小   島    博

606

大腸菌に対する4 OxydipkefiySatkerの作用に就て

金沢大学医学部日置内科牽教室（主任日置陸奥夫教授）

小   島    博

 （昭和25年6月 7日   受倒寸）

緒  大腸菌感染は執拗なる臨床症1伏を呈し從來 医家の処置に窮するものであったが，近來 Streptomycinその他の抗生剤の出現，一方には Phenothiazin， Furacin誘導体等；が有効であると の報告があって，之に対する処置の方途が開け て出た様に思はれる．而も最近叉もや別種の化 合物4−OxydiphenylLitherの大腸菌に対する彊 力な作用を主張する報告が泰西に現はれたが，

之より先我教室に於ても渡辺は「腸チフス・パ ラチフス菌に対する実験治療学的研究」に於て 同菌に対する数種のDiphenylather誘導体に就 て槍索をなし，被：温血血中では独り4−Oxydi−

phenylatherが優れて殺菌力彊く，4−Am圭nodi−

phenyl蕊ther j 4−Acetyldiphenylatherが之に次ぐ と云ふ結果を得，更に後当教室上井は赤痢菌に

言

対する同種化合物の発育抑制作用及び殺菌作用 を醜してその成績に就て夫々述べる所があっ た．其処で今若し4−Oxydiphenylatherのかx る作用に於て之宇瓦菌に対しそれぞれ異なる成 績を示すであらうならば，独り本化合物の抗菌 性を問題となし得るに止らす，その結果は亦之 要心菌の鑑別培養にも利用せられ得るであらう 事が充分に予想せられて良い．即ち著者は此の 逆な意図の下に諸種のDipheny】atherの大腸菌・

チフス・赤痢諸菌に及ぼす影響を改めて検索し，

特に4−Oxydipheny】蕊therの大腸菌・チフス菌．

パラチフス菌に対する発育阻止力の差異を利用 してチフス菌・パラチフス菌の槍出を簡便なら しめんとする努力を試みて見たので，今その成 績を鼓に録せんとする次第である．

実

A．大腸菌保存株に対するDiphenylather誘 導体の作用

 1）実験方法

 a）菌種：金沢大学医学部細菌学敢室に於て分離継 代培養申の大賜菌保存株の分与を乞ひ，塞天培地より 1白金耳を，pH 7・2の肉汁5・Occに移殖，37・0。Cに て2日間増菌せるものを使用した．

 b）供試藥物：当日置内鼠教室に於て合成した以下 のDiphenylather誘導体を使用した，

 1） 4−Oxydiphenylttther  2） 4−NitrodiphenyMther

験

5） 4，4ノー1）initrod量phenア職ther 6）3−N三tro−4−oxyd圭phe町1蕊ther

7）4−Am五蹟odiphepyl飢her

［ 34 ］

大腸菌に対する4−Oxydiphenylatherの作用に就て 607

 18） 4−1］aurylamino−3一一aminodiphenylather

 c）試験方法；供試藥物を1％に含有する水晶はア ルコール溶液0・2ccをpH 7・2のO・5％肉汁0・8cc に添加して500×液を作成，同標にして原液0・1ccを

肉汁0．9cc；1．9cc；2．9cc；…9・9cc；10．9ccに添加し て夫々10CO x；2000 x；3000 × ；…10000×；11GOO×

の稀釈液を得た。その各k 1・Gccにa）に於て作成 した大腸菌浮游液1滴を加へ37・O。C 2 日間培養，菌 の壇殖如何を観察し，更に各管より1滴を新鮮な同肉 汁1・Occに移植し，同じく37・0。Cに2日間培養して

殺菌力の如何を槍した．供用肉汁の滅菌は総：てユ00。C

30分とし，1日に1回，3日間繰返した．以 下阻止倍 数，殺菌倍数と称するのは夫k菌の壇殖を見る事がな かった最大廓釈倍数に椙博する．

 2）実験成績

 成績は次表に総括してみる．之を要するに，

保存大腸菌株に対する作用の最も優iれたのは 4．Oxydii）henylSther−6・あって，その菌発育抑制 力は1eOOO×殺菌力は4000 xで，4−Aminodi−

