九州大学学術情報リポジトリ

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Kyushu University Institutional Repository

RFLP(制限酵素DNA断片長多型)を利用したイネの連鎖 地図作成に関する研究

出田, 収

九州大学農学研究科遺伝子資源工学専攻

https://doi.org/10.11501/3110821

爪 U

RFLP(制 限 酵 素DNA断 片 長 多 型 ) を 利 用 し た イ ネ の 連 鎖 地 図 作 成 に 関 す る 研 究

出 回 収

1996 

目 次

頁 緒 言

第1章 ト リ ソ ミ ッ ク ス を 利 用 し たRFLPク ロ ー ン の 座 乗 染 色 体 決

定 な ら び にRFLP分 析 に よ る 異 数 体 の 染 色 体 構 造 の 決 定 4  第1節 ト リ ソ ミ ッ ク ス を 利 用 し たRFLPク ロ ー ン の 座 乗 染 色 体

決 定 5 

第l項 日 印 交 雑 ト リ ソ ミ ッ ク Flを 利 用 し たRFLPク ロ ー ン の

座 乗 染 色 体 決 定 5 

材 料 お よ び 方 法 5 

結 果 お よ び 考 察 8 

第2項 RFLPを 不 さ な いDNAク ロ ー ン の 座 乗 染 色 体 決 定 14 

材 料 お よ び 方 法 14 

結 果 お よ び 考 察 15 

第2節 RFLPを 利 用 し た 異 数 体 の 染 色 体 構 造 の 推 定 19  第1項 一 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス の 交 雑 後 代 に 出 現 し た 二 次 ト リ ソ

ミ ッ ク ス 様 植 物 に つ い て 19 

材 料 お よ び 方 法 20 

結 果 お よ び 考 察 20 

第2項 染 色 体11に 関 す る 4型 の ト リ ソ ミ ッ ク ス のRFLP分 析 24 

材 料 お よ び 方 法 25 

結 果 お よ び 考 察 25 

第2章 従来の連鎖、地図と RFLP連 鎖 地 図 と の 統 合 29 

第1節 標 識 遺 伝 子 と RFLPマ ー カ ー と の 連 鎖 分 析 に よ る 統 合連 鎖 地 図 の 作 成

材料お よ び 方 法

30  30 

結 果 お よ び 考 察

第2節 イ ン ド 型 品 種IR24と 日 本 型 標 識 遺 伝 子 系 統 と の 交 雑 後 代 に 観 察 さ れ た 遺 伝 子 の 分 離 の 歪 み に つ い て

材 料 お よ び 方 法 結 果 お よ び 考 察 第3章 総 合 考 察

摘 要 謝辞

引 用 文 献 英 文 摘 要 附 図 ・ 附 表

32 

A

﹃︐コ戸コウ

H o o

‑

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今' M O O

司 コ

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勺I円︐I勺

I 0 0

緒 言

メ ン デjレ の 遺 伝 の 法 則 は 優 劣 の 法 則 ， 分 離 の 法 則 ， 独 立 の 法 則 か ら な る . こ の う ち ， 独 立 の 法 則 に つ い て の 例 外 が 連 鎖 と 呼 ば れ る 現 象 で あ る . こ れ は 遺 伝 子 が 染 色 体 上 で 線 状 に 配 列 し て い る こ と に よ る も の で ， 逆 に ， 遺 伝 子 間 の 連 鎖 を 見 出 す こ と に よ っ て ， 遺 伝 子 を 線 状 に 配 列 し た 地 図 を 作 成 す る こ と が で き る . こ れ を 連 鎖 分 析 と い う . 1900年 に メ ン デ ル の 法 則 が 再 発 見 さ れ て 以 来 ， イ ネ に お い て も 連 鎖 分 析 が 行 な わ れ る よ う に な り ， 1963年 に はNagao and Takahashiが 主 に 形 態 形 質 着 色 形 質 ， 生 理 形 質 を 標 識 遺 伝 子 と し て ， イ

ネ(2n=24)に期待される 12の 連 鎖 群 を 試 作 し た . そ の 後 ， こ の12の 連 鎖 群 と 染 色 体 と の 対 応 関 係 を 決 定 す る た め に ， 相 互 転 座 や ト リ ソ ミ ッ ク ス を 用 い た 分 析 が 行 な わ れ る よ う に な り ， 連 鎖 、 群 の 改 廃 や 新 連 鎖 群 の 発 見 が な さ れ ， 現 在 ，

イネの12の 染 色 体 に そ れ ぞ れ 対 応 す る 連 鎖 群 ま た は 標 識 遺 伝 子 群 が 明 ら か に されている(総説 Iwata1986). 

一 方 ， 近 年 の 分 子 生 物 学 的 手 法 の 進 歩 に よ り ， DNAの 多 型 を 容 易 に か つ 多 数 検 出 す る こ と が 可 能 に な っ た . こ のDNA多 型 は RFLP(Res triction Fragmen t  Length Polymorphism)と 呼 ば れ ， な か で も ， 核DNAのRFLPは メ ン デ ル の 法 則

に 従 っ て 遺 伝 す る の で ， 標 識 遺 伝 子 と 同 じ よ う に ， 連 鎖 分 析 の マ ー カ ー と し て利用できる.

RFLPを 連 鎖 、 分 析 の マ ー カ ー に 利 用 す る 場 合 ， 従 来 の 標 識 遺 伝 子 と 比 較 す る と ， 次 の よ う な 特 徴 が あ る . ま ず ， 標 識 遺 伝 子 よ り も 容 易 に 多 数 の マ ー カ ー が 得 ら れ る . 次 に 標 識 遺 伝 子 は 一 般 に 完 全 劣 性 で あ る も の が 多 く ， F2でヘ テ ロ 型 の 遺 伝 子 型 を 判 別 で き る も の は 少 な い が RFLPマ ー カ ー は ， 大 部 分 の も の が 共 優 性 を 示 す の で F2で ヘ テ ロ の 遺 伝 子 型 を 判 別 で き ， 精 度 の 高 い 組 換 価 が 算 出 で き る . さ ら に 標 識 遺 伝 子 の 場 合 形 質 が 脹 乳 や 幼 苗 で 発 現 す る も の か ら 成 熟 個 体 に 達 し な い と 発 現 し な い も の ま で あ り ， 評 価 す べ き 時 期

が 限 ら れ て い る も の が 多 い . ま た ， 表 現 型 が 生 育 環 境 の 影 響 を 受 け ， 形 質 が 正 確 に 評 価 で き な く な る 可 能 性 が あ る . 一 方 ， RFLPマーカーは， DNAの 塩 基 配 列 の 違 い を 認 識 す る も の な の で ， DNAさ え 得 ら れ れ ば ， ど の 生 育 段 階 に お い て も 評 価 が 可 能 で あ る . ま た ， 生 育 環 境 に 左 右 さ れ ず に ， 正 確 に 遺 伝 子 型 を把握できる.

こ の よ う な 特 徴 を も っRFLPは ， 充 実 し た 連 鎖 、 地 図 を 作 成 す る の に 適 し て い る と 考 え ら れ る . 既 に ， い く つ か の 植 物 種 に お い て ， RFLPを 利 用 し た 連 鎖 地 図 が 作 成 さ れ ， 育 種 学 的 ， 遺 伝 学 的 あ る い は 分 類 学 的 な 応 用 が 期 待 さ れ て い る(総説 Tanksleyet al.  1989). イ ネ に お い て も McCouchet al. (1988)， Saito et  al.(1991)， Causse et al.  (1994)お よ びKurataet al.(1994)が そ れ ぞ れRFLPを利 用 し た 連 鎖 地 図 を 作 成 し て い る .

今 後 ， 連 鎖 地 図 を 基 盤 と し た 遺 伝 ・ 育 種 学 的 な 研 究 を 進 め る に 当 た っ て は ， 形 態 、 形 質 な ど を マ ー カ ー と し た 従 来 の 連 鎖 地 図 と RFLPを マ ー カ ー と し た

RFLP連 鎖 地 図 と の 両 方 の 情 報 を 利 用 す る こ と が 望 ま れ る . そ れ に は ， 従 来 の 連鎖地 ~(Classical linkage map)とRFLP連 鎖 地 図(RFLPlinkage map)とを統合 した連鎖、地図，すなわち，統合連鎖、地図(Integratedlinkage map)の 作 成 が 必 要 で あ る . 既 に ， シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ で は 125の 標 識 遺 伝 子 と 350のRFLPマ ー カ ー と か ら 成 る 統 合 連 鎖 地 図 が 作 成 さ れ て い る(Haugeet  al.  1993). また， トマトに お い て は 染 色 体l(Balint‑Kurtiet al.  1995)および、染色体6(Weideet al.  1993)に つ い て 統 合 連 鎖 、 地 図 が 作 成 さ れ ， 従 来 の 連 鎖 地 図 と RFLP連 鎖 地 図 と の 比 較 が 行なわれた.イネにおいても， Kishimoto et  al.  (1992)やYuet  al.  (1995)はい くつかの標識遺伝子とRFLPマ ー カ ー と の 対 応 づ け を 行 な い ， ま た ， Abenes et  al. (1994)は 染 色 体11に つ い て ， 従 来 の 連 鎖 地 図 とRFLP連鎖、地図との方向づけ

を行なっている.さらに， C a u s s e e t al.  (1 994 ) は 様 々 な 連 鎖 分 析 の 結 果 に 基 づ

ま だ な さ れ て い な い . 今 後 ， 従 来 の 連 鎖 地 図 と RFLP連 鎖 地 図 と が 統 合 さ れ て 充 実 し た 連 鎖 地 図 が 作 成 さ れ れ ば ， イ ネ の 遺 伝 ・ 育 種 学 の 基 礎 的 ， 応 用 的 研 究 に 資 す る と こ ろ は 大 で あ る と 考 え ら れ る .

