ウイルス感染葉の核の異常 : 顕微分光光度計による測定
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(2) 近 畿 大 学 農 学 部 紀 要. 2 4. 部 にl l ) 州丈が あ る核 恨 系統 の物 乍 ' ほ 触･ ^ J 七色で定 hけ る. 第 8号 (1975) つ い て述べ る ,なお材料 につ い ては, ウ イル ス感染. t L ' , . ; : ; 物 質 とみ ろ:され る封 入体 ( I nに よって細 胞 内に 与. こ とが で きる. 1 ゞ報付 では オ リン- ス DMS-I lを1 i h 一 用 して , ウ イ. cu lso ins)を 多i J lに生 ず るもの,かろ うじてそれが . L L J .. . l l l 物 につ い ル ス感l LL に よっ て柄 徴の 出現 した二 三の f. J :どを逃 げ, め られ る もの ,封 入体 を生 じろ:い もの t. て､ その核 の y' i i i ; t ;を紫外 部( ) R収 に よ り, あ るいは 各. 9 1 ･ ' , ; ; : ;を封 入体 それ ら全般 か らウ イル ス感始発 の核 の -. f ･ I 色 糸淡 色後 その可 和はI )q に よ り, 調 べ た結 果に T . 川i丈. 産 生 との 開 通 に お いて論 じよ うと した .. I I. 材料 と方法 実験 材料 と して Ta bl e lに示 した もの を仲川 した .. el･Expe r i me na tlmat e r l a l sus e df ori m C r os pe cr tophoo tmet me r i cme a s ur e ns t. Ta bl ans t Pl. Vi r us es. I ncu ls i ons. vi rus. Beanyel l ow mos ac i. manyt ypl l ygr anua lri ncu ls i ons Cal i nl earepi der mi s. Ri ce. Ried uS c wa r fvr i. l x a y r g l e e m i n p cu a r e s n i o c n s ya ma s s dwi l h o t o cae it usc el l st h. Tobacco l l qn aq lb GC um) ( Ni c ot. Tobacc omos cvi ai r us. us ual l ycr ys t al l i nei ncu ls i onsr ,ar ey l gr anua lrn icu ls i onsi nl mi earepi der s. Br oadbean. 較粒 状 封 入体 (いわ ゆ るX体. X-o bdi es)につ い て t ' J r I t Jな 紫外部 吸収 曲線 を とった. い ま嫡 発根 での鼎 T. 組 織 が附7 y t i す る よ うには ぎ とつた . さらに非 お よび. 盛 榊の 徒 1･ 横 断 ヤJ J [ を仙川 Ll =. ) , これ らをカル ノ. 一例 を示 す とFl g.1の よ うであ る.. OD. Et OH :クロロホルム :酢 酸-6:3:1) また ア液 ( 0% Et OHで 問定 した .これ は 5% ホルマ リン加用 7 を水洗 後紫 外 部 測定 では 血 ちに, 色東 独 色の はあ い には 次の 各色# 液 に泣. . 1 7後. さらに水洗 して それ そ 測' 芯 材料 と した . tL. Cl ems a)液 にや く 2独 色色 糸液 :市 販 キムサ ( 3分, ピロニ ン ･メチル 紬 (PMC)i 昆液 ( 05 .% ピロ ニ ン水溶液 :05 .% メチ ル緑 水溶液 -2:1)にや く. 5分.. DMSの 原理 お よび他用 TJ ' 法 は ,主 としてyl ･ 問 その 他･ 川 を参 J 5 ･ とした .他用 倍率 は 1 0×9 0で, ィ ､ ン _ 相差祝. . mmを他 用 祭 と し, ピンホー ルの在径 は主 と して O8. l l J ' 緋は した . したが って試料 面 に おけ る スポ /卜の l 36 ./ L 2(直径 や (2. 1 4p)とな る.なお ブ ラン ク (記 i' ) 長上計 の岨収度 を 0に{ナわせ るときの ス ボ ントの位 置 は特記 しないか ぎ り細 胞外 に とっ た.. I I l .実 験 結 果 インゲ ン黄 斑 モザ イクウ イルス ( BYMV)感染 ソラ マ メ葉. 本 ウ イル スに感 決 して 多少蛾 柄 を と もな. った典 型的 な黄斑 モザ イ ク葉の袈 佃l j 表 皮 を材料 と し た .健全薬核 . 病 葉椎 , お よび病 葉 内に 多数 生 ず る. 2 60. 27 0. 28 0. 290. Wa v ee 一ngt h(m) n. Fi g.. 1 Ul t r a v il oetas bor p. t l OnS pe cr tum Ornuc l e ii nt he l e a fe pi de r mi sorbr oa d be a nsi ne fce td wi t h be a n yeo H wmos . a i cv i r us( BYMV) Tl l ee plde r ma ls t r l pSWe r eF i x e di na l c oo hl イOm ra l i n a nd t he n obs er v e. d une dr mi c r os pe cr tophoo tme t e r ( Olmp y usDMSP一 g nr ii c a. t i on:x900,pn 日) . Ma ihl oedl a 一 ns i ons :3. e r :0. s po. td. i. 6〃2. met 8mm, me.
