release

平成２７年１１月１３日

報道機関各位

熊本大学

マウスにおける超過剰排卵誘起剤の

実用化について

-１匹の雌マウスから１００個の卵子-（概要） 熊本大学 生命資源研究・支援センター 動物資源開発研究施設 （CARD）の 中潟直己教 授 、竹尾透講師らは 、1 匹の雌マウスから１００個以上（従来法の３～４倍）の卵子を 排卵させる技術を開発し、平成 27 年 6 月 1 日付けプレスリリースにて、発表したところ ですが、このたび、九動株式会社より実用化され、平成 27 年 11 月 16 日付で販売開始さ れることとなりました（製品名：CARD HyperOva）。 これにより、より効率的な実験動物の繁殖に繋がり、ひいては卵子を採取する雌の数を 大幅に減少させ、実験動物の愛護・福祉に寄与することが可能です。また、超過剰排卵誘 起法が未だ確立されていないラット、ハムスター、モルモットなどへの応用の可能性が極 めて高く、今後その利用範囲がさらに広がるものと思われます。 （説明） 熊本大学 生命資源研究・支援センター 動物資源開発研究施設（CARD）では体外受精シス テムに関する技術開発に取り組んでおり、汎用的に実施できるよう、開発した技術を基にし たキットの実用化に努めて参りました。その結果、これまでに新規の凍結保存方法等を開発 し、極めて高い受精率が得られる体外受精システムを確立しました（Fertiup ®, CARD MEDIUM

®として九動株式会社より商品化）。 効率的に体外受精を行うためには、1 匹の雌からいかに多くの排卵卵子を得るかが重要に なります。しかし、これまでの過剰排卵誘起法では、1 匹の雌から平均２０個程度の排卵卵 子しか得られませんでした。 熊本大学 生命資源研究・支援センター 動物資源開発研究施設 （CARD）の 中潟直己教授 、 竹尾透講師らは 、1 匹の雌マウスから１００個以上（従来法の３～４倍）の卵子を排卵させ る技術を開発しました（特許出願中：特願 2015-092485）。 （→ 別紙 平成 27 年 6 月 1 日付けプレスリリース参照） この度、九動株式会社より実用化された超過剰排卵誘起剤が平成 27 年 11 月 16 日付で販 売開始されることとなりました（製品名：CARD HyperOva）。 本技術の利用効果としては、以下のとおり期待しております。 (1) 使用動物数の軽減 国立大学法人

熊本大学

数の削減は、実験動物の愛護・福祉の重要な柱の一つです。ライフサイエンス研究という観 点からのみならず、実験動物の愛護・福祉に対する社会的配慮と言う観点からも極めて意義 深いもので、国際的に高い評価を得る様々な研究の推進に寄与することができます。 (2) 遺伝子改変マウスの作製・収集・保存・提供の効率化 少数の雌マウスから大量の卵子を排卵させることで、体外受精や胚移植が容易になりま す。よって、遺伝子改変マウスの収集・保存・提供の効率化を図ることが可能となります。 (3) 他の動物種への応用 超過剰排卵誘起法が未だ確立されていないラット、ハムスター、モルモットなどへの応用 の可能性が極めて高く、今後その利用範囲がさらに広がるものと思われます。 熊本大学生命資源研究・支援センター 動物資源開発研究施設(CARD) では、これまでに 様々な生殖工学技術の開発・改良を行い、マウスバンクシステムの効率化を図って参りまし た。当センターのバンクシステムには、以下の 2 つがあります。一方は、マウスの寄託を受 け、保存された系統（遺伝学上の血統）について情報を公開し、第三者へ広く供給する「寄 託・供給システム」で、マウスの CARD への輸送や凍結保存経費など、寄託に関する一切の 経費は無料であり、WEB 公開・供給に関しては共同研究に限る、研究目的により制限する、 樹立者の承諾を得る、一定期間 は分与不可とする等の条件をつけて寄託することも可能で す。 供給に関しては、有料(実費)で、WEB で公開された情報を閲覧した供給依頼者が、寄託者 と承諾書の取り交わし、CARD へ個体または胚 / 精子の供給申し込みを行うシステムとな っています。他方は、有償にてマウス胚/ 精子の凍結保存サービスを行う「プライベイトバ ンクシステム」で、 保存したマウスを第三者へ分与しない、そのマウスの情報を公開しな いという条件で実施しています。また、依頼者本人にのみ、凍結した胚や精子から個体を作 製、供給するサービスも行っています。 今後、開発した超過剰排卵誘起法を様々な形で上記マウスバンクシステムに応用すること で、更なる効率化を図っていきたいと考えています。より多くの研究者皆さまのご利用を期 待 し て お り ま す 。 な お 、 本 技 術 を 含 め た 生 殖 工 学 技 術 は 、 オ ン ラ イ ン マ ニ ュ ア ル （http://card.medic.kumamoto-u.ac.jp/card/japanese/manual/index.html）でも公開して います。 【お問い合わせ先】 熊本大学生命資源研究・支援センター 動物資源開発研究部門(CARD)・資源開発分野 担当：中潟直己 電話：096-373-6564 e-mail: [email protected]

