第7巻 第6号 405
イ ン フル エ ンザ ウイルス の赤 血 球 凝集 能 と
感 染 能及 免疫 能 との 関連 性
iv イ ン フル エ ン ザ ウ イル ス の 卵 馴 化 株 が マ ウ ス に対 し て
非 病 原性 で あ るが マ ウス 肺 に 於 て 増 殖 す る とゆ うこ と
に就 て 私 達 の 実 験 並 に考 察
中 西 謙 三* 高 田 雄 正**,***吉 岡 勇 雄*** 岩 田 賢 太 郎****村 山 寿**KENZO NAKANISHI, Y. TAKATA, I. YOSHIOKA, K. IWATA and H. MURA
YAMA:
STUDIES
ON HEMAGGLUTINATING
ACTIVITY,
INFEC
TIVITY
AND
IMMUNIZING
ABILITY
OF INFLUENZA
VIRUS
iv STUDIES ON THE GROWTH
OF EGG-ADAPTED
LINES OF INFLU
ENZA VIRUS FM1, WHICH
ARE NONPATHOGENIC
TO MICE, IN
THE LUNG OF MICE.
〔受 稿 9月16日 1957〕 緒 言 中西1) 2)は 先 に イ ンフ ル エ ンザ ウ イル ス の 赤 血球 凝 集 能 と感 染 能 との 解 離 に つ い て のべ,そ の 際 イ ンフ ル エ ンザ ウ イル スFM1株 が継 代接 種 を重 ね て動 物 種 に 馴 応(adapt)し て来 る とマ ウ ス馴化 株 と卵 馴 化 株 とは 明 か に 区別 され る様 に な り,卵 馴 化FM1株 は 赤 血球 凝 集 能 と鷄 胎 感染 能 を保 有 す るが これ をマ ウス に接 種 し て もマ ウ ス肺 に は殆 ど病 変 を生 じ ない こ と を報 告 し た. Cheng-I Wang3)は マ ウ ス非 病原 性(マ ウ ス非 馴 化)のA´ 型Rhodes株 が マ ウ ス肺 に著 実 に増 殖 す る こ と,た ゞそ の増 殖 の割 合 がRhodes株 の マ ウ ス馴 化株 に比 して低 く且 凝 集 価 も低 い と報 告 し て居 る.更 に, F. M. Davenport and T. Francis Jr. 4)はA型 及 び
B型 イン フ ル エ ンザ ウ イル ス を用 い,そ の マ ウス馴 化 株 は接 種 後 非 馴 化 株 よ り速 か に増 殖 を始 め,稀 薄 ウ イ ル ス液 接 種 の場 合 には 両 株 の増 殖 の割 合 に は 相 違 は な い が,非 馴 化 株 の 最 高 感染 価 は馴 化 株 の そ れ よ り低 く 且 そ の離 反 は大 量 ウ イル ス の接 種 に伴 つ て 増 加 す るこ と を報 告 し て居 る.私 達 は病 変 を生 じ な くて もウ イル ス は増 殖 す る こ とは感 染 発 症 並 に 免疫 に重 要 な意 義 を 有 し且 そ れ が ワク チ ン製 造 に応 用 され るの で は ない か と考 え,次 の 実験 を試 み た所, Wang, Davenport等 とはい さ さか異 る結 果 を得 た の で こ こに そ の実 験 成 績 を報 告 し,且 考 察 を加 えた い と思 う. 実 験 ウ イル スは業 室 保 存 の 鷄 卵馴 化 のA型FM1株 を用 い た.即 ち,鷄 卵 尿 膜 腔 内 に接 種 継 代 した もの で接 種 鷄 卵 の尿 膜腔 液 を採 取後24時 間 以 内 に ウ イル ス液 とし て使 用 し た.又 マ ウ スは 白色 雑 マ ウ スで 研 究 室 内 で飼 育 繁 殖 し た体 重10∼12gの もの で あ る. C. C. A.価 は パ ター ン法 で測 定 した. 実 験1 卵馴 化FM1株 の 尿膜 腔 液(C. C. A.価10×26) の10-1稀 釈液 をマ ウ ス10匹 にエ ー テ ル麻 酔 下0.03cc宛 経 鼻 接 種 し,接 種 後4日 目 エー テル麻 酔 で殺 した.マ ウ ス肺 は 何 れ も肉 眼 的 に病 変 を認 め る こ と は な か つ た.組 織 学 的 に は僅 か に充 血 を認 め る程度 で対 照 のマ ウ ス馴 化FM1株 接 種 マ ウ スの 肺 に於 け る様 な 胞 隔 炎 の像 は 認 め られ な か つ た.う ち5匹 の マ ウ ス の肺 を集 * 東 京 医 大,内 科,臨 床 ウ イル ス ・リケ ツ チ ア部 ** 東 京 医 大小 児 科(教 授 飯 島 孝) *** 北 里 研 究所 ウ イル ス ・リケ ツチ ア部(部 長 笠 原 四郎) **** 千 葉 県 血清 研 究 所(越 後 貫 所 長)東 京 医大 細 菌(大 黒教 授)