(3) 平井 :ウ イル ス感 i LL 葉 の核 の 興′ さ ; 与 すなわち撮 高 吸収 は2 76-2 8. 0nm 附近 にみ られ たの ( ) 個 の試料 で,健 全兼核 ,病 発 根 ,封 入体 と もや く3. 25. につ いて測定 し, その 平均 値 と ともに標 准 誤 差 を出. e2で あ る. したの が Tabl. Tabl e2. .Ul t r a v il oeta bs or pt i onofuns t a i nednuc l eiandi nc l us i onsi ntel h e afepi de r mi sofbr oa dbe ans i nr e ce. tdwi t hbe a nyel lwmo o s a i cv i r us( BYMV) .. W mav x e i ml e um g t a h b h s ov a r i p n t g 1 0n n. O thpt ew i cav led e l e n n s g i t t ya ht. Heal t hynuce li. t nr ece tdnuce li. I ncu ls i ons. 2772 . ± 2O .nm. .mm 2. 7. 9. 0± 21. 2790 . ± 25 .mm. 08 .2±0. 05. 07 , 2±00 .9. 0. 71±00 .7. *r er ert oFi g.2.. 上 表の よ うに巌 高吸収 を示 す波長 は健菜 核 よ り摘 発 柁 お よび封 入体 で 多少長 波長 にずれ る傾 向が あ っ たが, その r 朴 二有意差 は なか った. また禄 高L 馴 父披. npt l Cal densi t . y)に も有意差 はみ ら i <でのl 吸光 度 ( / とは Fi g.2に示 す よ うに, 吸 れ なか っT =. 次 に yx 収 曲線に おけ る殻 F i 7 1 吸収 披 kの 点 と,殺 高吸収 波 良. +1 0nmの波立の. ･ . 3 ' . とを梧 / J= 1 縦 軸( y)と横 軸( x) と の比 で あ る. この比 が大 きい とr 馴 又曲線 は立 ちあが った シャー プ な曲線 とな り, この比 が′ トさい と岨収 曲線 は平i t lな曲線 とな る.つ ま り y/ xは吸収. 曲 線の. e2 哲 郎日生を代 表 する指標 と考 えることが で きる.Tabl / は柄 柴 核 お よび封 入体 では触発 核 よ り の よ うに yx j l 線 を示 した. も仲 が大 きく, よ り鋭 い立 ちあが った Fl ただ し両者 剛 二有 志二 差 は認め らiLf Jか : った. 以｣ーの. / と も他病 両 紫 の 柁 よ うに殺 高 城収 波長 な らび に yx お よび封 入f lF L絹に有意某: は なか ったが, 俊英 枝 に対 して, 病 梨 根 と封 入体 とが′ i ; 1 , に同 じ帆 . ' f ] を示 す こ と が注. E lされ た.. 275. 280. 285. 290. Wav el e ngt h(m) n RDV)感染 イネ葉 および菓輪 イネ萎縮 病 ウイルス (. 1.｣ 寸人体 の紫 外 E IJ ' ) r 吸収. 本 ウ イル 7 J=感L LLし. た イネ休 州 二は核 J :リも大 代● J _ の封 入体 が少/ ずるこ と WJ 桃断 UJl ､に お はす でに報 告 したnl1 まず無淡 色で薬 I け る維管 束菜 細 胞 内にみ られ る封 入体の 紫外部 L I )収 i. g.3の よ うな結 果 か え られ た. す 曲線 を とる と, Fi f ･ 1 なわ ち毅 高 l 馴T iは283nmL ; 近に あ った. 次 に この封 g.4の ように面 相 3. 6F 1 2の スポットを当て, 入体 に Fl 80nmでの峨光 I C : A(OD) 封 入体 お よび細 胞 1 ^ J各部 の 2 を調べ た.結 氷 は F g.4に示 す とお りで あ る. l. Fi g.2.Bendi nggr ae dso. ft heul t r av ) oe ltas bor pt l OnC ur v e o. fnuc L e)andI nc l us i onsi nbr oadbe anl e afe pi dcr m) s if ne ce. tdwi t hbe a. nyel lwmo o s ai cv l r uS( BYMV) aa ,′Wa v ee Lngt hha v i ngmaxi mum a bs or pt 1 0n,b, b' : a,a ′+ 1 0nm wa v el e ngt h,y,y′ .l engt hofper pendi c uga,a 'and b,b' ,x,x' :l engt hor 1 arl i nec onnec. t ) n. t r a ns v e r s a ll le nC Onne Ct l ngaa ,'a ndb,b' . ..
