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小   島    博

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(1)

606

大腸菌に対する4 OxydipkefiySatkerの作用に就て

金沢大学医学部日置内科牽教室(主任日置陸奥夫教授)

小   島    博

  Hiroshi五回忌α

 (昭和25年6月 7日   受倒寸)

緒  大腸菌感染は執拗なる臨床症1伏を呈し從來 医家の処置に窮するものであったが,近來 Streptomycinその他の抗生剤の出現,一方には Phenothiazin, Furacin誘導体等;が有効であると の報告があって,之に対する処置の方途が開け て出た様に思はれる.而も最近叉もや別種の化 合物4−OxydiphenylLitherの大腸菌に対する彊 力な作用を主張する報告が泰西に現はれたが,

之より先我教室に於ても渡辺は「腸チフス・パ ラチフス菌に対する実験治療学的研究」に於て 同菌に対する数種のDiphenylather誘導体に就 て槍索をなし,被:温血血中では独り4−Oxydi−

phenylatherが優れて殺菌力彊く,4−Am圭nodi−

phenyl蕊ther j 4−Acetyldiphenylatherが之に次ぐ と云ふ結果を得,更に後当教室上井は赤痢菌に

対する同種化合物の発育抑制作用及び殺菌作用 を醜してその成績に就て夫々述べる所があっ た.其処で今若し4−Oxydiphenylatherのかx る作用に於て之宇瓦菌に対しそれぞれ異なる成 績を示すであらうならば,独り本化合物の抗菌 性を問題となし得るに止らす,その結果は亦之 要心菌の鑑別培養にも利用せられ得るであらう 事が充分に予想せられて良い.即ち著者は此の 逆な意図の下に諸種のDipheny】atherの大腸菌・

チフス・赤痢諸菌に及ぼす影響を改めて検索し,

特に4−Oxydipheny】蕊therの大腸菌・チフス菌.

パラチフス菌に対する発育阻止力の差異を利用 してチフス菌・パラチフス菌の槍出を簡便なら しめんとする努力を試みて見たので,今その成 績を鼓に録せんとする次第である.

A.大腸菌保存株に対するDiphenylather誘 導体の作用

 1)実験方法

 a)菌種:金沢大学医学部細菌学敢室に於て分離継 代培養申の大賜菌保存株の分与を乞ひ,塞天培地より 1白金耳を,pH 7・2の肉汁5・Occに移殖,37・0。Cに て2日間増菌せるものを使用した.

 b)供試藥物:当日置内鼠教室に於て合成した以下 のDiphenylather誘導体を使用した,

 1) 4−Oxydiphenylttther  2) 4−NitrodiphenyMther

 3) 2,2 一Dinitrodiphenylnther  4) 2,4一一Dinit rodiphenyltither

5) 4,4ノー1)initrod量phenア職ther 6)3−N三tro−4−oxyd圭phe町1蕊ther

7)4−Am五蹟odiphepyl飢her

8) 4−Acetylaminodiphenylzather 9) 4−Caprylaminodipheny]ather 10) 4一一Laurylaminodiphenylather 11) 2−Nitro一一4i−aminodiphenyltither 12) 2一一Laurylamino−4−nitrodiphenylather 13) 4一一Nitro一一4 一一aminodiphenylttther 14) 4−1tr,T41t ro−4 一一caprylaminodiphenyMther 15) 3−Nitro−4−aminodiphenyllither 16) 4−Acetylamino−JO 一nitrodiphenylather 17) 3−Nitro−4−laurylam{nodiphenylEther

[ 34 ]

(2)

大腸菌に対する4−Oxydiphenylatherの作用に就て 607

 18) 4−1]aurylamino−3一一aminodiphenylather

 c)試験方法;供試藥物を1%に含有する水晶はア ルコール溶液0・2ccをpH 7・2のO・5%肉汁0・8cc に添加して500×液を作成,同標にして原液0・1ccを

肉汁0.9cc;1.9cc;2.9cc;…9・9cc;10.9ccに添加し て夫々10CO x;2000 x;3000 × ;…10000×;11GOO×

の稀釈液を得た。その各k 1・Gccにa)に於て作成 した大腸菌浮游液1滴を加へ37・O。C 2 日間培養,菌 の壇殖如何を観察し,更に各管より1滴を新鮮な同肉 汁1・Occに移植し,同じく37・0。Cに2日間培養して

殺菌力の如何を槍した.供用肉汁の滅菌は総:てユ00。C

30分とし,1日に1回,3日間繰返した.以 下阻止倍 数,殺菌倍数と称するのは夫k菌の壇殖を見る事がな かった最大廓釈倍数に椙博する.

