金沢 大 学十 全 医学 会 雑誌 第99巻 第6 号 99 1 −1 01 0 く1 9 9 01
局 所 温 熱化 学 療 法 の 基 礎 的 研 究
金 沢 大 学 医 学 部 外科 学 第 一 講座 は 任こ岩 喬 教 授フ
宗 本 義 則
く平成2 年1 1月2 日受 付つ
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V X 2 腫 瘍を ウ サ ギ の大腿部，胆 肝 梁 膜 下，肝 内にそ れ ぞ れ接 種し， 実験モデルと し て， 局所 接 種 腫 瘍では と もに温 熱開 始6 0分後よ り充 分な温 度上昇を認め， 加 温 終了後は周 囲の 正常 組織と比 較し， 有 意に長 時 間高 温を維 持し たくp く0．0引． 温 熱 後は一過 性の肝機 能 上 昇を認め た が 1 週 間 後には 回復し た．
一 方， 宿 主の細 胞 性 免 疫 能は温 熱 化学 療 法 後に有 意に上昇し たくp く0．岬 ．大腿 部 接 種腫 瘍に つ いて，温 熱 時に大腿動 脈に制 癌 剤を注入 し た群 く温 熱＋動 注 珊 と，制 癌 剤を投 与せずに温 熱 療 法の み を施 行した 群 く温 熱単 独 珊 の2群に分け て，腫 瘍 重 量を経日的に算 出し比較し た ところ，温 熱十勤 注 群で腰 瘍の増 殖 の抑 制を認め た．つ いで制癌 剤の動注 時 期を温 熱の2 4時 間 前 く−2 4 C H 召判， 1 時 間前 卜 1 C H 料， 同 時 くC H 詳軋 1 時 間後 く＋1 C H 君判， 24時 間後 什24 C H 珊 に分け， 化学 療 法の時相 差によ る治 療 効 果を 比較し た． そ の結 軋 −1 C H 群で最も抗 腫 瘍 効果を認め， つ い で C 日群で あ り， この 2群は他の 群と比 較し て有 意 差を認め たくp く0．弼． さ らに涯 熱と併用 す る制癌 剤を肝 動脈 注入く肝 動 注上 門脈 内 注 入 げヨ酎 に分け投 与 経 路によ る抗 腫 瘍 効 果を比 較し た．肝 内接 種 腫 瘍は温 熱＋肝 動 注群で， 胞肝 奨 膜 下 接種 腫 瘍は温 熱＋門 注 群で著 明な抗 腫 瘍 効 果を認め， おのおの他の群と 比較し て有 意 差を認め たくp く 0．0 51一 温 熱＋肝 動 注群の腫 瘍 細 胞には， 他の群に比 して有 意な D N A 合 成 期 くS夢剛 の増 加と D N A 分 裂 前休止期 ．分 裂 期 くG 2 M 卿 の減 少を認め たくp く0．0 5J． 生存日数右み る と， V X 2月重瘍を肝 内に接 種 し た ウ サギで は 温熱十肝 動 注 群が最も長く， 温 熱十門 注群， 温 熱 単 独 群， 対照群に比 し て有 意差を認め たくp く0．05ト 温 熱 療 法と制 癌 剤の動 注の時 間差は生 存日数に影 響し な かった． 以 上の如く， 温 熱化 学 療 法は V X 2腰 瘍 接 種モデル に お いて極め て有用であった． 従っ て， 肝 胆道 系 悪 性腰癌の集 学 的 治療の 一
環と し て， 温 熱 化 学 療 法の臨 床 応用 が期 待さ れ る．
Key w o rds lo c al hy pe rthe r m o che m othe r ap y， V X 2 T u m or
，5 −F lu o r o ura cil
固形 癌の根 本 的 治 療 法は， 担 癌 宿主からの癌 細 胞の 完全な除 去， す な わ ち切 除であり， 合理的な リン パ節 郭清を含む手術 術 式の改良は， 着 実に治 療成 績の向上 を も た ら して いる． しかし， なお切 除 不 能癌や再 発 病 症 例も多く， よ り 一 層の予後 向上のた めには， かか る 症 例に対す る有効な集学 的 治 療 法の開 発， 確 立が必 要 である． 最 近， 切 除 不能 癌に対す る 温熱療 法が注 目さ れ る よ うになった． 温熱 療 法の起 源は古く， 1 8 6 6年
Bu s ch1 1が丹 毒に履 患し た皮 膚の肉腫の症 例に お いて
高 熱を発し た結 果， その肉腫 が治 癒し た と報 告し たこ とに始まっ た． そ れ 以来， 悪性腫瘍細 胞の高 熱に対す る 脆弱性に関す る報 告が， Coley町や W e ste r m a rk別に よってな さ れ， その臨床 応用 は他の非手 術 的 治 療 法の 後 塵を拝してき た． し か し近 年， 温熱療法 が再認識さ れ るらミ至 り， 化 学 療 法や免疫 療 法との併用 が検 討さ れ ている． 著 者は， 局所温熱療 法と化学 療 法を併用 し た 場 合の治療 効 果， 腫 瘍細 胞の形 態 学 的変 化， 細 胞 動 態
