レグパラ
®錠
25mg
レグパラ
®錠
75mg
第 2 部（モジュール 2）
2.6 非臨床試験の概要文及び概要表
薬物動態試験
キリンファーマ株式会社
目次
2.6.4 薬物動態試験の概要文...1 2.6.4.1 まとめ...1 2.6.4.2 分析法...6 2.6.4.3 吸収...8 2.6.4.4 分布...16 2.6.4.5 代謝...24 2.6.4.6 排泄...35 2.6.4.7 薬物動態学的薬物相互作用...40 2.6.4.8 その他の薬物動態試験...43 2.6.4.9 考察及び結論...45 2.6.4.10 図表...46 2.6.4.11 参考文献...46略号一覧
略号 略していない用語
AUC
Area under the plasma concentration-time curve from zero to infinity（無限大時間までの血漿 中薬物濃度―時間曲線下面積）
BUN Blood urea nitrogen（尿素窒素）
cDNA Complementary deoxyribonucleic acid（相補的 DNA） CL Clearance（クリアランス）
CL/F Apparent clearance（みかけのクリアランス）
Cmax Maximum plasma drug concentration（最高血漿中薬物濃度）
Cr Creatinine（クレアチニン）
CYP Cytochrome P450（チトクローム P450） F Bioavailability（バイオアベイラビリティ）
GOT Glutamic-oxaloacetic transaminase（グルタミン酸オキザロ酢酸転位酵素） GPT Glutamic-pyruvic transaminase（グルタミン酸ピルビン酸転位酵素） HPLC High-performance liquid chromatography（高速液体クロマトグラフィー） HSA Human serum albumin（ヒト血清アルブミン）
IC50 Median inhibit concentration（50%阻害濃度） Km Michaelis constant（ミカエリス定数） Ki Inhibition constant（阻害定数）
LC-MS/MS Liquid chromatography-tandem mass spectrometry（液体クロマトグラフィー／タンデム質量分 析）
MRT Mean residence time（平均滞留時間）
NADPH
Reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate（還元型ニコチンアミドアデニンジヌク レオチドリン酸）
Papp Apparent permeability coefficient（みかけの透過係数）
TLC Thin-layer chromatography（薄層クロマトグラフィー） t1/2 Elimination half-life（消失半減期）
tmax Time to reach maximum plasma drug concentration（最高血漿中薬物濃度到達時間）
Vss Volume of distribution at steady state（定常状態における分布容積）
化合物略称一覧（1/2）
略称 化合物構造 化学名 （上段：英名、下段：日本名） シナカルセト 塩酸塩 N H H F F F CH3 ●HCl N H H F F F CH3 ●HCl N-[(1R)-1-(Naphthalen-1-yl)ethyl]-3-[3-(trifluoromethyl)phenyl] propan-1-amine monohydrochloride N-[(1R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル]-3-[3-(トリフルオロメ チル)フェニル]プロパン-1-アミン 一塩酸塩 CAFM F F F COOH 3-(Trifluoromethyl)cinnamic acid 3-(トリフルオロメチル)桂皮酸 CAGly F F F N H OCOOH 3-(Trifluoromethyl)cinnamic acid glycine conjugate
3-(トリフルオロメチル)桂皮酸グリシン抱合体 diOH N H H F F F CH3 OH OH 又は N H H F F F CH3 OH OH Dihydrodiol form ジヒドロジオール体 diOH-Glu N H H F F F CH3 OH OH Glu N H H F F F CH3 OH OH Glu 又は N H H F F F CH3 OH OH Glu N H H F F F CH3 OH OH Glu
Dihydrodiol glucuronide conjugate ジヒドロジオールグルクロン酸抱合体 3’,4’-diOH N H H F F F CH3 OH OH 3’,4’-Dihydrodiol form 3’,4’-ジヒドロジオール体
化合物略称一覧（2/2）
略称 化合物構造 化学名 （上段：英名、下段：日本名） 3’,4’-diOH-Glu N H H F F F CH3 OH OH Glu N H H F F F CH3 OH OHGlu 3’,4’-Dihydrodiol glucuronide conjugate
3’,4’-ジヒドロジオールグルクロン酸抱合体 5’,6’-diOH N H H F F F CH3 OH OH 5’,6’-Dihydrodiol form 5’,6’-ジヒドロジオール体 5’,6’-diOH-Glu N H H F F F CH3 OH OH Glu N H H F F F CH3 OH OH Glu
5’,6’-Dihydrodiol glucuronide conjugate 5’,6’-ジヒドロジオールグルクロン酸抱合体 PAFM F F F COOH 3-(Trifluoromethyl)hydrocinnamic acid 3-(トリフルオロメチル)ヒドロ桂皮酸 R-NEA N H2 H CH 3 (R)-(+)-1-(1-Naphthyl)ethylamine (R)-(+)-1-(1-ナフチル)エチルアミン TFBz F F COOH F 3-(Trifluoromethyl)benzoic acid 3-(トリフルオロメチル)安息香酸 TFBzGly F F F N H O
COOH 3-(Trifluoromethyl)benzoic acid glycine conjugate
3-(トリフルオロメチル)安息香酸グリシン抱合体 TFPA NH2 F F F 3-[3-(Trifluoromethyl)phenyl]propylamine 3-[3-(トリフルオロメチル)フェニル]プロピルアミン
2.6.4 薬物動態試験の概要文
2.6.4.1 まとめ
シナカルセト塩酸塩の薬物動態を明らかにする目的で、ラット及びサルに非標識体又は14 C 標識体を経口投与した時の血漿中濃度推移及び代謝を検討した。また、ラットにおける組織分 布、胎児移行性、並びに尿糞呼気中、胆汁中及び乳汁中排泄を検討した。血漿中濃度推移に関 しては、正常動物に加えて肝障害及び腎障害モデルラットについても検討した。たん白結合及 び in vitro における代謝についてはヒト生体試料を用いて検討した。尿糞呼気中排泄の検討に おいては、シナカルセトが体内で N-脱アルキル化により開裂した代謝物を生成することから、 3 種類の14C 標識体を使用した。2.6.4.1.1 吸収
シナカルセト塩酸塩をラットに 0.2～25 mg/kg、サルに 1～25 mg/kg の投与量で単回経口投 与した時の無限大時間までの血漿中薬物濃度－時間曲線下面積（AUC）及び最高血漿中薬物 濃度（Cmax）は、投与量の増加に伴い上昇した。経口投与した時のバイオアベイラビリティ（F） はラットで 1.04～1.47%、サルで 2.83～5.63%であり初回通過効果が大きかった。ラットで肝 及び消化管における初回通過効果を検討した結果、消化管の寄与は認められず、主に肝で初回 通過効果を受けることが示された。また、14 C 標識体の Caco-2 細胞膜透過性を検討した結果、 小腸においてシナカルセト塩酸塩が特殊輸送機構によって排出される可能性は低いと考えら れた。ラット及びサルに 1 mg/kg の投与量で静脈内投与した時の定常状態における分布容積 （Vss）から、シナカルセトは全身へ広く分布することが示唆された。 ラット及びサルに 5 mg/kg の投与量で 1 日 1 回、7 日間反復経口投与した時の最高血漿中薬 物濃度到達時間（tmax）付近の血漿中シナカルセト濃度は、投与回数によらずほぼ同様の値を 示した。トラフ濃度は投与回数に依存して上昇したが、上昇の程度はわずかであった。また、 薬物動態パラメータは単回投与した時と同様であった。したがって、この投与期間において定 常状態に達していると考えられ、反復投与により薬物動態はほとんど変動しないことが示され た。トラフ濃度から得られた実測の累積係数は、単回投与した時の消失速度定数から計算され た累積係数よりも高値を示したが、その乖離の程度は小さかった。したがって、シナカルセト 塩酸塩の反復経口投与による蓄積性は小さいと判断した。2.6.4.1.2 分布
ラットに14 C 標識体を 1 mg/kg の投与量で経口投与した時、投与 1 時間後の放射能は、胃、 小腸、肝臓、肺、腎臓、副腎及び脾臓など広範囲に分布した。投与 24 時間後以降において血 漿中より高い放射能濃度を示した組織は、ハーダー腺、肝臓及び腎臓であった。脳、眼球及び 骨格筋への放射能分布は全時点を通じて低かった。血漿中放射能濃度の減衰に伴い、組織の放 射能濃度も減衰した。また、14 C 標識体を 10 mg/kg の投与量でラットに経口投与した後の全身 オートラジオグラムでもほぼ同様の組織分布が確認された。なお、組織分布に性差は認められ なかった。投与 1 及び 6 時間後における放射能の血球移行率は、それぞれ 23.0%及び 17.5%で あった。 1ラット、サル及びヒト血漿におけるたん白結合率は、ラットで 96.33～97.67%、サルで 94.00 ～97.00%及びヒト（男性）で 96.67～97.67%であり、シナカルセト濃度依存的な変動及び種差 は認められなかった。また、ヒト血漿におけるたん白結合率に性差はなかった。シナカルセト は主にヒト血清アルブミン（HSA）に結合し、HSA のサイト II に対して高い親和性を示した。 妊娠ラットに14 C 標識体を 1 mg/kg の投与量で経口投与した時、卵巣、羊膜、乳腺及び胎盤 に、血漿中と比較して高い放射能濃度が認められた。胎児の組織内放射能濃度は母動物の血漿 中放射能濃度に比較して低く、母動物の血漿中放射能濃度の低下に伴い減少した。