phenylatherが之に継ぎ抑制力7000 ×i殺菌力 3000×と云ふ成績を示した．

No．

ユ

 物       質

4一 Oxydipheny！ather

  1

2 14−Nitrodiphenylather

3

4

5

6

7

8

9

10

2，2 一Dinitrodiphenylather

    L

2，4 一Dinit rodiphenylather

構 造

〈二〉一・《二〉・H

〈二〉一・一〈二＞N・・

r rM Nroi … No2

4，4 一Dinitrodiphenylather

3−N  it ro一 4−oxydiphenyl−

ather

4−Aminodipheny］ather

4一一Acetylaminodiphenyl一 邑ther

4−Caprylaminodiphenyl一

4−1．aurylaminodiphenyl一 鼓ther

  し、、｝2−N ・・び輌 ・・d p・…1−

  1銭th・・．

！一×．一〇一一／ N

       L／

×一／

         NO2

NO2〈：〉一〇一〈＝〉

N・・〈二〉…⊂＞N・s

         NO2

〈1一＞t−o一〈：＞oH

〈＝〉…〈二〉曲・

〈二〉一・一く⊃・NHC・CH・

〈＝〉一〇一〈IIIIII＞）gTLHcocq，Hig

〈：＞Nony．〈＝＞NHCOCItH23          NO2

NH2〈＝〉一〇一〈＝〉

12 2−Laurylamino−4−

nitrodiphenylttther

      NIICOCIIS／ll，．3

〈＝〉一〇・一一〈＝＞NO2

阻止倍数

10000 ×

殺菌倍数

4eoo ×

   L

一 1〈soo x

  一！

×

7000 ×

3000 ×

×

1000 ×

x

×

〈soe ×

〈500 ×

〈500 ×

3000 ×

2000 x

く50叡

×

500 ×

x

［ 35 ］

608

_小

13

14

15

4−Nit ro−4 一aminodiphenyl一 邑ther

4−N itro−4Lcaprylamino−

diphにny1飢her

3−Nit ro一一 4一 aminodiphenyl一 斗ther

16 1 ｛TillCetY．iar｝iino−3 一nitro．

  ｛d量phenyl翫the「

17

18

3−Nitro−4一一］aurylamino−

diphenylather

4−Laurylamino一一3−amino−

diphenylather

NII2〈：〉一 O 一〈：＞NO2

NHC OCg， Hlf〈＝〉 一一一 O 一一一 〈：一 ＞NO，，

        NO2

〈一一 ：一〉一〇一一〈：＞MI2

画σ2

〈＝〉一・一く⊃dHNC・cH・

        NO2

〈一一〉一〇．一．．〈＝＞NIICOCIIH23

        NH2

く＝》・一＜＝＞M・C・C1・H・・

〉く

3000 ×

1000 x

く5000x

×

く500x

2000 x

〈500 x

500 ×

註）1）＜500×：500xよむ少なるを示す．

  2）＝＝結晶析出による混濁のため判定困難．

  3）x＝水及びアルコpルに不溶のため槍査不能．

 B．4−Oxydiphenylatherの保存大腸菌・チフス 菌・パラチフス菌・赤痢菌に対する作用の比較  1）ブイヨン中培養比較成績

 前記に於て著者は被槍D｛phenyl且ther誘導体 申では4−Oxydipheny15therカミ大腸菌に対して 比較的強い作用を有するのを知った．本化合物

はその雪水に可溶匪であるから万一利用せられ るものがあるとすれば殊に便利な物質である．

 本物質が大腸菌及び腸内病原菌に対して果し て如何なる作用の差異を呈するかに就ては，前 述の成績を渡辺，上井のチフス菌・赤痢菌（志賀 菌）に対する成績に比較すると次の檬である．

菌  種 阻止倍数 殺菌倍数

大腸菌

10000 × 4000 ×

赤面チフス劇繍刻繍フ

4000 × 4eoo ×

4000 × 2eao ×

400e × 20eo ×

40GO x 2000 ×

 即ち如上の成績を信ずるならば，本化合物の 之一項菌に対する作用中最：も二大なの．は大腸菌 に対してS ある．著者は此処に着目して，次の 各種の条件に於けるその作用を夫々比較考察し

た。

 2）下天培地上培養比較成績

 pH 8，0の05％肉汁寒天培地を作成，之に

4一・Oxydiphenアlatherの100 x水溶液を1：119；

1：109； 1：10 ； 1：99； 1：94； 1：89； 1：84； 1：79」

1：74；の割合に添加し，夫々4−Oxydipheny］芭ther

を「 12000xJ 11000Jx lO500x3 10000x3 9500 xj 9000 × ；8500x；8000×17500xに含有 せる寒天培地を作成，滅菌，李板となし各種菌 の保存株を移植，37．0。C．48時闇培養したとヒ ろ下表の如き成績を得た．

