Posted at the Institutional Resources for Unique Collection and Academic Archives at Tokyo Dental College, Available from http://ir.tdc.ac.jp/
Title
№３：ラット三叉神経節ニューロンにおけるB１受容体を
介したCa２＋動態の評価
Author(s)
重藤, 玲子; 川口, 綾; 佐藤, 正樹; 木村, 麻紀; 澁川,
義幸; 田﨑, 雅和; 一戸, 達也
Journal
歯科学報, 115(5): 472-472
URL
http://hdl.handle.net/10130/3831
Right
目的：三叉神経支配領域における疼痛発生にブラジ キニン（BK）受容体が関与することが知られてい る。BK 受容体は B１受容体と B２受容体の二種類の サブタイプが存在する。B２受容体は恒常的に発現し ており，急性痛に関与するとされ，また B１受容体 は炎症や組織障害時に誘導的に発現することから， 慢性痛に関与するとされる。最近の研究で，新生仔 ラット三叉神経節ニューロンにおける B２受容体の 組織学的，機能的発現が明らかとなった。その一方 で，B１受容体の組織学的発現は明らかになったもの の，その機能性に関しては未だ知見が少ない。本研 究は新生仔ラット三叉神経節ニューロンにおける B１受容体刺激による Ca２＋動態を観察することで， その機能的探索を行うことを目的とした。 方法：新生仔 Wister/ST ラット（７日齢）より三 叉神経節を急性単離し４８時間初代培養を行った。こ の培養細胞に B１受容体の ア ゴ ニ ス ト で あ る Lys-［Des-Arg９ ］BK を 作 用 さ せ，Ca２＋ 蛍 光 色 素 で あ る fura-２を用いた細胞内遊離 Ca２＋ 濃度（［Ca２＋ ］i）の 変化を記録した。培養細胞からのニューロンの選別 には５０mM KCl 溶液を用い，全ての実験の最後に ５０mM KCl 溶液を作用させた際，応答を示した細 胞のみをニューロンとして扱い解析を行った。 結果および考察：初代培養新生仔ラット三叉神経節 ニ ュ ー ロ ン に お い て，細 胞 外 Ca２＋ 存 在 下 に Lys-［Des-Arg９ ］BK を投与すると［Ca２＋ ］iは一過性に 増 加した。この増加は細胞外 Ca２＋非存在下において も確認された。この結果から B１受容体の活性化に よって増加する［Ca２＋ ］iは，細胞内 Ca２＋ストア由来 であることが示唆された。 今 後 は B１受 容 体 活 性 化 か ら Ca２＋ス ト ア 依 存 性 Ca２＋ 放出までの細胞内カスケードを明らかにする必 要があり，より詳細な B１受容体の機能検索を行う ことで，三叉神経支配領域における慢性痛の細胞分 子学的メカニズムを解明していきたいと考える。 目的：低ホスファターゼ症（HPP）は組織非特異 的アルカリホスファターゼ（TNALP）遺伝子の変 異により生じる先天性疾患で，骨形成不全や乳歯の 早期脱落などを主徴とする。病型は様々で致死性の ものから軽症の歯限局型のものまで幅広くみられ る。HPP には有効な 治 療 法 が な い と さ れ て き た が，酵素補充療法の有効性が認められ，２０１５年，本 邦にて HPP 治療薬が承認された。しかし，酵素補 充療法で治療効果を得るためには長期間反復投与が 必要となる。さらに，従来の報告では延命効果に関 しては確認されているが，顎骨や歯牙の治療効果に 関しては不明な点が多かった。そこで本研究では， HPP モデルマウスに単回投与で長期に安定した酵 素補充を可能とする８型アデノ随伴ウイルス（AA-V）ベクターによる酵素補充を行った場合の顎骨お よび歯牙の治療効果を評価した。 方法：出生直後の TNALP 欠損モデルマウスに骨 親和型 TNALP 発現 AAV ベクター２．５×１０１２ vec-tor genome/body を筋肉注射（TNALP-D１０群）し， ９０日 後 に 下 顎 骨 の 形 態 学 的 解 析 を 行 っ た（n＝ ３）。形態計測のためには動物実験用マイクロ CT （R-mCT，リガク社製）を用いて画像撮影を行い， 下顎骨全長，歯槽骨長径，下顎第一臼歯の全長と歯 根長を計測した。また，組織学的検索のためには４ ％パラホルムアルデヒド溶液にて固定，１０％EDTA にて脱灰後，パラフィン切片を作製し，HE 染色像 を観察した。コントロールとして，同日齢の C５７ BL６野生型マウス（WT 群）を用いた（n＝３）。 結果および考察：下顎骨のマイクロ CT 解析より， TNALP-D１０群において切歯の石灰化不全と臼歯の 歯根露出と歯槽骨形成不全が認められた。WT 群と 比較して下顎骨全長は１．１mm（P＜０．０５），歯 槽 骨長は０．４９mm（P＜０．０５），第一臼歯全長は０．３８ mm（P＜０．０１）と，有意に低値を示した。また， 組織学的には歯槽骨頂の低下や歯頸部付近での無細 胞セメント質の欠如が認められた。以上の結果か ら，TNALP-D１０群においては延命効果や行動量の 改善が得られるものの，顎骨と歯牙の形成不全の完 治には不十分である可能性が示唆された。今後，硬 組織を治療するために必要となる酵素量，ベクター 投与方法の検討および安全性の確認を行う予定であ る。 （研究共著者：日本医科大学・分子遺伝学 笠原優子，島田 隆）
