抗 體 分 離 ニ 關 ス ル 研 究 岡山醫科大學衛生學敎室 (主任緒方敎授)
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(2) 生 理 的 食 鹽水 「メヂ ウム」ニ於 ケル抗 體 分 離 ニ關 ス ル 研究. ス」菌 凝 集 素 ヲ分 離 スル 事 ヲ得 タ リ更 ニ又Bail セ シ メ之 ニ40℃‑42℃. 1741. u. Tsuda9)及 ビSpaet10)ハ 感 作菌 ヲ生理 的 食 鹽 水 中 ニ浮 游. 認 メキ又Michaelis11)ハ. ノ熱 ヲ加 フル 事 ニ依 リ感 作菌 體 ヨ リ再 ビ抗體 ノ食 鹽 水 「メヂ ウ ム」中 ニ解 離 シ來 ル ヲ 沈 降素 ト沈降 原 ト ノ混 和 ニ依 リテ形 成 セ ラ レ タル 沈 降 物 ヨ リ沈 降 素 ヲ分 離 セ ン ト. 試 ミ タ リシ ガ分 離 「メ ヂ ウ ム」中 ニハ 沈 降 素 ヲ證明 セ ズ シテ 却 ツテ 沈降 原 ヲ證 明 セ リ ト云 ヘ リ. 以 上 列 記 セ シ各 研 究 者 ノ感 作 抗 原 ヨ リ ノ抗 體 分 離 ハ 其 ノ分 離 方 法 ニ尚 ホ 遺 憾 ノ點 ア リ シ ニ ツ キ其 ノ分 離 成 績 ハ 滿 足 ノ域 ニ達 セ ザ リ シ ガ1918年. 小 酒 井 氏12)が 分 離 「メ ヂ ウ ム」 ト シ テ10%ノ. 蔗 糖 溶 液 ヲ 使 用 シ溶 血 素 ヲ 以 テ 感 作 セ シ感 作 血 球 ヨ リ感 作 ニ使 用 セ シ溶 血 素 ノ殆 ド全 量 ヲ分 離 シ得 テ 此 所 ニ抗 體 分 離 上一 大 進 歩 ヲ來 セ リ即 チ 古 畑 氏13)ノ 血 球 凝 集 素 ノ分 離,緒 方敎 授14)ノ 抗 大 腸 菌 凝 集 素 ノ分 離 等 ノ研 究 業 蹟 相 ヒ踵 イ デ發 表 セ ラル ル ニ 至 レ リ又 三 輪15)及 ビHunton16)ノ 兩 氏 ハ 小 酒 弁 氏 ノ蔗 糖 溶 液 「メ ヂ ウ ム 」ヨ リ暗 示 ヲ得 テ 分 離 「メ ヂ ウ ム」 トシ テ蒸 餾 水 ヲ用 ユ ル 事 ニ着 想 シ之 又 良 結 果 ヲ納 メ得 タ リ又 我 ガ敎 室 ノ 景 山 氏17)ハ 小 酒 氏 法 ヲ用 ヒ テ 「フオ ル ス マ ン」氏 抗 體 ノ分 離 ヲ試 ミ テ成 功 セ リ次 デ最 近 ニ至 リ余18)及 ビ白 玖 氏19)ハ 分 離 「メ ヂ ウ ム」 トシ テ 蒸 餾 水 ヲ用 ヒ血淸 沈 降 素 竝 ニ 細 菌 沈 降 素 ヲ分 離 ス ル 事 ヲ 得 タ リ. 吾 人 ハ 以 上 ノ抗 體 分 離 ノ研 究 結 果 ニ 依 リ感 作 抗 原 ヨ リ ノ抗 體 分 離 ニ際 シ テ ハ 分 離 「メ ヂ ウ ム」 ト シテ10%蔗. 糖 溶 液 又 ハ 單 ニ蒸 餾 水 等 ノ如 ク鹽 類 ヲ含 有 セ ザ ル 「メ ヂ ウ ム 」 ガ最 適 ナ ル ヲ 知 ル. 之 蓋 シ一 般 ニ周 知 セ ラ レ居 ル ガ如 ク鹽 類 ハ抗 體 抗 原 間 ノ 生 物 學 的 反 應 ニ 必 要 缺 グ ベ カ ラ ザ ル モ ノ ナ ル ヲ以 テ 無 鹽 ノ「メ ヂ ウ ム 」ハ一 旦 完 成 セ シ抗 體 抗 原 ノ結 合 ヲ シテ 再 ビ解 離 セ シ メ ン トス ル 作 用 ヲ有 ス レバ ナ リ次 ニ尚 ホ 感 作 抗 原 ヨ リ ノ抗 體 分 離 ニ際 シテ 「メ ヂ ウ ム」以 外 ニ 温 熱 モ 亦 重 大 ナ ル 意 義 ヲ有 ス ル モ ノ ナ リ ト思 惟 ス 勿 論 此 熱 ノ抗 體 分 離 度 ニ 及 ボ ス影 響 ニ ツ キ テ ハ 各 研 究 者 ニ 依 リ其 ノ成 績 必 ズ シモ 一致 セ ズ 即 チPietro 際 シテ ハ0℃‑37℃. Rondoni氏. ノ如 キ ハ 「ア ル カ リ」ニ 依 ル 抗 體 分 離 ニ. 迄 ハ 其 ノ分 離 度 ニ差 異 ヲ 認 メズ トナ シ之 ニ反 シテLandsteiner20)及. ビ小 酒. 