併 関 す 実験的研究 用 療 法 悪性腫瘍 対す 局所温熱 菌療法

金沢大学 十全医学 会稚 誌 第9ニヨ巻 第3 号 ⁴2 仁 43 9 く1 9 8 射

悪 性 腫 瘍 ^に対 す^る局 所 温 熱療法^{と C al m et te −G u6rin} 菌 療 法^の併^用に 関す^る実 験 的研 究

金沢 大学 医 学部 第一一^一外科 学 教 室 く主任^二岩 喬 教 授I

市 橋 匠

く昭和5 9年4 月1 4 日受付J

本研 究は局 所温 熱 療 法と B C G く助cillu sCalm et t_e⁻Guerinl 生 薗の局 所 投与^を併用 し た時の治療 効 果^およ び免疫 学 的^パラメ^ー タ ^ー への影 響を検 討す る た めに行った^． 腫瘍 移 植の 31 日前にC 5 7 B Lノ6 ^マウス の腹 腔 内^に0．1 m g の B C G 生 菌ま た は 0^．2ml の生理食 塩 水を投 与し た． つ いで， Le wis肺 癌の生細 胞 2⁻5^Xl O⁵個を全てのマウス の左後 肢 足 蹴^に接 種し た． 腰 瘍移 植後^{1 4 日}目^に，腫 瘍を 4⁴⁰C，3 0分 間の温 浴^に 浸漬す るか， 電気 焼 灼 くele ctr o c a ute ryl によ り切 除す るか_， ま た は何も処 置を行わ な^い群^に分け た． 移植 後¹5 日目^{に こ}れ らの マ ウス に対し，2 mg の B C G 生 薗ま た は 0^．0 5 ml の生理食塩水の腫瘍 内 投与， ま た は 2 m g の B C G 生菌の腹 腔 内投 与を行^った． 生 存 率の検 討で は， 局 所温 熱 療 法と B C G 腫 瘍 内 投 与を行った 1 0 匹 くS T H B 葺削 ^のう ちの1 払 お よ び 生 理食 塩水^の代り^に B C G で前処 置し て か ら S T H B 群と同様の処 置を行^った10 匹くB T H B君削 の う ちの 2 匹 が， 腫瘍 移 植後5 0 日日^にも腫 瘍の再 発な く 生存して いた． 他

の治療 群でも軽度の生 存期 間^の延 長を認め た が， 全て 4 4 日 以内に死 亡 し た． W in n テスト を行う と， 腫瘍 移植3 1 日前^にB C G で前 感作さ れ， 移 植後1 5 日目^にB C G の腫 瘍 内投 与を熱ナ た B T B 群で は腫瘍 増殖が 完全に抑 制さ れ， ま た B T H B 群で は腫 瘍 増殖が部 分 的^に抑制さ れ た． 前もって抗T hy^，1^．2 抗体^と補体で 肺 細胞を処理 して おく と， 腰瘍増 殖 抑 制は B T H B 群で は消 失し， B T B 群で は減 少し た．

J B T H B 群^にお け る T 細 胞ま た は N K く^{n at}u r al kille rl細 胞の脾細 胞 総 数^に対す る割 合は， B T B 群^およ び対照群 くS T S葺削

に おけ る ものよ り多かった．

一方B T B 群にお^いて は単 球く^マク^ロフ ァ^ー ジ で あ る と考え ら れ たつの脾 細 胞 数^に対す る割 合が増加して いた． これ らの結 果か ら， マ ウ^スを B C G 生菌で前 感作し， さ ら^に局所 温 熱療 法 と B C G 生菌^の腫 瘍 内 投与の併用治 療を行うこと は， 増 加し た抗腫 瘍 免 疫の誘 導^に有 利^であ ること が 示唆 さ れ た．

K ey ^{w or}ds h_{y p}erthe rmi a

，im m unothe r ap y ，B C G く^{励cillu s Calm et te−Guerin}J

悪性腫瘍^に対す る免 疫 療 法は， ウイ ル スま た は化 学 物質によっ て修 飾し た 腫瘍 細胞^で生体を免 疫す る^か，

生腫瘍 細胞^から抽 出分離し た 腰瘍 特 異抗 原も し く は腫 瘍関連 抗原 を利用 す る特異免疫の誘 導が合理的， かつ

有効^であ る^こと は^いう までも な^いが， 臨 床 的^には種^々

の制約が あ る． これに対し， 細 菌 類， 担子菌 類， ま た はそ れ らの抽 出 物を利用 す る非 特 異 的 免 疫 療 法^{1 1}は，

腫瘍増 殖の抑 制 効果に限 界 は あ る が， 現在 臨 床面で広 く適用 き れている^．

一 方， 悪性腫瘍^に対す る 温熱 療 法は， 丹毒を併 発し た肉腫 患 者に お ^いて高 熱が 腫瘍^の退縮を も た ら し た と

Exp^{e r}im e ntal Stud ie s o n the Co mbin ed

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す る Bu s ch²切観察に始ま り，，^{その後Coley叶は直 接腫} 瘍 内に連 鎖 球 菌を注入 し， 発 熱^{によ る}腫 瘍の治 療を試