別紙

平成 27 年 6 月 1 日

報道機関 各位

熊本大学

1 匹の雌マウスから 100 個の卵子を排卵させること

に成功！

（ 概要 説 明） 現在 、遺 伝子破 壊 マウス（ノッ ク アウト マ ウス）※ １_{のバ ック グラ ウン ドであ} る C57BL/6系 統マ ウ ス にお い て、通常 の過 剰排 卵誘起 で得ら れる卵子数 は平 均20 個 前後 で あり、 排 卵 数 が10個 以 下であ る ケース もしばしば です。 排卵数が少な い とい う ことは 研 究 効 率化の 妨 げとな っ ている だけでなく 、採卵 はマウスを安 楽 死さ せ て行う た め 、 多数の 雌 を犠牲 に しなけ ればならな いこと も、動物の愛 護 ・福 祉 の観点 か ら き わめて 大 きな問 題 となっ ていました 。 そこ で 、今回 、私 た ち は 超過剰 排 卵誘起 法 を開発 し、1匹 の雌 マウ スから 100 個 の 卵 子 を排 卵さ せ る こ と に 成 功 し ま し た 。 これ ら の卵子 は 、体外受 精 -胚 移 植によ り 正常な２ 細胞期 胚※ ２_{（図 1）およ び} 産 子（ 図 2） へ 発 生す る こと も確認 され てお り 、 今 後の ノッ ク ア ウ トマウ スの 大 量 作 出 に極 めて 有 用 な 技 術 と な り 得 る も の と 期 待 さ れています。 この 超 過剰排 卵 誘 起 法は、 ナ ショナ ル バイオ リソースプ ロジェ クト 基盤 技 術 整備 プ ログラ ム の 支 援によ り 、生命 資 源研究 ・支援セン ター 動物資源開発 研 究部 門 (CARD)・ 資 源 開発 分野の 中潟 直己 教授 、竹尾 透 講師ら のグループが 開 発し た もので あ り 、 その成 果 は5月29日に PLOS ONE に発表され ました 。 論文著者・タイトル

Superovulation using the combined administration of inhibin antiserum and equine chorionic gonadotropin increases the number of ovulated oocytes in C57BL/6 female mice. Takeo Toru, Naomi Nakagata