2.6.4.1.3 代謝
推定代謝経路 14 C 標識体はマウス、ラット、サル、ウサギ、イヌ及びヒトの肝ミクロゾームにおいて還元 型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（NADPH）依存的に代謝され、複数の代謝 物を生成した。イヌを除いた動物肝ミクロゾームにおいて、ヒト肝ミクロゾームで生成する代 謝物はすべて生成することが確認された。また、マウス、ラット、サル肝ミクロゾームで生成 する主代謝物は、ヒト肝ミクロゾームで生成する主代謝物と同じであった。ラット、イヌ及び サル肝ミクロゾームで生成する代謝物に性差は認められなかった。 ヒトチトクローム P450（CYP）発現系ミクロゾーム（CYP1A2、2A6、2B6、2C8、2C9、2C18、 2C19、2D6、2E1、3A4 及び 4A11）のシナカルセトに対する代謝活性を算出した結果、CYP1A2、 CYP2B6、CYP2C19 及び CYP2D6 で相対的に高い活性が認められた。一方、各分子種に対す る親和性は CYP2D6>>CYP3A4>CYP2C19>CYP1A2>CYP2B6 の順に高いことが明らかとなっ た。ヒト肝ミクロゾームに各抗 CYP 分子種抗体及び各 CYP 分子種特異的阻害剤を添加した in vitro 代謝試験を実施した結果、CYP3A4 、CYP2D6 及び CYP1A2 がシナカルセトの代謝に関 与することが示された。更に、個体別ヒト肝ミクロゾームを用いた in vitro 代謝試験を実施し た結果、CYP1A2、CYP2B6 及び CYP3A4 活性と14C 標識体の代謝活性に有意な相関が認めら れた。
ヒト CYP 発現系ミクロゾームを使用し、in vitro で生成するシナカルセトの代謝物の構造を 解析した結果、CYP3A4 により N-脱アルキル化反応が進行し、R-NEA、TFPA 及び PAFM が生 成することが示唆された。また、CYP1A2、CYP2C19 及び CYP2D6 により、シナカルセトよ り分子量が 16 増加したエポキシドと推定される代謝物が生成した。生成したエポキシドは、 引き続きエポキシドヒドロラーゼにより開環し、3’,4’-diOH 及び 5’,6’-diOH へ代謝されるもの と考えられた。 ラットに14 C 標識体を 1 mg/kg の投与量で単回経口投与した後の血漿、尿、糞及び胆汁中で 5～16 種類の放射性成分が認められた。各試料中の未変化体の割合は低く、投与 1 時間後の血 漿及び投与 0～8 時間後の胆汁中では 6.3%以下であり、投与 0～8 時間後の尿及び投与 0～24 時間後の糞中では検出限界未満であった。尿、糞及び胆汁中の主要代謝物は、グルクロン酸抱 合体であることが示唆された。 サルに14 C 標識体を 10 又は 100 mg/kg の投与量で単回経口投与した時、投与 0～120 時間後 の糞中には投与放射能のうち未変化体が約 15%存在し、放射性成分の中では未変化体が最も 2
多かった。一方、尿中及び胆汁中に未変化体は検出されなかった。主要な代謝物は、尿中で diOH-Glu、CAGly 及び TFBzGly、糞中でモノヒドロキシ体（M1）、胆汁中で diOH-Glu 及び M1 のグルクロン酸抱合体であった。 以上の結果から、シナカルセトは CYP3A4 により N-脱アルキル化され PAFM を経由してグ リシン抱合される経路、並びに CYP1A2 及び CYP2D6 によりナフタレン環が酸化され、エポ キシドを形成した後、エポキシドヒドロラーゼによりエポキシドが開環して生成 す る 3’,4’-diOH 又は 5’,6’-diOH がグルクロン酸抱合される経路など、複数の経路で代謝されると考 えられた（図 2.6.4.1.3-1）。 シナカルセト TFPA PAFM 3', 4'-diOH 3', 4'-diOHGlu 5', 6'-diOH 5', 6'-diOHGlu 3-OH-PAFM R-NEA CAFM TFBz TFBzGly CAGly CYP CYP3 CYP CYP P2 6 N H H F F F CH3 N H2 H CH3 N H H F F F CH3 OH OH N H H F F F CH3 OH OH F F F COOH F F F COOH OH F F F COOH F F COOH F F F F N H O COOH F F F N H O COOH NH2 F F F N H H F F F CH3 OH OH Glu N H H F F F CH3 OH OH Glu * シナカルセト TFPA PAFM 3', 4'-diOH 3', 4'-diOHGlu 5', 6'-diOH 5', 6'-diOHGlu 3-OH-PAFM R-NEA CAFM TFBz TFBzGly CAGly CYP3A4 CYP3A4 CYP3A4 CYP1A2 / CYP2D6 N H H F F F CH3 N H2 H CH3 N H H F F F CH3 OH OH N H H F F F CH3 OH OH F F F COOH F F F COOH OH F F F COOH F F COOH F F F F N H O COOH F F F N H O COOH NH2 F F F N H H F F F CH3 OH OH Glu N H H F F F CH3 OH OH Glu N H H F F F CH3 OH OH Glu N H H F F F CH3 OH OH Glu * 図 2.6.4.1.3-1 シナカルセトの推定代謝経路
*：CYP2D6 及び CYP1A2 により異なるエポキシドが生成される。エポキシドはエポキシドヒドロラーゼにより開環して diOH
を生成する。 サル生体試料中においては、シナカルセトのモノヒドロキシ体（M1）及び M1 のグルクロン酸抱合体等、推定代謝経路に 記載していない代謝物も認められている。 酵素誘導 雌性ラットにシナカルセト塩酸塩を 50 mg/kg の投与量で 7 日間反復投与した時、アニリン 水酸化、アミノピリン N-脱メチル化、7-エトキシクマリン O-脱エチル化及び UDP-グルクロン 酸転移酵素活性の有意な上昇が認められた。しかしながら、肝臓中のミクロゾームたん白質含 3
量、CYP 含量及びその他の測定項目において媒体投与群との間に有意な変化は認められなか った。1 及び 5 mg/kg の投与量においては、すべての測定項目において有意差は認められなか った。 また、新鮮ヒト肝細胞を 2 µmol/L までのシナカルセト塩酸塩で 48 時間曝露させた時、シナ カルセト塩酸塩は CYP1A2、CYP2C19 及び CYP3A4 活性を誘導しなかった。
2.6.4.1.4 排泄
ラットに標識位置の異なる 3 種類の14 C 標識体を投与し、排泄経路について検討した。雄性 ラットに[Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセト塩酸塩を 1 mg/kg の投与量で単回経口投与した 時、投与 168 時間後までに投与放射能の 25.9%が尿中に、77.6%が糞中に排泄された。更に、 雌雄ラットに[Propylamine-2-14 C]シナカルセト塩酸塩を 1、10 及び 100 mg/kg の投与量で単回 経口投与した時、投与 96 時間後までに投与放射能の 37.9～43.0%が糞中に、17.7～26.3%が尿 中に、21.3～24.8%が 14 CO2 として呼気中に排泄された。[Propylamine-2-14 C]シナカルセト塩酸 塩の排泄に性差は認められなかった。[Propylamine-2-14 C]シナカルセト塩酸塩の検討において 呼気中へ放射能の排泄が認められたことから、標識位置の異なる[Trifluoromethyl-14 C]シナカル セト塩酸塩を雄性ラットに 10 mg/kg の投与量で単回経口投与して排泄経路を検討した。その 結果、投与 96 時間後までに投与放射能の 46.5%が尿中に、44.5%が糞中に排泄され、呼気中へ の放射能の排泄率は 0.2%未満であった。 胆管カニューレを施したラットに[Propylamine-2-14 C]シナカルセト塩酸塩を 10 mg/kg の投与 量で単回経口投与した時、投与 48 時間後までに雄では 55%、雌では 70%が胆汁中に排泄され た。 [Naphthalene-1,4,5,8-14C]シナカルセト塩酸塩を授乳中雌性ラットに、1 mg/kg の投与量で単回 経口投与した時の乳汁中放射能濃度は、投与 6 時間後までは血漿中放射能濃度に比較して高く 推移し、投与 12 時間後以降は血漿中放射能濃度より低く推移した。シナカルセト塩酸塩は投 与後早い時点より未変化体又は代謝物として乳汁中へ移行することが確認された。2.6.4.1.5 薬物動態学的相互作用
ヒト肝ミクロゾームを用いてシナカルセトの CYP 分子種に対する代謝阻害を検討した結果、 CYP2D6 に対する 50%阻害濃度（IC50）（0.0609 µmol/L）が最も小さく、その他の分子種に対する IC50は CYP2C19 が 49.3 µmol/L、CYP3A4 が 47.8 µmol/L（基質にテストステロンを使用）、
