プロテオームガイド 発現 精製 & 相互作用解析 同定 Contents: イントロダクション 2 タンパク質発現 4 Flexi HaloTag ORF Clone TNT System タンパク質精製 & 相互作用解析 6 HaloTag System タンパク質分析用プロテアーゼ 8 Prot

プロテオームガイド

発現・精製＆相互作用解析・同定

Contents：

• イントロダクション

2

• タンパク質発現

4



Flexi

®

HaloTag

®

ORFClone、TNT

®

System



• タンパク質精製&相互作用解析

6



HaloTag

®

System



• タンパク質分析用プロテアーゼ

8

て使用されてきました。しかし、抗体を用いる手法は、抗体の可用性、特異性など抗体自体のクオリティーに大きく依存して

います。他方で、標的タンパク質との結合が弱いあるいは細胞内の存在量が低いなど抗体がうまく機能しない場合にはエピトー

プタグおよび親和性タグを使用する場合も多くあります。このような手法ではリコンビナントタンパク質を発現させるために

DNA ベクター / クローンを調製、入手する必要がありますが、標的タンパク質ごとに抗体を用意することに比べると、非常に

簡便、低コストであり、多検体の処理にも適しています。プロメガでは HaloTag

®

_{をはじめ多くのアフィニティータグのシステ}

ムを有しており、無細胞発現系やタンパク質分析用のプロテアーゼなどプロテオーム研究に必要な試薬を取り揃えています。

Analysis

- ProteaseMAX™ Surfactant - Immobilized Trypsin - Trypsin Gold, Mass Spec Grade - Sequencing Grade Modified Trypsin - Chymotrypsin, Sequencing Grade - rLys-C, Mass Spec Grade

- Endoproteinase Lys-C, Sequencing Grade - Asp-N & Glu-C, Sequencing Grade

プロテアーゼ

  _{(8 ページ )} タンパク質同定の決め手は良質な酵素選びから！

Expression

Interaction & Purification

HaloTag

®  _{(6-7 ページ )}

GST タグ

  _{(7 ページ )}

His タグ

  _{(7 ページ )}

- HaloTag® Mammalian Protein Purification System - HaloTag® Protein Purification System - HaloTag® Mammalian Pull-Down System - HaloLink™ Protein Array System - HaloCHIP™ System

- MagneGST™ Pull-Down System - MagneGST™ Protein Purification System

- MagneHis™ Protein Purification System - HisLink™ Spin Protein Purification System - Maxwell® 16 Polyhistidine Protein Purification Kit

共有結合でガッチリ捕捉 ＆ アプリも豊富 磁性体粒子により効率的なプルダウン、精製が可能 レジンと磁性体粒子より選択可能。自動化にも最適 共有結合でタンパク質を高度に分離

Clone

無細胞発現

(5 ページ )

哺乳動物発現

(4 ページ ) TNT® System - Rabbit Reticulocyte - Insect - Wheat Germ - E.coli

- FuGENE® Transfection Reagent

タグ付き

タンパク質発現クローン

(4 ページ ) - Flexi® ORF Clone （HaloTag®）

哺乳動物細胞での発現実験を強力サポート   HaloTag® _{導入済みのヒト遺伝子クローン（＞7,000）} チューブ内、約数時間で簡便に タンパク質を合成 3 9 6 12 12 そのまま発現実験へ タンパク質発現まで 1∼数時間 切れ味鋭い酵素でタンパク質同定率アップ！ このクローンコレクションは、 かずさ DNA 研究所との コラボレーションにより実現しました。 TEV 切断サイト HaloLinkTM HT POI TEV 切断 SDS/ 尿素 溶出 POI 目的タンパク質 (Protein of Interest) HaloTag® _{タンパク質} 長鎖に特化したかずさ cDNA コレクションと幅広いラ イ ン ナ ッ プ の OC（The ORFeome Collaboration） ORF コレクションの 2 つのリソースをベースとした 独自のクローンリソース

