骨 髄 増 殖 性 疾 患 並 び に骨 髄 異 形 成症 候 群
にお け るEndogenous
CFU-Cの
検 討
岡山大学 医学 部 第二 内科 学教 室(指 導:木 村郁 郎教 授)
村
瀬
敏
夫
(平成6年2月28日 受 稿)
Key words:骨 髄 増 殖 性 疾 患,骨 髄 異 形 成 症 候 群, Endogenous CFU-C 慢 性 骨 髄 単 球 性 白血 病 緒 言 骨 髄 増 殖 性 疾 患(Myeloproliferative dis order: MPD)は,慢 性 骨 髄 性 白 血 病(Chronic myelogenous leukemia: CML),真 性 多血 症 (Polycythemia vera: PV),本 態 性 血 小 板 血 症(Essential thrombocythemia: ET),原 発 性 骨 髄 線 維 症(Primary myelofibrosis: PMF) な どの 疾 患 を含 む 概 念 で, 1951年 にDameshek1) に よ っ て 慢 性 骨 髄 増 殖 性 疾 患(Chronic myelo proliferative disorder: CMPD)と し て 提 唱 さ れ た.本 症 候 群 は 赤 血 球,顆 粒 球,血 小 板 な ど の 骨 髄 系 造 血 細 胞 の い ず れ か,あ る い は す べ て が 緩 徐 に 増 加 す るが,一 般 に 血 球 の 分 化 ・成 熟 障 害 は み ら れ ず,比 較 的 緩 慢 な 経 過 を と る こ と を特 徴 とす る.現 在, MPDはG 6-PDア イ ソ ザ イ ム を用 い た 研 究2) 3) 4) 5) 6),造血 幹 細 胞 の 染 色 体 分 析7)か ら 多 能 性 造 血 幹 細 胞 の 異 常 に 基 づ く clonal hemopathyで あ る こ とが 明 らか に され て い る. 骨 髄 異 形 成 症 候 群(Myelodysplastic syn drome: MDS)は,主 に 高 齢 者 に 認 め ら れ る こ と,末 梢 血 で は 血 球 減 少,骨 髄 は 正 形 成 な い し は過 形 成 で 血 球 形 態 に 異 常 が 認 め ら れ る こ と, そ の 臨 床 経 過 は 比 較 的 慢 性 で 種 々 の 頻 度 で 白血 病 化 す る こ と な どの 特 徴 を 有 す る. 1953年Block ら8)によ り初 め て 前 白血 病 状 態 と い う概 念 と して 臨 床 に 導 入 さ れ,現 在 はFrench-American-British(FAB)分 類 の 中 でMDSと し て位 置 づ け られ て い る9).血球 の 量 的 異 常 以 外 に 形 態 学 的, 機 能 的 異 常 が 各 血 球 系 に 認 め ら れ る こ と か ら 多 能 性 造 血 幹 細 胞 の 異 常 に 基 づ くclonal hemopathyと 考 え られ, G6-PDア イ ソ ザ イ ム を用 いた 研 究10),造 血 幹 細 胞 の 染 色 体 分 析11)か ら も そ の 可 能 性 が 強 く示 唆 され て い る. この よ うにMPD並 び にMDSは,と もにclonal hemopathyで あ る こ とか ら そ の 病 因 をめ ぐっ て 幹 細 胞 レベ ル で の 解 析 が な さ れ て き た が, MPD 及 びMDSの 一 部 の 症 例 に お い て はColony stimulating factor(CSF)無 添 加 で 形 成 され る endogenous colonyが 存 在 す る こ とが 報 告 さ れ て い る.そ の 一 つ と し て,真 性 多 血 症(PV)に お い て エ リス ロ ポ イ エ チ ン(Erythropoietin: Epo)無 添 加 で 赤 芽 球 系 コ ロ ニ ー を 形 成 す る,い
わ ゆ るEndogenous colony forming unit erythroid(E-CFU-E)の 出 現 はMPDの 病 態 解 析 を進 め る う え で 興 味 あ る所 見 と し て 注 目 さ れ た12) 13).す な わ ち培 地 中 にEpoを 加 え な く と もCFU-Eが 形 成 さ れ, Epoを 加 え る と そ の 濃 度 に 応 じて コ ロ ニ ー 形 成 数 が 増 加 す る.そ の 機 序 と し て は培 養 液 中 に わ ず か に 存 在 す るEpoに 鋭 敏 に 反 応 し て コ ロ ニ ー を生 ず るpopulationが 存 在 す るか,あ る い はEpoな し で も 自律 的 に 増 殖 し う る赤 芽 球 前 駆 細 胞 が 存 在 す る か,な ど が 推 定 さ れ た が,未 だ に 問 題 と して 残 さ れ て い る と こ ろ で あ る14).一 方,顆 粒 球 系 で は, CSF無 添 加 で 顆 粒 球 マ ク ロ フ ァー ジ系 コ ロ ニ ー を 形 成 す るEndogenous colony foming unit in cul ture(E-CFU-C)が 種 々 の 疾 患 で 出 現 す る こ と が 報 告 さ れ て い る. 1974年Altmanら15)が 若 年
型 慢 性 骨 髄 性 白血 病(Juvenile CML: JCML) の2例 に お い て 末 梢 血,骨 髄 血 でCSF無 添 加 で も 多数 の コ ロ ニ ー が 形 成 さ れ,そ の ほ と ん ど が 単 球 コ ロニ ー で あ った と報 告 し,そ の後PMF16), 慢 性 好 中 球 性 白血 病(CNL)17),慢 性 骨 髄 単 球 性 白血 病(CMML)18) 19), CML20)な ど で もE-CFU-Cの 報 告 が な され た,し か し未 だ にE-CFU -C形 成 の 臨 床 的 意 義 は 明 らか で な く,そ の 機 序 に つ い て も,幹 細 胞 のCSFに 対 す る感 受 性 の 亢 進21),内 因 性CSFの 分 泌 亢 進19) 22)などが 推 定 さ れ て い るが 明 らか で な い.今 回著 者 はMPD並 び にMDSに お け るE-CFU-C形 成 能 を検 討 し, E-CFU-C形 成 症 例 に つ い て 臨 床 的 解 析 を加 え る と と も にE-CFU-C形 成 機 序 に つ い て も検 討 を加 え, MPD並 び にMDSの 病 態 解 析 へ の 一 助 とせ ん と し た. 対 象 と 方 法 1,対 象 症 例 1988年 か ら1991年 ま で に 岡 山 大 学 第2内 科 及 び 関 連 病 院 を 受 診 し たMPD 62例, MDS 25例 を 対 象 と し た 。MPDの 内 訳 はCML 44例[慢 性 期(chronic phase: CP)24例,移 行 期(accere lated phase: AP)11例,急 性 転 化(blastic crisis: BC)9例], PV 9例,ET 2例, PMF 2例, CNL 1例, JCML 2例,分 類 不 能 型 骨
髄 増 殖 性 疾 患(Unclassified myeloprolifer ative disorder: UMPD)2例 で あ っ た.ま た MDSの 内 訳 は, Refractory anemia with excess of blasts(RAEB)5例, RAEB in
transformation(RAEBt)な い しMDSか ら移 行 し たovert leukemia 10例, CMML 10例 で あ っ た. CML-CPの う ち1例 はAPに, 5例 はBCに 移 行 し, RAEBの う ち2例 はRAEBt へ と移 行 した. MPDの 年 齢 構 成 は7∼83歳(中 央 値: 54歳),男 女 比 は37:25で あ り,MDSで は38∼81歳(中 央 値: 65歳), 19:6で あ っ た. 2.研 究 方 法 1) MPD並 び にMDSに お け るE-CFU-C形 成 能 の 検 討 イ ン フ ォー ム ド コ ン セ ン トを得 た 後,末 梢 血 な い し は 骨 髄 血 をヘ パ リン 加 で 採 取 し, Ficoll-Hypaque(HISTOPAQUE-1077; 1.077g/ul,