井 氏21)ノ 如 キ ハ 抗 體 分 離 度 ハ 分 離 「メ ヂ ウ ム」ノ加 温 度 ニ 正 比 例 ス ル モ ノ ナ リ ト云 ヘ リ又 緒 方 教 授22)ハN/100ニ. ナ ル ガ如 ク 「ナ トロ ン ラ ウ ゲ 」ヲ添 加 セ シ10%蔗. 大 腸 菌 凝 集 素 ノ分 離 ヲ セ ラ レ シ ニ其 ノ 分 離 度 ハ37℃‑55℃ 42℃‑45℃. 糖 液 ヲ 分 離 「メ ヂ ウ ム 」 ト シテ. ノ 間 ニ於 テ 著 明 ナ ル 差 異 ヲ 認 メ ズ. ガ最 適 ナ リ ト云 ヘ リ又 古 畑 氏23)モ 血 球 凝 集 素 ノ分 離 ニ際 シ温 度 ノ抗 體 分 離 度 ニ及. ボ ス影 響 ヲ檢 シ タ ル ニ緒 方敎 授 ト同 樣 ナ ル 結 果 ヲ得 タ リ ト云 ヘ リ余 ハ最 近 蒸 餾 水 「メ ヂ ウ ム」ー 於 ケル 沈 降 素 ノ分 離 ニ當 リ53℃. 迄 ハ 分 離 度 ハ加 温 度 ト正 比 例 シテ 上 昇 シ55℃. 以 上 ニ加 熱 スル. 時 ハ却 ツ テ 分 離 度 ノ減 退 ス ル ヲ 見 タ リ一 般 ニ抗 體 抗 原 ノ結 合 ニ都 合 良 キ 温 度 ハ37℃ テ45℃. 前後 ニ シ. ニ 至 レバ 已 ニ其 ノ結 合 ヲ抑 制 セ ン ト ス ル 傾 向 ア リ而 シテ 此 抑 制 度 ハ 温 ノ上 昇 ト共 ニ強. ク ナ ル モ ノ ナ リ從 テ感 作 抗 原 ヨ リ ノ抗 體 分 離 度 モ 又 分 離 「メ ヂ ウ ム」ノ加 温 度 ト共 ニ增 強 ス ベ キ 事想. 像シ得 ベ キ ナ リ然 ル ニ 上 記 ノ如 ク 加 温 ノ分 離 度 ニ及 ボ ス影 響 ニ 就 キ テ 各 研 究 者 ノ成 績 一 致. セ ズ 余 ハ此 一 致 セ ザ ル 理 由 ト シ テ次 ノ 如 ク思 考 ス即 チ加 温 ト共 ニ抗 體 ノ分 離 度 モ 亦增 大 シ得 ル モ 無 鹽 ノ 「メ ヂ ウ ム 」又 ハ 酸 「ア ル カ リ」性 ノ「メ ヂ ウ ム 」ニ於 テ ハ 「メ ヂ ウ ム」其 ノ モ ノ ガ 已 ニ 感 作 109.
(3) 1742. 須. 之. 内. 權. 三. 抗 原 ヲ シテ分離 「メヂ ムウ」中 ニ溶 解 移 行 セ シ メ ン トス ル傾 向 ア リ而 シテ尚 ホ之 ヲ加温 スル 時 ハ 加 温 度 ト共 ニ抗 原 ノ溶 解 移 行 ヲ益 々促 進 セ シメ以 テ折 角解 離 シ得 タル抗 體 モ分 離「メヂ ウ ム」中 ニ溶 存 スル抗 原 ノ爲 メニ分 離操作 終 結後 生理 的 ニ ナル ガ如 ク結 晶食 鹽添 加 ニ際 シ結 合 相 殺 セ ラ レテ其 ノ結 果 ハ低温 分 離 ノ場 合 ト等 シキ結 果 ヲ示 スカ又 ハ相 殺 セ ラ レ シ抗 體 量 多 大 ナ リ シ場 合 ニ ハ却 ツ テ低 温 分離 ノ方 ガ良成 績 ヲ示 ス ガ如 キ場 合 アル モ ノナ リ之 ニ反 シテ抗 原 ノ分 離 「メ ヂ ウ ム」 中 ニ溶 解移 行 スル事 困 難 ナル ガ如 キ溶 液 ヲ分離 「メヂ ウ ム」トシテ使 用 スル時 ハ其 ノ分離 度 ハ加 温度 ノ上 昇 ト共 ニ增大 スル モ ノナ リ而 シテ抗 原 ノ溶 解 移 行 ヲ困難 ナ ラ シム ル ガ如 キ 「メ ヂ ウム」 トシテ生理 的 食鹽 水 ノ如 キ ハ其 ノ1例 ナ リ余 ハ本 研 究 ニ於 テ分 離 「メヂ ウ ム」トシテ生 理 的 食鹽 水 ヲ使 用 シ高 低 各種 ノ温度 ヲ作 用 セ シ メ各 温 度 ニ於 ケル抗 體 分離 度 ヲ相 ヒ比 較 シ併 セ テ從 來 稱 用 セ ラ レタル無 鹽 「メヂ ウ ム」ヲ以 テス ル分離 法 トノ間 ニ於 ケ ル優 劣 ニ ツ キ論 及 セ リ.. 第1章 免 疫動 物 ト シテ體 重2.000g‑2.500gノ. 實 驗 材 料. 成 熟 家兎 ヲ使 用 シ免 疫 原 トシテ ハ牛 血淸,大. 腸 菌,山 羊 血 球,鶏. 血 球 ヲ以 テ シ抗 原 注 射 ハ 總テ 耳 靜 脉 ニ於 テ 爲 セ リ. 