について， 動 物 実 験モデルを 用い て検 討し た． A b br e viatio n s 二 A L P ， alkalin e ph o sphata s eニ C P K ， C r e atin e pho sphok in a s eニ 5F U，
5−F lu oro u r a cilニF C M ，flo w cy to m etry 三G O T
， gl uta m ate ox alo a c etate tr a n s a min a s e三G P T ，
gluta mic p yr u vic tr a n s a min a s eニ y −G T P， ga m m a ，gluta m yl trta n spep tida s e E C 2．3．2 三H E，
he m ato xylin a nd e o sin e i I． R．， inhibitio n r ate 三 L D H ， 1a ctate dehydr oge n a s e ニ P H A
，
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対 象およ び方法
I ． 対 象
工． 実 験材 料
実 験 動 物と し て体 重3 kg の雄 性ウ サ ギく船 橋 農 場I を使用 し た． 腫 瘍 細胞と し て V X 2 腫 瘍を以下の方 法 で処 置し使用 し た． す な わ ち， 大 腿 筋 肉 内に V X 2 腫 瘍を接 種 後4過 日の ウ サギから腫 瘍を取り出し， 内部
の壊 死 組 織を選 別， 除 去し た． 固形 腫 瘍は生理的 食 塩 水に浸し た メッ シュ付き円筒 容 器の中で限科 用は さ み で細 切し滅菌ゴ ム栓で軽く圧 迫， 濾過し た． 腫 瘍 細 胞 を含む濾 液は 7 0 0rpm ， 1 0分 間遠 心し， 沈 漆に適 宜 量
の生理的食 塩 水を加え て， 1 Xl O5c ellslml 濃 度の腫 瘍 細 胞 浮遊 液を調整し た． この腫 瘍 細 胞 浮 遊 液1 ml を ウ サ ギ左 大腿部に注入 し， 1 4 日 たっ た時 点で使用 し た． 一方ベ ン トパ ル ビ タ ー ルく大日本， 大 阪15 0m g の
静 脈 内 注射によ る全 身 麻 酔 下に開腹し， 1 8 G 針にて肝 左 葉 内に腰 癌 細胞 浮 遊 液を 1 ml 注入 し た ． ま た他の
群で は 2 7 G針にて胆 管 費 膜 下に 1 ml 注入 し， 1 4 日 たった時点で使用 し た．
H ． 温熱 療 法の方 法な ら びに温度測定 方 法 1 ． 加 温 方 法
ウ サギ大腿に接 種し た腫 瘍に対し て はベ ントパ ル ビ タ ー ル麻 酔 下に患 側の み を T H E R M O P E T N T T−12 0 E Y E L A く東 京理科 機 械， 東 京I に浸し目 的の 温度に設 定し た． 肝 内接 種， 胆 管 凍 膜 下 接種 腫 瘍に対し て は，
ベ ントパ ル ビ ター ル麻 酔下に仰 臥位 下に固定し た後，
上腹 部正中切 開によ り清 流 液 注入 用 と し て左 右の横 隔 膜 下に2 本， 排 出用 と し て骨盤腔に2 本 外 径 1 0 m m
のシリコン ドレ ー ンを挿入 し た． この挿入 さ れ た ドレ
ー ンを介し て図1 の よ うに腹 腔 内港 流を行っ た． 回路 を T H E R M O P E T N T T−1 2 0 E Y E L A く東 京理科 機 械ン 内を通し て， 温 度 調 節を し， M B P−1 2 0 メ ラ血 液ポ ンプく泉工医科工業， 東 京I を用いて潜 流し た．潜 流液
には生理食 塩 水を使用 し， 港 流 速 度5 0mlノmin， 濯 流 時 間6 0分， 総 清 流 量3 0 0 0ml と し た．
2 ． 温 度 測 定
温 熱 療 法 中， 腫瘍 中 心 部， 正常 肝 温， 筋 肉 内温を サ ー ミスタ デ ジ タル温 度 計T D．3 1 1く芝 浦 電子製 作 所，
東 京I ， 直 腸 温を サ ー ミスタ測 温体 N S Tく芝 浦 電子製
W ate r b at h
F ig．1． Sche m atic illu str atio n of lo c al hy pe rth e r m o che mothe r ap y． A ， Fig A