そ こ で ， 本 研 究 で は ， ま ず ， 農 林 水 産 省 と 九 州 大 学 農 学 部 育 種 学 教 室 と の 共同研究によるRFLP連鎖地図を完成させるために， ト リ ソ ミ ッ ク ス を 利 用 し て， RFLP連 鎖 群 と イ ネ の12の 染 色 体 と の 対 応 づ け を 行 な っ た . つ い で ， 標 識 遺伝子とRFLPマ ー カ ー と の 連 鎖 分 析 を 行 な い ， 従 来 の 連 鎖 地 図 と RFLP連 鎖 地図との統合を試みた.

な お ， 本 論 文 中 で は ， 従 来 の 連 鎖 地 図 と は 九 州 大 学 農 学 部 育 種 学 教 室 で 作 成 さ れ て き た イ ネ の 連 鎖 地 図 (Iwata et al.  1984， 1989a， 1989b) (Appendix 1  参照)を指し， RFLP連 鎖 地 図 と は Saito  et  al.  (1991)  (Appendix  2参照)の RFLP連鎖地図を指すこととする.また， S ai to e t al.  (199 1 )のDNAクローンは 番号にNpbを 付 し て 表 し ， そ の ク ロ ー ン に 由 来 す る 連 鎖 地 図 上 の 座 位 あ る い は マ ー カ ー は 番 号 にXNpbを 付 し て 表 し た . 同 ー の ク ロ ー ン に 由 来 す る 複 数 の 座 位 あ る い は マ ー カ ー は 枝 番 号 で 示 し た . 例 え ば ，XNpb68^・1(染色体8)と XNpb68・2(染 色 体6)とはともにNpb68に 由 来 す る . さ ら に ， 染 色 体1，3， 4， 

5， 8， 9および12に つ い て は ， 川 崎 ら (1991)お よ び 野 々 村 ら (1994お よ び 未 発 表)が染色体腕と連鎖、群との対応関係が明らかにしているので，短腕側が左側

も し く は 上 側 に な る よ う に 連 鎖 地 図 の 作 図 を 行 な っ た .

第

1

章 ト リ ソ ミ ッ ク ス を 利 用 し た

RFLP

ク ロ ー ン の 座 乗 染 色 体 決 定 な ら び に

RFLP

分 析 に よ る 異 数 体 の 染 色 体構 造 の 推 定

正 常 植 物 に 比 べ 染 色 体 を1本 過 剰 に も つ 植 物 を ト リ ソ ミ ッ ク ス と い う . イ ネ (2n=24)に お い て も 12種 類 の ト リ ソ ミ ッ ク ス の シ リ ー ズ が 作 出 さ れ て い る (I

w a t a  a n d  Omura 1 9 8 4 ) .  

ト リ ソ ミ ッ ク ス を 利 用 し て 行 な う 遺 伝 分 析 を ト リ ソ ミ ッ ク 分 析 と い う . 従 来 ， 主 と し て 標 識 遺 伝 子 に つ い て ， ト リ ソ ミ ッ ク ス と の 交 雑 後 代 に お け る 分 離 の 様 式 か ら ， そ の 座 釆 染 色 体 を 同 定 す る 分 析 が 行 な わ れ て き た . 現 在 ， イ ネ の12の 染 色 体 の そ れ ぞ れ に 対 応 す る 連 鎖 群 ま た は 標 識 遺 伝 子 群 が 明 ら か に さ れ て い る が ， ト リ ソ ミ ッ ク 分 析 が イ ネ の 連 鎖 地 図 作 成 に 果 た し た 役 割 は 大 き い ( 総 説

I w a t a1 9 8 6 ) .  

さらに近年， ト リ ソ ミ ッ ク ス は

RFLP

ク ロ ー ン の 座 乗 染 色 体 を 決 定 す る こ と に も 使 わ れ る よ う に な っ た .

S  a i  t o  

e t a.l 

( 1  9 9 1  

)は， ト リ ソ ミ ッ ク ス の 交 雑 後 代 における

RFLP

マ ー カ ー の 分 離 比 が ダ イ ソ ミ ッ ク ス の 交 雑 後 代 に お け る 分 離 比 と 異 な る こ と を 利 用 し て

RFLP

ク ロ ー ン

4

個 の 座 釆 染 色 体 を 決 定 し た . ま た ，

Y 

0 

u  n 

g e t al.  ( 

1  9  8 7  

)はトマトで，

McCouch 

et  al.(1988)な ら び に

Sa i t o  

et  al. 

( 1 9 9 1 )

は イ ネ で ， そ れ ぞ れ ト リ ソ ミ ッ ク ス の 遺 伝 子 量 効 果 を 利 用 し て ，

RFLP 

ク ロ ー ン の 座 乗 染 色 体 を 決 定 し た .

また，一旦，

RFLP

連 鎖 地 図 が 構 築 さ れ れ ば ，

RFLP

マ ー カ ー を 使 っ て 染 色 体 の 重 複 ・ 欠 失 を 遺 伝 子 量 効 果 に よ り 検 出 し 二 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス ， 三 次 ト

リ ソ ミ ッ ク ス あ る い は ア ク ロ ト リ ソ ミ ッ ク ス な ど の 異 数 体 の 染 色 体 構 造 を 推 定 す る こ と も 可 能 で あ る .

本研究では， ト リ ソ ミ ッ ク ス の 遺 伝 子量 効 果 を 利 用 し て ， い く つ か の

RFLP

ク ロ ー ン の 座 乗 染 色 体 を 決 定 し た . ま た

RFLP

連 鎖 地 図 上 に 位置 づ け られた

第

1

節 ト リ ソ ミ ッ ク ス を 利用 した

RFLP

クロー ン の 座 乗 染 色 体 決 定

S 

ai 

t o  

e t al.  ( 

1 9 9 1  

)はイネの

RFLP

連 鎖 群 作 成 の 際 ， ま ず ， イ ネ に 期 待 さ れ る 12の 連 鎖 群 を 試 作 し た . そ の う ち の 6群は，

RFLP

マ ー カ ー と 座 乗 染 色 体 既 知 の 標 識 遺 伝 子 や ア イ ソ ザ イ ム マ ー カ ー と の 連 鎖 を 指 標 に し て ， 対 応 す る 染 色 体 が 決 定 さ れ た

( K i s h i m o t o

et al.  1989)が ， 残 り の6群 は 染 色 体 と の 対 応 関 係 が 不 明 で あ っ た . そ こ で ， 本 研 究 で は ， ト リ ソ ミ ッ ク ス の 遺 伝 子 量 効 果 を 利 用

して，

RFLP

連 鎖 群 と 染 色 体 と の 対 応 関 係 を 調 査 し た .

第1項 目 印 交 雑 ト リ ソ ミ ッ ク

F l

を 利 用 し た

RFLP

ク ロ ー ン の 座 乗 染 色 体 決 定

McCouch 

et  al.(1988)^{は ， イ ネ の}

RFLP

連 鎖 、 地 図 作 成 の 際 ， イ ン ド 型 イ ネ の ト リ ソ ミ ッ ク ス に ジ ャ ワ 型 イ ネ を 交 配 し て 得 た ト リ ソ ミ ッ ク

F l

の 遺 伝 子 量 効 果を利用して，

RFLP

連 鎖 群 と 染 色 体 と を 対 応 づ け た . 本 実 験 で も こ れ に 準 じ た 分 析 を 行 な っ た .

材 料 お よ び 方 法

(1)供 試 イ ネ

日 本 型 品 種 目 本 晴 由 来 の ト リ ソ ミ ッ ク ・ シ リ ー ズ ( Iwataand Omura 

1 9 8 4 )

に イ ン ド 型 品 種IR24を 交 配 し て 得 ら れ た ト リ ソ ミ ッ ク

F l

の シ リ ー ズ を 用 い た .

ま た ， イ ン ド 型 品 種IR24の ト リ ソ ミ ッ ク ス ( 小 川 ら 未 発 表 ) に 日 本 型 品 種 ト ヨ ニ シ キ を 交 配 し て 得 ら れ た9型 の ト リ ソ ミ ッ ク

F l

も 用 い た . こ の9型 の ト リ ソ ミック

F l

は そ れ ぞ れ 染 色 体 1，

5

， 

6

， 

7

， 

8

， 

9

， 10， 11お よ び 12を 過 剰 染 色 体 と す る も の で あ っ た .

(2)DNAク ロ ー ン

Saito et  aI.  (1991)がRFLP連 鎖 地 図 作 成 に 用 い た ク ロ ー ン の中から， 日本 晴 とIR24との間，または， IR24と ト ヨ ニ シ キ と の 間 で 適 当 な 多 型 を 示 し た も の を56個 選 ん で 用 い た . さ ら に ， RFLP連 鎖 地 図 に 位 置 づ け ら れ て い な い 若 干 の ク ロ ー ン ( 斎 藤 ら 未 発 表 ) も 用 い た . こ れ ら は ク ロ ー ン の 番 号 にNpbを 付 し て 表 し た . ま た ， イ ン ド 型 品 種IR24の ゲ ノ ムDNAに 由 来 す る 新 た な ク ロ ー ン ( 吉 村 ら 未 発 表 ) に つ い て も い く つ か を 本 実 験 に 供 し た . こ れ ら は ク ロ ー ン の 番 号 にKyを 付 し た . 以 上 を 一 括 し てTable1・1・1に示した.