 2)実験成績

 成績は次表に総括してみる.之を要するに,

保存大腸菌株に対する作用の最も優iれたのは 4.Oxydii)henylSther−6・あって,その菌発育抑制 力は1eOOO×殺菌力は4000 xで,4−Aminodi−

phenylatherが之に継ぎ抑制力7000 ×i殺菌力 3000×と云ふ成績を示した.

No.

 物       質

4一 Oxydipheny!ather

  1

2 14−Nitrodiphenylather

  

3

4

5

6

7

8

9

10

2,2 一Dinitrodiphenylather

    L

2,4 一Dinit rodiphenylather

構 造

〈二〉一・《二〉・H

〈二〉一・一〈二>N・・

r rM Nroi … No2

4,4 一Dinitrodiphenylather

3−N  it ro一 4−oxydiphenyl−

ather

4−Aminodipheny]ather

4一一Acetylaminodiphenyl一 邑ther

4−Caprylaminodiphenyl一

蕊ther

4−1.aurylaminodiphenyl一 鼓ther

  し、、}2−N ・・び輌 ・・d p・…1−

  1銭th・・.

!一×.一〇一一/ N

       L/

×一/

         NO2

NO2〈:〉一〇一〈=〉

N・・〈二〉…⊂>N・s

         NO2

〈1一>t−o一〈:>oH

〈=〉…〈二〉曲・

〈二〉一・一く⊃・NHC・CH・

〈=〉一〇一〈IIIIII>)gTLHcocq,Hig

〈:>Nony.〈=>NHCOCItH23          NO2

NH2〈=〉一〇一〈=〉

12 2−Laurylamino−4−

nitrodiphenylttther

      NIICOCIIS/ll,.3

〈=〉一〇・一一〈=>NO2

阻止倍数

10000 ×

殺菌倍数

4eoo ×

   L

一 1〈soo x

  一!

×

7000 ×

3000 ×

×

1000 ×

x

×

〈soe ×

〈500 ×

〈500 ×

3000 ×

2000 x

く50叡

×

500 ×

x

[ 35 ]

(3)

608

13

14

15

4−Nit ro−4 一aminodiphenyl一 邑ther

4−N itro−4Lcaprylamino−

diphにny1飢her

3−Nit ro一一 4一 aminodiphenyl一 斗ther

16 1 {TillCetY.iar}iino−3 一nitro.

  {d量phenyl翫the「

17

18

3−Nitro−4一一]aurylamino−

diphenylather

4−Laurylamino一一3−amino−

diphenylather

NII2〈:〉一 O 一〈:>NO2

NHC OCg, Hlf〈=〉 一一一 O 一一一 〈:一 >NO,,

        NO2

〈一一 :一〉一〇一一〈:>MI2

画σ2

〈=〉一・一く⊃dHNC・cH・

        NO2

〈一一〉一〇.一..〈=>NIICOCIIH23

        NH2

く=》・一<=>M・C・C1・H・・

〉く

3000 ×

1000 x

く5000x

×

く500x

2000 x

〈500 x

500 ×

註)1)<500×:500xよむ少なるを示す.

  2)==結晶析出による混濁のため判定困難.

  3)x=水及びアルコpルに不溶のため槍査不能.

 B.4−Oxydiphenylatherの保存大腸菌・チフス 菌・パラチフス菌・赤痢菌に対する作用の比較  1)ブイヨン中培養比較成績

 前記に於て著者は被槍D{phenyl且ther誘導体 申では4−Oxydipheny15therカミ大腸菌に対して 比較的強い作用を有するのを知った.本化合物

はその雪水に可溶匪であるから万一利用せられ るものがあるとすれば殊に便利な物質である.

 本物質が大腸菌及び腸内病原菌に対して果し て如何なる作用の差異を呈するかに就ては,前 述の成績を渡辺,上井のチフス菌・赤痢菌(志賀 菌)に対する成績に比較すると次の檬である.

菌  種 阻止倍数 殺菌倍数

大腸菌

10000 × 4000 ×

赤面チフス劇繍刻繍フ

4000 × 4eoo ×

4000 × 2eao ×

400e × 20eo ×

40GO x 2000 ×

 即ち如上の成績を信ずるならば,本化合物の 之一項菌に対する作用中最:も二大なの.は大腸菌 に対してS ある.著者は此処に着目して,次の 各種の条件に於けるその作用を夫々比較考察し

た。

 2)下天培地上培養比較成績

 pH 8,0の05%肉汁寒天培地を作成,之に

4一・Oxydiphenアlatherの100 x水溶液を1:119;

1:109; 1:10 ; 1:99; 1:94; 1:89; 1:84; 1:79」

1:74;の割合に添加し,夫々4−Oxydipheny]芭ther

を「 12000xJ 11000Jx lO500x3 10000x3 9500 xj 9000 × ;8500x;8000×17500xに含有 せる寒天培地を作成,滅菌,李板となし各種菌 の保存株を移植,37.0。C.48時闇培養したとヒ ろ下表の如き成績を得た.