牛 血淸 ハ1囘 量0.5ccヲ 以テ シ3‑4日. ノ間 隔 ニテ 數 囘 乃至十 數 囘 免疫 シ最 後 ノ免 疫 ヨ リ約7日. シ緒 方敎 授 ノ稀 釋 沈降 反 應 ニ依 ル稀 釋 沈 降 價1:500以 大 腸 菌 ハ18時 間 培 養 ノモ ノ1斜 面 ヲ10ccノ シ4‑5日. ノ間 隔 ヲ以 テ第1囘 ハ1cc第2囘. 目ニ採 血. 上 ノモ ノ ヲ得 テ 之 ヲ實 驗 ニ供 セ リ.. 生 理 的 食 鹽水 ニ浮 游 セ シ メ60℃ ノ重 湯 煎 中 ニテ2時 間 殺菌. ハ2cc第3囘. ハ3ccト 云 フ如 ク順 次增 量 シ ツ ツ數 囘 以 上 免疫 シ. 最 後 ノ免 疫 ヨ リ約7日 目 ニ採 血 シ 「ア グル チ ノス コー ブ」ヲ 以 テ 觀 察 シ クル凝 集價1:20,000以. 上 ノモ ノヲ. 得 テ 實驗 ニ供 セ リ. 山 羊血 球 ハ 其 ノ10%生. 理 的食 鹽水 浮 游 液 ヲ 作 リ2cc 3cc 5ccト 順 次增 量 シ ツツ4日. 以 上 免疫 シ最 後 ノ免 疫 ヨ リ約7日. ノ間 隔 ヲ置 キテ 數 囘. 目 ニ採 血 シ一般 方式 ノ如 クシテ 溶 血 價 ヲ測 定 シ其 ノ溶 血 價0.001以. 上 ノ. モ ノヲ得 テ 之 ヲ實 驗 ニ供 セ リ. 鶏 血球 ハ山 羊 血 球 ノ場 合 ト同 方法 ニ テ免 疫 シ其 ノ血 球凝 集價1:400以. 上 ノモ ノ ヲ得 テ之 ヲ實 驗 ニ供 セ リ.. 次 ニ 感 作 セ シム ベ キ抗 原 トシテ 沈 降 素 ノ場 合 ニ ハ液 状 血淸 ヨ リハ粉 末 血淸 ノ方 ガ分 離 ニ 好都 合 ナ ル ニ依 リ血淸 粉 末 ヲ作 リテ之 ヲ使 用 セ リ溶 血 素竝 ニ血球 凝 集 素 ノ場 合 ニハ 血球 ハ已 ニ65℃ ニテ ハ 著 シク 溶 血現 象 ヲ發 來 ス ル ニ依 リ 血球 基質 ヲ使 用 セ リ 血球 基 質 ハ 次 ノ如 ク シテ作 レ リ 即 チ洗滌 血球 液 ヲ10倍 容 量 ノ蒸 餾 水 ヲ以 テ 溶 血 セ シ メ然 ル後 ニ生 理 的 食 鹽 水 ヲ以 テ數 囘遠 心 洗 滌 ス 然 ル時 ハ稍 々灰 白色 ヲ帶 ビ タル 基 質 ヲ得 ベ シ.. 第2章 第1節 第1項 輪 環法 ニ ハUhlenhuth氏. ノ原 法 ト1927年. 寳驗竝ニ其ノ成績 反 應檢 査 方 法 沈降反應檢査法 緒方敎 授 ノ發 表 セ ラ レ タル稀 釋 沈 降 反 應 法 ノ2法 ア リ 余 ハ 本 110.
(4) 生 理 的 食 鹽 水「メヂ ウム」ニ 於 ケ ル抗 體 分 離 ニ關 スル 研 究. 1743. 實 驗 ニ於 テ沈 降 素 ノ結 合 竝 ニ分 離 度 ノ關 係ハ 総 テ緒 方敎 授24)ノ 稀釋 沈降 反 應 法 ニ依 レ リ今 同敎 授 ノ稀 釋 沈 降 反 應法 ヲ略 述 ス レバ 次 ノ如 シ即 チ沈 降 素 血淸 ヲ10%海. 〓 血淸 又 ハ2%「. ア ラ ビ ヤ ゴム 」 溶 液 等 ヲ以 テ順. 次 稀 釋 シ行 ク時 ハ 遂 ニ或 ル特 定濃 度 ノ抗 原 トノ ミ反應 ヲ呈 シ 夫 レ以 外 ノ濃 度 ノ抗 原 トハ反 應 セザ ル ニ至 ル 此 場 合 ニ其 ノ特 定濃 度 ノ抗 原 ヲ稱 シテ結 合 帯 ト名 ヅ ケ 此 結 合 帯 ト反應 シ得 ル免 疫 血淸 ノ最 高 稀 釋 度 ヲ稀 釋 沈 降 價 ト稱 ス結 合. 竝 ニ分 離 度 ハ 此 稀 釋 沈 降價 ノ高 低 ヲ以 テ 評 價 セ リ 沈 降 反應 觀測 時間 ハ2時 間 ヲ以 テ 限 度. トナ シ 白色 輪 環 ヲ形 成 セ シモ ノヲ(+)ト. ナ シ然 ラザ ル モ ノ ヲ(‑)ト. 第2項. セ リ.. 細 菌凝 集反 應檢査法. 18時 間 寒 天 培養 ノ大腸 菌3「 ノル マ ール ヱ ーゼ」ヲ採 リ之 ヲ10ccノ. 生 理 的 食 鹽 水 中 ニ浮游 セ シ メ60℃ ノ. 重湯 煎 中 ニテ2時 間 殺菌 シ該 菌 液 ノ4滴 宛 ヲ免疫 血淸 ノ遞 降 的 稀 釋 液 ヲ盛 レ ル試 驗 管 ニ滴 加 シ37℃ ノ孵 卵 器 中 ニ入 レ居 ル事2時 間 ノ後 取 リ出 シ翌 朝迄 室 温 ニ放 置 シ然 ル後 「ア グ ル チ ノス コ ープ」ヲ以 テ檢 シ 良 ク對 照 ト比 較 シ以 テ 其 ノ成 績 ヲ判 定 セ リ.. 