226 （100） 氏名（生年月日） 本 籍
学位の種類
学位授与の番号 学位授与の日付 学位授与の要件学位論文題目
論文審査委員
カタ ヤマ ヨウ コ片山洋子（昭和3
博士（医学） 乙第1264号平成4年3月13日
学位規則第4条第2項該当（博士の学位論文提出者）
Ha盈ide transpor重in為ηoραs oocytes （アフリカツメガエル卵母細胞におけるハロゲンイオン輸送） （主査）教授 宮崎 俊一 （副査）教授 高桑 雄一，笠島 武論 文 内 容 の 要 旨
目的 致死的な遺伝性疾患である嚢胞性線維症（cystic 丘brosis）の病態は，気道，膵臓，汗腺などの外分泌腺 の機能異常に基づく粘調な粘液の停滞，管腔の閉塞， 難治性の感染であり，その根本的原因は広範囲の上皮 細胞，腺細胞におけるCl一イオン透過性の減少，より具 体的にはcycHc AMP依存性C1チャンネルの先天異 常であると考えられるに至っている．今後のアプロー チとして，気道上皮細胞から分離したmRNAをアフ リカツメガエルの卵円細胞に注入して発現させたCl チャンネルを，生理学的，分子生物学的に解析するこ とが重要であるが，その為にはまず，卵母細胞自身の もつCl一輸送系の性質を調べておく必要がある．本研 究は，ラジオアイソトープを用いたイオン流の測定及 び細胞膜電位測定により，アフリカッメガエル卵母細 胞におけるCl一イオン及びその他のハロゲンイオン輸 送の性質を明らかにする目的で行った． 方法 アフリカツメガエルの卵巣を摘出し，卵母細胞 （Stage V， VI）を分離した．アイソトープ溶液中に置 いた病母細胞への細胞外からの36CI，1251，82Brの流入 （inHux）を種々の条件下で測定した．膜電位は，4M・ potassium acetateを充填した細胞内電極を用いて測 定した． 結果 1）アフリカッメガエル卵母細胞のCr透過係数は， 3．9×10－7cm／sであった．卵母細胞は気道上皮や骨格 筋に比較してCl一透過性は低い． 2）36Cl in且uxは高K＋溶液による脱分極に際して constant field theoryセこ従って増加する． Cl一透過は拡 散であることを示唆する． 3）36Cl in且uxは外液のCr濃：度に直線的に依存し， 他の陰イオンの存在に影響されなかった．温度依存性 から計算した36CI innuxの活性化エネルギーは低く， 46KJ／Molであった．これらの所見は，やはりCr透過 が拡散であることを示唆する． 4）C1チャンネルのブロッカー， diphenylamine－2－ carboxylateと9－anthracene carboxylateは36Cl inHuxを抑制し， Kdはそれぞれ5×10－4M，10－3Mで あった．一方，C1・HCO3対向輸送及びNa・K－Cl共輸送 のinhibitorは36Ci inHuxに影響を及ぼさなかった． 5）Dibutyryl cyclic AMPは36Cl in恥xを増強しな かった．この点に於て気道上皮細胞のClチャンネルと 異なる， 6）アイソトープ実験及び膜電位測定から求められ た・・ロゲンイオン選択性はr（3．2）＞Br（1．3）＞Cr （1．0）であり，気道上皮細胞のClチャンネルの選択性 と類似していた． 考察 アフリカッメガエル卵母細胞のCl一輸送は，上記2）， 3），4）の実験結果からキャリヤを介する輸送ではなく， チャンネルを介する輸送であると考えられる．36Cl inHuxの初期速度より換算したClチャンネル密度は， 0．07／μm2であり，気道上皮細胞の1／10以下であると推 一830一227 定される． 結論 アフリカツメガエル卵母細胞のCl一輸送系はチャン ネルによる輸送であると結論される．Clチャンネルの プロッカーに対する感受性及びイオン選択性は気道上 皮細胞と類似しているが，卵母細胞のC1チャンネルは cyclic AMP依存性ではなく且つチャンネル数が少な いことから，気道上皮細胞のmRNA注入によって発 現させたClチャンネルを検出することは充分可能で ある．