 3）小  括

 勿論実験条件に依って化合物の示すと■ろの 細菌に対する発育抑制力・殺菌力は相違すると とろ大なるものがあるが，大休晶晶菌株では 4−Oxydiphenylatherの藥物作用はチフス菌・パ

［ 36 ）

大腸菌に対する4一一〇xydiphenylatherの作用に就て 609

隷

TII 十 十 十 十 十

TO

十 十 十 十

± P．A．

十

十 十 十 十 十 十 士

P．B．1 S

十 十 十 十 十 十 十 十 十

十

KLA

十 十

KBi iKBm

十 十 十 十 十 十 土

十 十 十

C

十

±

TH：チフス菌H型 TO：チフス菌0型 P・A・ ：パラチフス菌A型

：P．：B．：パラチフス菌：B型

S：赤痢志賀菌 1（A＝赤痢駒込A型菌 KBI：赤痢駒込BI型押 KBm＝赤痢駒込BIII型菌 C：大賜菌

ラチフス菌に対するより明らかに大腸菌に対し て強く現はれてるる．

 C．4−Oxydipheny】三ither含有二天培地上人糞 内大腸菌等の発生歌況

 前述の成績に依れば4−Oxydiphenyl巨therを

：普通一天培地に適当な濃度に含有せしめたなら ば簡軍に大腸菌の発生を阻止し得べき筈であ る．此の様な培地が実際人糞中の大腸菌を如何 様に抑制し得るであらうか．叉その場合に於 て，他種の腸内菌が如何様に増殖し來るであら

うか．之等を観察せんとして次の実験を行っ た．即ち，前章に述べたと同様の方法に依って 4−Oxアdipheny】atherを種々の割合に含む寒天培 地を作成，準板とし，その上に外來検便患者よ りの糞下を少量の水にといた物を極く少量塗抹 し，37．0。C 2日聞培養後集落の有無を槍したと tろ下表の如き成績を得た，

 但し上記集落中には大腸菌集落のみならす各 種の球菌及びアルカリ性糞便菌と思はれる桿菌 に依る集落も相当数に含まれてみた．又上表で

1含有量

集落発生例

割合（％）

1：12000

100

1：11000

100

ユ1105CO

．， 1 eo

i：ioooo l ］．：gsoo

60 50

1：9000

50

1：8500

40

1：8000

25

1：7500

15

は仮令集落の発生数が一二板上只1個でも之を 陽性として挙げたのであるが，無論藥物の作用 に依って個々の雫板上の集落数は普通肉汁塞天 上に於けるより遙かに凹く，例へば1：10000二 物含有手板上では僅かに0〜30個の程度を算し たに過ぎない．併しとに恥く藥物の含：量が之よ

り低下すればする程菌集落発生（大腸菌をも含 め）の率を増加したのであるから，之に依って みるも人糞内大腸菌は保存株とは著しくその活 力を異にする事を知るに至ったのである．

 D．4−Oxydiphenylather並びに2，4−D三brom−

6−nitrophenolkalium含有回天培地上に於けるチ フス菌・パラチフス菌・大腸菌保存株及び人糞内 大腸菌等の発生域績

 箪に4−Oxydiphenyl蕊therのみを含有せる寒

ptm．．op，．．E

天培地では上記の如く相当数の球菌集落の発生 を認めたので4−Oxydiphenyl蕊therに更に2，4−

D1brom−6甫itrophenolkaliumを寒天培地に含有 せしめ，之に依ってチフス菌・パラチフス菌と 大腸菌の発育にそれぞれ差異を保有せしめた上 に，人糞内諸雑菌の発生を更に稀ならしめ得る か否かにつき槍回したところ下表の如き成績を

．得た．因に上記2，4−Djbrom−6−nitrophenolkal｛um は．黄色葡萄朕球菌に対して1：76800稀釈に於 て之が発育を阻止し得た。但し大腸菌の発育に 対しては1＝2000含有寒天培地上に於ても之を

：全然抑制し得なV・．

 1）1：11000，4−Oxγdiphenア翫her含有塞天培 地に各種濃i度に2，4・Dibrom−6−nitrophenolkaliUm を含有せしめたる成績