406 VIRUS め 磨 砕 し 生 理 食 塩 水 で5倍 に 稀 釈 し2,00Or. p. m. 20分 遠 心 後 上 清 を と り(上 清C. C. A.価<10×),そ の 上 清 よ り肺 の10-1∼10-5稀 釈 液 を作 り11日卵 に各 々0.1ccを 尿 膜腔 内 に接 種 し更 に 孵 卵48時 間後 に尿 膜 腔 液 を採 取 しそ のC. C. A.価 を測 定 した.そ の成 績 は 第1表 に示 す 如 く何 れ も10×26以 上 の 価 を示 し,ウ イル スが 増殖 して 居 る こ と を示 した.即 ちマ ウス肺 に は何 等 病 変 を 示 さ な くて もウ イル スが マ ウ ス肺 内 に保 有 され て居 る こ とを示 した.然 しこれ が 果 して マ ウス肺 に於 け る病 変 を示 さ ない ウ イル ス の増 殖 で あつ た か,或 は単 な る 接 種 ウ イル スの生 残 で あつ た か は 尚考 察 を要 す る所 で あ る.
Fig. 1. Mice inoculated with low diluted
egg-adapted (nonpathogenic to mice)
Influenza Strain FM1.
Mice inoculated with 10-1 liq. all. (C. C. A. titer 10×26) 実 験2 卵 馴 化FM1株 増 殖 の 尿 膜 腔 液(C. C. A.価 10×27)を10-5に 稀 釈 し,之 を マ ウ ス5匹 に 接 種 し3 日後 エ ー テ ル で 殺 し そ の 肺 を 集 め5倍 に 稀 釈 し2,000 r. p. m. 20分 遠 心 後 上 清 を と り(上 清C. C. A.価<5×) 更 に 之 を基 と し て 肺 の10-4, 10-5, 10-6, 10-7稀 釈 液 を 作 り, 10-5液0.03ccを10匹 の マ ウ ス に エ ー テ ル 麻 酔 下 に 経 鼻 接 種 す る と 共 に10-4∼10-7液 を10日 卵3ケ 宛 に 0.1cc尿 膜 腔 内 接 種 し48時 間 孵 卵 後 尿 膜 腔 液 を 採 取 し そ のC. C. A.価 を し ら べ た 所 第2表 に 示 す 如 く何 れ も 陰 性 で あつ た.又 マ ウ スは4日 目に エ ー テ ル で殺 し, その うち5匹 は組 織 学 的 に検 した が 何等 の変 化 を認 め る こ とが 出 来 なか つ た.他 の5匹 は そ の肺 を集 め前 記 同様 に して10-1(C. C. A.価<10×), 10-2, 10-3, 10-4稀 釈 液 を作 り各3ケ の9日 卵 尿 膜 腔 内 に0.1cc宛 接 種 し 48時 間 孵 化 後 尿 膜腔 液 を採 取 しそ のC. C. A.価 をし らべ た が 同 じ く第2表 に示 す如 くす べ て 陰性 で あ つ た.こ の成 績 に よつ て見 る と稀釈 ウ イル ス液 をマ ウ スに接 種 した場 合,マ ウ ス肺 に は ウ イル スの 保 有 は 認 め ら れ ず,卵 馴 化 ウ イル スが マ ウ ス肺 内 で増 殖 す る証 拠 は何 等 認 め る こ とが出 来 なか つ た. 実 験3 卵 馴 化FM1株 を増殖 させ た尿 膜 腔 液(C. C. A.価10×27)を10-3に 稀 釈 し之 を マ ウ ス10匹 に エ ー テ ル麻 酔 下0.03cc宛 を経 鼻 接種 し接 種 後3日 目 エー テル で 殺 した 。肺 に は 肉眼 的 に何 等病 変 を認 めず 組 織 学 的 に も僅 か に充 血 を認 め るほ か は特 記 すべ き変 化 は なか つ た.