(3)サ ザ ン ハ イ プ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン

供 試 イ ネ か ら のDNA抽出は， CTAB(臭 化 セ チ ル ト リ メ チ ル ア ン モ ニ ウ ム ) を 利 用 し た 方 法(Murrayand Thompson 1980， Rogers and Bendich 1988)に 準 じ

て 行 な っ た . 抽 出 し たDNAは， 9種 類 の 制 限 酵 素BamHI， BglII， DraI， EcoRI， 

EcoRV， HindIII， SacI， ScaIお よ びXbaIの い ず れ か に よ っ て 消 化 し た 後 ， 各 レーン2μgずつ0.8%ア ガ ロ ー ス ゲ ル 電 気 泳 動 に か け ， ナ イ ロ ン メ ン プ ラ ン に 固 定 し た . プ レ ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン 処 理 に は4XSSPE，l%SDS， 0.5%ス キムミルク， 0.5mg/ml  Herring  DN A， 50%ホ ル ム ア ミ ド を 含 む 緩 衝 液 を 用 い た . 処 理 温 度 は42

o C

， 処 理 時 間 は2時 間 な い し 一 晩 と し た . プ レ ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン 後1 ラ ン ダ ム プ ラ イ マ 一 法 (Feinberg and  Vogelstein  1983)により 32p‑dCTPで 標 識 し たDNAク ロ ー ン を プ ロ ー プ と し て ， ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン 処 理 を 行 な っ た . 処 理 温 度 は42⁰C， 処 理 時 間 は6時 間 な い し一晩 と し た . ハ イ プ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン 後 の 洗 浄 は ， 42⁰Cの0.2%SDSを含む 6X SSCで30分2回， 0.2%SDSを含む2XSSCで60分1回 と し た . た だ し ， オ ー ト ラ ジ オ グ ラ ム 上 で

の シ グ ナ ル の 弱 い プ ロ ー プ を 用 い た 場 合 に は ， O.2%SDSを含む2X SSCで の 洗

Tab1e 1‑1‑1.  Chromosoma1  assignment of RFLP  c10nes by 

七risomic gene dosage ana1ysis  Chromosome  RFLP c10ne  (Npb) 1) 

l  54  96  130  147  252  314  80²) Ky3³) 

2  42  58  223  227  250  349  3  48  51  173  249  392 

4  114  120  203  311  72²) Ky4³) 

5  105  139  292  297 

6  12  135  172  209  342  83²) Kyl1³) 

7  20  22  117  338  50²) 

8  126  278  397  398  68⁴) 

9  13  36  47  108  Ky7³) 

10  37  127  291  333  68⁵)  89⁶) 

11  44  52  78  183  189  12  88  124  148  193  336 

1)  RFLP  c10nes mapped on the RFLP  1 inkage map  (Sai to et  al. 

1991) . 

2)  Unmapped clone  (Saito  et al . unpublished). 

3)  New c10ne  (Yoshimura  et  al. unpub1ished). 

4)  By dosage analysis  in Nipponbare hybrid trisomics  alone. 

5)  By dosage analysis  in工R24 hybrid trisomics  alone. 

6) 工ndica alle1e of工R24 hybrid七risomics for chromosome  10  was missing probab1y due to de1E~tion of a DNA segment. 

SDSを含む2XSSCで30分2回 お よ び60分 l回 の 洗 浄 を 行 な っ た . 洗 浄 後 の ナ イ ロ ン メ ン プ ラ ン は オ ー ト ラ ジ オ グ ラ ム 用 の カ セ ッ ト に 増 感 紙 ， X線 フ ィ ル ム と ともに装填し， ‑80tで3日 な い し は し 2週 間 感 光 さ せ て オ ー ト ラ ジ オ グ ラ ム をとった.

(4)遺 伝 子 量 効 果 の 検 出

日 本 型 品 種 目 本 晴 由 来 の ト リ ソ ミ ッ ク ス に イ ン ド 型 品 種IR24を 交 配 し て 得 ら れ た ト リ ソ ミ ッ クFlの 場 合 ， 過 剰 染 色 体 部 分 で は ， 日 本 晴 由 来 のDNAと IR24由来のDNAとが2:1の 割 合 で 存 在 す る . 従 っ て ， そ の 過 剰 染 色 体 に 座 乗 す

るRFLPク ロ ー ン を 用 い て サ ザ ン ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン を 行 な う と ， オ ー ト ラ ジ オ グ ラ ム 上 の 日 本 晴 型 の バ ン ド と IR24型 の バ ン ド と の シ グ ナ ル 量 の 比 が 2: 1に な る と 期 待 さ れ る . 一 方 ， RFLPク ロ ー ン が 過 剰 染 色 体 に 座 乗 し な い と

き に 期 待 さ れ る 日 本 晴 型 の バ ン ド とIR24型 の バ ン ド と の シ グ ナ ル 量 の 比 は1:1  で あ る . そ こ で ， こ の 日 本 晴 型 の バ ン ド の シ グ ナ ル 量 の 相 対 的 な 差 を オ ー ト ラジオグラム上に見出すことにより， RFLPク ロ ー ン の 座 乗 染 色 体 を 決 定 し た . イ ン ド 型 品 種IR24の ト リ ソ ミ ッ ク ス に 日 本 型 品 種 ト ヨ ニ シ キ を 交 配 し て 得 た

トリソミックFlを 用 い た 場 合 も 同 様 に し た .

結 果 お よ び 考 察

本 研 究 で 用 い たDNAクローンは，主として， Saito et  al.  (1991)が イ ン ド 型 品種Kasalathと 日 本 型 標 識 遺 伝 子 系 統FL134と の 聞 にRFLPを見出して連鎖、地 図 作 成 に 利 用 し た も の で あ る . 本 研 究 で は ， イ ン ド 型 品 種 にIR24を用い，ま た ， 日 本 型 イ ネ に は 様 々 の 品 種 お よ び 系 統 を 用 い た の で ， 実 験 に 先 立 っ て ，

ては日本晴とIR24と の 問 で も 多 型 が 見 出 さ れ た が ， 残 り 25個 で は 見 出 さ れ な かった.本項では， RFLPの 見 出 さ れ た147個 の ク ロ ー ン の 中 か ら ， 主 と し て ，

シ ン グ ル コ ピ ー の も の を56個 選 ん で 用 い た .

本 項 の 結 果 の 一 例 をFig. 1・1・1に示した.これは日本晴， IR24， ダ イ ソ ミ ツ クFl， お よ び ， 日 本 晴 の ト リ ソ ミ ッ ク ス にIR24を 交 配 し て 得 ら れ た12型のト リソミツク FlのDNAを 制 限 酵 素EcoRVで 消 化 し て 各 レ ー ン に 配 し ， RFLPクロ ーンNpb126を プ ロ ー プ と し て ハ イ ブ リ ダ イ ズ さ せ て 得 ら れ た オ ー ト ラ ジ オ グ ラ ム で あ る . 本 例 で は ， 染 色 体8を 過 剰 染 色 体 と す る ト リ ソ ミ ッ ク Flの レ ー ン に お い て ， 日 本 晴 型 の バ ン ド の シ グ ナ ル の 量 がIR24型 に 比 べ て 増 加 し て い た . よって， RFLPクローンNpb126は 染 色 体8に 座 乗 す る と 同 定 さ れ た . 同 様 に し て ， 各 染 色 体 ご と に4個 か ら 6個 ， 合 計56個 のRFLPク ロ ー ン に つ い て 座 乗 染 色 体 を 同 定 し た . 結 果 はFig.1・1‑2に ま と め て 示 し た .

本 実 験 に よ り ， 染 色 体1，5， 7， 8， 9， 10に 対 応 す るRFLP連 鎖 群 が 新 た に 判 明 し た . ま た ， 標 識 遺 伝 子 等 を 指 標 に し て ， 対 応 す る 染 色 体 が 決 定 ま た は 推 定 さ れ て い たRFLP連 鎖 、 群 に つ い て も ， そ の 結 果 を 再 確 認 す る こ と が で き た . 以 上 の 結 果 に よ り ， イ ネ の12の 染 色 体 の そ れ ぞ れ に 対 応 す る 連 鎖 群 が す べ て 明らかになった.さらに， RFLP連 鎖 地 図 上 に 位 置 づ け ら れ て い な いNpb50， Npb72， Npb80， Npb83， Ky3， Ky4， Ky7お よ びKy11の 合 計8個 の ク ロ ー ン

に つ い て も 座 乗 染 色 体 を そ れ ぞ れ 推 定 す る こ と が で き た .