98.3 µmol/L（基質にミダゾラムを使用）であり、CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1 及び CYP3A4 （基質にニフェジピンを使用）では、IC50が 100 µmol/L 以上であった。 CYP2D6 に対して強い阻害を示したため、CYP2D6 の特異的代謝反応に対するシナカルセト の阻害定数（Ki）を算出した。Kiは 0.087～0.45 µmol/L であり、阻害様式は拮抗阻害であった。 代謝酵素阻害によりシナカルセトの代謝が受ける影響を検討するために、シナカルセトの主 要な代謝酵素の一つであり、また多くの薬剤を代謝し薬物相互作用の原因となりうる CYP 分 子種である CYP3A4 に対して、その阻害剤のシナカルセト代謝に対する Kiを算出した。その 結果イトラコナゾール及びケトコナゾールの Kiは、それぞれ 1.6 µmol/L 及び 1.1 µmol/L であ り、イトラコナゾール及びケトコナゾールが臨床において血漿中で到達しうる濃度であった。 4
2.6.4.1.6 その他の薬物動態試験
肝又は腎障害時におけるシナカルセトの薬物動態の変動を確認する目的で、肝又は腎障害モ デルラットの血漿中濃度推移を検討した。肝障害群における AUC 及び Cmaxは対照群の約 7 倍、 みかけのクリアランス（CL/F）及びみかけの分布容積（Vd/F）は対照群のそれぞれ約 1/5 及び 約 1/6 となり、肝障害時には血漿中シナカルセト濃度が顕著に上昇することが明らかとなった。 また、腎障害群における平均滞留時間（MRT）及び消失半減期（t1/2）は対照群の約 2 倍を示 し、腎障害時には血漿中シナカルセトの消失の遅延が認められた。 5
2.6.4.2 分析法
2.6.4.2.1 標識化合物
2.6.4.2.1.1 被験物質
非臨床薬物動態試験に用いたシナカルセト塩酸塩の14 C 標識体の標識位置、放射化学的純度 及び比放射能は以下のとおりであった（表 2.6.4.2.1.1-1）。 表 2.6.4.2.1.1-1 標識化合物の性状分析値一覧 名称 [Naphthalene-1,4,5,8-14C] シナカルセト塩酸塩 [Propylamine-1-14C] シナカルセト塩酸塩 [Propylamine-2-14C] シナカルセト塩酸塩 [Trifluoromethyl-14C] シナカルセト塩酸塩 構造式 ＊ ＊ ＊ ＊ N H H F F F CH3 ＊ ＊ ＊ ＊ N H H F F F CH3 ●●HClHCl N H H F F F CH3 ＊ N H H F F F CH3 ＊ ●●HClHCl ＊ NH H F F F CH3 ＊ NH H F F F CH3 ●●HClHCl ＊ N H H F F F CH3 ＊ N H H F F F CH3 ●●HClHCl ロット 番号 CFQ11905 CFQ11139 CSL-97- 763-29-13 97-739- 38-35 98-807-83-17 比放射能 （GBq/mmol） 2.07 2.11 2.14 2.15 1.76 放射化学的 純度 （%） >97 >97 >96 >98 >98 供給元 *：標識位置2.6.4.2.1.2 放射能測定
組織分布及び胎児移行性試験における組織中の放射能は、試料に液体シンチレーターを添加 して液体シンチレーションカウンターで測定した。放射能の検出限界はバックグラウンドの 2 倍とした。組織分布試験の全身オートラジオグラムにおける放射能は、切片をホスホイメージ ャースクリーンに露出させ、コンピューター画像に変換して測定した。放射能濃度は、組織当 たりのシナカルセト当量で示した。 代謝物分析における放射能は、展開後の薄層クロマトグラフィー（TLC）プレートをホスホ イメージャースクリーンに露出させ、コンピューター画像に変換して解析した。また高速液体 クロマトグラフィー（HPLC）分離後の溶出液を液体シンチレーターと混合して放射能を検出 するラジオ HPLC 法も使用した。 6
2.6.4.2.2 非標識化合物
2.6.4.2.2.1 被験物質
非標識体を使用した非臨床薬物動態試験では、シナカルセト塩酸塩の原薬を用いた。バリデ ーション試験においてはシナカルセト塩酸塩の標準品を用いた。投与量及び濃度はシナカルセ ト（塩酸フリー体）換算値として表示した。2.6.4.2.2.2 生体試料中シナカルセト濃度の測定法
試料の分析ごとに標準曲線を作成し、測定値を保証するために Quality Control （QC）試料を同 時に測定した。2.6.4.2.2.2.1 ラット血漿中濃度測定法（試験番号：PK0005）
････
資料 4.2.2.1-1
ラット血漿中のシナカルセト濃度は、試料 100 µL にメタノールを添加し、除たん白処理し た 後 、 カ ラ ム ス イ ッ チ ン グ を 使 用 し た 液 体 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー ／ タ ン デ ム 質 量 分 析 （LC-MS/MS）法で測定した。定量範囲を 0.1～50 ng/mL とした時の特異性、同時再現性、日 差再現性及び安定性を以下にまとめた（表 2.6.4.2.2.2-1）。2.6.4.2.2.2.2 サル血漿中濃度測定法（試験番号：PRD00-319）
･･･
資料 4.2.2.1-2
サル血漿中のシナカルセト濃度は、試料 200 µL に 0.3 mol/L アンモニア溶液を添加し、固相 抽出により前処理を行った後、LC-MS/MS 法で測定した。定量範囲を 0.1～50 ng/mL とした時 の特異性、同時再現性、日差再現性及び安定性を以下にまとめた（表 2.6.4.2.2.2-1）。 表 2.6.4.2.2.2-1 動物種における血漿中濃度測定法バリデーション結果一覧 動物種 ラット サル 測定試料容量（µL） 100 200 定量範囲 （ng/mL） 0.1 ～ 50 0.1 ～ 50 特異性 （雌雄各 3 個体） 定量を妨害するピーク検出されず 定量を妨害するピーク検出されず 同時再現性 （n=5） 真度 -8.5 ～ 1.6% 精度 2.2 ～ 6.6% 真度 -8.4 ～ 3.9% 精度 1.3 ～ 6.4% 日差再現性 （n=5） 真度 -5.5 ～ -3.5% 精度 3.4 ～ 10.1% 真度 2.9 ～ 5.4% 精度 7.0 ～ 9.4% 定量下限 （ng/mL） 0.1 0.1 凍結融解安定性 3 回 3 回 保存安定性 3 ヶ月間 （-80 C） 4 ヶ月間 （-20 C） 7
2.6.4.3 吸収
2.6.4.3.1 Caco-2 細胞単層膜透過性試験（試験番号：P030556）
･･･････････････････････････････････････････････････
資料 5.3.2.3-1
【試験材料及び試験方法】 被験物質：[Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセト塩酸塩 試験系 ：Caco-2 細胞 試験方法：Caco-2 細胞単層膜を用い、頂側膜側（A）から側底膜側（B）方向（吸収方向）及 び B から A 方向（排出方向）へのみかけの透過係数（Papp）を算出した。 【試験成績】 Caco-2 細胞単層膜に対する透過性を検討することにより、シナカルセト塩酸塩の消化管吸 収における担体輸送の寄与について評価した。2、20 及び 200 µmol/L の濃度において Papp（吸 収方向）に比較して Papp（排出方向）が高い値を示した（図 2.6.4.3.1-1）。しかしながら、Papp （吸収方向）及び Papp（排出方向）に濃度依存性は認められなかったこと、また本試験のよう に生理的条件下（A：pH 6.0、B：pH 7.4）では、受動拡散により吸収される塩基性化合物の Papp（排出方向）／Papp（吸収方向）比は 1 より大きい値を示すことが報告されている 1）こと から、小腸においてシナカルセト塩酸塩が特殊輸送機構によって排出される可能性は低いと考 えられた。 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.02 µmol/L 20 µmol/L 200 µmol/L
Papp (×1 0 -6 cm/ se c) 吸収方向 排出方向 [Naphthalene-1,4,5,8-14C]シナカルセト塩酸塩濃度 図 2.6.4.3.1-1 [Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセト塩酸塩の Caco-2 細胞における膜透過性 （n=3、平均値+標準偏差） 8
2.6.4.3.2 単回投与時の血漿中濃度推移
2.6.4.3.2.1 ラットにおける単回投与時の血漿中濃度推移（試験番号：PK0007）
･････････････････････････････････････････････････
資料 4.2.2.2-1