そ の うち5匹 の 肺 を集 め5倍 に稀 釈 し2.000r. p. m. 20分 遠 心 後 上清 を と り(上清C. C. A.価<5×)そ れ を 基 と して肺 の10-2, 10-4, 10-6稀釈 液 を作 り各 々4ケ 宛 の11日 卵 に0.1cc尿 膜 腔 内 に接 種 した.又10-3稀 釈 液 を10匹 の マ ウ ス に0.03cc宛 エ ー テ ル麻 酔 下 経 鼻 接種 し た.被 接 種 卵 は更 に48時 間 孵 卵後 尿 膜 腔 液 を採 取 しそ のC. C. A.価 を検 した所 第3表 に示 す 様 に10-2液 接 種 卵 及 び10-4液 接 種 卵 では 何 れ も512倍 以 上 で あつ た が 10-6液接 種 卵 では1ケ の み 陽性(C. C. A.価>512×)で 他 は 何 れ も陰性 で あつ た.即 ち10-2, 10-4液 接 種 卵 で は ウ イル スの 増殖 を認 め たが10-6稀 釈 で は ウ イル スの 増 殖 は 不 確 実 で あつ た.二 代 目 マ ウ スは接 種 後4日 目 に エー テ ルで 殺 した.そ の肺 は 肉眼 的 に も組 織 学 的 に も何 等 病 変 を認 め る こ とが なか つ た.そ の う ち5匹 の マ ウ スの 肺 を集 め 前記 同 様 に して10-2, 10-4, 10-6稀 釈 液 を作 り11日 卵 各5ケ 宛 に尿 膜 腔 内 に0.1cc接 種 した. 48時 間 孵 卵 後 尿 膜腔 液 を採 取 しそ のC. C. A.価 を測 つ た 所 第3表 に示 す 如 く10-2稀 釈 液 接 種 卵 の 尿 膜腔 液 は何
Fig. 2. Mice inoculated with high diluted egg-adapted Influenza Virus Strain FM1
* Mice inoculated with 10-5 liquor allant. (C. C. A. titer 10×27) ** Mice inoculated with 10-5 lungs of 1st generation mice.
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Fig. 3. Mice inoculated with egg-adapted Influenza Virus Strain FM1
* Mice inoculated with 10-3 liquor allant . (C. C. A. titer 10×27) ** Mice inoculated with 10-3 lungs of 1st generation mice
れ も512倍 以 上 のC. C. A.価 を有 しウ イル ス が 増 殖 した こ とを示 した が10-4稀 釈 液 接 種 卵 で は僅 か に1ケ の み 512倍 以 上 のC. C. A.価 を示 した が他 の4ケ は す べ て 陰 性 で あつ た. 10-6稀 釈 液 接 種 卵 で は4ケ 共 すべ てC. C. A.価 を示 さず ウ イル ス の 増殖 は 認 め られ なか つ た. 即 ち10-2の 低 稀 釈 の み 尿 膜 腔 内 で の ウ イル スの 増 殖 を 示 し, 10-4, 10-6の 高 稀 釈 で は ウ イル ス の 増 殖 は 明 ら か で な か つ た.さ れ ば 二 代 目マ ウ ス で はそ の 肺 に於 て 卵 馴化 ウ イル スが 僅 か に保 有 され て はい たが 増 殖 した とい う明確 な証 拠 は認 め られ なか つ た. 総 括 並 に 考 按 こ こで 以 上 の実 験 を総 括 し て私 達 の見 解 を述 べ てみ よ う.卵 馴 化FM1株 は マ ウ ス肺 に は 何 等 病 変 を生 じ る こ と な く従 つ て私 達 はFM1卵 馴 化株 は マ ウ ス肺 で は 増 殖 しない もの と老 え て居 た.然 し鷄 卵 に て分 離 し た イン フル エ ンザ ウ イル スが 初 めは マ ウ ス肺 に何 等 病 変 を示 さない もの もマ ウ ス継 代 接 種 を行 う こ とに よつ て次 第 に マ ウ スに 馴化 し,遂 には マ ウ ス肺 に病 変 を生 ず る に至 るの で あ るか らマ ウ ス肺 内 で は 全 く増 殖 しな い とい うこ とは 云 えな い で あ ろ う.