Sigma, St. Louis, MO)を 用 い た 比 重 遠 心 法 に よ り単 核 球 を分 離 し, 20%牛 胎 児 血 清(Fetal calf serum; FCS, Flow General Company, McLean, VA), enriched McCOY's5A培 地
(GIBCO, Gland Island, NY)を 含 む0.3%軟 寒 天 中 に 細 胞 密 度2×105個/mlで 埋 め 込 み,CSF 無 添 加 ま た は 対 照 と し てCSF添 加 の 条 件 下 で 37℃, 5%CO2に て10日 間 培 養 した 後 に 構 成 細 胞 40個 以 上 の 細 胞 集 団 を コ ロ ニー と して 算 定 し た. CSF添 加 の 条 件 下 で は, CSF-chugai(中 外 製 薬,東 京)50U/ml,ま た はPHA-LCM〔PHA stimulated lymphocy teconditioned medium:健 常 人 単 核 球 を106個/mlの 細 胞 密 度
で1% PHA(Difco, Detroit, MI)10%FCS 加 で1週 間 液 体 培 養 した培 養 上 清 〕20%v/vを 加
え る か, recombinant human granulocyte-macrophage colony stimulating factor
(rhGM-CSF, Genzyme corporation, Boston, MA)2ng/mlを 添 加 し た. PHA-LCMを 添 加 した 時 に は,微 量 混 入 して い るPHAのT cell へ の 影 響 を除 くた め,羊 赤 血 球 ロゼ ッ ト形 成 法 に よ り単 核 球 か らT cellを 除 去 した.な おCSF を 添 加 して も コ ロ ニ ー が 形 成 さ れ な か っ た 時 に は 対 象 か ら 除 外 し た. CSF無 添 加 で 形 成 さ れ た コ ロ ニ ー(Endogenous colony)に つ い て は, メ イ ギ ム ザ 染 色,ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ 染 色,エ ス テ ラー ゼ 二 重 染 色 を 施 行 し,コ ロ ニ ー 構 成 細 胞 を 検 討 した. 2) E-CFU-C形 成 能 に 及 ぼ す 貪 食 細 胞 及 びT cellの 除 去 の 影 響 E-CFU-Cの 形 成 を認 め た5例(症 例7, 10, 11, 12, 13)に つ い て は,前 述 の 比 重 遠 心 に よ り分 離 さ れ た 単 核 球 か ら貪 食 細 胞 及 びT cellを 除 去 し, E-CFU-C形 成 能 に 及 ぼ す 影 響 を検 討 し た.貪 食 細 胞 の 除 去 は単 核 球 浮 遊 液 に1/10容 の カ ル ボ ニ ー ル 鉄(KAC-2,日 本 抗 体 研 究 所, 高 崎)を 加 え37℃, 5%CO2の 培 養 器 中 に 時 々 撹 判 し な が ら60分 間 反 応 させ た 後 に 同 様 に 比 重 遠 心 に よ り行 っ た. T cellの 除 去 は 羊 赤 血 球(日 本 ラ ム)とEロ ゼ ッ ト を 形 成 さ せ,さ ら に Ficoll-Hypaque上 に重 層 し単 核 球 層 を分 離 す る こ とに よ り行 っ た.貪 食 細 胞 及 びT cell除 去 の 有 無 で4つ の 単 核 球 分 画 に 分 け,そ れ ぞ れ の分
表1 骨 髄 増 殖 性 疾 患(MPD)に お け る Endogenous colony形 成 能
画 でrhGM-CSF 2ng/ml添 加, recombinant human granulocyte colony stimulating factor
(rhG-CSF,中 外 製 薬,東 京)50ng/ml添 加, 或 い は 無 添 加 の 条 件 下 で10日 間 軟 寒 天 培 養 を 施 行 し,形 成 さ れ た コ ロ ニ ー に つ い て は エ ス テ ラ ー ゼ ニ 重 染 色 を 施 行 し た . 3) E-CFU-C形 成 能 に 及 ぼ す 各 種 抗cytokine 抗 体 の 影 響 E-CFU-C形 成 を 認 め た1例(症 例10)に つ い て は,抗GM-CSF抗 体(mouse anti-human GM-CSF monoclonal antibody; Genzyme
corporation, Boston, MA),抗G-CSF抗 体 (rabbit anti-human G-CSF polyclonal anti-body: Genzyme corporation, Boston, MA), 抗M-CSF抗 体(rabbit anti-human macro phage colony stimulating factor polyclonal antibody; Genzyme corporation, Boston, MA),抗IL-1抗 体(rabbit anti-human interleukin-1 polyclonal antibody; Genzyme corporation, Boston, MA),抗IL-6抗 体
(rabbit anti-human interleukin-6 poly clonal antibody; Genzyme corporation, Bos ton, MA)を1/100(v/v%)添 加 し て, colony assayを 行 っ た. 4)末 梢 血 単 核 球 培 養 上 清 中 のcytokine濃 度 測 定 E-CFU-Cの 形 成 を 認 め た4例(症 例7, 10, 12, 13)と 健 常 人7例 に つ い て,末 梢 血 単 核 球 表2 骨 髄 異 形 成 症 候 群(MDS)に お け る Endogenous colony形 成 能 培 養 上 清 中 のcytokine濃 度 を 測 定 し た.す な わ ち 末 梢 血 をヘ パ リ ン加 採 血 し比 重 遠 心 に よ り 単 核 球 を分 離 した 後 に, 10%FCS加enriched McCOY's5A培 養 液 中 で 細 胞 密 度1×105個/ml と し37℃, 5%CO2の 条 件 下 で7日 間 液 体 培 養 し た.比 重 遠 心 に よ り培 養 上 清 を回 収 し, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-1β, IL-6濃 度 を 測 定 した. G-CSF濃 度 測 定 はRadioimmunoassay(RIA) 法 で, M-CSFはHanamuraら の 方 法23)に従 い 測 定 し た.そ の 他 のcytokineはEnzyme-linked immuno-sorbent assay(ELISA)法 で 行 っ た. 結 果 1. MPD並 び にMDSに お け るEndogenous CFU-C(E-CFU-C)形 成 能 の 検 討 MPDに お け るE-CFU-C形 成 能 に つ い て は 表 1に 示 す 如 くで, CML-AP 11例 中2例, CML-BC 9例 中1例, JCML 2例 中2例, UMPD 2 例 中1例 に 認 め ら れ た が, CML-CP, PV, ET, PMF, CNLで は 認 め られ ず, MPD全 体 で は 62例 中6例 に そ の 形 成 が 認 め られ た. MDSに お け るE-CFU-C形 成 能 は 表2に 示 す 如 くで, CMML10例 中7例, RAEBtな い しはovert leukemia 10例 中1例 に 認 め られ たが, RAEBで は 認 め ら れ ず, MDS全 体 で は25例 中8例 に そ の 形 成 が 認 め ら れ た.な お,病 像 の 変 化 と と も に 経 時 的 にcolony assayを 施 行 し得 た10例 に つ い てE-CFU-C形 成 能 を み る と, CML-CPか ら CML-APに 移 行 し た1例, CML-CPか らCML -BCに 移 行 した5例 , RAEBか らRAEBtに 移 行 し た2例 で は,移 行 後 もE-CFU-C形 成 を 認 め な か っ た が, CML-BCとRAEBtの2例 で は 表3に 示 す 如 く,病 態 の 悪 化 と と
もにE-表3 病 勢の 悪 化 に伴 うE-CFU-C形 成 能 の 増 強 表4 E-CFU-C形 成 症 例 の コ ロ ニ ー 形 成 数,及 び コ ロ ニ ー 細 胞 構 成 症 例10, 11で は,末 梢 血 か ら はE-CFU-Cは 形 成 さ れ な か っ た.