本実験の目的は， K i s h i m 0 t 0 e t al.  ( 1 9 8 9 )の試作した 12のRFLP連 鎖 群 と イ ネの12の 染 色 体 と の 対 応 関 係 を 明 ら か に す る こ と で あ っ た . こ れ ら 12のRFLP 連鎖、群のうち， 6群 に つ い て は 座 乗 染 色 体 既 知 の 標 識 遺 伝 子 や ア イ ソ ザ イ ム

マ ー カ ー を 指 標 に し て ， 染 色 体2，3，4，6，11， 12と の 対 応 関 係 が 決 定 さ れ ていた(Fig.1^・1^・2参 照 ) が ， 本 実 験 の 結 果 ， 染 色 体4の連 鎖 群は 染 色 体7の連 鎖 群 と 誤 り 結 ば れ て 1連 鎖 群 を 形 成 し て い た こ と が 明 ら か に な っ た . ま た ， 染 色 体 と の 対 応 関 係 の 決 定 さ れ て い な か っ た6群のうち， 5群 は 本 実 験 で そ れ ぞ

PIP2 D 1 2 3 4 5 6 7 8 9 101112 

Fig.  1‑1‑1.  An autoradiogram  showing  the  gene  dosage  effec七 in Nipponbare  hybrid  trisomics.  An RFLP  clone  Npb126  was  assigned七o chromosome  8 as エndicated by 七he increased  signal  for  the  Japonica  allele  in七riplo 8.  DNAs  were  diges七ed wi七h EcoRV.  Pl:  Japonica  diploid  paren七 Nipponbare

， 

P2 : 工ndica diploid  parent

， 

IR24

， 

0:  a hybrid disomics  as 七he con七rol.

Each  figure  represen七S 七he ex七ra chromosome  of  hybrid七risomics (lanes  1‑12). 

4 

2  3  5  6  7  8  9  10  11  12 

250  ^chl‑l  203  292  209  ^Rc  278  ^rDlDl  78  193 

338  20 

96  36  ^日_山

内 行 列

3 .

2 

139  124‑1 

48 

42  398  47  88 

336 

E.t‑2 

・

^11:

311  117  44 

252  249 

126  13  108  397  ‑ Ky7 

Sdh‑l  .P 

105  ₂₂  183  172  ....  50  58  114 

127  148 

314  227  120 

Ph  189 

52  51  ₁₉  12 

Lap  刀

一

M 4

一

2 

0J

q d  

  297 

223  349 

135  342  147 

130‑1 

トー..  ト...... 

I10cM 

83 

‑Ky11  ..;.. i 73 

十

⁵⁴

‑ 80 

‑Ky3 

Fig.  1‑1‑2.  RFLP  markers  assigned  to their  respec七ive chromosomes  by七risomic gene  dosage  analysis.  The  prefix XNpb are  omitted.  50

， 

72

， 

80 and 

83 are  unlocated clones  (Sai七o et al.  unpublished).  Ky3

， 

Ky4

， 

Ky7  and Kyll are new genomic clones  (Yoshimura  et al. unpublished). 

れ 染 色 体

1

，

5

， 

8

， 

9

， 

1 0

に 対 応 づ け ら れ た が ， 残 り の

1

群 は 染 色 体

4

に 対 応 す る こ と が 分 か っ た . 従 っ て ， 染 色 体

4

に は 独 立 の

2RFLP

連 鎖 群 が 対 応 し て い た こ と が 判 明 し た . さ ら に ， 染 色 体7については， Saito et  al.  (1991)の連鎖群と は独立に ，XNpb50‑XNpb178な る 連 鎖 群 ( 斎 藤 ら 未 発 表 ) が 見 出 さ れ た . 以 上のことから，

RFLP

連 鎖 地 図 は 多 数 の マ ー カ ー を 有 す る も の の ， 連 鎖 関 係 の み に 依 存 し た 連 鎖 群 の 形 成 に は 限 界 が あ る こ と ， ま た ，

RFLP

連 鎖 地 図 に ま だ 拡 充 の 余 地 の あ る こ と が 推 察 さ れ た .

近 年 ， イ ネ に お い て も 組 換 自 殖 系 の 集 団 に よ る

RFLP

連 鎖 地 図 が 整 備 さ れ

(Tsunematsu et  al. 

1 9 9 3

， Xiao et  al.  1995)，新 た な

RFLP

ク ロ ー ン の 座 位 を 決 定 す る こ と も 容 易 に な っ た . しかし，

RFLP

連 鎖 地 図 が イ ネ の ゲ ノ ム 全 領 域 に 対 応 で き て い る か ど う か は ま だ 明 ら か で な い の で ， 既 存 の 連 鎖 地 図 に 位 置 づ けられている

RFLP

ク ロ ー ン と の 聞 に 連 鎖 の 検 出 さ れ な い

RFLP

ク ロ ー ン の 見 出 さ れ る 可 能 性 は ま だ 残 さ れ て い る . こ の よ う な

RFLP

ク ロ ー ン の 座 乗 染 色 体 を 決 定 す る の に ， 本 項 で 述 べ た ， 遠 縁 交 雑 に よ る ト リ ソ ミ ッ ク

F l

の 遺 伝 子 量 効 果 を 利 用 し た 方 法 は 有 用 で あ る と 考 え ら れ る .

な お ， 日 本 型 品 種 目 本 晴 の ト リ ソ ミ ッ ク ・ シ リ ー ズ に イ ン ド 型 品 種

IR24

を 交 配 し て 作 出 し た ト リ ソ ミ ッ ク

F l

の シ リ ー ズ は い ず れ も 日 本 晴 の ト リ ソ ミ

ックスよりも生育旺盛で， DNA抽 出 用 の 成 葉 の 採 取 は 容 易 で あ っ た . これは 遠 縁 交 雑 後 代 に 見 ら れ る 雑 種 強 勢 で あ る と 考 え ら れ た . ま た ， 過 剰 染 色 体 の 種 類 に よ る 植 物 体 の 形 態 的 特 徴 は 概 ね 日 本 晴 の ト リ ソ ミ ッ ク ス の シ リ ー ズ に 一 致 し た の で ， 分 離 集 団 か ら の ト リ ソ ミ ッ ク ス の 選 抜 は こ れ に よ っ た . 過 剰 染 色 体 の 種 類 に よ る ト リ ソ ミ ッ ク ス の 形 態 的 特 徴 は ， 日 印 交 雑 に よ っ て も ， 基 本 的 に は 変 化 し な い と 考 え ら れ た .

本 研 究 で は ， 日 本 型 品 種 日 本 晴 の ト リ ソ ミ ッ ク ス に イ ン ド 型 品 種

IR24

を交

F l

を利用した. こ れ ら 両 方 の ト リ ソ ミ ッ ク

F l

を 用 い て 座 乗 染 色 体 の 決 定 を 行 な っ た 際 に ， い く つ か のRFLPク ロ ー ン に つ い て は ， 以 下 に 述 べ る よ う な 相 違 が見出された.

染 色 体1では， Npb96， Npb252， Npb147お よ びNpb54の4クローンについて，

日 本 型 品 種 目 本 晴 の ト リ ソ ミ ッ ク ス に イ ン ド 型 品 種IR24を 交 配 し て 得 ら れ た トリソミツク

F l

の シ リ ー ズ ， な ら び に ， イ ン ド 型 品 種IR24の ト リ ソ ミ ッ ク ス に 日 本 型 品 種 ト ヨ ニ シ キ を 交 配 し て 得 ら れ た9型 の ト リ ソ ミ ッ ク

F l

の 両 方 を 用 い て ， 座 乗 染 色 体 の 決 定 を 行 な っ た . 日 本 晴 の ト リ ソ ミ ッ ク ス にIR24を 交 雑

し て 得 ら れ た ト リ ソ ミ ッ ク

F l

を 用 い た 場 合 に は 4ク ロ ー ン と も に ， 染 色 体1 に 関 し て 遺 伝 子 量 効 果 が 検 出 さ れ た が ， IR24の ト リ ソ ミ ッ ク ス に ト ヨ ニ シ キ を 交 雑 し て 得 ら れ た ト リ ソ ミ ッ ク

F l

を用いたときには， Npb96とNpb252とで 遺 伝 子 量 効 果 が 検 出 さ れ な か っ た . こ れ はIR24の 染 色 体1の ト リ ソ ミ ッ ク ス の 過 剰 染 色 体 に 欠 失 が 起 こ っ て い る た め で あ る と 考 え た .

染 色 体11では， Np b78および、Npb44について， IR24の ト リ ソ ミ ッ ク ス に ト ヨ ニ シ キ を 交 雑 し て 得 ら れ た ト リ ソ ミ ッ ク

F l

を3個 体 用 い て 遺 伝 子量効 果 の 検 出 を 行 な っ た が ， こ の 中 の1個体は， Npb44を プ ロ ー ブ と し た 場 合 に ， 遺 伝 子 量 効 果 が 検 出 さ れ な か っ た . こ れ はIR24の 染 色 体11に 関 す る ト リ ソ ミ ッ ク ス

に 欠 失 の あ る 過 剰 染 色 体 を 有 す る も の が 存 在 す る た め で あ る と 考 え ら れ た . また， Np b68に つ い て は ， 日 本 晴 の ト リ ソ ミ ッ ク ス 由 来 の ト リ ソ ミ ッ ク

F l

を 用 い た 場 合 は 染 色 体8に， IR24の ト リ ソ ミ ッ ク ス 由 来 の ト リ ソ ミ ッ ク

F l

を用 い た 場 合 は 染 色 体10に ， そ れ ぞ れ 遺 伝 子 量 効 果 が 検 出 さ れ た . IR24の 染 色 体8

に 関 す る ト リ ソ ミ ッ ク ス の 過 剰 染 色 体 に 欠 失 が あ り ， そ の 一 方 で ， 染 色 体10

に 関 す る ト リ ソ ミ ッ ク ス の 過 剰 染 色 体 に 染 色 体8の 一 部 が 転 座 し て い た と す れ ば ， こ の よ う な 結 果 の 得 ら れ る 可 能 性 が あ る .