Focused

Technolo

gy

Flexi

®

_HaloTag

®

_{ORF Clone}

この ORF クローンはかずさ DNA 研究所の保有

するヒト長鎖 cDNA を HaloTag

®

_{融合遺伝子と}

してそのままタンパク質発現実験に使用するこ

とができます。配列情報はもとより、ほとんど

のクローンは実際の哺乳動物細胞内での発現ま

で確認しており安心してご利用いただけます。

Focused

Technolo

gy

TNT

®

_System

TNT

®

_{システムを用いれば数時間のインキュベー}

ションの間にチューブ内で転写 / 翻訳がおこる

ため、鋳型 DNA を反応に加えるだけでタンパク

質を調製することができます。

動物細胞での発現を確認済み

HEK293 細胞に Flexi® _HaloTag® _{ORF Clone を導入し、}

HaloTag® _{TMR Ligand で標識。}

数時間で機能性タンパク質を発現

S30 T7 High-Yield Protein Expression Systemを用いたGreen®

Fluorescent Protein （hMGFP）の無細胞発現

プロテオームガイド

Analysis

- ProteaseMAX™ Surfactant - Immobilized Trypsin - Trypsin Gold, Mass Spec Grade - Sequencing Grade Modified Trypsin - Chymotrypsin, Sequencing Grade - rLys-C, Mass Spec Grade

- Endoproteinase Lys-C, Sequencing Grade - Asp-N & Glu-C, Sequencing Grade

プロテアーゼ

  _{(8 ページ )} タンパク質同定の決め手は良質な酵素選びから！

Expression

Interaction & Purification

HaloTag

®  _{(6-7 ページ )}

GST タグ

  _{(7 ページ )}

His タグ

  _{(7 ページ )}

- HaloTag® Mammalian Protein Purification System - HaloTag® Protein Purification System - HaloTag® Mammalian Pull-Down System - HaloLink™ Protein Array System - HaloCHIP™ System

- MagneGST™ Pull-Down System - MagneGST™ Protein Purification System

- MagneHis™ Protein Purification System - HisLink™ Spin Protein Purification System - Maxwell® 16 Polyhistidine Protein Purification Kit

共有結合でガッチリ捕捉 ＆ アプリも豊富 磁性体粒子により効率的なプルダウン、精製が可能 レジンと磁性体粒子より選択可能。自動化にも最適 共有結合でタンパク質を高度に分離

Clone

無細胞発現

(5 ページ )

哺乳動物発現

(4 ページ ) TNT® System - Rabbit Reticulocyte - Insect - Wheat Germ - E.coli

- FuGENE® Transfection Reagent

タグ付き

タンパク質発現クローン

(4 ページ ) - Flexi® ORF Clone （HaloTag®）

哺乳動物細胞での発現実験を強力サポート   HaloTag® _{導入済みのヒト遺伝子クローン（＞7,000）} チューブ内、約数時間で簡便に タンパク質を合成 3 9 6 12 12 そのまま発現実験へ タンパク質発現まで 1∼数時間 切れ味鋭い酵素でタンパク質同定率アップ！ このクローンコレクションは、 かずさ DNA 研究所との コラボレーションにより実現しました。 TEV 切断サイト HaloLinkTM HT POI TEV 切断 SDS/ 尿素 溶出 POI 目的タンパク質 (Protein of Interest) HaloTag® _{タンパク質} 長鎖に特化したかずさ cDNA コレクションと幅広いラ イ ン ナ ッ プ の OC（The ORFeome Collaboration） ORF コレクションの 2 つのリソースをベースとした 独自のクローンリソース

HaloTag

®

HaloTag

®

_{はバクテリア由来の約 30KDa のタンパク質で特殊な化学合成リガンド}

をコートした担体（HaloLink

TM

_{）と特異的に共有結合を形成するため、HaloTag}

®

融合タンパク質を効率よく捕捉します。他のタグと担体との結合力に比べ非常に

強力であるためタンパク質の精製や相互作用タンパク質のプルダウンに威力を発

揮します。また、蛍光リガンドを用いることにより融合タンパク質を可視化する

ことができ、幅広いタンパク質分析に用いることができます。

56 19 TA j HaloLinkTM HT GST 共有結合 GST Resin HT GST 弱い結合 上清 10分後 24時間後 10分後 24時間後 HaloTag® _{と GST の結合力の違い}