第3項. 溶 血反 應 檢 査 法. 溶 血價 ハ 使 用 ス ル補 體量 ニ依 リ著 シ ク差 異 ヲ生 ズ ル ニ依 リ毎 實 驗共 ニ 補體 價 ノ2倍 量 ヲ使 用 セ リ 其 ノ他 ハ一 般 方式 ノ如 ク施 行 シ完 全 溶 血 ヲ(+)ト. ナ シ然 ラザ ル モ ノ ヲ(‑)ト. 第4項. セ リ.. 血球凝集反應檢査法. 血球 凝 集反 應 ノ場合 ニ 多量 ノ血 球 ヲ使 用 ス ル時 ハ 反 應 ノ發 現 不鮮 明 トナ ル ニ付 キ 余 ハ血 球 凝 集素 血淸 ノ 遞 降的 稀釋 液 ヲ盛 レル各試 驗 管 ニ5%ノ. 鶏 血 球 浮游 液2滴 宛 ヲ滴 加 シ37℃ ノ孵卵 器 ニ入 レ居 ル 事2時 間 ノ. 後 ニ取 リ出 シ翌 朝迄 放 置 シ反 應 ラ檢 スル 事 トセ リ 輕 ク振 盪 シテ 尚 ホ肉 眼 ニテ 明 カ ニ見 得 ル 血球 凝 塊 ノア ル モ ノ ヲ(+)ト. ナ シ然 ラザ ルモ ノ ヲ(‑)ト. 第2節. セ リ.. 抗 體 ノ温熱 ニ 對 スル抵 抗. 本 研 究 ニ於 ケル 抗體 ノ分 離 ニ際 シテ ハ 主 トシテ温 度 ノ變 化 ニ據 リシ ヲ以 テ 抗體 ノ熱 ニ對 ス ル抵 抗 ヲ檢 査 シ分 離 時 ニ作 用 セ シ メ得 ベキ熱 ノ限 度 ヲ定 メ抗體 ヲ損 傷 セザ ル範 圍 ノ最 高 ノ温 度 ヲ求 メ タ リ. 從 來 ノ文 獻 ニ徴 スル ニ技 體 ノ熱 ニ對 スル抵 抗 ハ 免 疫 血淸 ヲ賦 與 セ シ動 物 ノ種 類 ニ ヨ リ又 ハ 同種 類 ノ動 物 ヨ リ得 タ ル抗 體 ト雖 モ 免疫 元 ノ異 同 ニ依 リ各 々差 異 アル モ ノナ リ岩 井 氏25)ノ 溶 血素 血球 凝 集 素 等 ニ於 ケル 實 驗 結 果 ニ依 レバ63℃‑65℃20分. 間加 温 ス ル事 ニ 依 リ抗 體 ハ侵 害 セ ラ レ始 ム ト又緒 方敎 授26)ハ第2囘 衛 生. 學 微 生 物 學 寄生 蟲 學 聯 合學 會 ニ於 テ 沈降 素 ハ75℃30分. 間加 熱 ス ル事 ニ依 リ侵 害 セ ラ レ始 メ85℃30分. 間加. 熱 スル事 ニ依 リ全 ク抗 體 的能 力 ヲ消 失 スル モ ノナ リ ト述 ベ ラ レタ リ余 ハ余 ノ本 實 驗 ニ於 テ使 用 セ ン トス ル 諸 種 抗體 ニ 就 キ次 ノ如 キ 方法 ニ依 リ熱 ニ對 スル抵 抗 力 ヲ檢 セ リ即 チ先 ヅ各 種 免 疫 血淸 ヲ蒸 餾水 ヲ以テ10倍 ニ稀釋 シ重 湯 煎 中 ニテ30分. 間 宛 各 程 度 ノ温 ヲ作用 セ シ メ操 作 完 結後 直 チ ニ取 リ出 シ冷 水 ヲ以 テ 冷 却 シ 生. 理 的 ニ ナル如 ク結 晶 食 鹽 ヲ加 ヘ然 ル後 ニ抗 體價 ヲ測 定 シ以 シ各 抗 體 ノ熱 ニ 對 ス ル抵 抗 力 ヲ査 定 セ リ其 ノ成 績 ハ次 表 ニ示 セ ル ガ如 シ 沈 降 素 ノ場 合 ニハ 己 ニ緒 方敎 授 ガ發 表 セ シ如 ク酵素 「アル カ リ」酸 熱 等 ノ作 用 ヲ受 ク ル モ其 ノ結 合 帶 ハ常 ニ安 定 ニ ンテ移 動 セザ ル ヲ以 テ 沈 降素 量 ノ測 定 ニハ 常 ニ終 始 一貫 セ ル結 合帶 ヲ以 テ セ リ. 111.
(5) 1744. 之. 第1表. 備考. 内. 權. 三. 沈 降 素 ノ熱 ニ對ス ル抵 抗. 抗 體 稀 釋 度 ハ結 合 帶 ヲ以 テ 測 定 シ タル モ ノナ リ.結 合 帶1:500. 第2表. 細 菌 凝 集 素 ノ熱 ニ對 スル抵 抗. 第3表. 血球 凝 集 素 ノ熱 ニ對 スル抵 抗. 第4表. 溶 血素 ノ熱 ニ對 スル抵 抗. 以 上各 表 ノ成績 結 果 ヲ通 覽 スル ニ各抗 體 共 ニ65℃30分 ズ75℃30分. 間 ノ加 熱 ニ ヨ リ稍 々 強 ク侵 害 セラ レ85℃30分. 間 ノ加 熱 ニ ヨ リテ モ殆 ド侵 害 セラ レ 間 ノ加 熱 ニ ヨ リテ ハ殆 ド完 全 ニ抗 112.