［ 37 ）

610

_小

ぱ 1：60000 1：50000

T．H．

十 十 十 十 十 十 十 十 十

rr ． O・

十 十 十

十 十

十

P．A．

十，

十 十 十 十 十 十 十 十

P．B．

十 十 十 十 十 十 十 十 十

。．

±

±

±

± 士

±

±

2，4−Dibrom−6−nit rophenollcalium

       含有量 工 10000 1 ： saeo 1： 4eoo

人糞中諸菌 の発生頻度

80e／a soe／0 300／o

 2）1：10000，4一一〇xydiphenyl蕊ther含有寒天培 地に添加せる場合の成績

＼菌種1T．H．

舗壷＼1

1：600eo 1：socoe

1：lsooe

十 十 十 十 十 十 十 十

±

  f T．O^{@．?P．A．}

十 十 十 十 十

十 十

÷

± 十 十 十 十 十 十 十 十

± P．B．

十 十 十 十 十 十 十 十

± C．

 上記成績の如く 4−Oxγdiphenylatherをそれ ぞれi：10000，1：110eoに含有せしめた上更に

2， 4−Dibrom一一6−nitrophenolkalium を 1：5000〜

10000に含有せしめる事に依ってチフス菌・パラ チフス菌・大腸菌の発育上の差異をその儘か或 はそれ以上に保有せしめ得る事を知った，

 次で1：1100⑪，4−Oxアdiphenyl且ther及び1：1

0000，一一v4000， 2，4−Dibrom−6−nitrophenolkalium

含有寒天培地に於ける入毛内諸菌の癸生を通し たとヒろ集落発生率は更に次表の如く低下し，

殊に1：11000，4−Oxydipheny撫her及び1：400 0，2，4−Dibrom−6−nitrophenolkalium含有培地 の場合には雑菌の発生は下表の如き牽となり，

而も一貫板上1⑪個内外に減少し，その殆んどが アルカリ性糞便菌に属した．

 3）小  括

 之を要するに，適当なる濃度の4一一〇xydiphe−

ny15ther及び2， 4−Dibrom−6−nitrQphenolkalium を含有せしむる事に依ってチフス菌・パラチフ ス菌の発育に特に大なる障碍を与へす，而も輩 に4−Oxydipheny15therのみを使用した場合よ りも更に張力に腸内雑菌の増殖を阻止する事が

出來た．

 E．鑑別培地作成の試み

 前述の如く保存種では完全に大腸菌の発育を 阻止し独りチフス菌・パラチフス菌のみの増殖 を許し得るが如き条件が得られたのであるが，

実際には人糞内大腸菌その他の活力が平なる事 に依って鑑別培地作成可能の予想とは梢ζ反 する結果に至ったのである．併し4−Oxydiphe−

nylatherを1：11000並びに2，4−Dibrom−6−

nitrophenolkaliumを1：4000・一5000に含有せし めた培地では少くともチフス菌・パラチフス菌 を充分発育せしめ得る事が可能であり，此の場 合大腸菌の槍出率は予期に反して少くなかった とは謂うものの，無論何等本化合物を含有せし めざる培地に増殖せしめたるに比すれば癸生す る大腸 菌その他雑菌集落数は甚だ制限せられた ので，著者は本培地を基礎として一種の鑑別培 地を考案した，要は上述の如くして大腸菌及び 各種の球菌の発育を抑制し，猫且生する集落中 より糖分解を利用して糖非分解性諸雑菌を除外 せんとしたものである．

 1）培地製法

 1％肉汁を含有する3％寒天培地を型の如く作成，

pH 8』〜8・4に修正，10⑪Oc・c・に対し4−Oxydiphey−

IZther O，lg； 2，4一一Dibrom−6−nitrophenolkalium O．275g

を混合加熱，充分溶解後60・0。Cに冷却するを待ち予 め小羅の水に溶解せるRhamnose及びXylose各々 7・59を加へ充分混和する．その同病1時間1GO。C に加熱して後60。Cに冷却しpH 8・0に修正，更に