HaloTag®_{-GST融合タンパク質をHaloLink}TM _{ResinおよびGST}

結合レジンで捕捉し、洗浄後に表示時間インキュベー ションした。上清を SDS-PAGE により分析。24 時間後でも HaloLinkTM _{からのHaloTag}®_{-GST融合タンパク質の遊離は確認} されなかった。

Focused

Technolo

gy

Focused

Technolo

gy

ProteaseMAX

TM

_Surfactant

このプロテアーゼ消化促進剤は、タンパク質の

可溶化、プロテアーゼの消化効率向上、ペプチ

ドの回収率改善を可能にするため質量分析など

のタンパク質解析に最適です。

75 14 M B ProteasMAX™ プロトコル ProteasMAX™ Surfactant O/N インキュベーション 3時間消化 ProteasMAX™ が長いペプチドの抽出を助け、 消化終了時には分解される。 ProteasMAX™ によりタンパク質が 伸ばされトリプシンによる消化効率が向上 分解した ProteasMAX™ トリプシン タンパク質 標準プロトコル 抽出されたペプチド 長いペプチドは拡散しにくく ゲル内にトラップされる 抽出されたペプチド タンパク質 ゲル片 ProteaseMAXTM _{Surfactant の作用原理} HaloTag ® _ガイド 包括的なタンパク質解析のツール Contents： • イントロダクション HaloTag®ベクター HaloTag® ORFクローン • 細胞内イメージング 蛍光リガンド・抗体 • ス イ ェ チ ス ル パ • タンパク質間相互作用 HaloLinkTM Resin/Beads HaloTag® Pull-Down Syst em HaloLinkTM Array

• タンパク質-DNA相互作用

HaloCHIPTM System

• タンパク質 発現・精製

HaloTag® Protein Purification syste m • その他のアプリケーション紹介

HaloTag®_{テクノロジーについてはHaloTag}® _ガイド

および HaloTag® _{スターターガイドをご覧下さい}

Flexi

HaloTag

ORF Clone

タンパク質を調べるならORFクローンが近道です。

かずさDNA研究所が収蔵するヒト長鎖cDNAは、分子量の大きなタンパク質をコードしている割合が高く、生体機能に重要な

役割を持つものと予想されています。Flexi

®

HaloTag

®

ORF Cloneはこれらの有用な遺伝子リソースをHaloTag

®

Flexi

®

Vectorに

導入したクローンコレクション（7,217ヒト-クローン）で哺乳動物細胞やin vitroでの発現実験にそのままご利用頂けます。発現

したHaloTag

®

融合タンパク質は専用の担体や蛍光リガンドと共有結合を形成するため目的タンパク質の精製やイメージングに威

力を発揮します（HaloTag

®

については6, 7ページを参照ください）。これらのクローンは弊社WEBページより簡単にご注文いた

だけ、通常2週間程度でお届けすることができます。

FuGENE

®

HD & 6 Transfection Reagent

細胞生存性を維持しながらタンパク質発現量を最大限に！

FuGENE

®

_{HD Transfection Reagent は、広範な細胞株に対して高効率にDNA をトランスフェクションするためにデザインさ}

れた新規な非リポゾーム試薬で、毒性も低く抑えられています。プロトコルでは血清や培地を除く必要がなく、試薬 /DNA 複

合体を添加した後に洗浄や培地交換は不要です。

製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥）

ORF クローン

Flexi® _HaloTag® _{Type（pFN21A + ORF） 1 クローン FHCxxxxx 50,000~}

※詳細については。www.promega.co.jp/flexiclone/をご覧下さい。

製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥）

トランスフェクション

FuGENE® _{HD Transfection Reagent 1ml E2311 55,000}

5X1ml E2312 220,000

FuGENE® _{6 Transfection Reagent 1ml E2691 55,000}

5X1ml E2692 220,000

製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥）

関連製品

プラスミド精製（トランスフェクショングレード）

PureYieldTM _{Plasmid Miniprep System 100 回分 A1223 22,000}

250 回分 A1222 48,000

PureYieldTM _{Plasmid Midiprep System 25 回分 A2492 27,000}

PureYieldTM _{Plasmid Maxiprep System 10 回分 A2392 25,000}

1 - 500 1001 - 15002001 - 25003001 - 35004001 - 45005001 - 55006001 - 65007001 - 75008001 - 85009001 - 950010000 < 0 500 1000 1500 2000 2500 3000