 3)小  括

 勿論実験条件に依って化合物の示すと■ろの 細菌に対する発育抑制力・殺菌力は相違すると とろ大なるものがあるが,大休晶晶菌株では 4−Oxydiphenylatherの藥物作用はチフス菌・パ

[ 36 )

(4)

大腸菌に対する4一一〇xydiphenylatherの作用に就て 609

1:12000 1:nooe 1:10500 1:10000 1:9500 1:goeo 1:8500 1:8QOO 1:7500

TII

TO

± P.A.

P.B.1 S

KLA

KBi iKBm

C

±

TH:チフス菌H型 TO:チフス菌0型 P・A・ :パラチフス菌A型

:P.:B.:パラチフス菌:B型

S:赤痢志賀菌 1(A=赤痢駒込A型菌 KBI:赤痢駒込BI型押 KBm=赤痢駒込BIII型菌 C:大賜菌

ラチフス菌に対するより明らかに大腸菌に対し て強く現はれてるる.

 C.4−Oxydipheny】三ither含有二天培地上人糞 内大腸菌等の発生歌況

 前述の成績に依れば4−Oxydiphenyl巨therを

:普通一天培地に適当な濃度に含有せしめたなら ば簡軍に大腸菌の発生を阻止し得べき筈であ る.此の様な培地が実際人糞中の大腸菌を如何 様に抑制し得るであらうか.叉その場合に於 て,他種の腸内菌が如何様に増殖し來るであら

うか.之等を観察せんとして次の実験を行っ た.即ち,前章に述べたと同様の方法に依って 4−Oxアdipheny】atherを種々の割合に含む寒天培 地を作成,準板とし,その上に外來検便患者よ りの糞下を少量の水にといた物を極く少量塗抹 し,37.0。C 2日聞培養後集落の有無を槍したと tろ下表の如き成績を得た,

 但し上記集落中には大腸菌集落のみならす各 種の球菌及びアルカリ性糞便菌と思はれる桿菌 に依る集落も相当数に含まれてみた.又上表で

1含有量

集落発生例

割合(%)

1:12000

100

1:11000

100

ユ1105CO

., 1 eo

i:ioooo l ].:gsoo

60 50

1:9000

50

1:8500

40

1:8000

25

1:7500

15

は仮令集落の発生数が一二板上只1個でも之を 陽性として挙げたのであるが,無論藥物の作用 に依って個々の雫板上の集落数は普通肉汁塞天 上に於けるより遙かに凹く,例へば1:10000二 物含有手板上では僅かに0〜30個の程度を算し たに過ぎない.併しとに恥く藥物の含:量が之よ

り低下すればする程菌集落発生(大腸菌をも含 め)の率を増加したのであるから,之に依って みるも人糞内大腸菌は保存株とは著しくその活 力を異にする事を知るに至ったのである.

 D.4−Oxydiphenylather並びに2,4−D三brom−

6−nitrophenolkalium含有回天培地上に於けるチ フス菌・パラチフス菌・大腸菌保存株及び人糞内 大腸菌等の発生域績

 箪に4−Oxydiphenyl蕊therのみを含有せる寒

ptm..op,..E

天培地では上記の如く相当数の球菌集落の発生 を認めたので4−Oxydiphenyl蕊therに更に2,4−

D1brom−6甫itrophenolkaliumを寒天培地に含有 せしめ,之に依ってチフス菌・パラチフス菌と 大腸菌の発育にそれぞれ差異を保有せしめた上 に,人糞内諸雑菌の発生を更に稀ならしめ得る か否かにつき槍回したところ下表の如き成績を

.得た.因に上記2,4−Djbrom−6−nitrophenolkal{um は.黄色葡萄朕球菌に対して1:76800稀釈に於 て之が発育を阻止し得た。但し大腸菌の発育に 対しては1=2000含有寒天培地上に於ても之を

:全然抑制し得なV・.

 1)1:11000,4−Oxγdiphenア翫her含有塞天培 地に各種濃i度に2,4・Dibrom−6−nitrophenolkaliUm を含有せしめたる成績

[ 37 )

(5)

610

島.