r epr e s e nts the m ethods of lo c al hy pe rthe rmi a whe n V X 2 tu m o r c ells a r e
in o c ulated into fe m o r al m u s cle． T he leg is he ated d ir e ctly by the the r mopet．
B，F ig B r epr e s e nts the m ethods of lo c al hy pe rthe r mia whe n V X 2 tu m o r c ells a r e in o c ulated into the liv e r． A hy pe rthe r mic perito n e alpe rfu sio n w a s c a r ried
O ut fo r the liv e r tu m o r of Wh ite H o u s e r ab b its in o c ulated with V X 2 tu m o r C ells． T w o dr a n age tube s w e r ein s e rted in s ub d iaphr agm atic spa c efo r inflo w，
a n othe rtw o tube s w e r ein s e rted in pelvic spa c efo r o utflo w．
phy toh e m ag glutinin e ニ P I， pr Opidiu m iodidei P P D， pu rified pr otein d e riv ativ e of tube r c ul in ニR N a s e，dribo n u cle a s eニW B C， White b lo od c el13 G 2 M 期， D N A 分 裂 前 休止期 ． 分
裂 期こ S 期， D N A 合 成 期
局 所 温 熱化 学 療 法
作所ンに て計 時 的に測 定し た． H I． 実験 方 法
1 − 温 熱療 法 前 後の腫瘍 部な ら びに正常 部の温度 変 化の測 定
V X 2 腫 瘍を大 腿に接種し た 3 羽を使用 し た． 接 種 1 4 日目に恒 温 漕を 5 0 へ550Cに保つ よ うにし， 接種し た 大腰 を恒 温 漕に浸し た． 温 熱 療 法を6 0分 間施 行し た時
の腫 瘍 内温， 筋 肉 内 温， 直 腸 内 温を加 温 開 始 前か ら加 温 終 了後6 0分ま で は 1 5分ご とに測 定し た． 同 様に V X 2 腰 瘍を肝左葉 内接 種 後14日目に腹 腔 内港 流によ る 温熱 療 法を施 行し， 温 熱 療 法 前後の腫 瘍 内温， 正常 肝温， 直 腸 温を測 定し た．
2 ■ 温 熱 化学 療 法 前 後の血 液 生化 学 的検 査 値の測 定 V X 2 腫 瘍を肝 内に接 種し た ウ サギ6 羽 を使用 し た． 温 熱療 法施 行 時に5 − Flu o r o u r a cilく三井 製 薬工 業， 東 京I 15mlノkg を肝 動 脈よ り注入く温 熱＋肝 勤 注 科 と， 温 熱 療 法の みく温熱単 独 群1 の2群に分け た．
両群と も治療 前， 治 療 後2 4時 臥 治 療 後7 日目の計3 回採 血を行い， 赤血球 数， 白 血 球 数， ヘ モグロ ビ ン
値， グルタ メ ー ト オ キ ザロアセテー ト ト ラン スアミ ナ ー ゼ くgl uta m ate o x alo a c etate tr a n s ami n a s e，
G O Tl， グルタ ミック ビル ビック ト ラン スアミナ し ゼくgluta mic p yr u victr an S a min a z e，G P TJ， ラ ク テ ー ト デハ イ ド ロ ゲ ナ ー ゼ く1a ctate dehydr oge n a s e．
L D El， ガン マ グルタ ミル ト ラン ス ペプ チ タ ー ゼ くga m m a−gluta m yl tr a n spep ti da s e E C 2． 3． 2．y − G T Pl， アルカ リフ ォ ス フ ァタ ー ゼくalkalin e pho sp． hata s e，A L Pl， クレア チンホス ホキ ナ ー ゼくc r e atin e pho sphok in a z e，C P Kl， クレア チニ ン値を測 定し た．
3 ． 細 胞 性 免 疫能の測 定
V X 2腫 瘍を肝 内に接 種し た 1 5 羽 を使用 し た． 次の 3群に分け各群5 羽 と し 以下に処 置を行っ た． 温 熱十