1) granulocyte
colony
2) granulocyte-macrophage
colony
3) granulocyte-eosinophil
colony
4) monocyte-macrophage
colony
CFU-Cの 形 成 が 認 め ら れ た. E-CFU-Cの コ ロ ニ ー 数 と細 胞 構 成 は 表4に 示 す 如 くで,コ ロ ニ ー 数 は2∼164個/2×105cellsと ,い ずれ もCSF を添 加 し た 時 よ り も少 な か っ た.ま た コ ロ ニ ー 構 成 細 胞 を 染 色 性 に よ り検 討 し た が,そ の 結 果 は 表4に 示 す 如 くで,メ イ ギ ム ザ 染 色 で は 芽 球 様 コ ロ ニ ー は 認 め ら れ ず,す べ て ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ 染 色 陽 性 で あ っ た .さ らに エス テ ラーゼ ニ 重 染 色 性 の 検 討 で は, 10例 は ナ フ トー ルAS-D -ク ロ ロ ア セ テ ー トエ ス テ ラ-ゼ 陽 性 , α-ナ フチ ル プ チ レー ト陰 性 の 顆 粒 球 コ ロ ニ ー(図1-a) 優 位 か 両 者 陽 性 の 顆 粒 球 マ ク ロ フ ァー ジ コ ロ ニ ー(図1-b)優 位 か で あ っ た が,残 り4例 は 前 者 陰 性,後 者 陽 性 の 単 球 マ ク ロ フ ァー ジ コ ロ ニ ー(図1-c)優 位 で あ っ た . 2. E-CFU-C形 成 例 並 び に 非 形 成 例 に お け る 血 液 所 見 の 比 較 検 討 E-CFU-C形 成 例 並 びに 非 形 成 例 で 末 梢 及 び 骨 髄 血 液 所 見 に つ い て 比 較 検 討 し,特 にE-CFU-C 形 成 例 に つ い て は 血 液 所 見 を表5に 示 し た.末 梢 白 血 球 数 と末 梢 血 あ る い は 骨 髄 血 に お け る E-CFU-C形 成 との 間 に は 相 関 性 は認 め ら れ な か っ た が,末 梢 血 に お い てE-CFU-Cを 形 成 す る 症 例 に つ い て は,末 梢 白血 球 数 が 多 い傾 向 が 認 め ら れ た.一 方,全 症 例 の う ち 末 梢 血 単 球 増 多 (>10%)を 示 し た 症 例 は19例 で そ の う ち12例 にE-CFU-Cが 形 成 さ れ, E-CFU-C形 成14症 例 中11例 で 末 梢 血 単 球 増 多 が 認 め ら れ た.骨 髄 有 核 細 胞 数,末 梢 お よ び 骨 髄 中 の 骨 髄 芽 球 比 率, 末 梢 血 小 板 数,ヘ モ グ ロ ビ ン 濃 度 とE-CFU-C形 成 との 間 に は 相 関 関 係 は 認 め られ な か っ た. 3. E-CFU-C形 成 例 並 び に 非 形 成 例 に お け る核 型 所 見 の 比 較 検 討 核 型 はE-CFU-C形 成 例14例 中9例 で核 型 に つ い て 検 討 し得 た が,そ の 結 果 は 表6に 示 す 如 く で, 5例 に 染 色 体 異 常 が 認 め ら れ た. CMLで は 全 例 でPh1染 色 体 な い しはbcr-abl遺 伝 子 再 構 成 が 認 め ら れ,付 加 的 核 型 異 常 はCPで は24 例 中全 く認 め ら れ ず, APで は11例 中2例, BC で は9例 中3例 に 認 め ら れ た. E-CFU-C形 成 例 で は,症 例3のCML-BCに 付 加 的 核 型 異 常 が 認 め ら れ た. MDSで はRAEB 2例 中2例, RAEBt 8例 中4例, CMML 7例 中3例 に 核 型図1-a.症 例10の 単 球 マ ク ロ フ ァ ー ジ コ ロ ニ ー; α-NB(+), N-ASD-CA(-) 1-b.症 例10の 顆 粒 球 マ ク ロ フ ァ ー ジ コ ロ ニ ー; α-NB(+), N-ASD-CA(+) 1-c.症 例11の 顆 粒 球 コ ロ ニ ー; α-NB(-), N-ASD-CA(+) *α-NB; αナ フ チ ル ブ チ レー トN-ASD-CA;ナ フ トー ル-AS-D-ク ロ ー ロ ア セ テ ー ト 表5 E-CFU-C形 成 症 例 の 血 液学 的所 見 異 常 が 認 め ら れ た. E-CFU-C形 成CMMLで 核 型 に つ い て 検 討 し得 た の は5例 で あ っ た が, そ の う ち症 例9, 13の2例 に 核 型 異 常 を認 め た. E-CFU-Cを 形 成 し た 症 例7のRAEBtに も核 型 異 常 を認 め た. 4. E-CFU-C形 成 例,非 形 成 例 の 生 存 期 間 の 比 較 検 討 E-CFU-C形 成 例14例 中9例 で 経 過 観 察 が 可
表6 E-CFU-C形 成 症 例 の 核 型 所 見 症 例4, 5, 6, 11, 12は 不 能 も し くは 未 施 行 全 症 例 の 核 型 異 常 は, CML-CP 0/24例, AP 2/11例, BC 3/9例(付 加 的 核 型 異 常) RAEB 2/2例, RAEBt 4/8例, CMML 3/7例 で あ っ た. 能 で あ っ た.そ の うちCMMLの1例 は 不 慮 の 事 故 で 追 跡 不 能 で あ っ た が,残 りの8例 は 全 例 原 疾 患 の 増 悪 に よ り死 亡 し て お り,そ の 結 果 を 表7に 示 し た. E-CFU-C形 成 例 全 体 で は,生 存 期 間0.8ケ 月 か ら36ケ 月,平 均 生 存 期 間13.5ケ 月 で あ っ た.疾 患 別 に 生 存 期 間 をE-CFU-C形 成 例 と非 形 成 例 との 間 で 比 較 して み る と, CML-AP に つ い て は疾 患 全 体 で は 平 均11.6ケ 月 で あ っ た の に 対 しE-CFU-Cを 形 成 し た症 例2は4.5ケ 月 で, CML-BCに つ い て は 疾 患 全 体 で は 平 均4.7 ケ 月 で あ っ た の に 対 しE-CFU-Cを 形 成 した 症 例3は1.2ケ 月 でE-CFU-C形 成 例 で 短 い傾 向 が 認 め ら れ た.症 例7のRAEBtはCMMLの 病 態 に 類 似 し て い る の でCMMLに 含 め て 一 括 し た が, CMML全 体 で は 平 均 生 存 期 間 は12.2ケ 月 で生 存 期 間 が0.8ケ 月 か ら36ケ 月 に 広 く分 布 した が, E-CFU-C形 成 例 と非 形 成 例 と の 間 に は 明 ら か な 差 異 は 見 い だ せ な か っ た. 5. E-CFU-C形 成 に 及 ぼ すGM-CSF, G-CSF 添 加 並 び に 貪 食 細 胞, T cell除 去 の 影 響 症 例7, 10, 11, 12, 13に つ い て 検 討 し た が, そ の 結 果 は 図2-a, b, c, d, eに 示 す 如 く で あ っ た, GM-CSFを 添 加 す る こ とに よ り コ ロ ニ 表7 E-CFU-C形 成 症 例 の 生 存期 間,疾 患 ご との 平 均 生 存 期 間1)E-CFU-C形 成 を認 め た時 か ら死 亡 までの期 間2)colony assayか ら 死 亡 ま で の期 間3)症 例7.はCMML類 似 の た め, CMMLに 含 め た. 一 数 は 全 症 例 に お い てE-CFU-C数 よ り も増 加 を示 し,骨 髄 で は146∼26/2×105cells,末 梢 血 で は149-10/2×105cells形 成 さ れ,症 例10(図 2-b)以 外 では2倍 以 上 に 著 増 した.ま たG-CSF を 添 加 す る こ とに よ りコロニー 形 成 数 はE-CFU-C 数 よ り も,症 例13で は 著 増 し(図2-e),症 例 7, 11で は 特 に 貪 食 細 胞 を 除 去 し た分 画 で 顆 粒 球 コ ロ ニ ー を 中 心 に 増 加 し(図2-c, d),症 例 10, 12(図2-a, b)で は 軽 度 減 少 傾 向 が 認 め られ た,貪 食 細 胞 を 除 去 す る と, 5症 例 全 例 で E-CFU-Cの 形 成 は 抑 制 さ れ た.症 例13に お い て はE-CFU-Cは 全 く形 成 さ れ な くな り(図2-e),症 例7, 11, 12に お い て は 著 明 に 抑 制 さ れ 特 に 単 球 マ ク ロ フ ァー ジ コ ロ ニ ー の 形 成 が み ら れ ず(図2-a, c, d),症 例10に お い て は 抑 制 は 軽 度 で あ っ た が 単 球 マ ク ロ フ ァー ジ コ ロ ニ ー の 形 成 は 著 明 に 抑 制 さ れ た(図2-b).ま たT cell除 去 は,全 例 でE-CFU-C形 成 に 影 響 を及 ぼ さ な か っ た. 6. E-CFU-Cに 及 ぼ す 各 種 抗cytokine抗 体 の 影 響 症 例10に お い てE-CFU-Cに 及 ぼ す 各 種 抗 cytokine抗 体 の 影 響 を検 討 し た.そ の 結 果 は 図 3に 示 す 如 くで,抗IL-1抗 体,抗M-CSF抗 体,抗GM-CSF抗 体 の 添 加 に よ りそ れ ぞ れ38.0 %, 53.7%, 62.0%と 抑 制 さ れ,抗G-CSF抗 体 の 添 加 で は104.6%と 影 響 は 認 め られ ず,抗IL -6抗 体 の 添 加 で は174 .0%と やや 増 加傾 向 を示
a:症 例7の コ ロ ニ ー b:症 例10の コ ロ ニ ー c:症 例11の コ ロ ニ ー d:症 例12の コ ロ ニ ー e:症 例13の コ ロ ニ ー 図2 症 例7, 10, 11, 12, 13の コ ロニー 各 症 例 に お い て 貪 食細 胞, T cellの 除去,非 除 去 で4つ の分 画 に分 け,そ れ ぞれ の 分 画 でCSF無 添 加, GM-CSF 2ng/ml, G-CSF 50ng/ml添 加 の条 件 で 形成 され た コ ロニー の結 果 を, GM-CSF添 加 時 の コ ロニ ー 数 に 対す る比 率 で示 した.全 症 例 に お い てGM-CSF添 加 時 の コ ロニ ー 形成 数 は貪 食 細 胞, T cell 除 去 に よ って増 加 した.こ れ は単 核 球 浮 遊 液 中 の幹 細 胞 の 濃度 が細 胞 除 去 に 伴 い 濃縮 され高 ま るが,同 じ 細 胞 濃 度2×105個/mlに 再 調整 して 播種 した ため と考 え られ る.各 々 の分 画 で細 胞 除 去 の コロニー 形 成 能 に 与 え る影 響 を評 価 しや す くす る ため に, GM-CSF添 加 時 の 形成 コ ロニー数 との相 対 的比 率 で比較 した.