(6) 生 理 的 食 鹽水 「メ ヂ ウ ム」ニ於 ケ ル抗 體分 離 ニ關 スル 研 究. 1745. 體 的能 カ ノ消 失 セ ラル ル ヲ知 ル本 實 驗 成 績 ノ結 果 ニ依 リ抗 體 分 離 時 ニ作 用 セ シ メ得 ベ キ熱 度 ノ 最 高 ハ65℃ タル ベ キ ヲ知 レ リ.. 第3節. 抗 體 ノ 分 離. 第1項. 沈 降 素 ノ分 離. 緒 方敎 授 ノ稀 釋 沈 降 反 應法 ニ依 リテ測 定 シ タル 稀 釋 沈 降價1:610ヲ 取 リ之 ニ0.004gノ. 血淸 粉 末 ヲ加 ヘ良 ク振 盪 混和 セ シ メ37℃. 有 ス ル抗 牛 血淸 沈 降 素 血淸4.0ccヲ. ノ孵 卵 器 内 ニ入 レ置 ク事2時 間 ノ後 取 リ出 シ. 強 カ ナ ル 遠心 沈 澱 器 ニ依 リテ 上淸 ト沈 降 物 トニ區 別 シ 該 沈降 物 ヲ生 理 的 食 鹽 水 ヲ以 テ 數 囘遠 心洗 滌 シ免 疫 血淸 ノ殘存 ヲ無 カ ラ シ メ 次 ニ斯 ノ如 ク純粹 トナ サ レ タル沈 降 物 ヲ最初 結 合 時 ニ使用 シ タル免 疫 血淸 量 ト等 シキ量 ノ生 理 的 食鹽 水 中 ニ浮游 セ シ メ各 種 温 度 ノ重 湯 煎 中 ニ入 時 々振 盪 シ30分 ノ後 取 リ出 シ直 チ ニ強 力遠 心 器 ニ依 リ上淸 ト沈 澱 トニ區別 ス 此 上淸 ハ 即 チ分 離 液 ニ シテ分 離 セ ラ レ タル沈 降 素 ヲ含 有 ス 今 各 温度 ニ依 ル分 離 沈 降 素 量 ヲ素 示 ス レバ 次 ノ如 シ.. 第5表. 備考. 各温 度 ニ於 ケル沈 降 素 ノ分 離度 比 較. 抗 體稀 釋 度 ハ 結 合帶 ヲ以 テ 測定 ン タル モ ノナ リ. 結 合帶1:500. 結 合 度7.6/10. 第5表 ノ成 績 ニ依 リ分 離「メヂ ウ ム」ト シテ生 理 的 食鹽 水 ヲ使 用 ス ル時 ハ65℃. ニ於 テ 分 離 セ シ場 合 ガ其 ノ. 分 離度 最 モ良 好 ナ ル ヲ知 ル次 ニ余 ハ以 前 余27)ガ發 表 セ シ蒸 餾 水 「メヂ ウム」ニ於 ケル53℃ ヲ以 テ ス ル分 離 法 ト生理 的 食 鹽 水「メヂ ウ ム」ニ於 ケル65℃. ヲ以 テ ス ル分 離 法 ト ノ間 ニ於 テ其 ノ分 離 度 ニ優 劣 ノ差 ア ル ヤ否 ヤ. ヲ檢 セ シ ニ次 表 ニ示 セ ルガ如 ク兩 者 間 ニ大 差 ナキ ヲ見 タ リ.. 第6表. 生理 的 食鹽 水 「メヂ ウ ム」65℃ 分 離 法 ト蒸 餾 水 「メヂ ウ ム」53℃ 分 離 法 トノ間 ニ於 ケル 分離 度 比較. 113.
(7) 1746. 備 考. 須. 之. 内. 權 三. 抗 體 稀釋 度 ハ 結 合 帶 ヲ以 テ測 定 シ タル モ ノナ リ. 結 合 帶1:1,000. 結 合 度3/4. 鹽分 離 沈 降 素=生 理 的 食鹽 水 「メ ヂ ウム 」65℃ 分 離 法 ニテ分 離 シ タ沈 隆 素 ナ リ. 餾分 離 沈降 素=蒸 餾 水 「メヂ ウ ム」53℃ 分 離 法 ニ テ分 離 シ タル沈 降 素 ナ リ. 次 ニ 分 離液 中 ニ ハ 結 合 時 ニ使 用 セ シ抗 原 ノ僅 少 量 ガ 溶解 移 行 シ居 ル ヲ常 トス 而 シテ 余 ハ 生 理 的 食 鹽 水 「メヂ ウム」65℃ 分 離 法 ニ依 ル分 離 液 ト蒸 餾 水 「メヂ ウ ム」53℃ 分 離 法 ニ依 ル分 離液 トノ間 ニ於 テ 溶解 移 行 セ シ抗 原 量 ヲ比 較 セ シ ニ第7表 ニ示 セ ルガ如 ク生 理 的 食鹽 水 「メ ヂ ウ ム」65℃ 分 離 法 ニ依 ル モ ノ ノ方 ガ抗 原 含 有 量 少 キ ヲ見 タ リ.. 第7表. 生 理 的 食 鹽 水 「メヂ ウ ム」65℃ 分 離 法 ニ依 ル分 離液 中 ノ抗 原量 ト 蒸 餾 水 「メヂ ウ ム」53℃ 分 離 法 ニ依 ル分 離 液 中 ノ抗 原 量 トノ比 較. 備考. 鹽分 離 沈 降 素=生 理 的 食鹽 水 「メ ヂ ウム 」65℃ 分 離 法 ニ依 ル沈 降 素 餾 分 離 沈降 素=蒸 餾 水 「メヂ ウム 」53゜ 分 離法 ニ依 ル沈 降 素. 第2項 大 腸 菌18時. 細菌 凝集素 ノ分離. 間培 養 ノモ ノ5寒 天 斜 面 ヲ白 金 耳 ニ テ 丁 寧 ニ採 リ 之 ヲ 生 理 的 食 鹽 水 中 ニ平 等 ニ浮 游 セ シ メ. 60℃ ノ重 湯煎 中 ニテ2時 間 殺 菌 シ然 ル後 生理 的 食 鹽 水 ニテ3囘 遠 心 洗 滌 ス斯 ノ如 ク洗 滌 セ ラ レ タル菌 ヲ凝 集 價1:25,600ヲ. 有 ス ル免 疫 血淸5ccト. 良 ク混 和 シ37℃. ノ孵 卵 器 内 ニ入 ル ル事2時 間 ノ後 取 リ出 シ強 力 ナ. ル遠 心 器 ニ依 リ上淸 ト沈 澱物 トニ區 分 シ 該 沈 澱物 ヲ生 理 的 食 鹽 水 ヲ以 テ 數 囘 遠 心 洗 滌 シ以 テ 免 疫 血淸 ノ殘 存 ヲ無 カ ヲ シム 斯 ノ如 ク純 粹 ニサ レタル 沈 澱物 ヲ最 初 結 合時 ニ使 用 シ タル 免 疫 血淸 ト等 シ キ量 ノ生 理 的 食 鹽 水 中 ニ浮 游 セ シメ 各種 温度 ノ重 湯 煎 中 ニ入 レ時 々振 盪 シ30分 間 ノ後 ニ取 リ出 シ直 チニ 強 力 ナ ル 遠 心器 ニ 依 リ上淸 ト沈 澱 物 トニ 區別 ス該 上淸 液 ハ 即 チ分 離 液 ニ シテ分 離 サ レタ ル凝 集素 ヲ含 有 ス 今 各 温 度 ニ於 ケル 分 離 凝 集 素 量 ヲ表 示 ス レバ如 シ. 第8表. 備考. 各 温 度 ニ於 ケル 細 菌 凝 集 素 ノ 分 離 度 比 較. 結 合 度8.8/10 114.