［ 38 ］

大腸菌に対する4・一〇xydiphenyltitherの作用に就て

：Lacmus 8〜1egを水約50cc lこ溶解ぜるものを加へ，

混和，容稜を1100ccに修正，分注，100。Cにて30分 聞滅菌して冷暗所に貯藏，用に臨み李板として使用す

る，

 2）作成上の注意事項

 心密を要し，特にpH修正は正確でなけれぽならな い．完成品は李板とした場合青紫色透明なるべきで，

赤褐色の勝つた物は不i適品である。

 3）集落の判別法

 腸チブス菌・パラチフス菌を含むサルモネラ菌及び 極く小数乍ら発生する大腸菌は37。Cにて2日間の培 養後赤色の集落を作る．而して目的とする腸チフス菌          ゴ・パラチフス菌は之より試験凝集その他に依って判別

する．

 ：F．実際橡便成績

 無論上記の鑑別培地は当教室にある保存菌株 には充分の成績を示したので，6〜10月の5ケ 月に亘って，ともかくも腹部症状を主訴とした 患者及び面一患者にして槍便を要する者総てを 対象として培養を試みた結果，以下の如き威績

月 別i6月

    一L二 検便例数

赤色集落発 生乱数 赤色集落発

生率（％）

青色集落発 生例数 青色集落発 生率集（％）

落を発せざ

る例数

42

2．4

ユ

2．4

40

7月 8月

421 lo2

7

16．7

9 21．4

26 9

8．8

17

工6．6

76

1、。創繍

78i 3eO

51 O

13．7

3

8．3

28 e

o

22

7．1

30 Ol 10．0

781 248

を得た．

 此処に甚だ興味あるのは，初夏6月に於け る成績が42例中青赤色集落発生例数各1であっ て，発生する集落数は頗る勘かつたと同様の傾 向がやがて冬期に向ふ10月の既倒に現はれた事 である．即ち10月vaは何等集落の発生を見得な かったのである．之に反して夏期には本培地を 以てするも集落の発生数が比較的多く赤青両集 落を合して28〜30％に達した．此の事は著者の 取扱つた槍便材料の採取が恰も被検地城内に於 て赤痢症をも含め流行性下痢患者の頻i発に際し て行はれた事を勘考するとき頗る興味深bもの がある．又夏期に本夕地上に発生した青色集落 中には或種の赤痢菌集落が発生存在せる可能性 があり，被検患者中には正しく臨床上赤痢と目 されるものがあったが，本鑑別培地は專らチフ ス・パラチフス菌を耳蝉上の対象としたので，

これ以上の槍索は行はなかった．而して赤色集 落発生22例に重てはその個々の集落のマルトー ゼに対する糖分解を博し，非分解性の菌に就て チフス・パラチフス血清に依る凝集反応を試み だところ明らかにパラチフスB型菌に該当せる もの2例を得，爾余は他のサルモネラ族に属す る菌株及び極く少数の大腸菌族であった．叉2 例のパラチフス菌集落を得た糞便は1例は発熱 以來8日目に採取せるものであり，他の1例は 13日目の採取になるものであった，2例共に定 型的の高熱を持続したものであって，難癖の前

日迄は便秘のため槍便不能であっk．

結  1）著：者は各種Dipheny15ther誘導体の大腸 菌・赤痢菌・チフス菌・パラチフス菌に対する発 育阻止力及び殺菌力を槍し，4−Oxydiphenylather に於てチフス菌・パラチフス菌と大腸菌との間 に発育阻止力の相違，即ち大腸菌の発育をより 彊く抑制すると云ふ結果を得た．

 2）併し本物質を軍に寒天培地に加へたので

論

は聖人二尉の大腸菌その他の雑菌の混入を防く 事が至難であったので，更に 2， 4−Dibrom一一6−

nitr⑪phenolkaliumを添加し且Xylose， Rhamnose を加へてその分解を利用する薪鑑別培地を試作

した．

 3）而して本培地を利用して，6〜10月の5 ケ月闇に亘り著者の関係する病院外來患者300

［ 39 ］

612 小

例の槍便を行ひ2例に於てその尿中にパラチフ ヌ菌を得た。

 4）猫本培地を以てする赤色集落中チフス菌 以外のサルモネラ族の菌の発生は夏季に於て相

当数に認められ允が，冬季には殆んど認められ

なかつ1た．

 稿を終るに臨み終始御指導を賜e） s更に御絞閲の労 を探られた恩師日置教授に甚深の謝意を表する．

1）上井：十全会雑誌，51，349，工949・

文 献

2）渡辺：金沢医大日置内科実験的治療研究藁報．

［ 4e ］