UniGene Build #172: GenBank (24 Jun 2004), dbEST (24 Jun 2004)

Human (15,695) KIAA (2,037) 遺伝子 (cDNA) の個数 cDNAの長さ（塩基対） 全長塩基配列が決定されたヒトcDNAのサイズ分布 全長塩基配列が決定されたヒト cDNA のサイズ分布

UniGene Build #172: GenBank （24 Jun 2004）, dbEST （24 Jun 2004）

Flexi

®

_HaloTag

®

_{ORF Clone のスペック}

• 蛍光顕微鏡観察：HaloTag

®

_{TMR ligand を}

用いたHaloTag

®

融合タンパク質の細胞内

局在性観察を実施

• タンパク質発現確認：SDS-PAGE分析によ

るHEK293細胞でのHaloTag

®

融合タンパク

質発現を確認

• インサートサイズ確認：アガロースゲル電

気泳動によるサイズ確認

• 配列確認：シングルパス- シークエンシン

グによる5’, 3' 両末端の配列確認

他社試薬とのタンパク質発現および生存性の比較 FuGENE® _{HD は他社競合品に比べ高いトランスフェクション効率と生存} 性を示した。 86 30 M B 1000 2000 3000 4000 5000 200,000 400,000 600,000 0 0 800,000 Transfection Reagent Luciferase Reporter Viability

Reporter Activity (RLU)

Viability (RFU)

None Reagent A Reagent B FuGENE® _HD

プロテオームガイド

タンパク質発現

:

無細胞タンパク質発現システム

TNT

®

in vitro transcription/Translation System

簡単、スピーディーにタンパク質を発現させるなら…

タンパク質の発現実験は非常に煩雑で、結果が得られるまでに数多くの工程が含まれ、多大の労力や培養コストを必要としま

す。無細胞発現システムは細胞ベースの発現系に比べてよりシンプルにタンパク質を取得することができます。TNT

®

Systemは

プラスミドやPCR断片を鋳型としてチューブ内でRNAへの転写／タンパク質への翻訳を行うことのできる便利、迅速なタンパ

ク質無細胞発現システムです。手間のかかるin vitroでのRNA合成を行う必要がなく、DNAを添加後1時間～数時間程度のイン

キュベーション（25–30°C）でタンパク質を合成することができます。転写/翻訳に必要な全ての成分は各TNT

®

Systemの構成品

に含まれています。多くのシステムでマスターミックスとして試薬が供給されるため、分注ステップを大幅に削減できます。

製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥）

TNT

®

_システム

ウサギ網状赤血球由来

TNT® _{T7 Quick Coupled Transcription/Translation System 40 回分 L1170 68,000}

TNT® _{SP6 Quick Coupled Transcription/Translation System 40 回分 L2080 78,000}

昆虫細胞（Sf21）由来

TNT® _{T7 Insect Cell Extract Protein Expression System 40 回分 L1102 82,000}

10 回分 L1101 23,000

小麦胚芽抽出液

TNT® _{SP6 High-Yield Protein Expression System 40 回分 L3260 75,000}

10 回分 L3261 22,000

大腸菌抽出液

S30 T7 High-Yield Protein Expression System 24 回分 L1110 65,000

8 回分 L1115 25,000

標識試薬（蛍光 / 化学発光 / 発色） FluoroTectTM _{GreenLys in vitro Translation Labeling}

System（蛍光） 20-40 回分 L5001 50,000

TranscendTM _{Chemiluminescent Non-Radioactive}

Translation Detection System（化学発光） 1 システム L5080 43,000

TranscendTM _{Non-Radioactive Translation Detection}

System （Colorimetric）（発色） 1 システム L5070 30,000 66 34 M A TNT® _{転写/翻訳反応} NH₃ プラスミドDNA PCR断片