(8) 生 理 的 食 鹽 水「メヂ ウ ム」ニ於 ケ ル抗 體分 離 ニ關 ス ル研 究. 第8表. ノ成 績 ニ於 テ モ亦65℃. 次 ニ10%ノ. 1747. ノ場 合 ノ分 離 度 ガ最 モ 優 秀 ナ リ.. 蔗 糖 溶 液 「メヂ ウ ム」53℃ 分 離 法,蒸 餾 水 「メヂ ウ ム 」53℃ 分 離 法 及 ビ生 理 的 食 鹽 水「メヂ ウ. ム 」65℃ 分 離 法 ト ノ間 ニ於 テ 各分 離 度 ニ優 劣 ノ差 ア ル ヤ否 ヤ ヲ檢 セ シニ次 表 ニ示 セ ルガ 如 ク各分 離 法 ノ間 ニ大差 ナ カ リキ其 ノ成 績 ハ 次 表 ノ如 シ. 第9表. 10%ノ. 蔗 糖 溶 液 「メ ヂ ウ ム 」53℃ 分 離 法,蒸. 餾 水 「メ ヂ ウ ム 」53℃ 分 離. 法 及 ビ生 理 的 食 鹽 水 「メ ヂ ウ ム」65℃ 分 離 法 ニ 依 ル 各 分 離 度 比 較. 備考. 結 合 度5/10 糖 分離 凝 集 素=10%蔗. 糖 溶液 「メヂ ウ ム」53℃ 分 離 法 ニ依 ル分 離 凝 集 素.. 餾 分離 凝 集素=蒸 餾 水 「メヂ ウ ム」53℃ 分 離 法 ニ依 ル分離 凝集 素. 鹽 分離 凝 集 素=生 理 的 食鹽 水 「メヂ ウム」65℃ 分離 法 ニ依 ル分 離 凝 集 素. 第3項 第1章 記 載 ノ如 キ方 法 ニ依 リ鶏 血球 液2ccヨ 清4ccト. 血 球 凝 集 素 ノ分 離 リ血 球 基 質 ヲ作 リ凝 集價1:800ヲ. 有 ス ル抗 鶏 血球 凝 集素 血. 混 和 シ37℃ ノ孵卵 器 内 ニ入 レ良 ク凝 集素 ト ノ結 合 ヲ計 ラ ンガ爲 メ時 々振 盪 シ2時 間 ノ後 取 リ出 シ. 直 チ ニ強 力 ナル遠 心 器 ニ依 リ上淸 ト沈 降 物 トニ區別 ス 此 沈 降物 ハ即 チ 血球 凝 集 素 ヲ以 テ 感 作 セ ラ レ タル血 球 基 質 ナ リ 次 デ此 沈 降 物 ヲ生 理 的 食 鹽水 ヲ以 テ 數 囘 遠心 洗 滌 シ以 テ 免 疫 血淸 ノ残存 セ ル モ ノヲ除 去 ス斯 ノ 如 ク シテ 洗 滌 シ純 粹 トナサ レ タル沈 降 物 即 チ感 作 血 球 基 質 ヲバ 結 合時 ニ使 用 シタル 免疫 血淸 量 ト等 シキ 量 ノ生理 的食 鹽 水 中 ニ浮 游 セ シメ各 種 温 度 ノ重 湯煎 中 ニ入 レ時 々 振 盪 シ30分 間 ノ後 ニ取 リ出 シ直 チ ニ強 力 ナ ル 遠心 器 ニ依 リ上淸 ト沈 澱物 トニ分 ツ該 上淸 液 ハ即 チ分離 液 ニ シテ 分離 サ レ タ血球 凝 集 素 ヲ含 有 ス 今各 温 度 ニ於 ケル分 離 血球 凝 集 素 ヲ表 示 ス レ バ次 ノ如 シ.. 第10表. 備考 115. 結 合 度7/8. 各 温度 ニ於 ケル血球 凝 集 素 ノ分 離 度 比 較.
