 出 て き た 異 物 は コ ン ニャクウオ属の卵塊であると考えられた.一般的に コンニャクウオ属は食べられていないが，コンニャ クウオ属による食中毒はこれまで知られていないの で，間違って食べても問題はないと考えられた. Hebert， P.D. N.， Ratnasingham， S.， & Waard， J. R.， 2003 Barcoding animallife:cytochrome oxidase subunit1 di -vergences among closely related species.Proceedingof tberoyal societyB BiologicalSciences， 270: 96-99. Hunter， C.J.， 1969.Confinnation of symbiotic relationship between liparid自由民(Careproclusspp.) andmale king crab (Paralilhodes camlschalicia). Paci自cScience， 23 546-547.

園 調 辞

水産総合研究センター調査開発センターの 山 下 秀 幸 氏 に は ， ア ブ ラ ガ ニ の 異 物 と 異 物 の 写 真 を 提 供 し て 頂 い た . ク サ ウ オ 類 の カ ニ へ の 産 卵 に 関 す る 情 報 を 川 内 準 郎 氏 に ご 教 授 し て 頂 い た . こ の 場 を 借 り て 各位に厚くお礼申し上げる.

園 文

一

献

Altschul， S. F.， Gish， w.， Miller， w.，Myers， E. w.，

&

Lipan， D. J.， 1990.Basic localalignment search too.lJoumal 村 上 修 ， 1999. 1.アプラガニ資源生態調査l.lアブラ ガニ資源調査平成10年度網走水産試験場事業報告 書.網走水産試験場，網走， pp.200

ー

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Palumbi， S.， Martin， A.， Romano， S.， McMillan， W. 0.，

Stice， L.， & Grabowski， G.1991.The simplefooJ's

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，

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-430--448. sianJ