【試験材料及び試験方法】 使用動物：Sprague-Dawley 系ラット（7～8 週齢）、1 群雄 5 匹 投与量 ：0.2、1、5 及び 25 mg/kg（経口）、1 mg/kg（静脈内） 投与方法：シナカルセト塩酸塩を単回経口又は単回静脈内投与 測定方法：投与後の血漿中シナカルセト濃度を LC-MS/MS 法で測定した。 【試験成績】 ラットにシナカルセト塩酸塩を 0.2～25 mg/kg の投与量で経口投与した時の血漿中濃度は、 投与 1.30～3.80 時間後に Cmaxに達した後低下し、t1/2は 3.08～6.97 時間 であった（図 2.6.4.3.2.1-1 及び表 2.6.4.3.2.1-1）。AUC は投与量にほぼ比例して上昇し、CL/F 及び Vd/F に投与量依存的 な変化は認められていないことから、この投与量範囲における薬物動態はほぼ線形であると考 えられた。なお、25 mg/kg 投与時の t1/2が 0.2 及び 1 mg/kg 投与時に対して有意な延長（P<0.05） を示した。これは、0.2 又は 1 mg/kg 投与した時に、それぞれ投与 12 又は 24 時間後以降の血 漿中濃度が定量下限未満であったために消失相を正確に評価できなかったことが原因である と考えられ、非線形性を示すものではないと判断した。 静脈内投与した時の Vssが 2.54 L/kg であったことから、シナカルセト塩酸塩は全身へ広く分 布することが示唆された（表 2.6.4.3.2.1-2）。また、経口投与時と静脈内投与時の AUC の比か ら算出した F は 1.04～1.47%であった。 0.1 1 10 100 0 12 24 36 48 投与後経過時間（時間） 血漿 中シ ナ カ ルセト 濃 度（ ng/ m L ） 0.2 mg/kg 1 mg/kg 5 mg/kg 25 mg/kg * 図 2.6.4.3.2.1-1 ラットにシナカルセト塩酸塩を単回経口投与した時の 血漿中シナカルセト濃度推移 （n=5 又は n=4（*）、平均値±標準偏差） 9表 2.6.4.3.2.1-1 ラットにシナカルセト塩酸塩を単回経口投与した時の薬物動態パラメータ 投与量 （mg/kg) Cmax （ng/mL ） tmax （h） AUC （ng･h/mL） CL/F （L/h/kg） Vd/F （L/kg） MRT （h） t1/2 （h） F （%） 0.2 0.419 ± 0.108 1.30 ± 0.67 3.27 ± 0.98 67.8 ± 27.9 386 ± 100 7.06 ± 3.20 4.47 ± 2.23 1.04 1 3.55 ± 0.83 1.90 ± 1.34 21.5 ± 5.3 48.4 ± 10.1 216 ± 58* 5.18 ± 0.30 3.08 ± 0.41 1.37 5 15.7 ± 3.8 1.80 ± 1.44 109 ± 22 47.2 ± 9.6 324 ± 61 6.13 ± 0.49 4.86 ± 1.09 1 39 25 59.6 ± 13.4 3.80 ± 2.68 577 ± 72 43.8 ± 5.2 443 ± 83# 7.64 ± 0.83 6.97 ± 0.53*# 1.47 n=5、平均値±標準偏差 *：P<0.05（vs 0.2 mg/kg 群、Tukey の多重比較検定） #：P<0.05（vs 1 mg/kg 群、Tukey の多重比較検定） 表 2.6.4.3.2.1-2 ラットにシナカルセト塩酸塩を単回静脈内投与した時の薬物動態パラメータ 投与量 （mg/kg） AUC （ng･h/mL） CL （L/h/kg） Vss （L/kg） MRT （h） t1/2 （h） 1 1570 ± 1250 1.00 ± 0.68 2.54 ± 1.85 2.55 ± 0.43 5.50 ± 1.85 n=5、平均値±標準偏差
2.6.4.3.2.2 ラットにおける
14C 標識シナカルセト塩酸塩単回投与時の血漿中濃度
推移（試験番号：PK0012）
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資料 4.2.2.2-2
【試験材料及び試験方法】 被験物質：[Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセト塩酸塩 使用動物：Sprague-Dawley 系ラット（7 週齢）、1 群雄 3 匹 投与量 ：1 mg/kg 投与方法：[Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセト塩酸塩を単回経口投与 測定方法：投与後の血漿中放射能濃度を液体シンチレーションカウンターで測定した。 【試験成績】 ラットに[Naphthalene-1,4,5,8-14C]シナカルセト塩酸塩を 1 mg/kg の投与量で経口投与した時 の tmaxは 6.0 時間であった（表 2.6.4.3.2.2-1）。Cmaxに到達した後、放射能濃度は非標識体より も緩やかに低下し、t1/2は 20.5 時間であった。 表 2.6.4.3.2.2-1 ラットに 1 mg/kg の[Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセト塩酸塩を単回経口投 与した時の薬物動態パラメータ 投与量 （mg/kg） Cmax （ng14C-シナカルセト当量/mL） tmax （h） AUC （ng14C-シナカルセト当量･h/mL） t1/2 （h） 1 75.4 ± 16.6 6.0 ± 0.0 1743.3 ± 307.4 20.5 ± 0.8 n=3、平均値±標準偏差 10
2.6.4.3.2.3 サルにおける単回投与時の血漿中濃度推移（試験番号：
86-57）
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資料 4.2.2.2-4
【試験材料及び試験方法】 使用動物：カニクイザル（3～4 年齢）、1 群雄 3 匹 投与量 ：1、5 及び 25 mg/kg（経口）、1 mg/kg（静脈内） 投与方法：シナカルセト塩酸塩を単回経口又は単回静脈内投与 測定方法：投与後の血漿中シナカルセト濃度を LC-MS/MS 法で測定した。 【試験成績】 サルにシナカルセト塩酸塩を 5 及び 25 mg/kg の投与量で単回経口投与した時の血漿中濃度 は、投与 3.3～6.7 時間後に Cmaxに達した後低下し、t1/2は 7.64～8.59 時間であった（図 2.6.4.3.2.3-1 及び表 2.6.4.3.2.3-1）。Cmax及び AUC は投与量にほぼ比例して上昇し、CL/F、MRT 及び t1/2は 一定であったことから、5～25 mg/kg の範囲における薬物動態は線形であると考えられた。一 方、1 mg/kg 投与においては、t1/2が 5 及び 25 mg/kg 投与に対して、MRT が 25 mg/kg 投与に対 して有意に小さい値を示し、Cmax及び AUC も 5 及び 25 mg/kg 投与時の投与量比に対して低い 値を示した。これは、1 mg/kg 投与した時の投与 24 時間後以降の血漿中濃度が定量下限未満で あったために消失相を正確に評価できなかったことが原因であると考えられ、非線形性を示す ものではないと判断した。 静脈内投与した時の Vssが 13.5 L/kg であったことから、シナカルセト塩酸塩は全身へ広く分 布することが示唆された（表 2.6.4.3.2.3-2）。また、経口投与した時と静脈内投与した時の AUC の比から算出した F は 2.83～5.63%であった。 0.1 1 10 100 0 12 24 36 48 投与後経過時間（時間） 血 漿中シ ナ カ ル セ ト 濃 度（ ng /m L ） 1 mg/kg 5 mg/kg 25 mg/kg * * * 図 2.6.4.3.2.3-1 サルにシナカルセト塩酸塩を単回経口投与した時の 血漿中シナカルセト濃度推移 （n=3、平均値±標準偏差又は n=2（*）、平均値） 11表 2.6.4.3.2.3-1 サルにシナカルセト塩酸塩を単回経口投与した時の薬物動態パラメータ 投与量 （mg/kg） Cmax （ng/mL） tmax （h） AUC （ng･h/mL） CL/F （L/h/kg） Vd/F （L/kg） MRT （h） t1/2 （h） F （%） 1 1.46 ± 0.60 2.7 ± 1.2 13.8 ± 10.0 104 ± 71 545 ± 207 7.31 ± 2.18* 4.28 ± 1.46*# 2.83 5 10.3 ± 2.6 3.3 ± 1.2 100 ± 31 54.2 ± 20.6 599 ± 230 10.3 ± 0.4 7.64 ± 0.59 4.11 25 60.9 ± 29.7 6.7 ± 2.3 686 ± 296 43.5 ± 24.7 536 ± 304 13.0 ± 1.4 8.59 ± 1.30 5.63 n=3、平均値±標準偏差 *：P<0.01（vs 25 mg/kg 群、Tukey の多重比較検定） #：P<0.05（vs 5 mg/kg 群、Tukey の多重比較検定） 表 2.6.4.3.2.3-2 サルにシナカルセト塩酸塩を単回静脈内投与した時の薬物動態パラメータ 投与量 （mg/kg） AUC （ng･h/mL） CL （L/h/kg） Vss （L/kg） MRT （h） t1/2 （h） 1 487 ± 117 2.15 ± 0.60 13.5 ± 1.3 6.56 ± 1.60 10.6 ± 2.9 n=3、平均値±標準偏差
2.6.4.3.2.4 サルにおける
14C 標識シナカルセト塩酸塩単回投与時の血漿中濃度推
移（試験番号：6271-217）
････････････････････････
資料 4.2.2.2-5
【試験材料及び試験方法】 被験物質：[Trifluoromethyl-14 C]シナカルセト塩酸塩 使用動物：カニクイザル、1 群雄 3 匹 投与量 ：10 及び 100 mg/kg 投与方法：[Trifluoromethyl-14 C]シナカルセト塩酸塩を単回経口投与 測定方法：投与後の血漿中放射能濃度を液体シンチレーションカウンターで測定した。 【試験成績】 サルに[Trifluoromethyl-14 C]シナカルセト塩酸塩を 10 及び 100 mg/kg の投与量で経口投与した 時の tmaxは 4.67 及び 9.33 時間であった（表 2.6.4.3.2.4-1）。AUC は投与量に比例して増加した。 Cmaxに到達した後、放射能濃度は非標識体よりも緩やかに低下し、t1/2は 10 mg/kg 投与で 65.5 時間、100 mg/kg 投与で 65.2 時間であった。 表 2.6.4.3.2.4-1 サルに 10 及び 100 mg/kg の[Trifluoromethyl-14 C]シナカルセト塩酸塩を単回経口 投与した時の薬物動態パラメータ 投与量 （mg/kg） Cmax （µg 14C-シナカルセト当量/g） tmax （h） AUC （µg 14C-シナカルセト当量･h/g） t1/2 （h） 10 8.65 ± 1.94 4.67 ± 1.15 153 ± 25.8 65.5 ± 19.9 100 49.5 ± 4.19 9.33 ± 2.31 1627 ± 535 65.2 ± 1.93 n=3、平均値±標準偏差 12
2.6.4.3.3 反復投与時の血漿中濃度推移
2.6.4.3.3.1 ラットにおける反復投与時の血漿中濃度推移（試験番号：PK0203）
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資料 4.2.2.2-3