(9) 1748. 須. 第10表. ノ成 績 ニ於 テ モ亦65℃. 次 ニ10%ノ. 之. 内. 權. 三. ノ場 合 ノ分 離 度 ガ最 モ良 好 ナ リ.. 蔗 糖 溶 液 「メヂ ウ ム」53℃ 分 離 法,蒸 餾水 「メヂ ウ ム」53℃ 分離 法 及 ビ生 理 的 食 鹽 水 「メヂ ウ. ム」65℃ 分 離 法 ト ノ間 ニ於 テ 各 分離 度 ニ 就 キ差 異 ア ル ヤ否 ヤ ヲ檢 シ タル ニ大 差無 キ ヲ見 タ リ即 チ 其 ノ成 績 結 果 ハ 次表 ニ示 ス ガ如 シ. 第11表. 10%ノ. 蔗 糖 溶 液 「メ ヂ ウ ム」53℃ 分 離 法,蒸. 離 法 及 ビ生 理 的 食 鹽 水 「メ ヂ ウ ム」65℃. 備考. 餾 水 「メ ヂ ウ ム 」53℃ 分. 分 離 法 ニ依 ル 各 分 離 度 比 較. 結 合度7/8 糖 分離 凝 集 素=10%蔗. 糖 溶液 「メ ヂ ウ ム」53℃ 分離 法 ニ依 ル分 離 血 球 凝 集 素.. 餾 分離 凝 集素=蒸 餾 水 「メヂ ウム」53℃ 分 離 法 ニ依 ル 分離 血球 凝 集 素. 鹽 分離 凝 集素=生 理 的 食 鹽 水 「メ ヂ ウ ム」65℃ 分 離 法 ニ依 ル分 離 血球 凝 集 素.. 第4項. 溶 血 素 ノ分 離. 第1章 記 載 ノ如 キ方 法 ニ依 リ山 羊 血 球 浮 游 液5ccヨ 球 溶 血素 血淸5ccト. リ血球 基質 ヲ作 リ 溶 血價1:2,000ヲ. 有 ス ル抗 山 羊 血. 混 和 シ前記 血球 凝 集 素 分 離 時 ニ於 ケル ト全 ク同 一 方法 ニ ヨ リテ 溶 血 素 ヲ分 離 セ リ今 各. 温 度 ニ於 ケ ル分離 溶 血素 ヲ表 示 ス レバ次 ノ如 シ.. 第12表. 備考 第12表. 各温 度 ニ於 ケ ル溶 血 素 ノ分 離 度 比 較. 結 合度6/10 ノ成 績 ニ於 テ モ 亦65℃. 次 ニ感 作 血球 基 質 ヨ リノ溶 血. ノ場 合 ガ分 離 度 最 モ良 好 ナ リ. 分 離 ニ際 シ10%ノ. 蔗 糖 溶液 「メヂ ウム」53℃ 分 離 法,蒸 餾 水 「メヂ ウ ム」. 53℃ 分 離 法 及 ビ生 理 的 食 鹽 水 「メ ヂ ウ ム」65℃ 分 離 法 ト ノ間 ニ 於 テ 各分 離 度 ニ差 異 ア ル ヤ 否 ヤ ヲ檢 シタル 116.
(10) 生 理 的 食 鹽 水 「メヂ ウム 」ニ於 ケル 抗體 分 離 ニ關 スル 研 究. ニ10%ノ. 1749. 蔗 糖 溶液 「メ ヂ ウム 」53℃ 分 離 法 ノ場 合 ガ他 ノ場 合 ニ比 シ少 シ ク優 秀 ナ リキ 其 ノ成 績 ハ 次表 ノ如. シ.. 第13表. 10%ノ. 蔗 糖溶 液 「メ ヂウ ム」53℃ 分離 法,蒸 餾 水 「メヂ ウ ム」53℃ 分. 離 法 及 ビ生 理 的食 鹽 水 「メ ヂ ウ ム」65℃ 分離 法 ニ依 ル 各 分 離度 比較. 備考. 結 合度6/10. 第3章. 結. 論. 以 上各 實 驗 成績 ノ結 果 ヲ考 按 結 論 スル 事次 ノ如 シ. 1). 感作 抗 原 ヨ リ抗 體 ヲ分離 スル場 合 ノ「メヂ ウ ム」トシテ生理 的 食鹽 水 ヲ使 用 スル 時 ハ抗 體. ノ分 離度 ハ「メ ヂ ウム」ノ加温 度 ト共 ニ上 昇 シ65℃ ノ場 合 が分 離 度最 モ大 ナ リ. 2). 生 理 的食 鹽 水「メヂ ウ ム」65℃ 分 離法 ニ依 ル分 離 度 ハ從來 稱 用 セラ レ居 ル10%ノ. 蔗 糖溶. 液 「メヂウ ム」蒸 餾 水「メヂ ウ ム」分離 法 ニ依 ル分 離 度 ト殆 ド優劣 ナ シ. 3). 生 理 的 食鹽 水 「メヂウ ム」65℃ 分 離 法 ニ依 ル分 離 液 ハ他 ノ分 離 法 ニ依 レル分 離 液 ニ比 シ. 抗 原 ヲ含 ム事少 シ分離 液 中 ニ於 ケ ル抗 原 量 ヲ少 カ ラ シムル 事 ハ抗 體 分 離 上緊要 ナル要 件 ナ リ. 4) ア. 生 理 的 食鹽 水 「メ ヂ ウ ム」65℃ 分 離 法 ハ他 ノ分 離法 ニ比 シ其 ノ操 作 簡 便 ナ リ ト云 フ利 點. リ.. 5). 溶 血素 血球 凝集 素 ノ分 離 ニ際 シ感 作 セ シムベ キ抗 原 トシテ 血球 基 質 ヲ使 用 スル時 ハ血 球. 溶 解 ニ由來 スル分 離 液 ノ著 色 ヲ防 ギ且 又等 張 壓 ノ考 慮 ヲ要 セザ ル ノ利 點 ア リ.. 擱筆 ニ當 リテ終始 御懇篤ナル御指導竝 ニ御校閲 ヲ辱 フセ シ恩師緒方敎授 ニ對 シ謹テ感謝 ノ意 ヲ表 ス. (4.. 117. 6.. 6.受. 稿).
