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脂肪酵母Lipomyces Japonics nov. spに関する研究 (第8報) : 休止菌による飽和脂肪酸の酸化について 利用統計を見る

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(1)

脂肪酵母Lipomyces japonicus nov.sp.

に関する研究(第8報)

―休止菌による飽和脂肪酸の酸化に就いて―

渡辺大蔵

竹内敏夫

沼田周三

Studies on the Lipomyces japonicus nov. sp.

Part VIII. Oxidation of Saturated Fatty Acids by Resting Cells.

DaizoWatanabe ToshioTakeuchi ShuzoNumata

Synopsis

  Oxidation of straight cllaill saturated fatty acids colltainil1呂betwcen Lwo alid cighteen carb斑l ato1皿s (odd alld even Ilumhers) by resting cells of tl肥fこlt yeast, 1’ipomyces japonicus mv、 sp., were studied. All of th巳acids tested were oxidlzed by this organism, but varia− tions in thc ra、亡e and total oxygen uptake were found. 1.緒 言  生体に於ける脂肪酸の酷化分解,』1三合成,相互.i変換 等に関しては現在までに多数の研究がありすぐれた綜 説,成i!}等も多数発表ざれている間・(2)・〔3)・(4)。徴生物 についてのこの方而の研究は比較的おくれているとさ れるが失張り多数の報文が発衷ざれ綜説,成書等も多 いC5}。特に1〈, Bloeh等はSaceliarOmyces cerevisiae のresting cellsが嫌気ll旬条件下ではアセテー1・から 飽翻旨肪酸を主としてつくるのに反し好気的条件下で は飽和酸も不飽乖1晩もともにつくること,このwhole cells並に・ell−f・ee・el tractsが酸素の存在下iこP・− 1・it・・唖に・tea・n・。をp、ilmi・。1。、1・。及び・1,。・,に変 え闘1晃及びバクテリア(特に嫌翅生菌)中1こ発見さ れる特殊脂肪醜簿の関係から不飽和酸の生成に関し之 勧微生物に於ては好気的条II杯と嫌気1酬牛下でta 「の生成機構が全く異なることを指摘しているce)(T)。

端の一人は,ll醐酸パ、Vプ廃酬の農榊醗棄物

te原料にして深部培養法に適する脂肪生産菌を求めて 新に日本の土から分離した酵母力・Li,。m,,e、属の新 atであることを畑Lip。my,,、 j、P。。i、u、・n。v.,,. と命名したこと,この酵母はグルコ_ズ等の六炭杣だ

65

けでなく,キシPt・一ズ,アラピノーズ等の五炭糖,酢酸 答までをも唯一・の炭素源として振主盟培養によりll王盛な る据朋をなし菌体内に多lltの1指肪を蓄積すること㈹。  この脂肪の成分酸は飽和酸としては,パルミチン酸 とステアリン酸が,不飽和酸としてはオレイン酸とリ ノール酸が主であること等働報告した。この酵i母は非 常に好気的で嫌気的条件下での酷植は非常に:rsそいが その脂肪酸代謝等につき知るため先ずresting celisに ょる直鎖飽和脂Jlljitの酸化につき実験したので報告す る。

2,実

験   1 菌   1重 Lip・my・e・」叩・nicus n・v. sp.,(st・ai・N。.33)    ll 休止菌の調製  Tvlult agar slant ({耳…存」二芒fil1,1) カ、ら 1−lenne1〕erg E gar :lamtに12 ,1{i!1し25DCの室中で31}1聞培養した菌体を 引続き辿続してHenneberg agar slantに同様に移植 培i遼することを3回くりかえした後.500mlのフラス コに100ml宛分注して1Sx/“]19,151b/in:の圧力でオ ートクレr一ブ殺菌した第1表の培地に2白金耳を接種

(2)