【試験材料及び試験方法】 使用動物：Sprague-Dawley 系ラット（8～9 週齢）、1 群雄 4 匹 投与量 ：5 mg/kg 投与方法：シナカルセト塩酸塩を 1 日 1 回 7 日間反復経口投与 測定方法：単回投与時及び反復投与時の血漿中シナカルセト濃度を LC-MS/MS 法で測定した。 【試験成績】 ラットに 5 mg/kg の投与量で 1 日 1 回、7 日間反復経口投与した時、単回投与時と比較して 薬物動態パラメータに有意差は認められなかった（表 2.6.4.3.3.1-1）。各回の tmax付近（投与 2 時間後）の血漿中シナカルセト濃度は、投与回数によらずほぼ同様の値を示した。トラフ濃度 は投与回数に依存して上昇したが、上昇の程度はわずかであった。また、2-コンパートメント モデル解析により求めた単回投与のパラメータを使用して反復投与時の血漿中濃度推移を予 測したところ、実測値とほぼ一致した（図 2.6.4.3.3.1-1）。以上の結果より、反復投与によりシ ナカルセトの薬物動態は変動しないと考えられた。 トラフ濃度から得られた実測の累積係数は、単回投与した時の消失速度定数から計算された 累積係数よりも高値を示したが、その乖離の程度は小さかった。したがって、シナカルセト塩 酸塩の反復経口投与による蓄積性は小さいと判断した（表 2.6.4.3.3.1-2）。 0.01 0.1 1 10 100 0 24 48 72 96 120 144 168 初回投与からの経過時間 (時間) 血漿中シ ナ カ ル セ ト 濃度 (n g /mL ) 予測曲線 実測血漿中濃度 実測血漿中濃度（各回投与2及び24時間後) 図 2.6.4.3.3.1-1 ラットにシナカルセト塩酸塩 5 mg/kg を 1 日 1 回 7 日間反復経口投与した時の 血漿中シナカルセト濃度及び予想血漿中シナカルセト濃度推移 （n=4、平均値±標準偏差） 13表 2.6.4.3.3.1-1 ラットにシナカルセト塩酸塩 5 mg/kg を 1 日 1 回 7 日間反復経口投与した時の 薬物動態パラメータ 投与回数 Cmax （ng/mL） tmax （h） AUC （ng･h/mL） CL/F （L/h/kg） Vd/F （L/kg） MRT （h） t1/2 （h） 単回 24.9 ± 5.3 1.75 ± 0.50 159 ± 21 32.0 ± 4.5 182 ± 29 6.10 ± 0.70 3.97 ± 0.52 7 回 24.8 ± 6.8 2.06 ± 1.53 171 ± 29 29.9 ± 5.2 223 ± 59 7.14 ± 0.53 5.10 ± 0.79 n=4、平均値±標準偏差 表 2.6.4.3.3.1-2 ラットにシナカルセト塩酸塩 5 mg/kg を反復経口投与した時のトラフ濃度及び 累積係数 投与回数 トラフ濃度（ng/mL） 累積係数 1 0.303 ± 0.088 1.00 2 0.299 ± 0.072 0.987 3 0.368 ± 0.080 1.21 4 0.389 ± 0.122 1.28 5 0.420 ± 0.057 1.39 6 0.888 ± 0.858 2.93 n=4、平均値±標準偏差 累積係数：各投与のトラフ濃度／初回投与時のトラフ濃度 単回投与時の最終消失相の消失速度定数（0.177）及び投与間隔（24 時間）を用いて計算された累積係数：1.01
2.6.4.3.3.2 サルにおける反復投与時の血漿中濃度推移（試験番号：
86-66）
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資料 4.2.2.2-6
【試験材料及び試験方法】 使用動物：カニクイザル（3～4 年齢）、1 群雄 4 匹 投与量 ：5 mg/kg 投与方法：シナカルセト塩酸塩を単回経口投与し、休薬期間を 2 週間設けた後、1 日 1 回 7 日 間反復経口投与 測定方法：単回及び反復投与時における血漿中シナカルセト濃度を LC-MS/MS 法で測定した。 【試験成績】 サルに、5 mg/kg の投与量で 1 日 1 回 7 日間反復経口投与した時、単回投与時と比較して反 復投与時の Cmax及び tmaxは、ほぼ同等であった。CL/F は反復投与により低下する傾向がみら れ、t1/2 は反復投与により延長する傾向がみられたが、いずれも有意な変化ではなかった（表 2.6.4.3.3.2-1）。各回の tmax付近（投与 4 時間後）の血漿中シナカルセト濃度は、投与回数によ らずほぼ同様の値を示した。トラフ濃度は投与 3 回目以降にほぼ同じ値を示した。また、2-コンパートメントモデル解析により求めた単回投与のパラメータを使用して反復投与時の血 漿中濃度推移を予測したところ、実測値とほぼ一致した（図 2.6.4.3.3.2-1）。以上の結果より、 7 日間反復投与によってシナカルセトの薬物動態はほとんど変動しないと考えられた。 トラフ濃度から得られた実測の累積係数は最大で 2.06 であり、単回投与した時の消失速度 定数より計算された累積係数 1.05 に対し、その値が大きく乖離していなかった。したがって、 14シナカルセト塩酸塩の反復投与による蓄積性は小さいと判断した（表 2.6.4.3.3.2-2）。 0.01 0.1 1 10 100 0 24 48 72 96 120 144 168 192 初回投与からの経過時間（時間） 血漿 中シ ナ カ ル セ ト 濃度 （ng/ m L ） 単回投与時 反復投与時 予測曲線 図 2.6.4.3.3.2-1 サルにシナカルセト塩酸塩 5 mg/kg を 1 日 1 回 7 日間反復経口投与した時の 血漿中濃度及び予想血漿中濃度推移 （n=4、平均値±標準偏差） 表 2.6.4.3.3.2-1 サルにシナカルセト塩酸塩 5 mg/kg を 1 日 1 回 7 日間反復経口投与した時の薬 物動態パラメータ 投与回数 Cmax （ng/mL） tmax （h） AUC （ng･h/mL） CL/F （L/h/kg） Vd/F （L/kg） MRT （h） t1/2 （h） 単回 8.06 ± 1.84 3.0 ± 1.2 70.0 ± 20.2 76.8 ± 25.0 656 ± 278 8.08 ± 1.36 5.97 ± 2.18 7 回 13.2 ± 3.9 2.5 ± 1.0 106 ± 18* 48.4 ± 9.4 744 ± 335 10.4 ± 2.0 11.2 ± 6.5 n=4、平均値±標準偏差 *：P<0.05（vs 単回投与群、Student’s t 検定、両側） 表 2.6.4.3.3.2-2 サルにシナカルセト塩酸塩 5 mg/kg を反復経口投与した時のトラフ濃度及び累 積係数 投与回数 トラフ濃度（ng/mL） 累積係数 1 0.403 ± 0.128 1.00 2 0.590 ± 0.197 1.46 3 0.830 ± 0.173 2.06 4 0.704 ± 0.168 1.75 5 0.783 ± 0.137 1.94 6 0.674 ± 0.143 1.67 n=4、平均値±標準偏差 累積係数：各投与のトラフ濃度／初回投与時のトラフ濃度 単回投与時の最終消失相の消失速度定数（0.126）及び投与間隔（24 時間）を用いて計算された累積係数：1.05 15
2.6.4.4 分布
2.6.4.4.1 ラットにおける組織分布（試験番号：PK0012）
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資料 4.2.2.2-2
【試験材料及び試験方法】 被験物質：[Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセト塩酸塩 使用動物：Sprague-Dawley 系ラット（6～7 週齢）、1 時点雄 3 匹 投与量 ：1 mg/kg 投与方法：[Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセト塩酸塩を単回経口投与 測定方法：投与 1、6、24 及び 72 時間後における組織内放射能濃度を測定した。 【試験成績】 [Naphthalene-1,4,5,8-14C]シナカルセト塩酸塩を 1 mg/kg 経口投与した時の投与 1 時間後の放 射能は、消化管内容物を除き、胃で最も高く、次いで小腸、肝臓、肺、腎臓、副腎、脾臓、膵 臓、褐色脂肪、膀胱、大腸、下垂体、顎下線、甲状腺等で血漿中放射能濃度より高濃度を示し、 広範囲に分布した（表 2.6.4.4.1-1）。下垂体、ハーダー腺及び精巣上体等は投与 6 時間後に最 高組織内放射能濃度を示した。また、血漿中放射能濃度の減衰に伴い、いずれの組織、臓器も 放射能濃度は経時的に低下した。投与 24 時間後以降において血漿中より高い放射能濃度を示 した組織は、ハーダー腺、肝臓及び腎臓であった。なお、脳、眼球、胸部リンパ節、胸腺、前 立腺、精巣、精巣上体、皮膚及び骨格筋への放射能分布は全時点を通じて低かった。 投与 1 及び 6 時間後における放射能の血球移行率は、それぞれ 23.0±3.9%及び 17.5±1.7%で あった（表 2.6.4.4.1-2）。なお、投与 72 時間後における放射能の血球移行率は 51.7±9.2%に上 昇した。 