み， 温熱 療法の有用性を 示 し た^． Crile ら⁴¹， Ca v alie r e

ら⁵切加温 血液 濯流^によ る 悪性 腰 瘍の治 療 効 果が 1 9 6 0 年代に報 告さ れて から は， 悪性 腰 掛^こ対す る混 熱療 法

の有用性が再 認 識^{さ れ る よ うに}な^っ た^．し か し な が ら，

新しい治療 法と し て の全 身性温熱療 法が ^一 時 的に宿主 免疫 機能を低 下させる^{6 け}切に対し， 局所 温 熱療 法は む しろ増強す る傾 向にあ る と さ れて おり^8潮， 臨床 例で も 主 腫瘍^の局所加温^によ り転 移巣が消 失し た報 告^叫も あ る．

M odali_{t y} of h cillu s C alm ette⁻Gu色rin く^{B C G}ト Tre atm e nt a nd L o c al H_{y p}e rthe r mia fo r M ali_gna nt Tu m o r． T ak u mi Ichih a sh i， D ep^{a r}t⁻ m ent of SLl rg^{e r}yt^I H ^{D ir e ctorこProf■} T ．Iw aJ ^{Scho ol of M e}di^cin e， Ka n a z a w a Univ e r si_{t y}．

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今回著 者は， 局 所温 熱療 法と B C G 投 与^によ る 局所 免疫 療 法を併用 し た場合^の治 療効 果と， 背景と な る免 疫 機能の諸^{パ ラ メ ー} タ^{ー につい}て， 動 物 実験^モデル で

検 討し た．

材 料^およ び方法 工． 実 験 材料

1 ^． 供試^{マウ ス}

全 実 験を通 じ 約6 適 齢^の雌 性C 5 7 B Lノ6， S P F くspe cific pathoge nfr e el ^マ ウスく静 岡実験 動 物， 浜 松う を使用 し た^． 飼育 管理 は ^一定^の空調 室 内で行^い，

給餌は固型 飼 料 くM F，オ リ^エンタ^ノり ^{給 水は煮 沸滅 菌} 水を そ れ ぞ れ自 由に摂 取さ せ た．

2 ． 腫瘍な ら び^に癌 細 胞 浮遊 液

C 5 7 B LJ^r6 ^マ ウス由来の Le wis 肺 癌 く国立 ガ^{ン セ ン} タ^ー よ り分与1 を同 系^マ ウス の側 胸 部 皮下^に移 植継 代 し， 実 験^に供し た． 細 胞 浮遊 液^の調製には， 移 植14 日 目の摘 出 腫瘡を 8 0 メッシ ^ュの^ステ^{ン レ ス}網上 で細 切，

濾 過し， 燐酸 緩衝 液 くpE 7^．4_，以 下P B S と略うで 1 回 洗 浄 後，再度P B S に浮 遊さ せ， ト リバ ンプ^{ル ー}く0^．2％

鞍， Me r ckl ^一除外テ^ストによ り 生細胞 敷 く約30％l を

カ ウント し， ペニシリン^ーGく明 治 製 菓うを 10 0 Uノ^ml に

含む P B S，ま た は ゲンタ^マイシ ンく塩野義 製 薬1 を 1 0 メ gノml に含む R P M I 164 0 培 地 く日水製 薬う ^に， 所 定 の生 細胞 濃 度と な る よ うに浮 遊さ せ た^．

3 ． 肺細 胞浮 遊 液

無 菌 的^に摘 出し たマ ウス牌を R P M 工¹6 4 0培 地 中^に て， 載 物ガ ラス板で軽く 圧挫， 自 由 化し た牌 細胞の浮 遊 液を 80 メッ シ ^ュの^ステ^{ン レ ス}網で濾過し た．つ いで Tris⁻N 乱Cl緩 衝 液 処理 に よ^っ て赤血球を除 去し，

R P M 1 16 4 0 培地で 3 回洗 浄 後， pelletは R P M I 1 64 0 培 地に浮遊さ せ，0^．2％ト リ^{バ ン}プル ^ー によ り 生細胞 数

く約1 0 0％1を カ ウント後， 所定の脾 細 胞濃 度 液^に調 整 し た．

4^． 抗血 清お よ び抗体

flu o r e s c ein is oth io cy^{a n a}te川 く以下F I T C と略 ト ウ サギ抗マウ^スIgGl， FI T C⁻ヤ ギ抗ウ サギIgG， お よ び抗^ヒツ ジ赤血球^スト^{ロ ー マ}抗血清^{1 2I}くI_gM 抗 体I は，