然 しそ れ は分 離 当 初 の イン フ ル エ ンザ ウ イル ス株 で あ るが,私 達 の用 い たFM1株 は永 く業 室保 存 の もの で あ り,マ ウス馴 化 と卵 馴化 との区 別 が つ い て か ら久 しい もの で あつ て, 卵 馴化 株 は マ ウ ス肺 に は何 等 病 変 を示 さ ない様 に な つ た もの で あ る. Wang3)の 用 い たRhodes株 は フ ェ レ ツ ト3代 羊膜 腔2代 尿 膜腔4代 継代 の も の で あ り, Davenport & Francis Jr. 4)が 行 つ た 実 験 で 使 用 し
た マ ウ ス非 馴 化 株 はA型Rhodes株 は フ エ レ ツ ト3代 鷄 卵6代 の も の で あ りB型Warner株 は鷄 卵13代 継代 の もの で あつ て,何 れ も卵 馴 化 とマ ウ ス馴 化 と分 化 し た 程 度 が小 さい の では なか ろ うか.然 し,彼 等 は 卵馴 化 株 を用 い て実 験 してそ れ が マ ウ ス 肺 に 非 病 原 性 (non-pathogenic)で あつ て 而 もマ ウ ス肺 内 で増 殖 す る こ とを示 し て居 る.彼 等 の実 験 成 績 を見 る とマ ウ ス 肺 内 の イン フル エ ンザ ウ イル スは 接種 後 時 間 を逐 つ て 増殖 し て居 るの で 卵馴 化 株 も マ ウ ス肺 内 で 明 らか に増 殖 す るの で あ る と見做 さ ざる を得 ない.然 し乍 ら,私 達 の実 験 に於 ては,実 験1に 示 す 所 で は 確 か に卵 馴 化 FM1株 が マ ウ ス肺 内 で 増殖 した か の 如 く 見 え るが, この 場合 最 初 の原 液 のC. C. A.価 は10×26で あつ て そ の 10-1を マ ウ スに接 種 しそ の 肺 の10-1∼10-5を 更 に卵 に 接 種 し てC. C. A.価 を認 め た の で あ るが,こ れ は果 し て ウ イル スが マ ウ ス肺 内 で増 殖 し たの で あろ うか,或 は 接 種 され た ウ イル スが肺 内 に生 残 して 居 た の で あ ろ う か. C. C. A.価 と感 染 価 との 比 を約10-6と す るFazekas de St. Groth等5)の 意 見 に 従 つ て ウ イル ス稀 釈 度 を 計算 す る とウ イル スが マ ウス肺 内 で増 殖 した の で は な くて肺 内 に生 残 して 居 た と考 え て も よい こ とに な る. つ い で実 験2に 於 て 高 稀 釈 で ウ イル ス接 種 を 試 み た 所,第1代 マ ウ スは 勿 論,第2代 マ ウ スで もそ の肺 を 接種 した卵 に は尿 膜 腔 液 にC. C. A.価 は認 め られ なか つ た.原 液 のC. C. A.価 とそ の 稀 釈度 か ら老 え て卵 馴 化株 は や は りマ ウ ス肺 内 で は 増殖 し なか つ た もの と考 え る の が 妥 当 で は な か ろ うか.も し肺 で増 殖 す る もの とす れ ば 原 液 のC. C. A.価10×27で そ の10-5液 を マ ウ スに接 種 した の で あ るか らそ れ らの 肺 の 接種 卵 に はC. C. A.価 が認 め られ る筈 で あ る.も し初 代 に 出 ない として も第 2代 マ ウ スの肺 に は ウ イル スが 認 め られ て然 るべ き も の では なか ろ うか.更 に実 験3で は そ の 中間 の ウ イル ス稀 釈 度 を と りC. C. A.価10×27の 卵 馴 化 株 を10-3に 稀 釈 し て マ ウ スに接 種 した の で あ るが 肺 に は何 等 病 変 な くそ の マ ウ ス肺 接種 卵 の尿 膜 腔 液 は10-2, 10-4液 接 種 の もの で はC. C. A.価 を認 め10-6液 で は不 確 実 で あつ た.こ れ よ り見 る と10-4稀 釈(或 は10-5稀 釈 の も の ま でC. C. A.価 陽 性 で あつ た か も しれ ない)ま で接 種 卵 内 で ウ イル スが 増殖 した の は原 液 のC. C. A.価 が10×27で あ りマ ウ ス に はそ の10-3を 接 種 した の で あ るか ら原 液