16表 2.6.4.4.1-1 雄性ラットに 1 mg/kg の[Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセト塩酸塩を経口投与 した時の組織内放射能濃度 放射能濃度（ng 14C-シナカルセト当量/g or mL） 組織 1 時間 6 時間 24 時間 72 時間 血液 65.4 ± 6.6 55.0 ± 2.9 18.1 ± 1.8 3.7 ± 0.4 血漿 87.7 ± 6.8 77.7 ± 4.4 25.2 ± 4.7 2.8 ± 0.3 脳 36.6 ± 7.2 18.8 ± 7.3 1.5 ± 0.1 ND 脳下垂体 119.6 ± 8.1 141.5 ± 72.9 23.1 ± 16.1 ND 眼球 18.3 ± 5.9 10.6 ± 2.3 2.4 ± 0.1 ND ハーダー腺 80.4 ± 11.6 164.0 ± 35.0 119.8 ± 16.8 34.5 ± 15.2 顎下腺 117.1 ± 3.4 66.2 ± 21.8 6.7 ± 0.4 1.1a リンパ節 77.8 ± 5.5 53.8 ± 16.9 5.9 ± 1.1 ND 甲状腺 114.9 ± 15.4 37.9 ± 16.8 7.5a ND 胸腺 48.8 ± 7.8 41.4 ± 11.7 3.3 ± 0.2 ND 肺 605.2 ± 129.7 324.4 ± 148.3 14.2 ± 0.9 2.0 ± 0.2 心臓 93.3 ± 7.7 33.3 ± 9.4 6.0 ± 0.6 1.2 ± 0.2 肝臓 2111.2 ± 285.0 498.4 ± 113.3 90.1 ± 0.6 31.0 ± 4.4 腎臓 456.5 ± 58.1 283.0 ± 33.7 60.0 ± 1.5 13.6 ± 2.4 副腎 321.5 ± 49.3 120.1 ± 52.9 10.8 ± 0.3 ND 脾臓 199.9 ± 21.8 69.5 ± 32.3 7.5 ± 0.4 2.4 ± 0.4 膵臓 170.3 ± 12.2 169.8 ± 50.6 18.8 ± 1.6 2.6 ± 0.3 胃 9063.2 ± 2273.8 64.7 ± 34.2 11.5 ± 4.1 1.6 ± 0.4 小腸 4395.4 ± 3145.8 203.6 ± 114.9 15.8 ± 4.0 2.5 ± 0.7 大腸 142.9 ± 151.4 59.9 ± 32.0 17.8 ± 11.6 1.7 ± 0.1 白色脂肪 107.0 ± 14.6 108.6 ± 42.0 23.1 ± 0.4 1.9 ± 0.6 褐色脂肪 162.7 ± 10.9 88.6 ± 34.2 8.1 ± 1.5 1.4a 膀胱 156.9 ± 144.9 102.9 ± 57.6 10.7 ± 2.7 1.8a 前立腺 66.6 ± 15.4 55.4 ± 11.2 5.1 ± 0.7 ND 精巣 22.6 ± 3.7 34.9 ± 2.4 11.1 ± 1.9 1.1a 精巣上体 34.0 ± 5.7 42.1 ± 8.6 10.2 ± 0.8 1.1a 皮膚 44.0 ± 5.5 36.2 ± 6.3 8.4 ± 0.6 2.0 ± 0.4 骨髄 91.4 ± 14.6 51.3 ± 18.5 7.4 ± 1.0 ND 骨格筋 33.0 ± 9.7 19.5 ± 8.3 2.7 ± 0.3 ND 胃内容物 346029.1 ± 206200.3 127.8 ± 96.7 94.5 ± 77.1 1.2a 小腸内容物 39551.5 ± 13727.0 6824.8 ± 1705.5 861.0 ± 115.0 33.2 ± 5.8 n=3、平均値±標準偏差（a：n=2、平均値） ND：検出限界未満 表 2.6.4.4.1-2 雄性ラットに 1 mg/kg の[Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセト塩酸塩を経口投与 した時の血球移行率 投与後時間（時間） 血球移行率（%） 1 23.0 ± 3.9 6 17.5 ± 1.7 72 51.7 ± 9.2 n=3、平均値±標準偏差 17
2.6.4.4.2 ラットにおける定量的全身オートラジオグラフィー（試験番号：
6271-173）
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資料 4.2.2.3-1
【試験材料及び試験方法】 被験物質：[Propylamine-2-14 C]シナカルセト塩酸塩 使用動物：Sprague-Dawley 系ラット（8 週齢）、1 時点雌雄各 2 匹 投与量 ：10 mg/kg（経口）、1 mg/kg（静脈内） 投与方法：[Propylamine-2-14 C]シナカルセト塩酸塩を単回経口又は単回静脈内投与 測定方法：経口投与 4、12、24 及び 48 時間後並びに静脈内投与 1、12、24 及び 48 時間後にお けるオートラジオグラムを作製した。 【試験成績】 [Propylamine-2-14C]シナカルセト塩酸塩を雄性ラットに経口投与した時の放射能は、広範囲 に分布した（表 2.6.4.4.2-1 及び図 2.6.4.4.2-1）。ハーダー腺、肝臓、膵臓、肺、包皮腺及び褐色 脂肪で高い放射能が検出され、中枢神経系組織、眼球、筋肉、精巣、腹部脂肪、気管、心筋及 び骨への放射能分布は低かった。消化管内容物を除いて、経口投与時と静脈内投与時の放射能 分布は類似しており、また雌雄でほぼ同様な放射能分布を示した。 18表 2.6.4.4.2-1 雄性ラットに 10 mg/kg の[Propylamine-2-14 C]シナカルセト塩酸塩を単回経口投与 した時の全身オートラジオグラフィーによる放射能分布 放射能濃度（µg 14C-シナカルセト当量/g） 組織 4 時間 12 時間 24 時間 48 時間 AUC0-t （µg 14C-シナカ ルセト当量･h/g） 血液 1.69 1.80 1.08 BLQ 34.6 大脳 0.520 BLQ BLQ BLQ NA 小脳 0.510 BLQ BLQ BLQ NA 松果体 1.48 NR 1.55 NR NA 下垂体 2.46 2.44 1.81 1.32 87.6 脊髄 BLQ BLQ BLQ BLQ NA 鼻甲介 1.09 1.59 1.14 1.02 55.2 嗅葉 0.525 BLQ BLQ BLQ NA 眼球 BLQ BLQ BLQ BLQ NA 内涙腺 2.37 3.76 1.78 1.34 99.9 外涙腺 2.75 3.55 1 92 1.58 106 ハーダー腺 6.73 17.2 15.8 6.60 576 顎下腺 3.30 4.03 1.42 1.10 98.9 リンパ節 1.60 1.72 1.48 1.22 68.1 甲状腺 1.68 1.95 1.72 1.41 77.5 胸腺 1.49 1.71 1.64 1.35 71.8 気管 BLQ 1.16 0.550 BLQ NA 横隔膜 1.60 1.53 1.08 0.993 56.3 食道 4.02 2.11 1.10 1.13 78.6 肺 3.57 2.58 1.35 1.06 84.2 心筋 1.64 1.49 1.10 BLQ 31.3 大動脈 2.05 2.25 1.59 1.27 78.7 肝臓 7.62 7.00 4.45 2.47 225 腎臓 3.74 4.12 2.47 1.79 130 腎皮質 3.82 4.29 2.60 1.84 135 腎臓髄質 2.85 2.89 1.53 1.23 88.3 副腎 2.82 2.62 2.68 2.08 116 脾臓 3.39 2.64 1.89 1.42 97.8 膵臓 6.79 5.14 1.60 1.15 135 胃 6.04 2.48 1.76 1.09 106 小腸 5.82 4.85 2.89 1.28 151 大腸 1.57 2.91 1.60 1.07 80.2 盲腸 3.69 6.66 2.04 0.595 133 褐色脂肪 1.58 2.68 3.65 3.61 145 腹部脂肪 BLQ 0.555 BLQ BLQ NA 前立腺 1.63 1.87 1.86 1.54 80.4 尿道球腺 1.74 1.35 NR NR NA 膀胱 1.92 1.85 1.18 BLQ 37.1 精巣 BLQ BLQ BLQ BLQ NA 精嚢 0.630 2.34 1.75 1.43 75.8 精巣上体 BLQ 1.18 1.10 0.615 39.0 皮膚 1.07 1.37 1.48 1.16 60.7 包皮腺 2.41 3.25 4.64 3.37 171 骨髄 2.25 3.21 2 92 1.81 120 骨 BLQ BLQ BLQ BLQ NA 髄質 0.515 BLQ BLQ BLQ NA 筋肉 BLQ BLQ BLQ BLQ NA 食道内容物 19.5 2.21 0.935 BLQ 145 胃内容物 197 8.73 1.77 ND 1280 小腸内容物 186 13.6 8.08 1.55 1420 盲腸内容物 61.8 76.6 8.02 1.16 1300 大腸内容物 2.69 90.1 15.4 1.77 1220 尿 5.78 5.14 1.44 1.06 125 胆汁 27.2 15.7 NR NR NA n=2、平均値 AUC0-t：測定時点までの組織内放射能濃度－時間曲線下面積 BLQ：定量限界未満（<0.963 µg 14C-シナカルセト当量/ g） ND：検出限界未満（<0.488 µg 14C-シナカルセト当量/ g） NA：適合せず NR：切片上に表出せず 19
投与 4 時間後 盲腸内容物 精巣 顎下腺 副腎 肝臓 胃 精嚢 ハーダー腺 松果体 小脳 投与 12 時間後 盲腸内容物 副腎 顎下腺 褐色脂肪 胃 血液 ハーダー腺 大腸 投与 24 時間後 小腸内容物 肺 ハーダー腺 小脳 膵臓 血液 大脳 副腎 皮膚 精巣 投与 48 時間後 精巣上体 褐色脂肪 顎下腺 小脳 胃 胃内容物 ハーダー腺 腎臓 皮膚 図 2.6.4.4.2-1 雄性ラットに 10 mg/kg の[Propylamine-2-14 C]シナカルセト塩酸塩を 単回経口投与した時の全身オートラジオグラム 20
2.6.4.4.3 たん白結合
2.6.4.4.3.1 血漿たん白結合（試験番号：PK0302）
･･････････････
資料 5.3.2.1-1