(11) 1750. 須. 之. 内. 權. 三. 文 1) 32,. Wiedal. of. 1899, Biol.. Klin.. u. Sicard,. S. 375. chem.,. 1906,. Woch.. 1904,. journal. of Imm.. Spaet,. Zeitschr.. 509.. 12). World.. No.. 3). 1, 161. 17.. Vol.. P.. zu. Landsteiner, 演.. journal. 1.. 14) 684頁,. 25). Bd.. 1, Heft. Wien. 岩 井,國. 1, 1928,. Klin.. Wcch.,. 1897,. W.. K.. Munch. 9). of. Bail. 1926.. Nr.. 40.. Nr.. 18). 家 醫 學 會 雜 誌,第428號,. 24) 1922,. S.. Bd. journal. 26). 6). 4). P.. 1924,. of. 須 之 内,. Bd.. f. klin.. 109.. 39,. Israel. 13). 1, S. Med.. 23). Arbeiten. Vol.. 古 畑,. 10). 56,. 1905,. Japan. der. No.. med.. 2.. 421.. 26). 生 17). Universitat. 衛 生 學 微 生 物 學 寄 生 蟲 學 聯 合 學 會 講 演. 緒 方,第1囘. S.. med.. 三 輪,衛. 6, 1921,. aus. Wien.. Weinstein.. 546.. Bd.. S. 270. 15). Imm,. Bd.. journal. u. Jagic,. 8). f. Imm. 1909,. f. Hyg.,. Gibson,. Landsteiner S. 415.. Zeitschr.. 2, 1918,. f. Imm.. Zeitschr.. 1, 351.. 1900,. Zeitschr.. 白 玖,第2囘 40.. Nr. Marz.. Michaelis,. Hunton,. 1926. 19). 1902,. III.. 16). 684頁, S. 1.. 1902, Woch.. Zeitschr.. Winterberg,. 1901,. u. Tsuda,. Vol.. 緒 方,. 2). u. pathol. W.. 11). Imm,. 33.. med.. S. 712.. 22). P.. physiol. Landsteiner,. 7, 1910,. 山 醫 學 會 雜 誌,第437號,. Okayama. J. 100, z. chem.. 3, 17.. Bd.. 學 傳 染 病 學 雜 誌,第437號, 景 山,岡. List,. Trommsdorf,. 3, 1918,. 小 酒 井,. 1921,. de. 5). 7). f. Imm 21). 6,. Ann.. Pick, Beitrage. 獻. 20). 衛 生 學 微 生 物 學 寄 生 蟲 學 聯 合 學 會 講 緒 方,第2囘. 衛 生 學 微 生 物 學 寄 生 蟲. 學 聯 合 學 會 講 演.. Kurze. Inhaltsangabe.. Die Temperaturwirkung Immunkorpers. bei der Isolierung. im physiologischen. des. Kochsalzmedium.. Von. Gonzo. Sunouchi.. Aus dem Hygienischen Institut der med. Universitat zu Okayama. (Vorstand: Prof. Dr. M. Ogata.) Eingegangen am 6. Juni 1929.. 1) Es ist eine interessante Tatsache, dass bei Isolierung des Antikorpers, der mit den Antigenen gebunden worden ist, die Menge des freigewordenen Immunkorpers zu der Temperatur eine innige Beziehung zeigt. Wenn man fur die Isolierung nur eine einzige Bedingung benutzt, z. B. in der physiologischen Kochsalzlosung die Temperatur erhoht, so geht die Menge des freigewordenen Antikorpers proportional mit der Temperatur-hohe des Mediums, wie von Landsteiner gezeigt, und auch von Prof. Ogata bei Bakterien agglutinin und von mir bei Serumprazipitin bewiesen wurde. 118.
(12) 1751. Wenn wie. man. dagegen. Temperatur. und. (nach. 2) lang. Ich. zu. bei. und. habe. das. bei. 65℃.. und. habe. gefunden, 3). 75℃.. ich. die. dass. Ich. habe. isoliert a) eine. den. anderen. die. die. Antikorper. Isolierung. Temperatur. betragt. die. folgenden. 65℃.. weil. des. bei im. Resultat. des. von. des. ber. halbe. das. gebundene. ich. wieder. des. eine. neue. Antikorpers. kann. (Serumprazipitin,. die. Stunde. Prazipitins. habe. Isolierung. werden. Bakterien. Temperaturwirkung. beschadigt. festgestellt. werden.. physiologischen. Kochsalzmedium. bei. 45℃.‑. erzielt. im. am. Dabei. besten. im. War. Antikorpers. dass. Menge. bei. gegen 75℃.. eine. Tatsache. Antikorpers. Antikorpers. Isolierungsmethoden,. grosse. angewendet. erst. geeigneten. gebundenen. erhalten,. dieser. Haemolysin). benutzt,. Temperaturhohe. Isolierung. des. Resultat. Grund. Resistenz. Antikorper. daher. und. Fur. sich. die. die. die Resistenz. aufgestellt,. und. Faktoren. etc.). eine. Auf. Temperatur. Haemoagglutinin. fur. zwei zwischen. Kochsalzmedium. um. sondern. wurde.. hohe. den. interessante. Antikorpers. eine. nur Rondoni,. erhitzt,. vernichtet,. des. Vorprobe,. dann. uber. Parallelismus. physiologischen. das. frei. Kochsalzmedium Als. physiologischen ist die. Zuckermedium. Kochsalzmedium. eignet. Antikorpermenge. oder. gleich. Wassermedium.. (Der. wie. bei. Quotient. 1/20).. b). Die. beim. Isolierungsflussigkeit. Wassermedium. Fortschritt frei von c). oder. fur. die. Eiweiss, Bei. Isolierung als. konnte. erzielen,. doch gehabt. agglutinin.. des. bekommen. der. Methode. enthalt. ich. habe als. beim. des. bei. Kochsalzmedium. Diese. Immunkorpers,. weniger. Tatsache weil. wir. zeigt. Antigene. auch. moglichst. einen. reine. als. grossen. Antikorper. ,. suchen.. Antigene. nicht ich. beim. Zuckermedium.. Isolierung. zu. Blutkorperchens. Hamolysin. 119. dabei. nicht. Isolierungsmethode. agglutinin,. im. Antikorpers. dieser. Pietro. Warmegrad. Kochsalzmedium. im. findet und. Prazipitat. und. des. so fehlt. Ogata. verschidenem. Prazipitin. Isolierung. man. Furuhata,. untersuchen,. im. die. Chemicalien,. Antikorpermenge,. megrad.. des. fur. und. die. Hamoagglutinins benutzt, gleichen. und um. die. Resulzate. Hamoagglutiningleiche Zuckermedium,. Hamolysins,. Hitzehamolyse wie. beim oder. ebenso. bei. habe zu. ich. die. vermeiden.. Zuckermedium bessre. (von. Resultate. Serumprazipitin. Stroma Nur Kosakai). mit und. bei. meiner. Bakterien.
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