ぱ 1:60000 1:50000

1:40000 1:30000 1:20000 1:lsoeo 1:10000 1:5000 1:4000

T.H.

rr . O・

十 十

P.A.

十,

P.B.

。.

±

±

±

±

±

±

2,4−Dibrom−6−nit rophenollcalium

       含有量 工 10000 1 : saeo 1: 4eoo

人糞中諸菌 の発生頻度

80e/a soe/0 300/o

 2)1:10000,4一一〇xydiphenyl蕊ther含有寒天培 地に添加せる場合の成績

\菌種1T.H.

舗壷\1

1:600eo 1:socoe

1:400ee 1:300eo 1:20000

1:lsooe

1:10000 1:5000 1:troOO

±

  f T.O@.?P.A.

十 十

÷

±

± P.B.

± C.

 上記成績の如く 4−Oxγdiphenylatherをそれ ぞれi:10000,1:110eoに含有せしめた上更に

2, 4−Dibrom一一6−nitrophenolkalium を 1:5000〜

10000に含有せしめる事に依ってチフス菌・パラ チフス菌・大腸菌の発育上の差異をその儘か或 はそれ以上に保有せしめ得る事を知った,

 次で1:1100⑪,4−Oxアdiphenyl且ther及び1:1

0000,一一v4000, 2,4−Dibrom−6−nitrophenolkalium

含有寒天培地に於ける入毛内諸菌の癸生を通し たとヒろ集落発生率は更に次表の如く低下し,

殊に1:11000,4−Oxydipheny撫her及び1:400 0,2,4−Dibrom−6−nitrophenolkalium含有培地 の場合には雑菌の発生は下表の如き牽となり,

而も一貫板上1⑪個内外に減少し,その殆んどが アルカリ性糞便菌に属した.

 3)小  括

 之を要するに,適当なる濃度の4一一〇xydiphe−

ny15ther及び2, 4−Dibrom−6−nitrQphenolkalium を含有せしむる事に依ってチフス菌・パラチフ ス菌の発育に特に大なる障碍を与へす,而も輩 に4−Oxydipheny15therのみを使用した場合よ りも更に張力に腸内雑菌の増殖を阻止する事が

出來た.

 E.鑑別培地作成の試み

 前述の如く保存種では完全に大腸菌の発育を 阻止し独りチフス菌・パラチフス菌のみの増殖 を許し得るが如き条件が得られたのであるが,

実際には人糞内大腸菌その他の活力が平なる事 に依って鑑別培地作成可能の予想とは梢ζ反 する結果に至ったのである.併し4−Oxydiphe−

nylatherを1:11000並びに2,4−Dibrom−6−

nitrophenolkaliumを1:4000・一5000に含有せし めた培地では少くともチフス菌・パラチフス菌 を充分発育せしめ得る事が可能であり,此の場 合大腸菌の槍出率は予期に反して少くなかった とは謂うものの,無論何等本化合物を含有せし めざる培地に増殖せしめたるに比すれば癸生す る大腸 菌その他雑菌集落数は甚だ制限せられた ので,著者は本培地を基礎として一種の鑑別培 地を考案した,要は上述の如くして大腸菌及び 各種の球菌の発育を抑制し,猫且生する集落中 より糖分解を利用して糖非分解性諸雑菌を除外 せんとしたものである.

 1)培地製法

 1%肉汁を含有する3%寒天培地を型の如く作成,

pH 8』〜8・4に修正,10⑪Oc・c・に対し4−Oxydiphey−

IZther O,lg; 2,4一一Dibrom−6−nitrophenolkalium O.275g

を混合加熱,充分溶解後60・0。Cに冷却するを待ち予 め小羅の水に溶解せるRhamnose及びXylose各々 7・59を加へ充分混和する.その同病1時間1GO。C に加熱して後60。Cに冷却しpH 8・0に修正,更に

[ 38 ]

(6)

大腸菌に対する4・一〇xydiphenyltitherの作用に就て

6ユ1

:Lacmus 8〜1egを水約50cc lこ溶解ぜるものを加へ,

混和,容稜を1100ccに修正,分注,100。Cにて30分 聞滅菌して冷暗所に貯藏,用に臨み李板として使用す

る,

 2)作成上の注意事項

 心密を要し,特にpH修正は正確でなけれぽならな い.完成品は李板とした場合青紫色透明なるべきで,

赤褐色の勝つた物は不i適品である。

 3)集落の判別法

 腸チブス菌・パラチフス菌を含むサルモネラ菌及び 極く小数乍ら発生する大腸菌は37。Cにて2日間の培 養後赤色の集落を作る.而して目的とする腸チフス菌          ゴ・パラチフス菌は之より試験凝集その他に依って判別

する.