さらに， IR24の 染 色 体10に関する ト リ ソ ミ ッ ク ス 由 来 の ト リ ソ ミ ッ ク

F l

は， 染 色 体10に 座 乗 す るNpb89をプロ ー ブ と し た 場 合に， IR24型 の バ ン ド が オ ー

ト ラ ジ オ グ ラ ム 上 に 現 れ な か っ た . こ れ は ， 染 色 体10に 関 す る IR24の ト リ ソ ミ ッ ク ス の 染 色 体 か ら ， Npb89に 相 当 す る DNA配 列 が 欠 失 し て い る た め で あ る と 考 え ら れ た .

第2項 RFLPを 示 さ な いDNAク ロ ー ン の 座 乗 染 色 体 決 定

Young et  al.  (1987)は ト マ ト のRFLP連 鎖 地 図 を 作 成 す る た め のDNAク ロ ー ン の 座 乗 染 色 体 を 純 系 の ト リ ソ ミ ッ ク ス を 用 い て 決 定 し た . そ の 際 ， トリソ ミ ッ ク ス の 遺 伝 子 量 効 果 を 検 出 す る た め に ， 以 下 の よ う な 方 法 を と っ て い る . す な わ ち ， 別 の 染 色 体 に 座 乗 し ， か つ ， オ ー ト ラ ジ オ グ ラ ム 上 で の バ ン ド の 位 置 の 異 な る ク ロ ー ン を 数 個 ， 同 時 に サ ザ ン ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン に 供 し ，

あるDNAク ロ ー ン に 由 来 す る バ ン ド の シ グ ナ ル 量 の 変 化 を ， 別 のDNAク ロ ー ン に 由 来 す る バ ン ド の シ グ ナ ル 量 を 指 標 に し て 見 出 す 方 法 で あ る . 本 項 で は ， こ の 方 法 に 準 じ ， 前 項 で 述 べ た ト リ ソ ミ ッ ク スFlの 両 親 で あ る 日 本 型 品 種 目 本 晴 あ る い は ト ヨ ニ シ キ と イ ン ド 型 品 種IR24と の 間 で 多 型 を 示 さ な いDNAク

ロ ー ン に つ い て ， 座 乗 染 色 体 の 決 定 を 行 な っ た .

材 料 お よ び 方 法

(1)供試イネ

イ ン ド 型 品 種IR24の ト リ ソ ミ ッ ク ス ( 小 川 ら 未 発 表 ) に 日 本 型 品 種 ト ヨ ニ シ キ を 交 配 し て 得 ら れ た9型 の ト リ ソ ミ ッ クFlを 用 い た . こ の9型 の ト リ ソ ミ ッ 夕 刊 は そ れ ぞ れ 染 色 体1，S， 6， 7， 8， 9， 10， 11お よ び12を 過 剰 染 色 体 と す る も の で あ っ た .

(2)DNAク ロ ー ン

IR24と ト ヨ ニ シ キ と の 問 でRFLPの 手 会 出 さ れ な か っ た ク ロ ー ン あ る い は 制 限 酵 素 と ク ロ ー ン と の 組 合 せ を 利 用 し た . い ず れ も ， オ ー ト ラ ジ オ グ ラ ム 上 の バ ン ド の 位 置 が 互 い に 重 な ら な い よ う に ク ロ ー ン を 2個選択し， こ れ を 混 合 し て 標 識 し ， サ ザ ン ハ イ プ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン に 供 し た .

(3)サ ザ ン ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン は 前 項 に 準 じ た .

(4)遺 伝 子 量 効 果 の 検 出

イ ネ は 二 倍 体 で あ る の で ， あ るDNAク ロ ー ン に 相 当 す るDNA量 を2とすると，

ト リ ソ ミ ッ ク ス の 過 剰 染 色 体 に 座 乗 す るDNAク ロ ー ン に 相 当 す るDNA量 は3で ある.従って， ト リ ソ ミ ッ ク ス よ り DNAを抽出し， DNAク ロ ー ン を プ ロ ー ブ と し て サ ザ ン ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン を 行 な っ た 場 合 ， そ のDNAク ロ ー ン が 過 剰 染 色 体 に 座 乗 す る な ら ば オ ー ト ラ ジ オ グ ラ ム 上 に 期 待 さ れ る バ ン ド の シ グ ナ ル 量 は3 座 乗 し な い な ら ば2で あ る . そ こ で ， オ ー ト ラ ジ オ グ ラ ム 上 で ， 選 択 し た2個 のDNAク ロ ー ン に 由 来 す る2種 類 の バ ン ド の シ グ ナ ル 量 を 同 一 レ ー ン 内 で 相 互 に 比 較 し ， バ ン ド の シ グ ナ ル 量 の 相 対 的 な 差 を 見 出 す こ と

により， ト リ ソ ミ ッ ク ス の 過 剰 染 色 体 に 起 因 す る 遺 伝 子 量 効 果 を 検 出 し た .

結 果 お よ び 考 察

本 項 の 結 果 の 一 例 をFig.1^・1‑3に 示 し た . こ れ はIR24， トヨニシキ，および，

IR24の ト リ ソ ミ ッ ク ス に ト ヨ ニ シ キ を 交 配 し て 得 た9型 の ト リ ソ ミ ッ ク Flの DNAを 制 限 酵 素HindIIIで 消 化 し て 各 レ ー ン に 配 し ， DNAク ロ ー ンNpb25(上)

とNpb27(下 ) と を 併 せ て プ ロ ー プ と し て ， ハ イ ブ リ ダ イ ズ さ せ て 得 ら れ た オ ー ト ラ ジ オ グ ラ ム で あ る . 本 例 で は ， Npb25とNpb27と の バ ン ド の シ グ ナ ル量の

Pl P2 1 6 5 12  7 B 9 10 11 

RJ

司︐ 内

︐ 島 内

4

b b  

p p  

N N  

Fig.  1‑1‑3.  An autoradiograrn  showing七he gene dosage  effec七 in IR24  hybrid trisornics.  DNA clones  Npb25  and Npb27  were  assigned七o chrornosomes  5 and  6 respec七ively as  indica七ed by七he increased  signals.  DNAs  were  diges七ed with HindIII. Pl:  Indica  diploid paren七，

IR24

， 

P2:  Japonica  diploid  paren七 Toyonishiki.

Each  figure  represen七S 七he ex七ra chrornosorne  of  hybrid trisornics. 

比 を レ ー ン ご と に 比 較 す る と ， 染 色 体5を 過 剰 染 色 体 と す る ト リ ソ ミ ッ ク Flの レーンにおいて， Np b25の バ ン ド の シ グ ナ ル 量 に 増 加 が 認 め ら れ た . よ っ て ，

Npb25は 染 色 体5に 座 乗 す る こ と が 判 明 し た . ま た ， Npb27は 染 色 体6を 過 剰 染 色 体 と す る ト リ ソ ミ ツ ク Flの レ ー ン に シ グ ナ ル 量 の 増 加 が 認 め ら れ ， 染 色 体6に 座 乗 す る こ と が 判 っ た . 同 様 に し て ， Npb121お よ びNpb88も ， そ れ ぞ

れ 染 色 体 lお よ び 染 色 体12に 座 乗 す る こ と が 確 認 さ れ た(Table1‑1^・2). 

こ れ ま で ， イ ネ のRFLP連 鎖 地 図 作 成 に 当 た っ て は ， RFLPを 検 出 し や す い よ う に 日 印 交 雑 の 後 代 を 用 い て い る が ， そ れ で も ， ゲ ノ ミ ッ ク ラ イ ブ ラ リ ー か ら 選 抜 し た ク ロ ー ン の 中 に は ， RFLPの 検 出 さ れ な い も の が 多 く 含 ま れ る .

Yano et  al.  (1990)は ，Pst 1ゲ ノ ミ ッ ク ラ イ ブ ラ リ ー か ら 選 抜 し た ク ロ ー ン に つ い て ， 日 本 型 標 識 遺 伝 子 系 統FL134お よ び イ ン ド 型 品 種KasalathのDNAと4

種 類 の 制 限 酵 素 と の 組 合 せ でRFLPの 検 出 を 行 な っ た 結 果 ， オ ー ト ラ ジ オ グ ラ ム 上 に バ ン ド の 現 れ る472クローンの内， 210ク ロ ー ン がRFLPを 示 さ な か っ た と 報 告 し て い る . 現 在 の と こ ろ ， こ の よ う な ク ロ ー ン は 連 鎖 地 図 作 成 に 用 い る こ と が で き な い が ， 近 年 ， 栽 培 稲 と 野 生 稲 と の 交 雑 後 代 を 用 い たRFLP連 鎖 地図(Huangand Kochert 1994， Jena et al.  1994， Causse et al.  1994)が 作 成 さ れ て い る よ う に ， 連 鎖 地 図 作 成 の 材 料 も 多 様 化 し て い る の で ， 今 後 ， 日 印 間 でRFLPの 見 ら れ な い ク ロ ー ン で も 栽 培 稲 と 野 生 稲 と で は 新 た にRFLPが 見 出 さ れ ， 連 鎖 、 地 図 作 成 の マ ー カ ー た り 得 る こ と も 考 え ら れ る . こ の よ う な 場 合 に は ? 本 項 で 述 べ た 方 法 で ク ロ ー ン の 座 乗 染 色 体 を 決 定 す る こ と が 有 効 で あ る . な お ， 異 数 性 半 数 体 や テ ト ラ ソ ミ ッ ク ス 等 の 遺 伝 子 量 効 果 の 大 き い 異 数 体 を 利 用 す れ ば RFLPを 示 さ な い ク ロ ー ン の 座 釆 染 色 体 を 更 に 簡 明 に 決 定 す る こ と が で き る(Wan g e t al.  1995). また， RFLPが 不 安 で あ る の で ， 純 系 の 異 数 体 に お い て 遺 伝 子 量 効 果 を 検 出 し そ の 染 色 体 の 重 複 ・ 欠 失 を 推 定 す る 際 に も ， こ の 方 法 は 有 効 で あ る と 考 え ら れ る .