金 沢大 学^{が ん}研 究所 免 疫生 物 部 坂井 俊之助助 教 授よ り 供 与を う け た^． ま た， 抗T by⁻1^．2抗 体 く^{モ ノ}ク^{ロ ー} ナ ル抗体こ^Clo n e5a⁻8，Ceda rla n e社， Ca n adal ^およ び 抗a sialo G M l 抗体 く和光 純 薬工業K ．K ．，大 阪I ^{は そ} れ ぞ れ市 販 品を供用 し た^．

工工． 実 験 方法 1 ． 抗腰瘍試 験

本 研 究^において，局 所 温熱 療 法と免 疫 療 法を単 独に，

ある^いは併用 し^て行う実験の プロ トコ ^ー ル およ び群 別

は図1 に ^一括 捷示 し た． B C G く助cillu s Calm et te^．

Guerinl 弱毒 株 製 剤 く日本B C G K^．K^．，生 菌 数4 ^へ 6 x l O⁷l^m gl の生理食塩 水 く以下P S S と掛 浮遊 液eo^．5

m gl ml1 0．2 m 卜を^マ ウス腹腔 内^に投 与し た B C G 感作

マ ウス群と， 対照 と し てのP S S O^．2 mlの腹 腔 内投与 群に大 別し たくDay−^{31l．B C G 感 作 は た は P S S} 投与I 3 1 日後， Lewi s肺 癌 細 胞^{2■5X lO5}個ノ0．0 5ml P B S を

全^マウス の左後 肢 足 庶 皮 下^に移 植し た の^ayoう． 腫瘍 移 植 後1 4 日目に， 4 410 士0⁻l^OC^の温 水 中^に， 腫瘍を移 植し た患 肢を 30 分間 浸 漬し た群， 電気 焼灼 くele ctr 。^．

C a ute ryl ^によ って患肢 を大腿部^で切 断し た群， およ び

無 処 置の群に分 別し た の^ay 抽 ． さ ら^に腫瘍 移植後 15 日目^に， 腰痛 内に B C G 2 m gノ0．0 5 ml P S S を注入 し た群， P S S O ．0 5 ml を注入 し た群， およ び腹 腔内^に B C G 2 m gIO^．05 mi P S S を注入 し た群を 設定し， 分別

し た くDay 1 5コ．

効 果 判 定^{につい ては}， い 生命 延 長は^m ed ia n s u r vi^．

V al tim e く以下M S T と略l， およ び腫 瘍 移 植後5 0 日 目 くDay5 0J ^{に お}け る生存 率の 比較によって_， ま た 2 J 局 所腫瘍^の増殖 抑制は移 植後¹8 日目 のay 1 81 に お いて^スラ イ ディ ング キャリ^{バ ー} で腫腐^の長 径くL，m mう と短 径 くW ，m ml を計 測し， 次 式^によって算 出し た腰 痛サ イ ズ の比較^{によった．}

腫瘍重量く^m gン^こLx W ²ノ2

なお_，温 熱 療 法 時，腰 痛 中心部^の温度と直 腸温を サ^ー ミスタ ディジ タ^ル温度 計T D⁻31 1 と サ ^ー ミ スタ測温体 N S T くと もに芝 浦 電子製 作 所1 ^{に て}測 定し た．

2 ^{． マ} ウ^ス牌 細 胞によ る腫 瘍 細 胞傷 害 試 験^{くW in n，s}

te st^{1 3}り

S T S 群^こP S S 投 与 くDay ⁻ 31l ^ぅ腫瘍 移 植 m ^ay Ol

づ P S S 投 与 くDay 151．

B T B 群^二B C G 投与 くDay ⁻31l ^一 腰瘍移 植くDay OI J^{＋ B C G} 投 与 くDay 15l．

S T H S 群^こP S S 投 与 のay−^{3 い ぅ} 腫瘍 移 植 m ^ay Ol

一温 熱 処 置 eDay 1 4I N^{＋P S S} 投与 くDay 15l．

B T H B 群^こB C G投 与 くDay−³¹l ^一腫 瘍 移 植 くDay OI ^一握 熱 処 置 くDay 1 4l ⁻ B C G 投与くDay 1 5l．

以 上^のよ う な処 置を行^っ た各 群 く図1 参照う ^およ び 非 担 癌正常 群^{に つ いて}， Day 2 1 に 1群1 0 匹分を プ^ー

ルし た脾 細 胞浮 遊 液を調 製し， 実 験^に供し た．

ま た各 群の牌 細 胞 浮 遊 液^{の 一}部を， 抗T h_y−^1．2抗体

の 40倍 希 釈 液で 4 ⁰C， 3 0 分処理 し た後， R P M I 1 64 0 培 地^で2 回洗 浄し，さ ら^に新鮮ラッ ト補 体の 10倍 希釈 液^で3 7⁰C， 3 0分 反応さ せ， R P M I 1 64 0 培 地^で2 回洗 浄し た も の を仁^{抗T hy−1．2} 抗体^＋補 体コ^{処理肺細 胞と}

し た．