図3 症 例10で 各cytokineに 対 す る 抗 体 を 添 加 し て 行 っ たcolony assay 表8 症 例7, 10, 12, 13に お け る末 梢 血 単 核球 培 養 上 清 中のcytokine濃 度(下 段 に対 照 健 常 人7人) し た. 7.末 梢 血 単 核 球 培 養 上 清 中 のcytokine濃 度 の 検 討 症 例 数 の 関 係 か ら統 計 的 処 理 は で き な か っ た が,測 定 結 果 は 表8に 示 す 如 くで, GM-CSF濃 度 は 全 症 例 で135.7∼28.5pg/mlと 健 常 人 で ほ と ん ど 測 定 感 度 以 下 で あ っ た の に 対 し高 値 を示 し た. G-CSF濃 度 は 症 例7で2.44ng/mlと や や 高 値 を示 した が,他 の3症 例 で は 高 値 を示 さ な か っ た. IL-1β 濃 度 は 症 例10で162.8pg/mlと 著 明 な 高 値 を示 した が,他 の3症 例 で は 測 定 感 度 以 下 で あ っ た. IL-6濃 度 は 症 例7, 10, 13で 62,900∼32,500pg/mlと や や 高 値 を示 し,症 例12 で は や や 低 値 を示 し た が,健 常 人 と 比 較 し て 著 変 は 認 め ら れ な か っ た. M-CSF濃 度 は3症 例 で 測 定 し た が,症 例10で621U/mlで あ っ た が,他 の 2例 で は0で あ り,健 常 人 と比 較 し て 低 下 傾 向 が う か が わ れ た. 考 察 MPDとMDSで はE-CFU-Cの 形 成 を 認 め る こ とが あ り,病 態 と の 関 連 か ら注 目 さ れ て い る.今 回 の 検 討 で はCML-AP 11例 中2例, CML-BC 9例 中1例, UMPD 2例 中1例,
JCML 2例 中2例, CMML 10例 中7例, RAEBt 10例 中1例 にE-CFU-Cの 形 成 が 認 め られ, JCML, CMMLに 形 成 さ れ や す い と い う点 で は こ れ ま で の 報 告 とほ ぼ 同 様 で あ っ た.従 来CML-CPで は 顆 粒 球 マ クロ フ ァー ジ系 幹 細 胞 数 は 増 加 し て お り, CFU-Cは 骨 髄 で 正 常 人 の 平 均15倍, 末 梢 血 で 平 均500倍 形 成 さ れ る と して い るに もか か わ ら ず24) 25) 26) 27), E-CFU-Cに 関 して は,今 回 CML-CP 24例 で1例 も形 成 さ れ な か っ た.こ れ ま で の 報 告 で は,骨 髄,末 梢 血 双 方 で そ の 形 成 を 認 め た と の 報 告20)も み ら れ る が,一 方 で は E-CFU-Cの 形 成 は み られ ず 顆 粒 球 マ クロ フ ァ-ジ 系 コ ロ ニ ー の 形 成 に はCSFを 必 要 と し19) 22), PVがEpo無 添 加 でE-CFU-Eを 形 成 す る の と は 異 な る との 報 告 が 多 く24) 28),今回 の 結 果 も同 様 で あ っ た. PVに お い て はE-CFU-Eの 形 成 が 認 め られ な か っ たが,そ の原 因 として は, ①CFU-E は7日 目前 後 に コ ロ ニ ー 形 成 の ピー ク を示 し, そ れ 以 降 は 急 速 に 減 少 し て ゆ くが 今 回 は コ ロ ニ ー 数 の 算 定 を培 養10日 目 に行 っ た こ と, ②CFU -E assayに は 厳 密 な培 養 条 件 が 必 要 と され るが, そ の 一 つ と し て 血 清 ア ル ブ ミン を培 養 液 中 に 添 加 し な か っ た こ と な どが 考 え られ た29) 30).これ ま でMDS造 血 幹 細 胞 に 関 す る研 究 と し て 骨 髄 血 を用 い たCFU-C形 成 能 が 主 に 検 討 さ れ て お り, CMML以 外 で は 正 常 人 に比 しその 形 成 能 が低 率 で あ るこ とが 報 告 され てい る31) 32) 33).一方E-CFU-C形 成 能 に 関 し て は, CMML以 外 のMDSで は, RAEBtか らovert leukemiaへ 移 行 し た 時 点 でE-CFU-C形 成 を 認 め た とい う報 告34)が 1例 な され て い る 以 外 に は報 告 が み ら れ な い. 今 回 の 検 討 で もCMML以 外 の 症 例 で は 総 じて CFU-C形 成 は 低 率 で あ り, E-CFU-C形 成 は CMML類 似 の病 態 を示 すRAEBtの1例, CMML 10例 中7例 に 認 め た がRAEB,上 記 以 外 のRAEBtに は 認 め られ ず, CMML以 外 の MDSで はE-CFU-Cの 形 成 は 認 め ら れ な い と の 従 来 の 報 告 と同 様 の 結 果 で あ っ た19). MPD, MDSに は し ば しば 病 型 移 行 が み られ る が,今 回CML-CPか らAPま た はBCに 移 行 した6症 例 でcolony assayを 施 行 しえ た が, 病 型 移 行 後 新 た にE-CFU-C形 成 が 認 め ら れ る こ とは な か った.し か し前 述 した よ うにCML-CP で はE-CFU-Cは 形 成 さ れ 難 い と考 え ら れ, E-CFU-Cの 形 成 が 認 め ら れ たCML-AP2例, CML-BC 1例 は 病 型 移 行 後 に初 め てE-CFU-C 形 成 能 を獲 得 し た 可 能 性 が 推 察 さ れ る.ま た RAEBか らRAEBt, overt leukemiaへ と病 型 移 行 した 症 例 で もE-CFU-Cの 形 成 を認 め な か っ た.し か しCML-BCの1例 は 急 性 転 化 後 の 初 期 に お い て はE-CFU-Cは 形 成 さ れ な か っ た が 疾 患 末 期 に末 梢 白血 球 数 が 著 増 した 時 期 に 新 た にE-CFU-Cが 形 成 さ れ,さ らに 経 過 と と もに コ ロ ニ ー 数 が 増 加 した.ま たE-CFU-Cを 形 成 し たRAEBtで は 当 初 末 梢 血 に お い て は コ ロ ニー 形 成 が 認 め られ なか ったが,単 球 系 のovert leukemiaへ 移 行 し て ゆ く過 程 でE-CFU-Cが 形 成 さ れ た. MDS, MPDで は 疾 患 末 期 に 白 血 球 数 の 著 増 が しば しば 認 め られ る が,一 部 の 症 例 で は 病 型 移 行 にE-CFU-C形 成 機 構 が 関 与 し て い る可 能 性 を 示 唆 す る 所 見 と し て 興 味 深 い. 血 液 所 見 と の 関 連 性 に つ い て は,末 梢 血 で E-CFU-Cを 形 成 す る症 例 で は末 梢 白血 球 数 が 多 い傾 向 が 認 め られ,前 述 し た よ うに 末 梢 白血 球 数 の 増 加 に 伴 い 新 た にE-CFU-Cの 形 成 ま た コ ロ ニ ー 形 成 数 の 増 加 を示 した 症 例 も認 め られ た. ま た 末 梢 単 球 増 多 がE-CFU-C形 成14例 中11例 に 認 め ら れ,そ の 内 訳 はCMML 7例 以 外 に は JCML 2例, CMML類 似 病 態 を有 す るRAEBt 1例, CML myelomonocytic crisisへ と移 行 途 中 のCML-AP 1例 で あ っ た.こ れ ら の 症 例 で は E-CFU-C形 成 に お い て 単 球 由 来 のCSF(mono kine)の 関 与,す な わ ちautocrineな い し は paracrine増 殖 機 構 が 存 在 す る 可 能 性 が 考 え られ た. CMLで は9; 22転 座,す な わ ちPh1染 色 体 異 常 が95%以 上 に 認 め られ るが35), CPか らAP, BCへ と病 型 移 行 す るの に伴 い付 加 的 核 型 異 常 が 出 現 す る こ とが あ る.こ れ らの 変 化 は しば し ば 臨 床 所 見 及 び 血 液 所 見 に 先 行 す る の で,そ う し た 症 例 で は 核 型 異 常 に 伴 い 何 ら か の 遺 伝 子 が 関 与 し て 急 性 白 血 病 様 の 病 態 に 移 行 す る こ とが 考 え ら れ て い る36). CML-AP 2例, CMLBC 3 例 に 付 加 的 核 型 異 常 を認 め この うちCML-BCの 1例 でE-CFU-Cの 形 成 を 認 め た が,こ の 症 例 で はclonal evolutionに 伴 いE-CFU-C形 成 能
