Ｌｐ(a) リポ蛋白構造変異性と病態的意義に関する研究

Title

Ｌｐ(a) リポ蛋白構造変異性と病態的意義に関する研究( は

_{しがき )}

Author(s)

牧野, 和彦

Report No.

平成6年度-平成7年度年度科学研究費補助金 (一般研究(C) 

_{課題番号06672289) 研究成果報告書}

Issue Date

1995

Type

研究報告書

Version

URL

http://hdl.handle.net/20.500.12099/217

研究成果 はじめに 1984年Flessら1)は密度勾配超遠心法を用いて､Lp(a)リボ蛋白を構成する アポ(a)にサイズ変異性のあることを報告した｡すなわち､個人によってLp (a)の密度が異なり､また同一人血清中でも2種類のアポ(a)が存在すること を示した｡1987年には批ermmら2)によってアポ(a)のサイズ変異性､すなわ ちアイソフォームの分離法及び概念が確立された｡それによると､Lp(a)をメ ルカプトエタノールで遭元処理して､遊離するアポ(a)をポリアクリルアミドゲ ル電気泳動(PAGE)を用いてアポ(a)のサイズによって分離後､ウエスタン プロット法によって検出した｡その結果､6種類のアイソフォームとそれらのシン グルとダブルのものからなる16種類の表現型(フエノタイプ)を報告した｡これ と時期を同じくして､且ck乳nら3)はアポ(a)蛋白の一次構造を決定し､プラスミ ノーゲンとのきわめて高い相同性をセンセーショナルに報告した｡すなわち､プラ スミノーゲンのものと相同性の高いクリングル4の多数繰り返しとクリングル5か らなるアポ(a)蛋白一次構造の報告であった｡ その後の研究でアポ(a)の分子サイズ変異性はアポ(a)を構成するクリング ル4の繰り返し数に由来することが解明された4)｡さらに､その後高分離能の電気 泳動法と検出法の組合せを応用して､Gaubatzら5)､Kamtx)hら6)及びEikuchiら7) による多分画のアイソフォームが報告されるに至っている｡ ここでは､Lp(a)アイソフォーム分類の基本であるUtermannらによる決定 法の実際を述べ､それによる我々の日本人におけるデータを示し､また新しいアイ ソフォームの概念についても触れ､従来法による表現型と新法による遺伝型(ジェ ノタイプ)の比較を行なった｡ 1:アイソフォーム決定法 著者らはアイソフォーム分離の技術8)とそのキャリブレーション9)について詳細 に報告しているので､参考にされたい｡分離技術の基本は批ermannらの方法に準 じているが､わが国において､簡易に沸定できるような分離機材を応用している｡ まず､その測定法の概要を述べる｡ a)検体の前処理 血清あるいは血欒検体を前処理してLp(a)からアポ(a)を遊離させる｡前 処理液は0.5molトリス塩酸緩衝液(pH6.8)1ml､10%SDS溶液1.6ml､グ リセロール0.8ml､2-メルカプトエタノール0.4ml､0.05%プロムフェノー ルブルー溶液0.2ml及び精製水4mlを混ぜて調整する｡これに検体10〝1を