m

R N A

標的タンパク質の 遺伝子配列 タンパク質

TNT

®

_{無細胞発現システムの利点}

• 培養細胞/菌体ベースの発現システムに比べ迅速（数日の

工程が数時間に短縮され、スクリーニング等にも最適。）

• 柔軟性のあるタンパク質発現系（タンパク質の標識が

容易で抗体が無くても検出できます。キナーゼなど毒

性のあるタンパク質も発現可能）

• 用途によってシステムを選択可能（真核生物系は活性/

溶解性、原核生物系は収量が期待されます）

システム

鋳型

アプリケーション

製品名 抽出液由来 _DNA環状 直鎖状_DNA RBS*_要求 Kozak_推奨 真核生物タンパク

質分析 原核生物 タンパク 質分析 構造 解析 収量※

真

核

TNT® _{Quick Coupled Transcription/}

Translation System

ウサギ網状

赤血球 P P P P 最大 300ng

TNT® _{T7 Insect Cell Extract Protein}

Expression System

昆虫培養

細胞 P P P 最大 4µg

TNT® _{SP6 High-Yield Wheat Germ}

Protein Expression System 小麦胚芽 P P P P 最大 5µg

原

核

S30 T7 High-Yield Protein Expression

System 大腸菌 P P P P 最大 25µg ・上記以外の TNT® _{System についてはお問い合わせください。} プロメガの無細胞発現システムの特性 78 71 TA M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A.

B.

真核生物由来のタンパク質発現

転写 / 翻訳反応は TNT® _{Quick Coupled Transcription/Translation System}

（カタログ番号 L1170） および FluoroTectTM _{GreenLys tRNA （カタログ}

番号 L5001） （1 µl）を用いて行った。反応後、5µl を分取し、導入され

なかった FluoroTectTM _{tRNA を除去するために RNase-ONE}TM _{で処理し、}

SDS-PAGE に供した。レーン M. 蛍光マーカー、レーン 1. ネガティブ コ ン ト ロ ー ル（No-DNA）、 レ ー ン 2-11. 9.7~255KDa の ヒ ト タ ン パ ク 質 10 種（ 遺 伝 子 シ ン ボ ル：SMPX, MAR1, BTG1, CASP6, MAPK14, CYP3A4, PRKCG, MCM5, ERBB2, PTPRZ1 ）、レーン 12. ルシフェラーゼ。 TNT®_{システムの概要} kDa 155 – 98 – 63 – 40 – 32 – 21 – 11 –

HaloTag

Mammalian Protein Purification System

これまでになかった強力なタンパク質精製システム！

哺乳動物細胞ライセートからのHaloTag

®

融合タンパク質の精製に最適化されたキットです。HaloTag

®

融合タンパク質は

HaloLink

TM

Resinと高い特異性で共有結合を形成します。このHaloLink

TM

Resinへの共有結合と非特異的な結合の低さにより、

哺乳動物培養細胞での発現レベルが低い場合でもリコンビナントタンパク質を非常に高い純度、収率で精製することができま

す。HaloTag

®

Mammalian Protein Detection and Purification System （カタログ番号 G6795, G6799） にはHaloTag

®

染色用の

HaloTag

®

_TMRDirect

TM

_{Ligandが付属しており、簡便にHaloTag}

®

融合タンパク質を蛍光検出できるため、発現・精製条件を迅速

に最適化することができます。システムに付属するHaloLink

TM

Resinの結合容量はHaloTag

®

融合タンパク質 >7mg/ml （FLAG

®

の約10倍）で、回収率も通常>75%です。非特異的な結合も非常に少なく（< 0.1%） 高純度のタンパク質を精製することがで

きます。

9 6 6 7 T B Halo Tag ® FLAG ® 3xFLAG ® His6 ta g Halo Tag ® FLAG ® 3xFLAG ® His ta6 g PKC