Tab1e 1‑1‑2. Chromosoma1  assignment  of monomorphic  c10nes  by trisomic  gene  dosage  ana1ysis  identified  by  "within‑1ane"  comparison  between  the  hybridiza七ion signa1s  of  different  size  derived from respective DNA c10nes 

Chromosome 

14Rd広U門ノι

司 ム

C10ne  (Npb)  121 

25  27  88 

第2節 RFLPを 利 用 し た 異 数 体 の染 色体構 造の推 定

第1節では， ト リ ソ ミ ッ ク ス の 遺 伝 子 量 効 果 を 利 用 し てRFLPクロ ーンの座 乗染色体を決定し， RFLP連 鎖 群 と 染 色 体 と の 対 応 関 係 を 明 ら か に し た が ， 一 旦， RFLP連 鎖 地 図 が 構 築 さ れ れ ば ， 逆 に ， RFLPマ ー カ ー を 使 っ て 染 色 体 の 重 複 ・ 欠 失 を 遺 伝 子 量 効 果 に よ り 検 出 し ， 異 数 体 や 染 色 体 構 造 変 異 体 の 染 色 体 構 造 を 推 定 す る こ と も 可 能 で あ る と 考 え ら れ る . 本 節 で は ， 若 干 の 異 数 体 について， RFLPを 利 用 し た 分 析 を 行 な っ た の で ， そ れ に つ い て 述 べ る . な お ， 本 節 で は ， 二 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス 等 ， 他 の 種 類 の ト リ ソ ミ ッ ク ス と の 区 別 を 明 確 に す る た め に ， こ れ ま で 単 に ト リ ソ ミ ッ ク ス と 称 し て き た も の に つ い て ， 一 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス の 語 を 用 い る こ と に す る .

第1項 一 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス の 交 雑 後 代 に 出 現 し た 二 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス 様 植 物 について

染 色 体8を 過 剰 染 色 体 と す る 日 本 型 品 種 日 本 晴 の 一 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス に イ ン ド型品種IR24を 交 配 し て 得 ら れ たFl個 体 群 の 中 に ， 染 色 体8の 一 次 ト リ ソ ミ ッ クFlとは形態、のやや異なる変異体が 1個 体 出 現 し た . 一 次 ト リ ソ ミ ッ クFlに比 べ 草 丈 は 低 く ， 穂 、 は 小 さ く ， 粒 は や や 小 さ く ， 全 体 的 に 見 て や や 小 型 で あ っ

た . ま た ， 葉 の 捲 き 方 の 程 度 が や や 大 き く 種 子 稔 性 は 一 次 ト リ ソ ミ ッ クFl が約38%で あ っ た の に 対 し ， 変 異 体 は 約6%で あ っ た . そ こ で こ の 変 異 体 に つ い て ， 減 数 分 裂 第 一 中 期 に お け る 染 色 体 観 察 を 行 な う と と も に ， RFLP分 析 を行な っ て 遺 伝 子量効 果 を 検 出 し ， 通 常 の一次 ト リ ソ ミ ッ クFlと比較 した.

材 料 お よ び 方 法

(1)供試イネ

染 色 体8を 過 剰 染 色 体 と す る 日 本 型 品 種 目 本 晴 の 一 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス に イ ン ド型品種1R24を 交 配 し て 得 ら れ たFlに 出 現 し た 変 異 体 ， お よ び ， 同 交 配 で 得 ら れ た 一 次 ト リ ソ ミ ッ クFlを供試した.

(2)DNAクローン

Saito et al.  (1991)のRFLP連 鎖 地 図 で 染 色 体8の 連 鎖 群 に 所 属 す るRFLPクロ ーンを 12個 用 い た . 配 列)1¥買にこれを示すと， Npb278， Npb68， Npb330， 

Npb38， Npb41， Npb104， Npb369， Npb398， Npb126， Npb187， Npb56お よび、Npb397である.

(3)サ ザ ン ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン ， (4)遺 伝 子 量 効 果 の 検 出 は 本 章 第1節 第1項 に準じた.

(5)染 色 体 観 察

ア セ ト カ ー ミ ン 押 し 潰 し 法 に よ っ た .

結 果 お よ び 考 察

ま ず ， 今 回 出 現 し た 変 異 体 ， お よ び ， 染 色 体8を 過 剰 染 色 体 と す る 一 次 トリ ソ ミ ッ 夕 刊 の 減 数 第 一 分 裂 中 期 に お け る 染 色 体 観 察 を 行 な っ た . そ の 結 果 は

Table 1‑2‑1 に ま と め た . 変 異 体 は 染 色 体 数 が25で あ っ た の で トリソミック

tサ ー..... 

Table  1‑2‑1.  Chromosomal  configuration  a^七 me^七aphase 1 in^七he hybrid primary 

七risomics for chromosome  8 and a related varian^七 a secondary‑

trisomic  like plan七

Chromosome  conf工guration a七 mataphase 1  Number of cells  1111 + 1111  1211 + 11  observed 

Primary trisomics  27  (52宅) 25  (48毛) 52 

Varian七 13  (32毛) 28  (68宅) 41 

た が ， そ の 頻 度 に は 違 い が 見 ら れ た . す な わ ち ， 一 次 ト リ ソ ミ ッ ク Flで は 1111+1111が52%，1211+11が48%で あ っ た が ， 変 異 体 で は そ れ ぞ れ320/0，68% 

で あ っ て ， 三 価 染 色 体 の 形 成 頻 度 が 低 く ， 一 価 染 色 体 の 形 成 頻 度 が 高 く な っ て い た . こ の こ と か ら ， 今 回 出 現 し た 変 異 体 で は ， 過 剰 染 色 体 の 構 造 に 何 ら か の 変 化 の 生 じ て い る こ と が 推 察 さ れ た .

次 に ， こ の 変 異 体 に つ い てRFLP分 析 を 行 な っ た . 結 果 は Fig. 1‑2‑1にまと め て 示 し た . 右 側 に 示 し た オ ー ト ラ ジ オ グ ラ ム は ， 日 本 晴 ， IR24，ダイソミ ツクFl， 染 色 体8に 関 す る 一 次 ト リ ソ ミ ッ 夕 刊 な ら び に 今 回 出 現 し た 変 異 体 を 各レーンに配し， RFLPクローンNpb369お よ びNpb398を プ ロ ー ブ と し て 得 た サ ザ ン ハ イ プ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン の 結 果 で あ る .

Npb369を プ ロ ー プ と し た 場 合 ， 一 次 ト リ ソ ミ ッ クFlの レ ー ン で は 日 本 晴 型 の バ ン ド の シ グ ナ ル 量 に 増 加 が 認 め ら れ た が ， 変 異 体 の レ ー ン で は ， 日 本 晴 型 の バ ン ド の シ グ ナ ル 量 が ， 一 次 ト リ ソ ミ ッ クFlに 期 待 さ れ る シ グ ナ ル 量 よ

りも，著しく増加していた.これと同様の結果が ]~pb278 ， Npb68， Npb330，  Npb38， Npb41お よ びNpb104に つ い て も 得 ら れ た .

一方， Npb398を プ ロ ー プ と し た 場 合 ， 一 次 ト リ ソ ミ ッ クFlの レ ー ン で は Npb369の 場 合 と 同 じ く ， 日 本 晴 型 の バ ン ド の シ グ ナ ル 量 に 増 加 が 認 め ら れ た が ， 変 異 体 の レ ー ン で は こ の よ う な シ グ ナ ル 量 の 変 化 は 認 め ら れ ず ， ダ イ ソ ミック Flと 同 じ 結 果 で あ っ た . こ れ と 同 様 の 結 果 がNpb126，Npb187，  Npb56および、Npb397についても

f

^{尋られた.}

以 上 の 結 果 か ら ， 今 回 出 現 し た 変 異 体 の 過 剰 染 色 体 に は ， 重 複 と 欠 失 と が 存 在 す る と 考 え ら れ た . こ れ を RFLP連 鎖 地 図 上 で 表 す と ， 重 複 部 分 は XNpb278‑XNpb68^・l‑XNpb330‑XNpb38‑XNpb41‑XNpbl04‑

X Npb369の 領 域 で あ り ， 欠 失 部 分 はXNpb398‑XNpb126‑XNpb187‑

8 

278  68‑1 

330  38  41 

104 

369  398 

126  187 

V 

T 

D 

Qd η 

画 ︑

J11

3h 

b  P  N 

Npb~~98

Pl  P2  D  T  V 

Pl:  Nipponbare  P2:  工R24

I 0 I

^{cM  D}  disomic Fl 

56  ^{T  hybrid七riplo 8} 

397  v  ^varian七

Fig.  1‑2‑1.  RFLP  gene  dosage  analysis  of  a  variant:  a  secondary一七risomic like  plan七 for chromosome  8.  RFLP  clones  used  in  this  s七udy are  shown  by  the 

locus name without XNpb. 