胎和41イ自2月

川梨大学工学部研’舟報告

第T7号

一一一“一一“一一’77M’ ク’ノレ:’一ス’ MgSO‘・7H20 F巴C]a】()%.S OI t) (NI・1‘)2SO4

第1爽

  4{摺/♪ 酵母培ゴ岳;培地      1〈2T・ip()4 1g/i 2dt’ops〃 NnCT

L賠〃 ペゾトン

  pll tl ,5 wiユh

  CnCOn

C∫ICI2・2H20  2A・ /1  ↓).59〃  O.r) s, /t  1.r,g/l E・ltSO, 19ノ∫ し2fi °cの出中で振牌ll 3 Cm,振動数flJ}分10{}で・IH脂閤 振撤」∫f並した前培∫畠破tlO ml巻2!のソヲス;tに:s{;【) ml宛分『liして上とIFiiじ棄{牛でオー1クv・一一プ殺菌し た第1遅の培地にカllえlril嫌に・旧問問振磁11:千養した閉体 誤この時の酬M・1!t剛:85∼9鰯であつた)恥分離 し殺間照情水で2回洗浄した。 この菌体在5C)O mlの フヲメコに10{〕ml宛分注して.−1:と同械オートクレPt プ殺鼎したJ)1’1 6.sの第2表のリン酷緩衝液に}限濁し ,90°Cの蝦中で上とli:llじ条件でg6時聞]辰批して飢郎操 作をfゴなつた,,     到「y2表  リン醜ホ嬰菰i訂虹(pl−16.8) 1¶(1二ltl}04      f}書‘1][{r  j11 :」〔)1111 0∫ 〔liおtillロcl 、」」ノflter Nll!}11〕04.121−J20 2.⑪“tr伺  i11 701111 (li9, til1‘…丁1  、ΨEller          Ii町者を合わせて」{}Om1とするu  この削体を1;吃操淵1イくとして21.5mμ/1,0 rn 1となる 様に第2翼の1)H (i,sのリン酷纏肺液に階湖した。    ]r[Mnnomet.ric experirncnts  W川’hUT9検圧汀1’を川い30°CでOxygen UIコーlakeを 測定した.三1三室には前i氾の1曇1体のリン醜網薔懸湖波 1・O mlとZKIS{{7k・O・Sml 1ab,1・㈱こは2n%KoH水溶 液【)…ml・’al,・鵬ゴにに1・r蝋飽棚蹴酸のソータ聯 波{}・1mlを入れた。1、‘‖供試飽ifl l脂肪醜はこれを精秤 し苛性ソーダ溶液で]’]吏中和しモのソーグ塩溶液0ユ

m坤に通常2川11d・噌酬する様にした“(馳だ

けは一級酢醜ソーダ巻梢秤しモのまま水溶液とした)    1V 茸晴    果  第1∼3図の如くであった4、  供試したC2∼C抽までのlll正鎖飽i師j旨肪酋蛇は凡て奇 数醜も偶数酸も:1[ig periodなしに酷化された、 然し そのnVtヒの1)tttt・’1’llから次の3グ・1・一プに分け得・うれ るものと糖られた。又この酬(LiP・nlycc.s j。Po. ll:CUS :1°V・・PJ刷[鎖飽剛開端酸価舗系は、。n.  ,      , stitutiveであり, 又何れの樹合にも所謂Oxidati、,e assimilutionが起っているものと網られた。(C端

醐合・J・r−F蜘剛・・を川いての1醐の鋼で,

C}‘1・ ,‘COONtt, ”cT−1・ cooNEt 2・,・,を夫蝦入、5

66

1馴臓酬枯’ら 励たJiliflfjの灘㌃脂肪鋤

喘鰍階ンチレーシ弘力1ン〃一で鵬した

処,夫’t 22・6・15 rl・P・m・/lmM, :8・596・1、P.m./1剛 の放射能が険出された佃))  (1) C7∼C団醜のグル_プ

  微酸棚酬も伽訓も端に靴され,X”

徽化のため酬轍・{端謝し5n∼鰯融の

 Oxygen t叩t{tkeを元ミす。 (2) C丑∼Ca酸のグ/tr_プ

 之働短鋤醐酸閻1・秘除き(1)のグルゴ

の酷に比べ非糊こ酸化か{酬已滅b       卜111xlu’lEs  Oxiclaton of shoi’t and mecl i um cllai■1∫a【ty皿ci(ls. Oxygen uplake 111eitf ur(〕d tlt 300C it:1〔l pl−16.8. 21・5 ]1・s’・r。d1・(d・yw・igh・)P,, r1、,,k.21・ m・1…1 …hs・bg. trtLte a〔lded.(・x・・pt C,(10 r・m・1・の)・. Bl−basal respil’utioll;C2−acetic acid;C:一・propionlc aoid;C4−butyric acicl;C5−valeriC臼cid;Ce−cnp「OtC ・・i心C、¶−h・pt・t・。i・・cid;C、−c。p・yli・acid ; C!’ n−nonanoic aci(1;Clo−capric acid ;C11−n−undecanOiC 皿cid;C1,−lt川ri。匡icid;Cls.。.t,id㈱。i、・ci出CI・’ myristiC {1〔〕i[1、        第1図

(3)

n旨肪㈱LiP°m・ce・ j・ p・ni・us・・1・・. ・p.に関する融(第8報) oxyeEII UPTAKE 柳 7‘o ’lua 剛 fica 600 5fie 5功 4Be 40P 400 姻 3?o ?oo P珊 ?co lfio 12e 4D 』』 1/

