雑誌名 博士学位論文要旨 論文内容の要旨および論文審査

変異ラス導入線維芽細胞に内在するRas‑GTPase活性 タンパク質1のノックダウンによるイノシトール4リ ン酸依存的な受容体作働性Ca[2+]流入の抑制

著者 高橋 博人

著者別名 Takahashi, Hiroto

雑誌名 博士学位論文要旨 論文内容の要旨および論文審査

結果の要旨／金沢大学大学院医学研究科

巻 平成13年7月

ページ 5

発行年 2001‑07‑01

URL http://hdl.handle.net/2297/15602

、

学位授与番号 学位授与年月日 氏名 学位論１文題目

医博甲第1431号 平成12年５月31日 高橋博人

変異ラス導入繊維芽細胞に内在するras-GTPase活性タンパク質１のノックダウンによ るイノシトール４リン酸依存的な受容体作動`性Ｃａ2＋流入の抑制

論文審査委員 主査 副査

教授 教授 教授

東田陽博 加藤聖 狩野方伸

内容の要旨及び審査の結果の要旨

細胞外からのＣａ2+流入は、細胞内Ｃａ2+シグナルとしての重要な役割を担っている。

Ca2+流入経路の非容量`性Ｃａ2+流入は、受容体刺激後に生産されるイノシトール1,3,4,5-四リン 酸［Ins(1,3,4,5)P,,]がＣａ2+貯蔵庫の状態とは無関係にＣａ2+流入を引き起こす｡最近､Ins(1,3,4,5）

Ｐ,結合タンパク質としてRas-GTPase活性タンパク質(GAP)１がラットのGAPIIIやヒトの

GAP11MBl'として脳や血球細胞から単雑ざれた。そこで今回、受容体刺激によるＩns(1,3,4,5)ＰＩ

依存的で非容量`性Ｃａ2+流入にＧＡＰ１が関与しているか否かを検討した。

‐実験には、ブラジキニン刺激やＩns(1,3,4,5)Ｂの細胞内導入によるＣａ2+流入が確認 きれているマウスＮＩＨ/3Ｔ３細胞を用いた。ざらに、ＮＩＨ/3Ｔ３細胞を癌化変異ｒａｓで形質転換 したりＴ細胞も用いた。GAPIIIをクローニングし、ざらにアンチセンスＤＮＡを作製した。こ れらＤＮＡをトランスフェクシヨンに使用した。得られた結果は以下のように要約される。

LGAPIIIアンチセンスおよびセンス導入株細胞DTGIIIAS-16とDTGIIIS-2細胞を樹

２，DTCIIIAS-16細胞のGAPIII転写産物とGIPase活性はの減少していた。

３．DTGIIIAS-16細胞ではブラジキニン刺激によるＣａ2+オシレーションやＣａ2+流入が抑

制された

４．この細胞株ではIns(1,3,4,5)日の細胞内注入によるＣａ2+流入の抑制が確認された。

５．ＧＡＰＩＩＩとＧＦＰの融合タンパク質を、Ｔ細胞内に発現させるとＧＦＰの蛍光は、Ｔ細 胞の細胞膜表面に限局していた。

６．DTGIIIAS-16細胞は正常ＮＩＨ/3T3細胞に近い形態を示した

以上のことから、Ｉns(1,3,4,5）Ｐ,受容体としてのＧＡＰＩＩＩは細胞膜表面に存在し Ins(1,3,4,5）Ｅ,をセカンドメッセンジャーとした受容体作働|生Ｃａ2+流入経路(カスケード)の中 にあって重要な役割を担っていることが明らかになった。

本研究はホルモンや神経伝達物質受容体刺激により産生されるＩns(1,3,4,5)P4の下流にGAPⅢ力

率肋先はホルモンや押潤云達物質党容体刺激により産生きれるＩns(1,3,4,5)P4の下流にGAPmが存在

することを実証したはじめての報告で、細胞遺伝子学なかでも、シグナル伝達研究上極めて価値ある

論文と評価きれた。

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