仁コ

no dosage effect 

‑ 圃

more increased dosage effec七

今 回 出 現 し た 染 色 体8に 関 す る 二 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス 様 植 物 は ， 同 染 色 体 に 関 す る 日 本 型 品 種 日 本 晴 の 一 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス に イ ン ド 型 品 種IR24を 交 配 し て 得られたFlに 偶 発 し た も の で あ っ た . そ の 後 ， 同 様 の 交 配 を 行 な っ て 反 覆 実 験を試みたところ，

1 1 6

個 体 のFlの 中 に 同 様 の 変 異 体 が

1

個 体 出 現 し た . こ れ の

RFLP

分 析 を 行 な っ た と こ ろ ， 染 色 体

8

に 関 す る 二 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス 様 植 物 に 一 致 す る 結 果 が 得 ら れ た . こ の こ と か ら ， 染 色 体8に 関 す る 二 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス 様 植 物 は ， 同 染 色 体 に 関 す る 一 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス の 後 代 に ， 一 定 の 割 合 で 出 現 す る 可 能 性 の あ る こ と が 考 え ら れ た .

Belling and Blakeslee (1924)は ， シ ロ パ ナ ヨ ウ シ ュ チ ョ ウ セ ン ア サ ガ オ に お い て ， 一 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス の 後 代 よ り 二 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス を 得 て い る の で ， 今 回 出 現 し た 二 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス 様 植 物 が 二 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス で あ る 可 能 性

は 高 い . 二 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス に は 特 異 的 な 染 色 体 対 合 像 が 知 ら れ て い る ( Khush 1973 ) の で ， 今 回 出 現 し た 二 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス 様 植 物 が 二 次 ト リ ソ ミ

ッ ク ス で あ る こ と を 確 認 す る た め に は ， 今 後 ， 染 色 体 対 合 像 の 観 察 が 必 要 で ある.

第

2

項 染 色 体

1 1

に関する

4

型 の ト リ ソ ミ ッ ク ス の

RFLP

分 析

1 w a t a e t al.  ( 1 97 0 ) は ， 日 本 型 イ ネ を 用 い て ， 同 質 三 倍 体 な ら び に 相 互 転 座 ヘ テ ロ 個 体 の 後 代 よ り ， イ ネ に 期 待 さ れ る 12型 の ト リ ソ ミ ッ ク ス を 成 熟 期 の 形 態 的 特 徴 に よ っ て 分 離 ・ 同 定 し ， そ れ ぞ れ に ア ル フ ア ベ ッ ト の 一 文 字 を 冠 してA‑‑‑L型 と 名 づ け た . しかし，その後， Kurata et  al.  (1981)は こ れ ら の ト リ ソ ミ ッ ク ス の 過 剰 染 色 体 の 同 定 を 行 な い ， G型 1型 J型 お よ びK型 の4型 が ， い ず れ も 染 色 体11を 過 剰 染 色 体 と し て い る こ と を 見 出 し た . し か し ， 同

行 な い ， 遺 伝 子 量 効 果 を 検 出 す る こ と に よ っ て 過 剰 染 色 体 の 構 造 を 調 査 し た . ここで， 1 w a t a e t al.  ( 1 970)の記載に従って， 0型， 1型， J型 お よ びK型 の4型 の ト リ ソ ミ ッ ク ス の 形 態 的 特 徴 を 述 べ れ ば ， 以 下 の よ う で あ る .

G型 : や や 濃 緑 葉 ， 出 穂 、 晩 ， 籾 や や 粗 剛 ， 輝 黄 色 粒 ， 脱 粒 易 高 稔 性 で ダ イ ソ ミ ッ ク ス か ら の 判 別 困 難 .

I型 : 草 丈 低 ， 出 穂 晩 .

J型 : や や 細 稗 ， 黄 褐 着 色 稗 ， 出 穂 後 葉 身 に 褐 斑 を 生 ず る .

K型 : 草 型 ほ ぼ 正 常 で ダ イ ソ ミ ッ ク ス か ら の 判 別 困 難 ， 出 穂 、 や や 晩 .

材料および、方法

(1)供 試 イ ネ

日 本 型 品 種 愛 国 の 同 質 三 倍 体 に 由 来 す る G型'. 1型 J型 お よ びK型 の4型 の ト リ ソ ミ ッ ク ス に イ ン ド 型 品 種IR24を 交 配 し て 得 ら れ た そ れ ぞ れ の 型 の ト

リソミックFlを 供 試 し た .

(2)DNAクローン

S ai to  e t al.  ( 1991 )のRFLP連 鎖 地 図 で 染 色 体11の 連 鎖 群 に 所 属 す るRFLPク ロ ー ン の う ち ， 愛 国 とIR24と の 間 で 適 当 な 多 型 を 示 し た10個 を 用 い た . 連 鎖 地 図 で の 配 列 順 に こ れ を 示 す と Npb389，Npb78， Npb85， gmZ410， Npb202， 

Npb44， Npb183， Npb205， Npb189お よ びNpb52で あ っ た .

(3)サ ザ ン ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン は 第1章に， (4)遺 伝 子 量 効 果 の 検 出 は 本 章 第1節 第1項 に 準 じ た .

結 果 お よ び 考 察

愛国， IR24， ダ イ ソ ミ ッ ク Flお よ び2個 体 ず つ のG型 1型 J型， K型 の 各 トリソミツク Flを 各 レ ー ン に 配 し ， RFLPク ロ ー ンNpb78，Npb202お よ び Npb44を ハ イ ブ リ ダ イ ズ し て 得 た 結 果 を Fig. 1‑2‑2に 示 し た . 以 下 ， ク ロ ー ン 毎 に 結 果 を 述 べ る .

(l)Npb78 

G型 の レ ー ン で は ， 一 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス に 期 待 さ れ る 遺 伝 子 量 効 果 が 検 出 さ れたが， 1型 お よ びK型 で は 検 出 さ れ な か っ た . さ ら に ， J型 で は 一 次 ト リ ソ ミ

ッ ク ス に 期 待 さ れ る よ り も 過 剰 な 遺 伝 子 量 効 果 が 検 出 さ れ た . Npb389，  Npb85および、gmZ410で も 同 様 の 結 果 が 得 ら れ た .

(2)Npb202 

G型 の レ ー ン で は ， 一 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス に 期 待 さ れ る 遺 伝 子 量 効 果 が 検 出 さ れ た が ， 残 り のI型 J型 お よ びK型 で は 検 出 さ れ な か っ た . Np b202以 外 に 同 様 の 結 果 の 得 ら れ た ク ロ ー ン は な か っ た .

(3)Npb44 

G型， 1型 お よ びK型 の レ ー ン で は ， 一 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス に 期 待 さ れ る 遺 伝 子 量 効 果 が 検 出 さ れ た が ， J型 で は 検 出 さ れ な か っ た . Npb183， Npb205，  Npb189および、Npb52で も 同 様 の 結 果 が 得 ら れ た .

以 上 の 結 果 を ま と め る と 以 下 の よ う に な る(Fig.1‑2‑2). G型 は 供 試 し た ク ロ

G  工 J  K  389 78  85‑2 

gmZ410 

202  44 

183  205 

189  52 

Npb78  Pl P2 D 

Npb202  Pl.P2 D 

Npb44  Pl P2 D 

Pl:  Aikoku  P2: 工R24

D  disomic Fl 

r‑G ‑‑1 

「由G ‑，

r‑‑1 G 

工 J K 

r‑‑‑1  r‑‑‑1  r‑‑‑1 

工 J K 

r‑，  r‑一寸 r^ー寸

工 J K 

「ーi r‑・，.‑，

G

， 工 ，

J and K: 七risomic七ypes

Fig.  1‑2‑2.  RFLP  gene  dosage  analysis  of  4  types  of  trisomics

， 

G

， 

1

， 

^J and K

， 

having  chromosome  11  as  an  ex七ra chromosome.  RFLP  clones  used  in  this  study  are  shown  by  the  locus  name  without XNpb. 