を獲 得 し た 可 能 性 が 推 測 さ れ る. MDSで は 20∼90%に 核 型 異 常 が 認 め られ る と さ れ,特 に RAEBで は80%前 後 と高 率 に数 的 あ るい は構 造 的 異 常 が 報 告 さ れ37),異 常 核 型 を 示 す 症 例 で overt leukemiaへ の 移 行 率 が 高 く生 存 期 間 も短 い とされ てい る38) 39).今 回CMML類 似 のRAEBt で 核 型 異 常 を示 し, overt leukemiaへ 移 行 す る 過 程 でE-CFU-Cの 形 成 が 認 め られ た.さ らに 核 型 を検 討 し得 たE-CFU-C形 成 例 で は10例 中 5例 と高 率 に 核 型 異 常 が 認 め ら れ た こ とは, E-CFU-C形 成 能 と何 らか の 関 連 性 を示 す もの と し て 興 味 深 い. ま た 今 回経 過 を観 察 し得 たE-CFU-C形 成 例 は 全 例 と も原 疾 患 の 増 悪 に よ り死 亡 し て い る. 原 疾 患 の 性 格 か らみ て 当 然 と も考 え ら れ る が, MPD, MDSの う ちE-CFU-C形 成 能 を 示 す 症 例 は 予 後 不 良 とい う こ とが で き よ う.な か で も E-CFU-Cを 形 成 し たCML-AP例, CML-BC 例 は,同 じ病 態 の 平 均 生 存 期 間 に 比 較 して 短 く, CMLに お い てE-CFU-C形 成 能 を 認 め る こ と は 予 後 不 良 因 子 と考 え られ る. Hunterら40)は 急 性 骨 髄 性 白血 病 に お い てEndogenous leukemic blast colony(L-CFU)形 成 能 を有 す る 症 例 は 完 全 寛 解 が 得 ら れ に く く且 つ 再 発 を き た しや す い と述 べ て い る が, MPD, MDS特 にCMLに お け るE-CFU-Cの 検 討 は 予 後 を推 測 す る上 で 有 益 で あ る と考 え られ た. 今 回 の 検 討 で 高 率 にE-CFU-Cを 形 成 した の はJCMLとCMML症 例 に お い て で あ り,両 疾 患 と も単 球 増 多 とい う共 通 点 を持 つ. Altman ら15)は, JCMLに お い て 単 球 マ ク ロ フ ァ ー ジ コ ロ ニ ー か ら な るE-CFU-Cが 形 成 さ れ た と報 告 し た が,そ の 形 成 機 序 に つ い て は 言 及 して い な い.小 池 ら22)は, JCMLに お い て 多 数 のE-CFU-C が 形 成 さ れ た が 貪 食 細 胞 除 去 に よ り コ ロ ニ ー 形 成 数 が 激 減 し た こ とか ら,そ の 形 成 機 序 と し て は 貪 食 細 胞 分 画 の 内 因 性CSF産 生 能 に よ る も の が 考 え られ る と報 告 し た.そ の 後,患 者 単 核 球 培 養 上 清 中 のcytokine濃 度 測 定, cytokine に 対 す る抗 体 を添 加 し たcolony assayな どの 検 討 か らE-CFU-C形 成 機 序 と し てIL-141) 42), GM-CSF42) 43), tumor necrotizing factor
(TNF)42)な ど単 球 由 来 のCSFに よ るpara crineが 考 え ら れ る と の 報 告 が な さ れ た.一 方, CMMLは1970年 初 め てLinman44)に よ り顆 粒 球 系 及 び 単 球 系 の 両 系 統 の 増 殖 に特 徴 づ け られ る 骨 髄 増 殖 性 疾 患 と記 載 さ れ た.そ の 後,赤 血 球, 白 血 球 及 び 血 小 板 の3系 統 に わ た る異 形 成,無 効 造 血 の 存 在 が 報 告 され45) 46) 47), FAB分 類9)の 中 でMDSの1型 に 分 類 さ れ て い る.ま たras 遺 伝 子 の 点 突 然 変 異 が 顆 粒 球,単 球, T及 びB cellに 検 出 さ れ た との 報 告48)が あ り, CMMLも 他 のMPD, MDSと 同 様 に 多 能 性 幹 細 胞 レ ベ ル の 異 常 に も とつ くclonal hemopathyと 考 え ら れ る. CMMLで もJCML,と 同 様 に 高 率 に E-CFU-Cを 形 成 し,形 成 機 序 と し て は 貪 食 細 胞 な い し は 付 着 細 胞 を 除 去 す る と コ ロ ニ ー 形 成 数 が 減 少 す る こ と か らG-CSF19), IL-649) 50), GM-CSF49) 50) 51)などの 単 球 由 来 のCSFに よ るpara crineが 推 定 さ れ る との 報 告 が な さ れ た.今 回 の CMML及 びCMML類 似 病 態 のRAEBtに お け る検 討 で も,貪 食 細 胞 の 除 去 に よ り全 例 で E-CFU-C形 成 の 抑 制 が み られ た こ とか ら,単 球 由 来 のCSFの 関 与 が 強 く考 え ら れ た.貪 食 細 胞 の 除 去 に よ り特 に 強 く抑 制 さ れ た の は 単 球 マ ク ロ フ ァ ー ジ コ ロ ニ ー で あ っ た の で,貪 食 細 胞 を除 去 した 際 に 単 球 マ ク ロフ ァー ジ 系 のprogeni tor cellを 除 去 し た 可 能 性 も考 え られ るが,従 来clonogenic cellは 貪 食 能 を 持 た な い と言 わ れ て お り,実 際 に 症 例10に つ い て 貪 食 細 胞 よ り も未 分 化 な 細 胞 を含 む 付 着 細 胞 を集 め てcolony assayを 行 っ た が コ ロ ニ ー は 形 成 さ れ な か っ た. 従 っ て 単 球 由 来 のCSFが 血 液 幹 細 胞 な い しは progenitor cellに 対 し て 単 球 マ ク ロ フ ァ-ジ 系 へ と増 殖 を促 す よ うに 作 用 して い るparacrine増 殖 の 可 能 性 が 示 唆 され た.ま た 貪 食 細 胞 を 除 去 し た 後 で も単 球 マ ク ロ フ ァ ー ジ コ ロ ニ ー を 認 め た 症 例 で は 除 去 に よ るE-CFU-C形 成 能 の 低 下 は 軽 度 で 依 然 と して コ ロ ニ ー 形 成 を 認 め て お り, autocrine増 殖 機 構 と し て のCSFの 関 与,CSF 非 依 存 性 のautonoumousな 増 殖 機 構 な ど が 存 在 す る こ と も考 え られ た.後 者 に つ い て は,最 近Reillyら52)は, endogenous colonyを 形 成 す る 急 性 骨 髄 性 白 血 病 の 一 部 の 症 例 で そ の 培 養 上 清 に はCSF活 性 が 認 め ら れ ず, GM-CSFの 細 胞 内分 泌 に よ りお そ ら くは 細 胞 内 に 存 在 す る
で あ ろ うGM-CSFレ セ プ タ ー と結 合 し増 殖 刺 激 を す る の で あ ろ う と報 告 して お り,一 見CSF 非 依 存 性 の よ う に 思 わ れ て も細 胞 内 の レベ ル で はautocrine増 殖 を営 ん で い る可 能 性 を示 唆 し て い る.今 回 の 検 討 で は, GM-CSFの 添 加 に よ り全 例 で コ ロ ニ ー 数 の 増 加 が 認 め られ た こ と, 単 核 球 培 養 上 清 中 のGM-CSF濃 度 を 測 定 し た 4症 例 で は 全 例 が 高 値 を示 し た こ と, 1症 例 に お い て の み の 検 討 で あ る が 抗GM-CSF抗 体 の 添 加 で コ ロ ニ ー 形 成 が 抑 制 さ れ た こ とな ど か ら GM-CSFに よ るparacrineな い しはautocrine 増 殖 機 構 の 存 在 が 示 唆 さ れ た. GM-CSFに よ る autocrine増 殖 は,急 性 骨 髄 性 白 血 病 の 一 部 の 症 例 に 認 め ら れ た と の 報 告 も み ら れ る53).一 方 G-CSF添 加 で コ ロニ ー 形 成 を強 く刺 激 した の は 1例 に お い て の み で あ っ た.