 :F.実際橡便成績

 無論上記の鑑別培地は当教室にある保存菌株 には充分の成績を示したので,6〜10月の5ケ 月に亘って,ともかくも腹部症状を主訴とした 患者及び面一患者にして槍便を要する者総てを 対象として培養を試みた結果,以下の如き威績

     

月 別i6月

    一L二 検便例数

赤色集落発 生乱数 赤色集落発

生率(%)

青色集落発 生例数 青色集落発 生率集(%)

落を発せざ

る例数

42

1

2.4

2.4

40

7月 8月

421 lo2

7

16.7

9 21.4

26 9

8.8

17

工6.6

76

9月  36

1、。創繍

78i 3eO

51 O

13.7

3

8.3

28 e

o

22

7.1

30 Ol 10.0

781 248

を得た.

 此処に甚だ興味あるのは,初夏6月に於け る成績が42例中青赤色集落発生例数各1であっ て,発生する集落数は頗る勘かつたと同様の傾 向がやがて冬期に向ふ10月の既倒に現はれた事 である.即ち10月vaは何等集落の発生を見得な かったのである.之に反して夏期には本培地を 以てするも集落の発生数が比較的多く赤青両集 落を合して28〜30%に達した.此の事は著者の 取扱つた槍便材料の採取が恰も被検地城内に於 て赤痢症をも含め流行性下痢患者の頻i発に際し て行はれた事を勘考するとき頗る興味深bもの がある.又夏期に本夕地上に発生した青色集落 中には或種の赤痢菌集落が発生存在せる可能性 があり,被検患者中には正しく臨床上赤痢と目 されるものがあったが,本鑑別培地は專らチフ ス・パラチフス菌を耳蝉上の対象としたので,

これ以上の槍索は行はなかった.而して赤色集 落発生22例に重てはその個々の集落のマルトー ゼに対する糖分解を博し,非分解性の菌に就て チフス・パラチフス血清に依る凝集反応を試み だところ明らかにパラチフスB型菌に該当せる もの2例を得,爾余は他のサルモネラ族に属す る菌株及び極く少数の大腸菌族であった.叉2 例のパラチフス菌集落を得た糞便は1例は発熱 以來8日目に採取せるものであり,他の1例は 13日目の採取になるものであった,2例共に定 型的の高熱を持続したものであって,難癖の前

日迄は便秘のため槍便不能であっk.

結  1)著:者は各種Dipheny15ther誘導体の大腸 菌・赤痢菌・チフス菌・パラチフス菌に対する発 育阻止力及び殺菌力を槍し,4−Oxydiphenylather に於てチフス菌・パラチフス菌と大腸菌との間 に発育阻止力の相違,即ち大腸菌の発育をより 彊く抑制すると云ふ結果を得た.

 2)併し本物質を軍に寒天培地に加へたので

は聖人二尉の大腸菌その他の雑菌の混入を防く 事が至難であったので,更に 2, 4−Dibrom一一6−

nitr⑪phenolkaliumを添加し且Xylose, Rhamnose を加へてその分解を利用する薪鑑別培地を試作

した.

 3)而して本培地を利用して,6〜10月の5 ケ月闇に亘り著者の関係する病院外來患者300

[ 39 ]

(7)

612 小

例の槍便を行ひ2例に於てその尿中にパラチフ ヌ菌を得た。

 4)猫本培地を以てする赤色集落中チフス菌 以外のサルモネラ族の菌の発生は夏季に於て相

当数に認められ允が,冬季には殆んど認められ

なかつ1た.

 稿を終るに臨み終始御指導を賜e) s更に御絞閲の労 を探られた恩師日置教授に甚深の謝意を表する.

1)上井:十全会雑誌,51,349,工949・

文 献

2)渡辺:金沢医大日置内科実験的治療研究藁報.

[ 4e ]

参照

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4/6~12 4/13~19 4/20~26 4/27~5/3 5/4~10 5/11~17 5/18~24 5/25~31 平日 昼 平日 夜. 土日 昼

1月 2月 3月 4月 5月 6月 7月 8月 9月 10月 11月 12月.

The IOUT pin sources a current in proportion to the total output current summed up through the current summing amplifier. The voltage on the IOUT pin is monitored by the internal

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12月 1月 2月 3月 4月 5月 6月 7月 8月 9月 10月 11月 12月.

4月 5月 6月 7月 8月 9月 10月 11月 12月 1月 2月