γ

PI3K

γ

kDa 150 75 50 37 86 60 52 31 88 40 58 33 % Recovery ≥95 74 77 34 ≥95 45 50 21 % Purity HaloTag® _{およびその他のタンパク質タグの精製効率の比較} 2 つのタンパク質 （PKCγ、PI3Kγ） の精製において HaloTag®_{の回収率およ}

び純度は FLAG® _{タグおよび His タグよりも優れていた。また、HaloTag}®

で精製したキナーゼは活性も有していた。

Ohana, R.F. et al. （2011） HaloTag-based purification of functional human kinases from mammalian cells. Protein Expr. Purif. Apr; 76（2）: 154-64.

製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥）

HaloTag

®

_{精製システム}

哺乳動物細胞からの精製システム

HaloTag® _{Mammalian Protein Purification System 1 システム G6790 84,000}

HaloTag® _{Mammalian Protein Detection}

and Purification System 1 システム G6795 94,000

HaloTag® _{Mammalian Protein Detection}

and Purification System Sample Pack 1 システム G6799 38,000

タグの切除

HaloTEV Protease 1000u G6601 20,000

4000u G6602 60,000

製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥）

その他の HaloTag

®

_製品

大腸菌からのタンパク質精製

HaloTag® _{Protein Purification System Sample Pack 1 システム G6270 80,000}

HaloTag® _{Protein Purification System 1 システム G6280 300,000}

レジン担体

HaloLinkTM _{Resin 1.25ml* G1912 30,000}

2.5ml* G1913 59,000

10ml* G1914 72,000

25ml* G1915 150,000

HaloLinkTM _{Magnetic Beads 40 回分 G9311 16,000}

プロテインアレイ

HaloLinkTM _{Array （TNT}® _{T7 Quick） Two Slide System 2 × 50 ウェル}

アレイ分 G6140 80,000

HaloLinkTM _{Array （TNT}® _{SP6 Wheat Germ） Two Slide}

System 2 × 50 ウェルアレイ分 G6180 80,000 クロマチン免疫沈降様システム HaloCHIPTM _{System 20 回分 G9410 85,000} 抗体 Anti-HaloTag® _{pAb 200μg G9281 52,000} ベクター

pFN21A （HaloTag® _{7） CMV Flexi}® _{Vector 20μg G2821 48,000}

* 沈殿状態のレジン容量（懸濁した場合の総ボリュームは4 倍量）

HaloTag®_{の詳細については www.promega.co.jp/halotag/ をご覧下さい。}

※リガンド購入における注意点：HaloTag® _{Technology で使用するリガンドをプロメ}

ガ以外で作製・入手する場合、または研究用途以外でご使用される場合、ライセンス 契約の必要があります。詳細については弊社までご連絡ください。

HaloTag

®

_{Protein Purification Systemの特長}

• 多くのタンパク質を精製 :

HaloLink

TM

_{Resin への共有結合}

容量 >7mg/ml HaloTag

®

_{融合タンパク質 （FLAG}

®

_{の 10 倍}

以上）。高い回収率（通常 > 75%）

• 高純度 : 共有結合により、結合タンパク質を損失するこ

となく強い洗浄が可能となるため非常に低い非特異的結

合 （<0.1%）と高純度タンパク質回収を実現

• スケール変更が自在 : スケールアップ

/ ダウンが容易で、

mg オーダー以上の精製も可能

• 哺乳動物のタンパク質発現に最適化 :

HaloTag

®

_プラット

フォームならばタンパク質精製からプルダウン、細胞内

イメージングを単一のコンストラクトで柔軟に実施可能。

9532 M A HaloTag® _protein POI POI HaloLink™ Resin HaloLink™ Resinへの HaloTag® _{融合タンパク質} (POI)の共有結合 HaloLink™ Resinに 共有結合した状態の HaloTEV Proteaseが POI を切除 HaloLink™ Resin POI POI 精製された 目的タンパク質 の回収