貪 食 細 胞 を除 去 し た分 画 に お い て の み コ ロ ニ ー 形 成 を刺 激 し た 症 例 で は部 分 的 な 弱 い 刺 激 作 用 を有 す る 可 能 性 が 考 え ら れ る. G-CSFはmonokineの な か の1 つ で あ り, E-CFU-Cの 形 成 に 関 与 して い る 可 能 性 を 指 摘 した 報 告19)もみ られ るが,単 核 球 培 養 上 清 中 の 濃 度 も あ ま り高 値 を示 さ な か っ た こ とか ら してE-CFU-C形 成 に 関 与 して い る可 能 性 は 少 な い の で は な い か と 思 わ れ る.そ の 逆 に, 2 例 に お い て は 弱 い な が ら もG-CSFが 抑 制 作 用 を示 した こ と か ら,こ れ ら症 例 で はG-CSFが 抑 制 因 子 と し て 作 用 し た 可 能 性 も推 定 さ れ,そ の 機 序 の 一 つ と し てclonogenic cellがG-CSF に よ っ て 顆 粒 球 系 へ と分 化 誘 導 さ れ,そ の 結 果 単 球 マ ク ロ フ ァ ー ジ 系 へ の 分 化 が 抑 制 さ れ た た め にcolony形 成 に 必 要 なmonokineの 分 泌 を 抑 制 し た 可 能 性 が 考 え られ た.こ の 他CMMLに お け るE-CFU-C形 成 抑 制 因 子 に つ い て は,明 石 ら50)がIL-4に よ る 抑 制 作 用 を報 告 し て い る. IL-1は 正 常 人 に お い て マ ク ロ フ ァ-ジ に 作 用 し てGM-CSF, IL-1自 身 の 産 生 を 高 め, T cellに 作 用 し てIL-3, GM-CSF, IL-6の 産 生 を刺 激 し,骨 髄 間 質 細 胞 に 作 用 してGM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-6の 産 生 を 刺 激 す る.ま た 最 近, Griffinら54)は 一 部 の 急 性 骨 髄 性 白血 病 症 例 にお い て 白血 病 細 胞 の 産 生 す るIL-1が 間 質 細 胞 か ら のCSF産 生 を刺 激 し 白 血 病 細 胞 の 増 殖 を促 進 す る と報 告 し て お り, Rodriguez-Cimadevillia ら55)は一 部 の 急 性 骨 髄 性 白血 病 症 例 に お い て 白 血 病 細 胞 の 産 生 す るIL-1がendogenous in ducerと し て 白 血 病 細 胞 自 身 に 作 用 し た 結 果 GM-CSFな ど のcytokineが 産 生 さ れ,そ れ に よ り 白血 病 細 胞 の 自 己 増 殖 が 行 わ れ る と報 告 し て い る.症 例10で は 単 核 球 培 養 上 清 中 のIL-1β が 唯 一 高 値 を示 し た が,抗IL-1抗 体 の 添 加 で コ ロニー 形 成 の 抑 制 が 認 め ら礼 同 時 に抗GM-CSF 抗 体,抗M-CSF抗 体 の 添 加 で も抑 制 傾 向 が 認 め ら れ た.こ の こ とか ら,ま ずIL-1β が 単 球 か ら産 生 分 泌 さ れprimer刺 激 と し て単 球 自 身 に 作 用 し,そ の 結 果 産 生 分 泌 さ れ たGM-CSF, M-CSFが 幹 細 胞 な い し はprogenitor cellを 刺 激 し て 細 胞 増 殖 を 引 き起 こ すparacrine増 殖 の 可 能 性 な ど,何 等 か の 形 でIL-1が 関 与 して い る 可 能 性 が 考 え られ た. IL-6がCMMLに お け る autocrine増 殖 因 子 で あ る との 報 告 もみ ら れ る が49) 50),症例10で は 抗IL-6抗 体 の 添 加 で コ ロ ニ ー 数 は わ ず か の 増 加 を 示 し た の み で,か つ 単 核 球 培 養 上 清 中 のIL-6も 著 明 な 高 値 を示 してお ら ず,今 回 の 成 績 か ら は 否 定 的 で あ り,む し ろIL-6に よ る抑 制 作 用 の 存 在 さ え 疑 わせ た. CMML はMPDとMDSと の 中 間 に位 置 づ け ら れ る特 異 な疾 患 で あ り,臨 床 的 に も細 胞 化 学 的 に も 多 様 性 を 示 す56) 57).今 回 の 検 討 で も,CSFに 対 す る 反 応 性,コ ロ ニ ー 構 成 細 胞,単 核 球 培 養 上 清 中 のcytokine濃 度 な ど そ れ ぞ れ 性 格 を 異 に し た 点 も あ り,疾 患 自体 の 多 様 性 が 示 唆 さ れ た. ま たE-CFU-C形 成 機 序 と して はGM-CSFの paracrine増 殖 が 共 通 点 と して 考 え られ たが,症 例 に よ っ て はIL-1のparacrine増 殖 の 可 能 性, IL-6, G-CSFの 抑 制 因 子 の 可 能 性 な どE-CFU-C形 成 機 序 自体 に も 多 様 性 が 存 在 す るの で は な い か と考 え ら れ る . 近 年MDSに お い て も発 癌 遺 伝 子 の 活 性 化 が 報 告 さ れ58) 59),癌遺 伝 子 の 活 性 化 が 認 め られ た 症 例 で は,病 態 の 進 行 或 い は 白 血 病 へ の 移 行 が 認 め られ た と さ れ て い る. MDSで 最 も研 究 され て い る の は, ras遺 伝 子 でN-ras遺 伝 子 の 活 性 化 が 多 く検 出 さ れ て お り, CMMLで は 特 に 高 率 で あ る58) 59) 60).ま たM-CSFレ セ プ タ ー を コ ー ド す るfms遺 伝 子 は,チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ 活 性 を有 し,そ の 突 然 変 異 はMDSの5∼15%に 報 告 さ
れ て い る60) 61). MDSの 中 で はCMMLに 最 も 高 率 に 認 め られ る こ とは, M-CSFが 単 球 増 殖 因 子 で あ る こ と と関 係 し て い る の か も しれ な い. 今 後 は こ の 方 面 か らの 検 討 も必 要 で あ る と思 わ れ る. 結 論 今 回, MPD並 び にMDSに お け るE-CFU-C 形 成 能 に つ い て 検 討 した.そ の 結 果, 1. MPD 62例 中6例(CML-AP 11例 中2 例, CML-BC 9例 中1例, JCML 2例 中2例, UMPD 2例 中1例)にE-CFU-C形 成 を 認 め た. ま たMDSで は25例 中8例(CMML類 似 の RAEBt 1例, CMML 10例 中7例)にE-CFU-C の 形 成 を 認 め た. 2.末 梢 血 でE-CFU-Cの 形 成 を 認 め た 症 例 で は 末 梢 白 血 球 数 が 多 い 傾 向 が 認 め ら れ,疾 患 末 期 に 白血 球 数 が 著 増 し た 時E-CFU-Cが 形 成 さ れ る症 例 も認 め られ た. 3. E-CFU-C形 成 例 では 単 球 増 多 を示 す 症 例 が 多 く,さ ら にCMML及 び 単 球 増 多 を示 し た CMML類 似 のRAEBtの5例 で は,貪 食 細 胞 を 除 去 す る こ と に よ りE-CFU-Cの 形 成 は 抑 制 さ れ, GM-CSFの 添 加 に よ り コ ロ ニ ー 形 成 数 が 増 加 した.ま た4例 で 末 梢 血 単 核 球 培 養 上 清 中 濃 度 を 測 定 し た 結 果GM-CSF濃 度 は 高 値 で あ り, 1例 で 抗GM-CSF抗 体 を 添 加 す る とE-CFU-C形 成 が 抑 制 さ れ た. 4. E-CFU-C形 成 例 で は 高 率 に核 型 異 常 が 認 め ら れ た. 5.経 過 観 察 が 可 能 で あ っ たE-CFU-C形 成 例 は 全 例 と も死 亡 に 至 っ た.な お, E-CFU-Cの 形 成 を 認 め たCML-AP 1症 例, CML-BC 1症 例 の 生 存 期 間 は 同 一 疾 患 の 平 均 生 存 期 間 に 比 較 して 短 い傾 向 に あ っ た. 以 上 の 成 績 を得 たが, E-CFU-C形 成 能 と病 型, 病 像 の 推 移 に 関 連 性 が 推 定 され, hematological malignancyでE-CFU-C形 成 能 を認 め る こ と は 予 後 不 良 因 子 と考 え られ た. CMMLに お け る E-CFU-C形 成 機 序 と し て は 単 球 由 来 のCSFが コ ロニ ー 形 成 に 関 与 して い る可 能 性 が 推 察 され, 特 にGM-CSFのparacrineが 示 唆 さ れ た が, 同 時 に そ の 機 構 に 多 様 性 が 存 在 す る と考 え られ た. MPD並 び にMDSに お け るE-CFU-C形 成 能 の 検 討 は,こ れ ら疾 患 に お け る血 球 の分 化 ・ 増 殖 機 構 の 解 析 と病 態 と の 関 連 を検 討 す る上 で 意 義 深 い と考 え ら れ た. 稿 を終 え るに あ た り御 指 導,御 校 閲 を賜 った 木 村 郁郎 教 授 並 びに 高橋 功講 師,大 本 英 次 郎 助 手 に 深 甚 な る謝意 を表 し ます. 本 論 文 の要 旨は 第53回 日本 血 液 学 会 総 会(京 都), 第33回 日本 臨 床 血 液 学会(東 京)で 発 表 した.