408 VIRUS の 凡 そ10-8を 卵 に接 種 した こ とに な るの で必 ず し もマ ウ ス肺 内 で ウ イル スが 増殖 した と強 張 す るに は 当 らな い,マ ウ ス肺 内 で ウ イル スが生 残 し た と考 えて は い け な い で あ ろ うか.ウ イル スが肺 内 で増 殖 す る もの な ら ば 実 験3に 於 て も第 二 代 マ ウ ス肺 内 では ウ イル スは更 に増 殖 し て居 る筈 で あ る.初 代 マ ウ ス肺 の10-3を 二 代 目マ ウ ス に接 種 した 所 が そ の第 二代 マ ウ スの ウ イル ス 接 種 後4日 目 の肺 の10-2釈 稀 液 は ウ イル ス を保 有 して 居 た が10-4稀 釈 液 では 殆 ど保 有 して居 らず10-6液 で は 全 くウ イル ス を認 め なか つ た.第 二代 マ ウ ス肺 の10-2 液 は 初代 マ ウ ス肺 に対 す る稀 釈 度 が凡 そ10-6に な つ て 居 るの で あ る か ら初 代 マ ウ ス肺 の10-6で ウ イル スの保 有 不 確 実 で あつ て 第 二 代 マ ウ ス肺 の10-2稀 釈 で ウ イル スの保 有 を認 めた の は や は りウ イル ス のマ ウ ス肺 に於 け る単 な る生 残 のみ で は な く僅 か で は あ るが や は り肺 内 で 増殖 し て居 た のか も しれ ない.従 つ て 増殖 した と して も極 め て軽 度 の増 殖 で あつ て マ ウ ス肺 に 対 して こ れ とい つ た病 変 を現 わ さ ない の か も しれ ない.然 し こ の程 度 の稀 釈 度 の差 は 或 は誤 差範 囲 か も知 れ ない と考 えれ ば,必 ず し も増 殖 と考 え な くて もた ゞの ウ イル ス の生 残 と考 え られ ない で あ ろ うか.然 し卵 馴 化 株 をマ ウ スに継 代 し て行 つ て マ ウ ス肺 に馴 化 す る場 合 に は 当 然 マ ウ ス肺 で ウ イル スは 増 殖 して マ ウ ス肺 に病 変 を生 ず るの で あ るか らこ の際 の卵 馴 化株 が マ ウ ス肺 で増殖 す る機 転 に つ い て は今 後 の研 究 を俟 た な け れば な ら な い. 以 上 を総 括 す る と,マ ウ ス肺 馴 化 と卵 馴 化 とに充 分 分 化 し た後 の 卵 馴化FM1株 は マ ウ ス経鼻 接 種 後 そ の 肺 内 に於 て 数 日に亘 り生 残 す るが 増殖 す るこ とは 殆 ど ない.仮 に 増殖 して も極 く少 量 で あつ て マ ウ ス肺 に病 変 を示 す 程 に は な らない. 結 語 私 達 は イ ン フル エ ンザ ウ イル スFM1の 卵 馴 化 株 を 用 い て そ れ が マ ウ ス肺 内 で病 変 を示 さない が増 殖 は す る か否 か とい う こ とに関 して 実 験 を試 み,そ の実 験成 績 を報 告 し且 つ私 達 のそ れ に 対 す る見 解 を述 べ た.よ く分 化 した 後 の卵 馴 化FM1株 は マ ウ ス経 鼻 接 種 後数 日に亘 り肺 内 に生 残 す る が肺 内 で増殖 を示 す こ とは 殆 どな く又 マ ウ ス肺 に病 変 を生 ず る こ と もな い.た とえ 肺 で増 殖 す る と して も極 く軽 度 で あ る と しか考 え られ な い. 文 献 1) 中 西 謙 三:イ ン フ ル エ ン ザ ウ イ ル ス の 赤 血 球 凝 集 能 と感 染 能 及 免 疫 能 と の 関 連 性, I, VIRUS, 4, 193-194, 1954. 2) 中 西 謙 三,越 後 貫 博,岩 田 賢
太 郎:同 上, III, VIRUS, 7, 1957,印 刷 中 3) Wang,