【試験材料及び試験方法】 被験物質：[Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセト塩酸塩 試験系 ：Sprague-Dawley 系ラット（雄性）のプール血漿、カニクイザル（雄性）及びヒト（男 女）の個体別血漿及び HSA 試験方法：平衡透析法によりたん白結合率を算出した。 【試験成績】 25、100 及び 400 ng/mL におけるたん白結合率は、ラット血漿で 96.33～97.67%、サル血漿 で 94.00～97.00%であった。ヒト血漿では男性で 96.67～97.67%及び女性で 94.33～97.67%であ り、HSA では 98.00～99.00%であった（表 2.6.4.4.3.1-1）。ラット、サル及びヒト血漿における たん白結合率に濃度依存的な変動及び種差は認められなかった。更に、ヒト血漿において性差 はないことが示された。HSA に対して高い結合率を示したことから、シナカルセト塩酸塩は、 ヒトに投与された場合、主に血漿たん白のアルブミンに結合するものと考えられた。 表 2.6.4.4.3.1-1 各種血漿における[Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセトのたん白結合率 血漿たん白結合率（%） [Naphthalene-1,4,5,8-14C] シナカルセト濃度 （ng/mL） ラットa サル ヒト（男性） ヒト（女性） HSA a 25 96.33 ± 1.53 94.00 ± 0.00 96.67 ± 2.31 94.33 ± 3.79 98.00 ± 1.00 100 97.67 ± 0.58 97.00 ± 0.00 97.67 ± 0.58 97.00 ± 1.00 99.00 ± 0.00 400 97.33 ± 0.58 96.00 ± 0.00 97.67 ± 0.58 97.67 ± 0.58 99.00 ± 0.00 n=3、平均値±標準偏差（a：triplicate）2.6.4.4.3.2 結合部位の同定（試験番号：PK0307）
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資料 4.2.2.3-2
【試験材料及び試験方法】 試験系 ：HSA 試験方法：精製たん白である HSA を用い、アルブミンの薬物結合サイトに対する特異的蛍光 プローブの置換現象によりシナカルセトのたん白結合部位を推定した。 【試験成績】 シナカルセトは、HSA のサイト II の蛍光プローブであるダンシル-L-プロリンに対して、HSA のサイト II の陽性対照薬であるイブプロフェンと同様に、濃度依存的に相対蛍光強度（F/F0） を減弱させた（図 2.6.4.4.3.2-1）。HSA のサイト II における薬物の置換が認められたことから、 シナカルセトは HSA のサイト II に対する親和性が高いことが示唆された。 21ワルファリン（サイトⅠ） 0 20 40 60 80 100 120 140 0 20 40 60 相対 蛍光 強度 （F/ F0 、% ） シナカルセト イブプロフェン フェニルブタゾン ダンシル-L-プロリン（サイトⅡ） 0 20 40 60 80 100 120 140 0 20 40 60 シナカルセト イブプロフェン フェニルブタゾン シナカルセト又は対照物質濃度(µmol/L) 図 2.6.4.4.3.2-1 ヒト血清アルブミンの結合サイト特異的プローブに対する シナカルセト及び対照物質の影響 （n=3、平均値±標準偏差） 22
2.6.4.4.4 ラットにおける胎児移行性（試験番号：
86-58）
････
資料 4.2.2.3-3
【試験材料及び試験方法】 被験物質：[Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセト塩酸塩 使用動物：Sprague-Dawley 系ラット（妊娠 17 日）、1 時点雌 3 匹 投与量 ：1 mg/kg 投与方法：[Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセト塩酸塩を単回経口投与 測定方法：投与 1、6、24 及び 72 時間後における組織内放射能濃度を測定又はオートラジオグ ラムを作製した。 【試験成績】 母動物の組織内放射能濃度は、多くの組織で投与 6 時間後に最高値を示し、6 時間後以降は 血漿中放射能濃度の低下に伴い減少した（表 2.6.4.4.4-1）。また、卵巣、羊膜、乳腺及び胎盤 は、血漿中に比較して高い放射能濃度を示したが、血漿中放射能濃度の低下に伴い減少した。 胎児の組織内放射能濃度は母動物の血漿中放射能濃度に比較して低く、母動物の血漿中放射能 濃度の低下に伴い減少した。 表 2.6.4.4.4-1 妊娠ラットに [Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセト塩酸塩を 1 mg/kg 単回経口投 与した時の母動物及び胎児組織内放射能濃度 放射能濃度（ng 14C-シナカルセト当量/g or mL） 組織 1 時間a 6 時間 24 時間 72 時間 血液 36.1 64.1 ± 4.0 20.4 ± 3.5 4.9 ± 0.1 血漿 44.1 92.9 ± 4.7 28.3 ± 7.4 2.3 ± 0.1 脳 26.3 45.1 ± 2.2 9.1 ± 2.6 2.4 ± 0.6 心臓 87.9 82.1 ± 8.8 12.0 ± 2.4 3.3 ± 0.5 肺 482.3 1218.0 ± 171.4 37.3 ± 4.8 7.8 ± 0.7 肝臓 740.0 794.6 ± 73.0 133.4 ± 12.8 68.4 ± 10.5 腎臓 267.0 526.1 ± 4.0 95.4 ± 20.8 44.6 ± 4.5 副腎 281.5 290.6 ± 65.8 27.5 ± 1.1 10.8 ± 0.5 脾臓 159.9 261.8 ± 77.0 21.2 ± 3.7 10.7 ± 3.1 骨髄 85.2 175.1 ± 59.7 22.2 ± 3.0 ND 甲状腺 106.9 120.9 ± 17.0 16.6 ± 2.7 ND 眼球 9.3 25.4 ± 3.7 11.3 ± 1.4 2.2 ± 0.2 ハ－ダー腺 72.9 411.7 ± 74.2 236.5 ± 33.5 75.2 ± 8.2 乳腺 57.2 195.8 ± 2.6 37.7 ± 6.1 6.4 ± 1.3 胎盤 48.0 105.4 ± 7.1 21.8 ± 3.2 8.0 ± 1.7 子宮 33.2 82.6 ± 2.9 26.9 ± 5.2 4.2 ± 0.6 卵巣 202.1 275.9 ± 89.5 26.4 ± 1.8 7.6 ± 1.4 羊水 1.3 3.0 ± 0.6 ND 3.3 ± 1.5 母動物 羊膜 57.5 168.2 ± 15.3 107.8 ± 10.6 48.0 ± 3.9 血液 11.7 21.8 ± 0.9 7.4 ± 0.4 ND 脳 17.5 34.3 ± 4.2 3.2 ± 0.9 ND 心臓 33.1 29.6 ± 4.9 ND ND 肺 22.7 34.0 ± 4.4 8.8 ± 1.9 2.2 ± 0.1 肝臓 33.1 53.2 ± 8.7 7.6 ± 1.1 2.7 ± 0.1 腎臓 ND 46.7 ± 26.1 ND ND 胎児 全身 15.7 29.5 ± 3.2 8.9 ± 2.3 2.5 ± 0.1 n=3、平均値±標準偏差（a：n=2、平均値）ND：検出限界未満 23
2.6.4.5 代謝
2.6.4.5.1 各種動物肝ミクロゾームにおける代謝プロファイル比較（試験番号：PK
#100155、103684）
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資料 5.3.2.2-1, 2
【試験材料及び試験方法】 被験物質：[Propylamine-2-14 C]シナカルセト塩酸塩 試験系 ：マウス（雄）、ラット（雌雄）、イヌ（雌雄）、ウサギ（プール）、サル（雌雄）及び ヒト（プール）の肝ミクロゾーム 試験方法：肝ミクロゾームに[Propylamine-2-14 C]シナカルセト塩酸塩を添加し、インキュベー ション後の放射性成分をラジオ HPLC 法で分離し、プロファイルを比較した。 【試験成績】 [Propylamine-2-14C]シナカルセトはマウス、ラット、イヌ、ウサギ、サル及びヒトの肝ミク ロゾームにおいて NADPH 依存的に代謝され、複数の代謝物を生成した。HPLC クロマトグラ ムの比較から、イヌを除いた動物肝ミクロゾームにおいて、ヒト肝ミクロゾームで生成する代 謝物はすべて生成することが確認された。マウス、ラット及びサル肝ミクロゾームでは、ヒト で生成しなかった代謝物が更に 1～2 種類生成した。マウス、ラット、サル肝ミクロゾームで 生成する主代謝物は、ヒト肝ミクロゾームで生成する主代謝物と同じであった。一方、イヌ及 びウサギ肝ミクロゾームで生成する主代謝物は、ヒト肝ミクロゾームでも生成するがヒトの主 代謝物とは異なるものであった。また、ラット、イヌ及びサル肝ミクロゾームで生成する代謝 物に、性差は認められなかった。 24
2.6.4.5.2 代謝酵素の推定（試験番号：PK0207、PK9907、PK0202、PK0209）
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資料 4.2.2.4-5, 5.3.2.2-3, 4, 5
【試験材料及び試験方法】 被験物質 ：非標識体又は[Propylamine-1-14 C]シナカルセト塩酸塩 試験系 ：ヒト肝ミクロゾーム、ヒト CYP 発現系ミクロゾーム 試験方法 ：非標識体の試験では、ヒト肝ミクロゾーム又はヒト CYP 発現系ミクロゾームを使 用して、シナカルセトの減少率から代謝活性を算出した。阻害試験は、シナカルセ ト塩酸塩と抗 CYP 分子種抗体又は特異的阻害剤の共存下で代謝反応を実施した。 シナカルセトは HPLC 法又は LC-MS/MS 法で測定した。標識体を用いた試験では、 個体別ヒト肝ミクロゾームを用いて、[Propylamine-1-14 C]シナカルセト塩酸塩の in vitro 代謝反応を行い、放射能濃度を TLC-バイオイメージングアナライザーで測定 した。 【試験成績】 1）ヒト肝ミクロゾームを用いた試験 シナカルセト濃度 0.5～25 µmol/L の範囲におけるシナカルセトの代謝活性について Eadie-Hofstee プロットを用いて解析を行ったところ、高親和性領域と低親和性領域からなる二 相性のプロットを示した。 ヒト肝ミクロゾーム画分に各抗 CYP 分子種抗体及び各 CYP 分子種特異的阻害剤を添加した in vitro 代謝試験を実施した。シナカルセト濃度 0.1 µmol/L の時は、CYP3A4、CYP2D6 及び CYP1A2 の 3 分子種で、シナカルセト濃度 8 µmol/L の時は CYP1A2 及び CYP3A4 の 2 分子種 で、シナカルセトの代謝が阻害された（表 2.6.4.5.2-1）。 