文
献
1) Dameshek W: Some speculation of myelo-proliferative
syndromes.
Blood (1951) 6, 372-375.
2) Fialkow PJ, Jacobson RJ and Papayannopoulou
T: Chronic myelocytic leukemia:
Clonal origin in
a stem cell common to the granulocyte,
erythrocyte,
platelet and monocyte/macrophage.
Am J Med
(1977) 63, 125-130.
3) Fialkow
PJ: Cell lineages in hemato-poietic
neoplasia
studied with glucose-6 phosphate
dehy
drogenase cell markers.
J Cell Physiol (1982) Suppl. 1, 37.
4) Jacobson RJ,
Salo A and Fialkow PJ: Agnogenic myeloid metaplasia:
Clonal proliferation
of
hematopoietic
stem cells with secondary myelofibrosis.
Blood (1978) 51, 189-194.
5) Adamson JW, Fialkow PJ, Murphy S, Prchal JF and Steinmann L: Polycythemia vera: Stem cell
and probable clonal origin of the disease. N Engl J Med (1976) 295, 913-916.
6) Fialkow PJ, Faguet GB, Jacobson RJ, Vaidya K and Murphy S: Evidence that essential throm
bocythemia in a clonal disorder with origin in a multipotent stem cell. Blood (1981) 58, 916-919.
7) 高 橋 隆 幸,井 谷 舜 郎,星 野 孝, Messner HA:慢 性 骨 髄 白 血 病 に お け るsingle colonyの 染 色 体 分 析 …CFU-GEMM, CFU-Meg, CFU-Eoに お け るPh1染 色 体 の 証 明.日 血 会 誌(1984) 47, 377.
8) Blook M, Jacobson LoJ and Bethard WFB: Preleukemic acute human leukemia. JAMA (1953) 152,
1018-1028.
9) Bennett JM, Catovsky D, Daniel MT, Flandrin G, Galton DAG, Gralnick HR and Sultan C:
Proposals for the classfications
of the myelodysplastic
syndrome.
Br J Heamatol
(1982) 51, 189
-199.
10) Raskind WH,
Tirumali N,
Jacobson R, Singer J and Fialkow PJ: Evidence for a multistep
pathogenesis of a myelodysplastic
syndrome.
Blood (1984) 63, 1318-1323.
11) Amenomori T, Tomonaga M, Jinnai I, Soda H, Nonaka H, Matsuno T, Yoshida Y, Kuriyama
Y, Ichimaru M and Suematsu T: Cytogenetic and cytochemical studies on progenitar cell of primary
acquired sideroblastic
anemia (PASA):
Involvement of multipotent myeloid stem cells in PASA
clone and mosaicism with normal clone. Blood (1987) 70, 1367-1372.
12) Zanjani ED: Hematopoietic
factors in polycythemia
vera; in Polycythemia,
Grune and Stratton,
New York (1976) pp 111-122.
13) Golde DW, Bersh N and Cline MJ: Polycythemia vera: Hormonal modulation of erythropoiesis
in
vitro.
Blood (1977) 49, 399-405.
14) Casadevall N, Vainchenker W, Lacombe C, Vinci G, Chapman J, Breton-Gorius J and Varet B
:
Erythroid
progenitors
in polycythemia
vera: Demonstration
of their hypersensitivity
to eryth
ropoietin using serum free cultures.
Blood (1982) 59, 447-451.
15) Altman AJ,
Palmer
CG and Baehner
RL: Juvenile
"chronic granulocytic
leukemia"
A pan
myelopathy with prominent monocytic involvement and circulating monocyte colony-forming cells.
Blood (1974) 43, 341-350.
16) Partanen S, Ruutu T and Vuopio P: Circulating haematopietic
progenitors in myelofibrosis.
Scand
J Haematol
(1982) 29, 325-330.
17) 立 田 浩,布 出 泰 紀,市 場 茂 樹,奥 野 芳 章,高 橋 隆 章: Endogenous CFU-E及 びCFU-Cコ ロ ニ ー の 形 成 を認 め た 慢 性 好 中 球 性 白 血 病 の1例.日 血 会 誌(1985) 52, 920.
18) Ohyashiki K, Ohyashiki J, Oshimura M, Miyasaka Y, Sakai N, Osamura S, Tonomura A and Ito
H: Cytogenic and in vitro culture studies on chronic myelomonocytic
leukemia.
Cancer (1984) 54,
2468-2474.
19) Yuo A, Miyazono K, Urabe A and Takaku F: Characteristics
of granulocyte-macropage
colony
formation in chronic myelomonocytic
leukemia:
A comparative
study with other myelodysplastic
and myeloproliferative
disorders.
Jpn J Cancer Res (1990) 81, 820-826.
20) 真 田 雅 好,高 橋 益 広,岸 賢 治,森 山 美 昭,柴 田 昭:慢 性 骨 髄 性 白 血 病 に お け る幹 細 胞(CFU-C)の 動 態.臨 床 血 液(1979) 20, 1539-1547.