HaloTEV Protease Protein of Interest

HaloTag® _{Mammalian Protein Purification System の操作}

クローン & ベクター

HaloTag® _{融合タンパク質を哺乳動物細胞で発現させるには Flexi}® _HaloTag®

ORF クローン（4 ページ参照）あるいは pFN21A などの Flexi® _HaloTag® _Vector

が必要です。Flexi® _HaloTag® _{Vector は用途に合わせて幅広いラインナップをそ}

ろえています。詳細については www.promega.co.jp/flexicloning/vectors をご覧 ください。

プロテオームガイド

タンパク質相互作用解析（プルダウン）

HaloTag

®

Mammalian Pull-Down System

より多くの複合体構成タンパク質を取得可能

HaloTag

®

_{Mammalian Pull-Down and Labeling Systemは、HaloTag}

®

_{融合タンパク質の特性を利用しており、HaloLink}

TM

_Resinとの

高い特異性と共有結合により濃度の低いタンパク質複合体を迅速、効率的に哺乳動物細胞ライセートより捕捉することができま

す。HaloLink

TM

_{Resinの非特異的結合の少なさと迅速な結合により、多量体の捕捉ならびにそれらの構成タンパク質同定の成功率}

を向上させることができます。本システムには HaloTag

®

TMRDirect

TM

Ligandも含まれており、同じ遺伝子コンストラクトを用い

て複合体形成との相関的な細胞内局在やリアルタイムイメージも観察でき、タンパク質機能の理解に役立ちます。

関連製品

GST & His Tag Related Product

GSTタグやHisタグはこれまでタンパク質分析に広く使用されてきた実績のあるツールです。コストも比較的安く、多検体の処理

にも適しています。プロメガではGSTタグおよびHisタグ融合タンパク質を捕捉するためのレジン担体や磁性体粒子も提供してお

り様々なフォーマットでタンパク質精製を行うことができます。

製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥）

HaloTag

®

_{プルダウンシステム}

プルダウンシステム

HaloTag® _{Mammalian Pull-Down & Labeling System 24回分 G6500 88,000}

HaloTag® _{Mammalian Pull-Down System 24回分 G6504 56,000}

別売品

HaloLinkTM _{Resin レジン 2.5ml* G1913 59,000}

レジン 25ml* G1915 150,000

HaloTag® _{Control Vector 20μg G6591 39,000}

Mammalian Lysis Buffer 40ml G9381 9,000

Protease Inhibitor Cocktail 1ml G6521 14,000

* 沈殿状態のレジン容量（懸濁した場合の総ボリュームは4 倍量） ※リガンド購入における注意点：HaloTag® _{Technology で使用するリガンドをプロメ} ガ以外で作製・入手する場合、または研究用途以外でご使用される場合、ライセンス 契約の必要があります。詳細については弊社までご連絡ください。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥）