また、各 CYP 分子種活性と[Propylamine-1-14 C]シナカルセトの代謝活性値の相関性を確認し たところ、CYP1A2、CYP2B6 及び CYP3A4 の代謝活性に対し有意な相関を示した（表 2.6.4.5.2-2）。 2）ヒト CYP 発現系ミクロゾームを用いた試験 ヒト CYP 発現系ミクロゾーム（CYP1A2、2A6、2B6、2C8、2C9、2C18、2C19、2D6、2E1、 3A4 及び 4A11）を用いて、シナカルセトの代謝に関与する分子種の推定を行った。その結果、 CYP1A2、CYP2B6、CYP2C19 及び CYP2D6 で相対的に高い活性が認められた（図 2.6.4.5.2-1）。 これらの高い活性が認められた分子種に加えて、肝臓中の発現量が多く、多くの薬剤を代謝し 薬物相互作用の原因となりうる CYP 分子種である CYP3A4 について、ミカエリス定数（Km） を算出したところ、シナカルセトの各分子種に対する Kmは CYP2D6、CYP3A4、CYP2C19、 CYP1A2、CYP2B6 の順に小さいことが示された（表 2.6.4.5.2-3）。 25表 2.6.4.5.2-1 ヒト肝ミクロゾームによるシナカルセトの代謝に対する抗 CYP 抗体及び CYP 特異 的阻害剤の影響 シナカルセト濃度 （µmol/L） 0.1 8 阻害率（%） 分子種 抗体 阻害剤 抗体 阻害剤 阻害剤、濃度（µmol/L） CYP1A2 12.3a 51.5 17.7 a 54.7 フラフィリン 20 CYP2A6 ND ND ND 5.0 トラニルシプロミン 2 CYP2B6 NE 7.5 NE 18.5 チオテパ 50 CYP2C9 1.3 6.6 6.5 12.3 スルファフェナゾール 50 CYP2C19 9.5 14.9 ND 13.9 オメプラゾール 10 CYP2D6 55.2 33.7 ND 3.4 キニジン 5 CYP2E1 7.7 1.0 0.9 2.2 DDC 38 40.3 41.5 トロレアンドマイシン 50 CYP3A4 33.2 34.6 24.1 44.0 ケトコナゾール 5 CYP 特異的抗体は、大腸菌を用いて発現したヒト CYP を精製し、得られた精製物を抗原としてウサギに免疫して作成した ポリクローナル抗体を購入して使用した。 ND：反応阻害率が 0%以下 NE：測定実施せず DDC：ジエチルジチオカルバミン酸ナトリウム三水和物 a：CYP1A1 も阻害する 表 2.6.4.5.2-2 [Propylamine-1-14 C]シナカルセトの代謝活性と各 CYP 分子種活性との相関性 分子種 代謝反応 相関係数 CYP1A2 カフェイン N3-脱メチル化反応 0.641* CYP2A6 クマリン 7-水酸化反応 0.149 CYP2B6 （S）-メフェニトイン N-脱メチル化反応 0.728* CYP2C9 トルブタミド-メチル水酸化反応 0.298 CYP2C19 （S）-メフェニトイン 4’-水酸化反応 0.082 CYP2D6 デキストロメトルファン O-脱メチル化反応 0.130 CYP2E1 クロルゾキサゾン 6-水酸化反応 0.236 CYP3A4 デキストロメトルファン N-脱メチル化反応 0.666* *：P<0.01（Pearson の相関分析） 表 2.6.4.5.2-3 CYP 発現系ミクロゾームにおけるキネティックパラメータ
分子種 Km（µmol/L） Vmax（nmol/min/nmol CYP）
CYP1A2 30.5 32.8
CYP2B6 113 53.9
CYP2C19 18.4 21.3
CYP2D6 0.0813 0.280 CYP3A4 5.50 0.412 CYP 発現系は、ヒト CYP の相補的 DNA（cDNA）及び NADPH P450 レダクターゼの cDNA を組み込んだバキュロウィルス
感染昆虫細胞から調製されたミクロゾームを購入して使用した。チトクローム b5 は共発現していない。
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0
CY P1A2 CY P2A6 CY P2B6 CY P2C8 CY P2C9 CY P2C18 CY P2C19 CY P2D6 CY P2E1 CY P3A4 CY P4A11
シナカルセト代謝活性（ nmol /m in /n mol C Y P ） ND 図 2.6.4.5.2-1 CYP 発現系ミクロゾームによるシナカルセトの代謝活性 （duplicate、平均値）ND：検出限界未満
CYP 発現系は、ヒト CYP の相補的 DNA（cDNA）及び NADPH P450 レダクターゼの cDNA を組み込んだバキュロウィルス 感染昆虫細胞から調製されたミクロゾームを購入して使用した。チトクローム b5は共発現していない。
2.6.4.5.3 In vitro 試験の代謝物構造解析（試験番号：PK0305、B000848）
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資料 4.2.2.4-6, 5.3.2.2-6
【試験材料及び試験方法】 被験物質：非標識体又は[Naphthalene-1,4,5,8-14 C]シナカルセト塩酸塩 試験系 ：ヒト CYP 発現系（バキュロウィルス感染昆虫細胞発現系ミクロゾーム、ヒト B-リ ンパ芽球様発現系ミクロゾーム、大腸菌発現系）及びヒト肝ミクロゾーム 試験方法：ヒト CYP 発現系及びヒト肝ミクロゾームを用いた in vitro 代謝反応により生成、単 離した代謝物について、液体クロマトグラフィー/質量分析法、LC-MS/MS 法及び 核磁気共鳴スペクトル法で構造解析した。 【試験成績】 ヒト CYP 発現系（バキュロウィルス感染昆虫細胞発現系ミクロゾーム）を用いた in vitro に おける代謝により生成する代謝物の構造を解析した結果、シナカルセトの一部は、CYP3A4 に より N-脱アルキル化反応が進行し、R-NEA、TFPA 及び PAFM へ代謝されると推察された。 また、シナカルセトの一部は、3’,4’-diOH 及び 5’,6’-diOH へ代謝されると推定され、それぞ れに立体異性体の存在が確認された（図 2.6.4.5.3-1）。ヒト B-リンパ芽球様発現系ミクロゾー ム及びヒト CYP 大腸菌発現系では CYP1A2、CYP2C19 及び CYP2D6 により、シナカルセトよ り分子量が 16 増加したエポキシドと推定される代謝物が生成した。また、ヒトミクロゾーム エポキシドヒドロラーゼを共存させるとエポキシドは検出されないことが判明した。また、こ の酸化反応には位置及び立体選択性が認められ、CYP2D6 及び CYP2C19、CYP1A2 では異な るエポキシドが生成した。以上のことから、シナカルセトの一部は CYP1A2、CYP2C19 及び CYP2D6 により位置及び立体選択的にナフタレン環の 3’,4’位又は 5’,6’位が酸化され、エポキ シドを形成した後、引き続きエポキシドヒドロラーゼによりエポキシドが開環し、3’,4’-diOH 及び 5’,6’-diOH へ代謝されるものと推察された。 N H H F F F CH3 OH OH N H H F F F CH3 OH OH N H H F F F CH3 OH OH N H H F F F CH3 OH OH 5' 4' 5' 3' 6' 3' 4' 6' 図 2.6.4.5.3-1 ヒト肝ミクロゾームにより生成する diOH の立体異性体 28
2.6.4.5.4 ラットにおける初回通過効果（試験番号：PK0108）
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資料 4.2.2.4-1
【試験材料及び試験方法】 使用動物：Sprague-Dawley 系ラット（投与時 8 週齢）、1 群雄 4 匹 投与量 ：1 mg/kg 投与方法：シナカルセト塩酸塩を尾静脈内、上行腸間膜静脈内及び十二指腸内投与 試験方法：偽手術を施した後、尾静脈より単回投与した群（静脈内投与群）、上行腸管膜静脈 より単回投与した群（上行腸間膜静脈内投与群）、及び十二指腸に単回投与した群 （十二指腸内投与群）の血漿中シナカルセト濃度を LC-MS/MS 法にて測定した。 【試験成績】 初回通過効果を受ける部位及びその程度を明らかにすることを目的として、ラットにシナカ ルセト塩酸塩を尾静脈内、上行腸間膜静脈内又は十二指腸内投与し、その血漿中シナカルセト 濃度より肝及び消化管における F を算出し、初回通過効果を検討した。上行腸間膜静脈内及び 十二指腸内投与群における血漿中濃度は、いずれも尾静脈内投与群に比較して低く推移した （図 2.6.4.5.4-1）。更に、上行腸間膜静脈内及び十二指腸内投与群におけるクリアランス（CL） はほぼ同等であり、初回通過効果における消化管の寄与は認められなかったことから、シナカ ルセト塩酸塩は主に肝で初回通過効果を受けることが示された（表 2.6.4.5.4-1）。 消化管 肝臓 循環血 十二指腸内投与 門脈 上行腸間膜静脈内投与 静脈内投与 Ftot: 6.70% Fh : 5.76% Fg: 116% 0.1 1 10 100 1000 10000 0 2 4 6 8 10 投与後経過時間（時間） 血漿中シ ナ カ ルセト 濃度（ ng/ m L ） 静脈内投与群 上行腸間膜静脈内投与群 十二指腸内投与群 図 2.6.4.5.4-1 各投与群における血漿中濃度推移及びバイオアベイラビリティ 血漿中濃度推移（n=4、平均値±標準偏差） Ftot：十二指腸内投与時の利用率 Fh：肝臓における利用率 Fg：消化管における利用率 表 2.6.4.5.4-1 各投与群における薬物動態パラメータ 投与群 AUC（ng･h/mL） CL（L/h/kg） 静脈内 762 ± 230 1.40 ± 0.40a 上行腸間膜静脈内 44.6 ± 12.3 24.3 ± 8.9b 十二指腸内 51.5 ± 17.5 20.9 ± 6.0c n=4、平均値±標準偏差 a：静脈内投与時の全身クリアランス b：上行腸間膜静脈内投与時のクリアランス c：十二指腸内投与時のクリアランス 29