21) Kobayashi
S, Teramura
M, Hoshino S, Motoji T, Oshimi K and Mizoguchi H: Circulating
megakaryocyte
progenitors in myeloproliferative
disorders are hypersensitve to interleukin-3.
Br J
Haematol
(1993) 83, 539-544.
22) 小 池 健 一,長 沼 邦 明,石 井 栄 三 郎,辻 浩 一 郎,安 藤 伯 秋,入 木 芳 雄,野 呂 瀬 昇,斉 藤 寛 治,内 海 治 郎: Invitro colony形 成 法 を 用 い た 若 年 型 慢 性 骨 髄 性 白 血 病 の 病 態 解 析.日 血 会 誌(1985) 48, 750-755.
23) Hanamura T, Motoyoshi K, Yoshida K, Saito M, Miura Y, Kawashima T, Nishide M and Takaku
F: Quantitation
and identification
of human M-CSF in human serum by ELIZA. Blood (1988) 72,
886-892.
hematopietic
cells. J Natl Cancer Inst (1973) 50, 603-623.
25) Moore MAS: In vitro culture studies in chronic granulocytic leukemia. Clin Hematol
(1977) 6, 97
-112 .
26) Bertheir R: Cellular factors regulating granulopiesis in myeloid leukemia.
Blood Cells (1977) 3,
461-474.
27) Metcalf D: Hematopietic
colonies. Springer-Verlag,
Berlin (1977).
28) Weinberg RS, Worsley A, Glibert HS, Cutter J, Berk PD and Alter BP: Comparison of erythroid
progenitor
cell growth in vitro in polycythemia
vera and chronic myelogenous
leukemia.
Only
Polycythemia
vera has endogenous colonies. Leuk Res (1989) 13, 331-338.
29) Terasawa T, Kimura H, Maruyama W and Kasai S: An improved assay method for erythropoietic
colony forming units in murine and human bone marrow.
Acta Haematol
(1979) 42, 72-78.
30) Iscove NN, Sieber F and Winterhalter
KH: Erythroid colony formation in cultures of mouse and
human bone marrow.
J Cell Physiol (1974) 83, 309-320.
31) Greenberg PL, Nichols WC and Schrier SL: Granulopoiesis
in acute myeloid leukemia and preleu
kemia.
N Engl J Med (1971), 284, 1225-1230.
32) Milner GR, Testa NG, Geary CG, Dexter TM, Muldal S, Maclver JE and Lajtha LG: Bone marrow
culture studies in refractory cytopenia and smoldering leukemia.
Br J Haematol
(1977) 35, 251
-261.
33) Verma DS, Spintzer G, Dicke KA and McCredie KB: In vitro agar culture patterns in preleukemia
and their clinical significance.
Leuk Res (1973) 3, 41-49.
34) 朝 長 万 佐 男,陣 内 逸 郎,塚 崎 邦 彦,栗 山 一 孝,松 尾 辰 樹,雨 森 龍 彦,市 丸 道 人:急 性 白 血 病 転 化 時 に Spntaneous colony formationを 認 め たRAEB-tの 一 例.日 血 会 誌(1987) 50, 438.
35) Rpwley JD: A new consistent chromosomal abnormality in chronic myelogenous leukemia identified
by quinecrine fluo-rescence and Giemsa staining.
Nature (1973) 243, 290-293.
36) 鎌 田 七 男:前 白 血 病 状 態 の 病 態(染 色 体);前 白 血 病 状 態(1984) pp 30-37.
37) Greenberg PL: The smoldering myeloid leukemic states (clinical and biological features).
Blood
(1983) 61, 1035-1044.
38) Knapp RH,
Dewald GW and Pierre RV: Cytogenetic
studies in 174 consecutive
patients with
preleukemic or myelo-dysplastic
syndrome.
Mayo Clin Proc (1985) 60, 507-516.
39) Nowell PC: Cytogenetics of preleukemia
Cancer Genet Cytogenet (1982) 5, 265-278.
40) Hunter AE, Rogers SY, Roberts IAG, Barrett AJ and Russel N: Autonoumous growth of blast cells
is associated with reduced survival in acute myeloblastic leukemia.
Blood (1993) 82, 899-903.
41) Bagby GC, Dinarello AC, Neerhout
RC,
Ridgway D and McCall E: Interleukin
1-dependent
paracrine granulopoiesis
in chronic granulocytic leukemia of the juvenile type. J Clin Invest (1988)
82, 1430-1436.
42) Freedman MH, Cohen AC, Grunberger T, Bunin N, Luddy RE, Saunders EF, Shahidi N, Lau A
and Estrov Z: Cenatral role of tumor necrosis factor, GM-CSF and inter-leukin 1 in the pathogenesis
of juvenile chronic myelogenous leukemia.
Br J Haematol
(1992) 80, 40-48.
43) Gualtieri RJ, Emanuel PD, Zuckerman KS, Martin G, Clark SC, Shadduck RK, Dracker RA,
Akabutu
J,
Nitscke R,
Hetherington
ML,
Dickerman
JD,
Hakami N and Castleberry
R:
Granulocyte-Macrophage
colony-stimulating
factor is an endogenous regulator of cell proliferation
in juvenile chronic myelogenous leukemia.
Blood (1989) 74, 2360-2367.
713-716.
45) Miesher PA and Farquet JJ: Chronic myelomonocytic
leukemia in adults.
Semin Hematol
(1974)
11, 129-139.
46) Geary CG, Catovsky D, Wiltshaw E, Milner GR, Schles MC, Van Noorden S, Wardsworth
LD,
Muldal S, Maclver JE and Galton DAG: Chronic myelomonocytic
leukemia.
Br J Haematol (1975)
32, 289-302.
47) Zitoun R: Subacute and chronic myelo-monocytic
leukemia:
A distinct haematological
entity.
Br
J Haematol
(1976) 32, 1-7.
48) Janssen JWG, Buschle M and Layton M: Clonal analysis of myelodysplastic
syndromes.
Evidence
of multipotent stem cell origin. Blood (1989) 73, 248-254.
49) Everson MP,
Brown CB and Lilly MB: Interleukin-6
and granulocyte-macrophage
colony
stimulating factor are candidate growth factors for chronic myelomonocytic
leukemia cells. Blood
(1989) 74, 1472-1476.
50) Akashi K, Shibuya T, Harada M, Takamatsu
Y, Uike N, Eto T and Niho Y: Interleukin-4
supresses the spontaneous growth of chronic myelomonocytic
leukemia cells. J Clin Invest (1991) 88,
223-230.
51) 堀 田 友 光,鏡 味 良 豊,斎 藤 英 彦:慢 性 骨 髄 単 球 性 白 血 病 に お け る 自発 性 顆 粒 球.マ ク ロ フ ァ ー ジ コ ロ ニ ー 形 成 機 序.日 血 会 誌(1985)53, 807.
52) Reilly IAG, Kozlovski R and Russell NH: Heterogenous mechanisms of autocrine growth of AML
blasts.
Br J Haematol
(1989) 72, 363-369.
53) Young DC and Griffin JD: Autocrine secretion of GM-CSF in acute myelo-blastic leukemia.
Blood
(1986) 68, 1178-1181.
54) Griffin JD, Rambaldi A, Vellenga E, Young DC, Ostapovicz D and Cannitra SA: Secretion of
interleukin-1 by acute myeloblastic leukemia cells in vitro induces endothelial cells secrete colony
stimulating factors.
Blood (1987) 70, 1218-1221.
55) Rodriguez-Cimadevilla
JC, Beauchemin V, Villeneuve L, Letendre F Shaw A and Hoang T:
Coordinate secretion of interleukin-1 beta and granulocyte-macrophage
colony-stimulating
factor by
the blast cells of acute myeloblastic
leukemia:
Role of interleukin-1
as an endogenous inducer.
Blood (1990) 76, 1481-1489.
56) Hotta T and Utsumi M: Chronic myelomonocytic
leukemia
(CMML)-characterization
of clinical
features and prognosis.
Acta Haematol Jpn (1988) 51, 1441-1447.
57) 倉 田寛 一,平 井 真 希 子,三 輪 哲 義,村 井善 郎,森 真 由美:慢 性 骨髄 単 球 性 白血病 の 多様 性 の検 討.臨 床 血 液 (1990)31, 1906-1913.
58) 高 久文 麿,平 井 久丸,西 田淳 二:前 白血 病 状 態 に おけ る トラ ン ス フ ォー ミン グ遺 伝 子.癌 と化 学 療 法(1987)