P

C岨Fl Ce F: C 1fi、

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.ノノ OX路 EN UPTA KE メ」 ワ甜 fiHa 嗣U G叩 「J f,0 5叩 dHO ldO 400 3so u2凸 ?an 討o 卯0 1団 b缶 肛 岨   ・… 6・ua 1・・ 1・・14・ ltn le…。綱赫晶       Mlト]UTES Oxid・t・n・f 1・ng。h・i・f・tty acids.0・ygen uptalce measured at 30℃and pH 6,8. 21・5mg of cells (dry w{三ight) per flasl{, 2μ inoles of each substrate added        ロ BL−baEal respiration;C」rn−Pentadecanoic acid; C・・−P・Ilniti…id;Crn−hept“cl・・a・・i・・cid; Cls−5tearic acid;CtaFt−Oleic acid; C」sF2−Linoleic acid       第2図 501叩Iio却脚ヨ田m柵am三凹口0㈹碑mo 7却邸0脚螂蜘r㎜馴11∩}t伸「v        同川UTES

    Oxi〔|atiOrl of long cl111ill ftltty 三lcj{ls.  0}こyばcrl   uptake measured at 30°C and pH 6.8.21.5mg   ・fcells(dry weight)per flask.2μm・les・f   each 呂ubstrate added.     C、rn−11eptadec口noic acid;C・s−stear▲c acid       第3図

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(4)

IIG乖114Ml{12月

川梨大学工学部研究報古

第1ア号 C}) Cl1…JC1”醜のグループ       ・  之竹:の長鎖飽和lln肪醜も酸化され蝋いがモの原田 は(2)の甜鎖飽和Ill了肪醜のグループとは異るとす るのが没:!’1であると汚え1うれる. (恐らく細胞1挺の permw’n1)ility,および供試酷の治1‖♀度に」:る)  尚第3図は之鵠;の酸の酸化を長問川1にわたってし 畝ぺたものであり,又第2図に示される如く,C口 酷に4:11[,「’1する不飽乖ll酸はオレイン酷もリノーノレ酸も 共に(1)のグループの酸と階同1蜘こ酸1化ざれた。

3,結

肯  (1) 脂肪酵’SJ:LiP‘川lyCUgS jltP〔川icus 11‘)V, Sl⊃.の休   、止閑はCaからC口までの酌:鎖の飽却脂肪酸を奇数   醐b偶数酷も凡てIEtlir pcri‘}dなしに醜化した。  (2) この酵触のll二雌111胞和脂肪酷酷化酵メξ系は 即11−   ttitutiveで1必り,何れの場凸にもllfiilll Oxi{Uttive   ”ssimi1[it,ionカ{姐っているものと考えられた.  (:D 挺も書劫に酸化されるのはC〒∼C川の皿eclium   chmi1の飽∬1脂肪1世のグループーe CUNCfiの短鎖飽

・和脂肪酸はCt酷を除き酸化が困離であった。又

  CttrvCleの良釧飽乖捌胃肪醜の醜化も困難であった   がどの原図はC8∼C凸の1庇韻飽和II口肪酷のモれとは   興なるものであろうと考えられたe  終りに臨み終始御悲切なる御指占尊御鞭拙をいただい た)kJS(大学農学部古惜教授坂口灘一郎先生,1司教授有 畑啓先£kに厚く御祐申し」二げます。 献 (ユ) 」.F. Mencl, D,R.1.losvtoti;      R“‘lioisotope  Stll【1jcs  ol  F‘ltty  Aci‘l     M識1・・lilm;P・・g・m⑪・P・ess, L。・d・,,     (1960). (2) K.Bloch(ed.);      Lipidc MetfLbolism;Wiley&Sons,     Nuw Y‘,rk,(1960), (3) 今」卜 賜,坂」二利夫;    脂質の些1{化学; 朝倉」!昌1i,1旧和‘ll年 (4) R.M.C. D“wson, D.N. Rhode島(ecl,);     MetFiholi: m and Physiological Significance    of Lipicls ;Wiley世so1ユs, London,(1964). (5) ],Ass. lincttn and E, Ledcrcr;     Chcmistry I川d mcl皿1〕ulis, nl o「 ba:terinl    lipides, hl I(, Bloch(eエL), Lipide MettLbolism,    P,337 (19日0),、Viley 世 5011s, N¢、v Yorl{, (‘i) K.Bloch, P, Bnronowsky, H.Goldfine, W.J,    Len;ittrz, R. Light, A. T. Norris and G,    Scheuer brancl t;      Biosynthesit Imd nietaboiisin ot unsatu.−     r“ted f,ittY Iicicls, il11□pifl Mctabolism ;     Fed. Procc,,20921(19刷) (7) D,K. BIOOtnfield, K.Bloch ;     J , B. C,235, 337 (].960) (8)渡辺大蔵,間和30fl三度日本農i}寒化学会大翻徽 (9) 渡辺大蔵,日本農芸化学会i誌投稿中 (]0) 渡辺大蔵,田中英夫,佐藤隆俊,白鳥元己;    米発表 日1召聯11年8月31111受付)

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