仁 コ

no dosage effect 

f7J:  trisomic gene dosage: effec七 園田 more increased dosage effec七

型 お よ び K型 は ， と も に ，XNpb44‑XNpb183‑XNpb205‑XNpb189‑

XNpb52の 領 域 で ， 一 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス に 期 待 さ れ る 遺 伝子 量 効 果 が 検 出 さ れ たが ，XNpb389‑XNpb78‑XNpb85・2‑gmZ410‑XNpb202の 領 域 で は ダ イ ソミツクFlと 同 様 の 結 果 で あ っ た . よって 1型 お よ びK型は， と も に ， 過 剰 染色体のXNpb389‑XNpb78‑XNpb85・2‑gmZ410 ‑XNpb202部 分 の 欠 失 し た ア ク ロ ト リ ソ ミ ッ ク ス 様 植 物 ， あ る い は ， テ ロ ト リ ソ ミ ッ ク ス 様 植 物 で あ ると考えられた.さらに， J型 は

X

Npb38 

9  ‑X 

Npb78 ‑

X 

Npb85 

‑2‑

gmZ41 0の 領 域 で 一 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス に 期 待 さ れ る よ り も 過 剰 な 遺 伝 子 量 効 果 が 検 出 さ

れ，XNpb44 ‑

X 

^Npb183 ‑

X 

Npb205 ‑XNpb189 ‑

X 

^Npb52の 領 域 で は ダ イ ソ ミックFlと 同 様 の 結 果 で あ っ た . よ っ て ， J型 は 過 剰 染 色 体 のXNpb389‑ XNpb78‑XNpb85・2‑gmZ410部 分 の 重 複 し た 二 次 ト リ ソ ミ ッ ク ス 様 植 物 で あ

ると考えられた.

以 上 述 べ た よ う に ， 染 色 体11に関して4型 の ト リ ソ ミ ッ ク ス が 存 在 す る の は ， 過 剰 染 色 体 に 生 じ た 重 複 ・ 欠 失 の た め で あ る と 考 え ら れ た . 1型 と K型 と で RFLP分 析 の 結 果 が 同 じ で あ っ た の は ， 今 回 供 試 し たRFLPク ロ ー ン だ け で は 検 出 さ れ な い ほ ど の 狭 い 領 域 ， あ る い は ， RFLP連 鎖 地 図 の 包 含 し て い な い 領 域 で の ， 過 剰 染 色 体 の 欠 失 あ る い は 重 複 に よ る と 考 え ら れ る . ま た ， Npb202 

の結果は， 1型， J型 お よ びK型 の 過 剰 染 色 体 に 起 こ っ て い る 欠 失 が 原 因 で あ る と 考 え ら れ る . こ れ ら の 結 果 に つ い て は 更 な る 検 討 が 必 要 で あ る .

な お ， 本 実 験 で 用 い たG型， 1型，

J

型 お よ びK型 の ト リ ソ ミ ッ クFlの そ れ ぞ、 れ の 植 物 体 の 形 態 的 特 徴 は ， 交 配 親 で あ る 日 本 型 品 種 愛 国 の G型 1型， J型お

よびK型 の ト リ ソ ミ ッ ク ス の 形 態 的 特 徴 に 概 ね 一 致 し た . 過 剰 染 色 体 の 種 類 や 重複 ・欠失による形態、的特徴は，遠縁交雑を行なった場合でも， 基本 的 に は 変化 し な い と 考 え ら れ た .

第2章 従 来 の 連 鎖 地 図 とRFLP連鎖 地図との統 合

イ ネ の 連 鎖 分 析 は 古 く か ら 行 な わ れ ， 現 在 で は ， 12の 染 色 体 す べ て に つ い て ， 形 態 形 質 ， 葉 緑 体 形 質 ， 着 色 形 質 ， 生 理 形 質 等 の 標 識 遺 伝 子 か ら 成 る連 鎖地図(従来の連鎖地図， Clas sical  linkage map)が 作 成 さ れ て い る(Iwataet  al.  1984， 1989a， 1989b). 一方，近年に至って， DNAの 多 型 を マ ー カ ー と し た 連鎖地図(RFLP連鎖地図， RFLP linkage  map)が イ ネ に お い て も い く つ か 作 成 されている(McCouchet  al.  1988， Saito et  al.  1991， Kurata et  al.  1994，  Causse et al.  1994). 

現 在 の と こ ろ ， 従 来 の 連 鎖 地 図 とRFLP連 鎖 地 図 と は ， そ れ ぞ れ 独 立 に 存 在 し て い る が ， こ れ ら の 連 鎖 地 図 が 統 合 さ れ れ ば ， イ ネ の 遺 伝 子 連 鎖 地 図 が 充 実するだけでなく， RFLPマ ー カ ー を 指 標 と し た 有 用 形 質 の 間 接 選 抜 や 染 色 体 歩 行 に よ る 遺 伝 子 の 単 離 等 ， 遺 伝 ・ 育 種 学 上 の 基 礎 的 ・ 応 用 的 研 究 の 発 展 に 寄 与 す る と こ ろ は 大 で あ る と 考 え ら れ る .

イネにおいては，これまでにも， S a i t 0 e t al.  ( 1 9 9 1 ) や Kishimotoet  al.  (1992 )がいくつかの標識遺伝子と RFLPマ ー カ ー と の 連 鎖 分 析 を 行 な っ て お り ，

さらに， Yu et  al.  (1995)は 近 似 同 質 遺 伝 子 系 統 を 用 い て ， 標 識 遺 伝 子 とRFLP マーカーとを対応づけている.また， Abenes et  al.  (1994)は 染 色 体11につい て標識遺伝子とRFLPマーカーとの配列を明らかにし， Causse et  al.  (1994)は 様々な連鎖分析の結果に基づいて，従来の連鎖、地図とRFLP連鎖地図との対応、

づ け を 試 み た . し か し な が ら ， 従 来 の 連 鎖 地 図 とRFLP連 鎖 地 図 と の 全 染 色 体 に わ た る 対 応 づ け は 未 だ に な さ れ て い な い .

そこで，第1節 で は 九 州 大 学 農 学 部 育 種 学 教 室 で 作 成 さ れ て き た 従 来 の連 鎖地図(Iwataet  al.  1984， 1989a， 1989b)(Appendix  1参照)と Saito  et  al.  (1991 )のRFLP連 鎖 地 図(Appendix 2参照)との統合を試みた.分離集団にはイ

ンド型品種IR24と 日 本 型 標 識 遺 伝 子 系 統 と の 交 雑

F 2

あ る い は お を 用いたが，

日 印 交 雑 の 後 代 で は 遺 伝 子 が 異 常 な 分 離 を 示 す こ と が あ る の で ， 遺 伝 子 の 分 離 の 歪 み に つ い て ， 第2節 で 考 察 を 加 え た . な お ， Appendix  3に は ， 本 章 で 用 い た 標 識 形 質 の 写 真 を 示 し た .

第l節 標 識 遺 伝 子 とRFLPマ ー カ ー と の 連 鎖 、 分 析 に よ る 統 合 連 鎖 地 図 の 作 成

本節では，イネの従来の連鎖、地図(Iwataet  al.  1984， 1989a， 1989b)に 位 置 づけられている標識遺伝子と， S aito et  al.  (1991)のRFLP連鎖、地図に位置づけ られているRFLPマ ー カ ー と の ， 連 鎖 分 析 に よ る 統 合 連 鎖 地 図 の 作 成 に つ い て 述 べ る . 始 め に ， 材 料 と 連 鎖 分 析 の 方 法 と に つ い て ま と め ， 次 い で ， 染 色 体

ご と に 結 果 お よ び 考 察 を 述 べ た .

材 料 お よ び 方 法

(1)供試イネならびに標識遺伝子

イ ン ド 型 品 種IR24と 日 本 型 標 識 遺 伝 子 系 統 と の 交 雑F2集 団 を 用 い た . 交 雑 組 合 せ な ら び に 標 識 遺 伝 子 は 一 括 し て Table2‑1‑1に 示 し た . こ れ ら の わ 集 団 を 常 法 に 従 っ て 栽 培 し ， 適 宜 ， 標 識 形 質 の 分 離 を 調 査 し た . ま た ， 出 穂 期 頃 に 成 葉 を 採 取 ， 凍 結 保 存 し てDNA抽出に供した.ただし， IR24 / 88F126の交 雑 組 合 せ に つ い て はF2各 個 体 よ り お 系 統 を 育 成 し て 標 識 形 質 の 調 査 や 成 業 の 採取を行なった.

(2)RFLPマ ー カ ー

S ai to  e t al.  (1 99 1 )がRFLP連 鎖 地 図 に 位 置 づ け たRFLPマーカーの中から，

Tab1e 2‑1‑1.  F2 popu1ations observed for  1inkage ana1ysis  Chromosome  Cross combination  Marker genes tested 

l  工R24 / FL293  d‑18， fs‑2 

工R24/88F126¹)  eg， spl‑6， rl‑2  工R24/ FL150  d‑2 

2  工R24/ FL274  bl‑l ， tri  工R24 / FL235  spl‑2 

3  FL303 /工R24 chl‑l ， fc‑l， spl‑3  工R24 / 90Fl023  dl， st (七)(CM120)2)  4  工R24 / FL151  19， d‑ll ， Ph 

5  工R24 / 89F92  _spl‑7， nl‑l ， st (七)(CM37)  工R24 /89F920  d‑l 

6  工R24 / FL314  dp‑l， spl‑4  工R24 / 90Fl023  dp‑l ， Cl 

7  工R24 / 90F93  v‑ll ， d‑6， g‑l ， spl‑5  8  工R24/ 90F1211  v‑8， sug 

9  工R24 / FL260  _Dn‑l， drp‑2， dp‑2  FL303 /工R24 I‑Bf 

10  工R24 /89F921  pgl， spl‑l0  11  工R24 / 90Fl036  z‑2 ， v‑9  12  工R24 / 89F919  spl‑l 

89F424 /工R24 rl‑l 

1)  F3  1ines derived from F2  individua1s were used. 

2

)  Assigned to chromosome  3 in this  study. 

3)  Assigned to chromosome  5 by trisomic ana1ysis  (Satoh  et  al. unpub1ished). 

3)