ノカルジア症の薬剤感受性研究について
◆目的
◆現状と問題点
サルファ剤（ｽﾙﾌｧﾓﾉﾒﾄｷｼﾝﾅﾄﾘｳﾑ（
SMM-Na
）：商品名ﾀﾞｲﾒﾄﾝｿｰﾀﾞ）の薬効を正確に現場評価し，ノカルジア症の治療対策 の確立と既承認抗菌性薬剤の有効性を検証し，新薬開発に向けた基礎的知見を得る。◆方法
①ｻﾙﾌｧ剤の薬効を評価する標準法の開発：Resazurinを添加したﾏｲｸﾛﾀﾞｲﾘｭｰｼｮﾝ法（REMA法）によるMIC測定法の開発
②疫学調査：ノカルジア症野外分離株のα-ｸﾞﾙｺｼﾀﾞｰｾﾞ活性とｻﾙﾌｧ剤及び既承認抗菌性薬剤のMIC値の関連性を調査
③最適治療方法の調査：
SMM-Na投薬方法の整理とｴﾘｽﾛﾏｲｼﾝ（EM），塩酸ｵｷｼﾃﾄﾗｻｲｸﾘﾝ（OTC）の治療効果の探索
◆ブリ類の魚病被害額（全体）に占め るノカルジア症被害額の推移
594.2 872.6 463.5 463.3 403.0
1,810.1 2,271.4
2,253.9 1,844.3 1,535.3 1,145.4
768.8
0 500 1,000 1,500 2,00 0 2,500 3,000 3,500 平 均
H20 H19 H18 H17 H16
年 度
ノカルジア症 その他疾病
被害額（百万円）
被害割合：２４．７％
（ ５年間の平均 ）
水産食品部 研究専門員 柳 宗悦
chromID TM MRSA
培地による判定●
【 α- グルコシダーゼ活性の判定】
ノカルジア症に２つの タイプが存在
※
コロニーの色で判定 緑 色 陽性株 乳白色 陰性株【MIC測定法の開発】
従来の測定法
10
5cfu/well 10
4cfu/well 10
3cfu/well 10
2cfu/well
REMA法
◆結果
●α-グルコシダーゼ陽性株 ：①カンパチに多い（５割強） ②ほとんど当歳魚で確認（９割） ③春先～初夏で多く確認
図３．α-グルコシダーゼ陽性株の魚種別確認状況 4
2 4
11
14 19
8
0 5 10 15 20 25
クロマグロ ヒ ラ メ ブ リ カ ン パ チ
魚 種
α-グルコシダーゼ陽性株 α-グルコシダーゼ陰性株
分離数（株）
図４ カンパチのα-グルコシダーゼ陽性株の年齢構成
90.9%
9.1
%
当歳 ２歳
図５ カンパチのα-グルコシダーゼ陽性株の月別出現割合 0
1 2 3 4
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 月
分 離 数（ 株）
α-グルコシダーゼ陽性株
α-グルコシダーゼ陽性株の分析
Ｎ＝62
Ｎ＝ 11
Ｎ＝11
MIC
分布は4
～32μg/mL
で，陽性株 は16~32μg/mL
で確認された。（陽性株：低感受性）
図２
REMA
法によるNocardia seriolaeのMIC
分布MIC分布は1～64μg/mLで，陽性株
は4~64μg/mLで確認された。
（陽性株：低感受性）
MIC
分布は0.5〜512μg/mL
で，陽 性株は<0.5μg/mL
でのみ確認された。（陽性株：感受性）
α-グルコシダーゼ活性とMIC値の関連性
菌が増殖 菌の増殖なし
0 5 10 15 20 25
<0.5 1 2 4 8 16 32 64 128 256 >512 MIC（μg/ml）
分 離 数（ 株）
α-グルコシダーゼ陽性株 α-グルコシダーゼ陰性株
0 5 10 15 20 25
<0.5 1 2 4 8 16 32 64 128 256 >512 MIC（μg/ml）
分 離 数（ 株）
α-グルコシダーゼ陽性株 α-グルコシダーゼ陰性株
0 5 10 15 20 25
<0.5 1 2 4 8 16 32 64 128 256 >512 MIC（μg/ml）
分 離 数（ 株）
α-グルコシダーゼ陽性株
α-グルコシダーゼ陰性株
SMM-Na
OTC EM
Ｎ＝ 62 Ｎ＝62 Ｎ＝ 62
感受性（高） 感受性（低） 感受性（高） 感受性（低） 感受性（高） 感受性（低）
抗生剤を倍々希 釈していき，そこ に細菌を入れて培 養し，どの濃度で 細菌の発育が抑制 されるかを判定し た値
最小発育阻止濃度
●ＭＩＣとは？
１週目 ２週目 ３週目 ４週目 備 考 対 照 区
OTC区 投薬 休薬 投薬 休薬 水産用ＯＴＣ散
SMM-Na区 投薬 休薬 投薬 休薬 水産用ダイメトン散 無 投 薬
（注） ①用量「水産用医薬品の使用について」の第25報に基づき，オキシテトラサ イクリン（OTC），ダイメトン（SMM-Na）とも50mg/kg/日を基準に，１週間当 たり５日間連続投与とした。
0%
20%
40%
60%
80%
100%
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 攻撃後日数
生 残 率（
％）
試験区1 試験区2 試験区3
試験区4 対照区
塩酸ｵｷｼﾃﾄﾗｻｲｸﾘﾝOTC治療試験
●まとめ
●α-グルコシダーゼ活性はSMM-Na，OTC，EMの薬剤感受性との関連性が高く，当該活性のモニタリングは薬剤耐性 菌発生の有益な指標になり得るものと推察された。
。●SMM-Na及びOTC 陽性株：低感受性，陰性株：感受性 ●EM 陽性株：感受性，陰性株：低感受性
●EM はSMM-Naとほぼ同等の治療効果が，ＯＴＣは治療効果が低いことが示唆されたが，SMM-Na，EMとも生残魚 で保菌個体が確認されており，完全には除菌できておらず，治療効果の高い新薬及びワクチン開発が望まれる。
図６ EM治療効果試験の生残率の推移
図７ EM治療効果試験の生残率の推移
図８ Nocardia seriolaeによる攻撃試験 図９ 治療効果試験中・終了時の供試魚の状況
● レサズリン
Resazurin(色素)を添加することで，視覚により薬剤感受性を容易に判定することが可能となった。
● ピンク色：菌が増殖（薬が効いていない），紫色：菌の増殖が認められない（薬が効いている）
○投薬 休薬 投薬 休薬のパターン が最も治療効果に優れていた。
○EMはSMM-Naとほぼ同等の治療効果 があることが示唆された。
１週目 ２週目 ３週目 ４週目 試験区１ 投薬 休薬 投薬 休薬 試験区２ 投薬 休薬 休薬 投薬 試験区３ 投薬 休薬 休薬 休薬 試験区４ 投薬 休薬 投薬 休薬
対照区
試 験 設 定 の 概 要
備 考 水産用ダイメトン散
（ｽﾙﾌｧﾓﾉﾒﾄｷｼﾝ）
水産用エリスロマイシン
無 投 薬
（注） 用量は「水産用医薬品の使用について」の第24報に基づき，ダイメ トン，エ リスロマ イシンとも 50mg/kg・日 を基準に，１週間当たり５日間連続投与とした。
エリスロマイシン（ EM ）治療試験
○投薬 休薬 投薬 休薬のパターン をベースに投薬を実施。
○OTCは感染初期(1週間程)は有効性を 示すが治療効果は低いと推察された。
試 験 設 定 の 概 要