His タグ関連製品

（つづき） His タグタンパク質精製用担体（レジン）

HisLinkTM _{Protein Purification Resin 50ml V8821 44,000}

5ml V8823 5,000

GST タグ関連製品

GST タグタンパク質精製キット（磁性体粒子）

MagneGSTTM _{Protein Purification System 40 回分 V8600 24,000}

200 回分 V8603 80,000

GST タグタンパク質精製用担体（磁性体粒子）

MagneGSTTM _{Glutathione Particles 4ml V8611 18,000}

20ml V8612 65,000

GST タグタンパク質によるプルダウンキット

MagneGSTTM _{Pull-Down System 80 回分 V8870 90,000}

製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥）

His タグ関連製品

His タグタンパク質自動精製用キット（磁性体粒子）

Maxwell® _{16 Polyhistidine Protein Purification Kit 48 回分 AS1060 38,400}

His タグタンパク質精製キット（磁性体粒子）

MagneHisTM _{Protein Purification System 65 回分 V8500 26,000}

325 回分 V8550 90,000

His タグタンパク質精製用担体（磁性体粒子）

MagneHisTM _{Ni-Particles 2ml V8560 19,000}

10ml V8565 65,000

His タグタンパク質精製キット（磁性体粒子：ウサギ網状赤血球ライセートからの精製）

MagZTM _{Protein Purification System 30 回分 V8830 36,000}

His タグタンパク質精製キット（レジン）

HisLinkTM _{Spin Protein Purification System 25 回分 V1320 27,000}

HisLinkTM _{96 Protein Purification System 1 × 96}

ウェル分 V3680 45,000

HaloTag® _{Mammalian Pull-Down System と免疫共沈降法によるプルダウンの比較}

左図：HeLa 細胞で p65 の相互作用パートナーのプルダウンを行った後に電気泳動 - 銀染

色により検出し、HaloTag® _{Mammalian Pull-Down System と免疫共沈降法を比較した。HaloTag}®

Mammalian Pull-Down System では免疫共沈降法の約 4 ～ 5 倍の感度が得られた。左表：2 つの 方法により確認された p65 パートナー。予想される相互作用パートナーは質量分析により 確認した。 予想されるパートナー 免疫共沈降 HaloTag® p105 ○ ○ p100 ○ Rel A ○ ○ Rel B ○ C-Rel ○ IκBα ○ ○ IκBb ○ ○ IκBe ○ ○

HaloTag

®

免疫共沈降

p65 Ab No Ab

p65-HT HT Cont

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販売店：

Protease

プロテオーム研究サポート製品

定評のあるプロメガのトリプシンに加え、質量分析・アミノ酸配列分析用の各種プロテアーゼを揃えています。さらに酵素消

化効率を向上させる消化促進剤により確実なタンパク質同定が可能です。

製品名 切断部位 特長 カタログ番号 容量 価格

プロテアーゼ

トリプシン

Trypsin Gold Mass Spectrometry Grade

Lys-C、 Arg-C 質量分析グレード 特異性が向上し（TPCK処理）、自己消化を 予防（リジンの還元メチル化）、質量分析で 品質管理 V5280 100μg ¥16,500

Sequencing Grade Modified Trypsin

シークエンシンググレード 特異性が向上し（TPCK処理）、自己消化を 予防（リジンの還元メチル化）。V5111は凍 結乾燥粉末。V5113は凍結溶液（0.5mg/ml : in 50mM acetic acid） V5111 5x20μg ¥13,000 V5113 5x20μg ¥6,500 Immobilized Trypsin 短時間消化 スピード消化（30分間）。トリプシンがレジ ンに固定化されているので分解産物のみを回 収可能。 V9012 ₍₁₀2ml _回分) ¥35,000 V9013 ₍₂₀2Ｘ_回分2ml ₎ ¥64,000

キモトリプシン

Chymotrypsin, Sequencing Grade （芳香族アミノ酸Tyr, Phe, Trp）の C末端 シークエンシンググレード ウシ膵臓由来のセリンエンドペプチダーゼ V1061 25μg ¥10,000 V1062 4x25μg ¥32,000

Lys-C

rLys-C Mass Spec Grade

Lys-C 質量分析グレード & シークエンシング グレード トリプシンとの組み合わせでシークエンス カバー率向上 V1671 15μg ¥20,000

Endoproteinase Lys-C Sequencing Grade V1071 5μg ¥29,000

Asp-N

Asp-N, Sequencing Grade Asp-N, Cys-N

シークエンシンググレード

トリプシンとの組み合わせでシークエンス カバー率向上

V1621 2μg ¥20,000

Glu-C

Glu-C, Sequencing Grade Glu-C, Asp-C

シークエンシンググレード

トリプシンとの組み合わせでシークエンス カバー率向上

V1651 5x10μg ¥29,000

消化促進

ProteaseMAXTM _{Surfactant, Trypsin Enhancer}

質量分析グレード

タンパク質分解効率およびゲル内消化後のペ

プチド回収率が向上。1時間で消化完了。適

応プロテアーゼ：トリプシン、キモトリプシン、 Lys-C、Glu-C （Asp-Nについては未試験だが消 化促進が予想される。）

V2071 1mg ¥11,000