掲載雑誌 PLOS ONE

May 29, 2015DOI: 10.1371/journal.pone.0128330

http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.01283 30

ISTT blog（ International Society for Transgenic Technologies BLOG） http://transtechsociety.org/blog/?p=1575 （ 説明 ） 近年 、 ヒト遺 伝 子 は 2 万数 千 程度 である ことが明 らかに なりました 。そ の全 遺 伝子 の 機能を 解 析 す るため に 、世界 中 で個々 の遺伝子を 破壊し たノックアウ ト マウ ス を網羅 的 に 作 製し、 そ れらマ ウ スの基 礎的表現型 （実際 に現れる遺伝 的 な性 質 ）の解 析 が 精 力的に 行 われて い ます。 そのために 遺伝子 改変マウスの 作 製・ 収 集・保 存 ・ 提 供の効 率 化が必 要 とされ ています。 しか し ながら 、 ノ ッ クアウ ト マウス を 迅速、 大量かつ効 率的に 作製するた め に は、体 外受 精 -胚 移 植技術 の 確立が 必 須であり 、1 匹の雌 から多 数の卵子を排 卵 させ る 超過剰 排 卵 誘 起法の 開 発が望 ま れてい ました。 ● 従 来 の 過剰排 卵 誘 起 法 マウ ス におけ る 従 来 の過剰 排 卵誘起 法 は、妊馬血 清性腺 刺激 ホルモン（ PMSG： 卵 胞 刺 激 ホ ル モ ン （ FSH※ ３_{様 ホ ル モ ン ） ） を 投 与 す る こ と で、 多 数 の 卵 胞 を 発} 育 させ る もので す が 、1 匹の 雌 マウス から得 ら れる排 卵数は、多く ても 30 個が 限 度 で した 。 ● 新 規 開 発した 超 過 剰 排卵 誘起法 の原 理と 方法 イン ヒ ビンは 発 育 卵 胞中か ら 放出さ れ るホル モンで、下 垂体（ ホルモンを分 泌 する 内 分泌器 官 ） か ら分泌 さ れる FSH の分 泌量調 節因子 として、排 卵数 を制 限 する た め、PMSG の単 独 投与 で は限 られ た排 卵数しか得 られま せんでした。そ こ で、 抗 インヒ ビ ン 血 清を用 い て雌の 体 内のイ ンヒビンを 中和す ることで FSH の 分泌 を 過剰に 促 進 し 、同時 に PMSG を投与 すること で多数 の卵胞を発 育さ せる こ とに よ り、1 匹 から 100 個 以 上（ 従 来 法 の 3～4 倍）の 卵子 を排 卵させ るこ と に 成 功 しま した（ 超過剰 排 卵 誘 起法 ）（ 図３ ）。 ● 利 用 効 果 （ １） 使 用動物 数 の 軽 減 卵 子 採取に 用 い る 雌の数 を 1/3～1/4 以下に 減らす ことが可能 です 。実 験動 物 の使用 匹 数 の 削減は 、実 験動物 の 愛護・福 祉の重 要な 柱の一つで す。

別紙 ライ フ サイエ ン ス 研 究とい う 観点か ら のみな らず、実験 動物 の愛護・福 祉 に対 す る社会 的 配 慮 と言う 観 点から も 極めて 意義深いも ので、国際的に 高 い評 価 を得る 様 々 な 研究の 推 進に寄 与 するこ とができま す。 （ ２） 遺 伝子改 変 マ ウ スの作 製 ・収集 ・ 保存・ 提供の効率 化 少 数 の雌マ ウ ス か ら 大量の 卵子 を排 卵さ せること で、体 外受精や 胚移 植 が容 易 になり ま す 。よ って、遺 伝子改 変 マウスの 収集・保存・提供 の効 率 化を 図 ること が 可 能 となり ま す。 （ ３） 他 の動物 種 へ の 応用 超 過 剰排卵 誘 起 法 が 未だ確 立さ れて いな いラット 、ハムスタ ー、モ ルモ ット な どへの 応 用 の 可能性 が 極めて 高 く、その 利用範 囲がさらに 広が るも のと 思 われま す 。 ● 今 後 の 展開 現在 、 特許申 請 中 で あり（ 特 願 2015-032354）、 本排卵 誘発剤を企 業か ら発 売 予定 で す。 ● 用 語 の 説明 ※ １ ノ ック アウ ト マ ウ ス （ Knock-out mouse） 遺 伝 子 操作 に より 1 つ 以 上 の遺 伝 子を 欠 損さ せ た マウ ス 。遺 伝 子の 塩 基 配 列 は 決 定 し て い る も の の 、 そ の 遺 伝 子 産 物 の 機 能 が 不 明 な 場 合 に そ の 機 能 を 推 定 する た めの 重 要な モ デ ル動 物 。 ※ ２ ２ 細胞 期胚 ： 卵 が 分 裂 し て ２ 個 の 細 胞 に な っ た 状 態 。 受 精 卵 は 発 生 の 過 程 で ２ 個 、 ４ 個 と 分 割 を繰 り 返し て 成長 す る 。 ※ ３ FSH 卵 巣 に 存在 す る卵 胞 を刺 激 し て、 発 育を 促 す働 き を 持つ ホ ルモ ン 。

【 図 １ 】1 匹の雌マウスから排卵された卵子を体外受精して得られた 2 細胞期 胚

【 図 ２ 】1 匹の雌マウスの卵子から得られた 2 細胞期胚を仮親の卵管に移植し て 生ま れ た産子

別紙 【 図 ３ 】超 過剰排 卵誘起 法 【お 問 い 合わせ 先】 熊本 大 学 生命資 源研 究・支 援センター 動物 資 源 開発研 究部 門(CARD)・資源開 発分 野 担当 ： 中 潟直己 電話 ： 096-373-6564 e-mail: [email protected]