肝動 脈 注入群こ腫瘍 内温 度が 4 2 ．50C にな る よ うに温 熱療 法を 1 時 間施 行す る と同 時に 5 F U を 1 5m glkg
一 回で肝 動 脈 内に注入く温熱＋肝 動注入群1， 温 熱 療 法 単独 群二同様の温 熱 療 法のみ施 行 く温 熱単 独男判， 対照 群こ開腹のみ施 行 く対 照 群I の3 群に ついて測 定し た．
処 置 前， 処 置 後1週 間， 処 置後2 週 間の3 臥 精製
ツベ ル ク リ ン pu rified Pr otein De riv ativ e of Tube r c ulinくP P DH 日本B C G 社， 東 京 川．05JLg10．1 ml を背部 皮 内に注入 し， 4 8時 間後に紅斑の長 径と短 径の 平均を測 定し た． 同 様に pu rfied P hy tohe m ag g− 1utinin e 反 応 くP H Al くWelc o m e 社， Bo sto n， U S AJ lOメ gノ0．1ml を背部 皮 内に注 射し 2 4時 間 後に紅斑の
長径と短 径の平 均 値を測 定し た．
4 ． 温 熱 化 学 療 法の抗腫 瘍 効 果
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11 ウ サ ギ大 腿 接 種腫瘍に対す る抗腫瘍 効果の測 定 V X 2腫瘍を大腿に接 種し た ウ サ ギ 2 4羽を使 用し た． 大腿接 種1 4 日目に ベ ントパ ル ビ タ ール5 0m g の静 脈 内 注射によ る全 身麻 酔 下に V X 2 腫 瘍 接種 側に大 願 動 脈を露 出し， 2 0 G エラスター 針を挿入 し薬 剤の注入 経 路と し た■ 以 下の群に分け， 各群3羽と し て処 置を 行った．
i ． 温 熱 療 法， 動注 療 法の効 果を見る実 験 対 照群二生理食 塩水1 ml 注入 似 下対 照 群ン， 温 熱 療 法 単独 群I こ腫瘍 内温 度を 42．50Cに保つよ うに温 熱 療 法を 1 時 間 施行 く以下 温 熱 単 独 刑， 温熱 療 法十動 注 療法 群こ腫 瘍 内温 度を4 2．50Cに保つよ うに温 熱 療 法を 1 時 間施 行し， 同 時に5 F U を 1 5m gノkg 動 脈 内 注入 く温 熱＋動 注 群1 し た群と し た．
ii ． 温 熱 療 法と動 注 療 法の時 間 差効 果を見る実験
−2 4 C H 群二温 熱 療 法 施 行2 4時 間 前に動 注 療 法 施 行，
．− 1 C 王1 群こ温 熱 療 法施 行1時 間前に動 注療 法施 行， C H 二温 熱療 法 施 行 中に勤 注 療 法 施 行， 十1 C H 群こ温 熱療 法終了後1時 間 目に動 注 療 法 施 行， ＋ 24 C H 群こ温 熱療 法 終了後2 4時 間 目に動 注 療 法施 行， の 5群に分け た． 各 群は腫 瘍 接 種1 4 日目に温 熱療 法を施 行す る よ うにトた一 温熱 療 法は 腰瘍 内温 度を 4 2．50C に 維 持し， 1 時 間施 行し た． 動 注療 法と し て 5 F U を15
m gノkg 注入 し た．
iう， iil と も処 置後2 日おき に腰 瘍の長 径と短 径 を測 定し， 次 式によ り腫 瘍 重 量を算出し た．
腫瘍重量くgl こ 長径くc ml ＋く短径くc mlナ2
ま た， 処 置1 6 日後の対 照 群 くCl に対す る実験 群 く温 熱 単独 群， 温 熱＋動 注群，
−24C H 群，
− 1C H 群，
C H 群， ＋1 C H 群， 十24 C H 群こTJ の腫 瘍 重 量を求 め， 腫 瘍 増 殖 阻止率 くinh ivitio n r ate，I．R1 ％． を 下記
のよ うに求め た．
工R ．ニく1− 治療群の平均腫瘍重量こT 対照群の平均腫瘍重量こC1 x lO O さ らに接 種16 日後に局 所 腫瘍を摘 出し， 病理組 織 学 的検 索を行っ た．
21 ウ サギ肝 内接 種腫瘍に対す る抗 腫瘍 効果の判 定 V X 2 を肝 内に接 種し た ウ サ ギ12羽を使用 し， 各 群 3 羽 と し， 接 種14 日目に開 復し以 下の処 置を施 行し た． 開 腹のみ群こく以下 対照群1 ， 温 熱 療法 単 独 群二腫 瘍 内温 度を 4 2．50C に維 持し温 熱 療 法を 1 時 間 施 行し たく温 熱 単 独 群1． 温 熱 療 法十肝 動脈 内 注入群こ温熱 療 法 施 行 時に肝 動脈よ り 5 F U を15mglkg d 回注入く温