(4) 近 畿 大 学 農 学 部 紀 要. 26. 第 8号 (1975). 上図の よ うに封 入体の中央部 では吸光度 は高 く, 周囲ではそれが低 かった. また細胞内各部 では吸収. 08 .. は非常 に低 いか, あるいはほ とん ど認め られ なか っ た. この事実 は封 入体は四角な立方体の よ うな もの. 07 .. でな く, ラグヒーの球 の よ うな楕円体 を しているこ 06 .. とを暗示す る.. 05 .. 健全細胞核 と同病核 につ いて, ギムザ染 色 してその. 2. ギムザ染色核の吸収. 次に集散 内側表皮の. 吸収 曲線 をとった.後述す るよ うに (本項 3参坤), イネ体 内の核 は無染色で も紫外部 よ りの最高吸収は 260 2. 70 20 8 290 300. 350-360nm附近にあ る.キムザ染色でも一つの最高. Wae vl e ngt h(m) n. 吸収が この附近にみ られた.そこで健痛両核 間で貴. Fi g.3.Ul t r a v il oeta bs or pt l On S pe cr tum Orl ar gei nc l us i onsi nte h pa r e ncy. h mat ousc el l sne arv a s c ua lrbundl e s i c edwarv fi r us( RDV) . ofl rC ei ne fce. tdwi t. hr. 高吸収 を示す波長 を比較 した.なお該部 に存在す る イネの核 は小形で, ギムザ染色でや っ と認め られ る e 3 と Fl g.5 に示 程度 であった.その結果 を Tabl. した. す なわ ち最高吸収波長につ いては有意差はなかっ たが,病核が健核 よ りよ り長波長の方にずれ る傾向 車. OD ● 0. 7- 0.9 ⑳ ◎ 0･ 5- 0･7 0. 0,2 -. があった.また吸収曲線の形 をみ る と (Fi g.5) ,柄 核のそれが よ り平i L ] . な曲線 を示 した.. 車. =. 3.イネの核の近紫外部吸収の特製性. 4. 0 .. .. < 0･1. . 1 0F J. Fi g.4.Di s r but i onorop. t i c a. ldens i t i e sat280nm wi t hi n t i t he l a r g ei nc l us i on. s ad n te h r i c el e af se hat h cl el s l nr e Cl e dwi t hr i c edwa r rvi r us( RDV) . Di me ns i onsoron. es pot :36〃 . 2,dl a met e rOrt he s pot :c a.21 .4〟. OD. 以上の. よ うに イネの葉輪内側表皮の核 は,近紫外部 の貴 高 吸収 として350-360nmが認め られたが, その理 由に ついて検討 した .この値はブランク ( 記録計の吸収 度 を 0に合わす ため の スポッ トの位置) を細胞外に とったばあいである.そこで同 じ7う ン クの位 置で 核 に近接 した細胞内の吸収 をみ ると. 320nm に最高 吸収のある核 とほぼ同 じ吸収曲線が えられた.これ は イネの細胞内に この附近に吸収のあるなにかの物 質が存在す ることを暗示す る.そこで核 に近接 した 細胞内にブランクをとり,核の吸収 を調べ た ところ, 280nmに最高吸収のある曲線が えられ た.. 次にモデル実験 として,酵母 RNA とフェノールの 吸収 曲線 を DMSP を他用 して測定す る と,それぞれ 268,25 8 nmに壕高吸収があった .また RNA+フェ. ノールでは最高吸収 は中間の 278nm となった.以上 の こ とか ら, イネ細胞内には 32. 0nm 附近に吸収 をも つ物音 了があ り, これが核の国有の吸収に; 杉野 してい るこ とが想像 された . 350. 355. 360. 365. Wae vl e ngt h(m) n Fi g.5. Be n. di n. g gr ae ds or te h abs or pt l On C ur v e Or Gl e TS na. -. S. t a i ne. dnuc l eii nteI h nne re pi der mi soHe af se h at hofr i c. ei ne fce tdw it hr i c edwar fvi r us( RDV) . Th. es y. mbos la r el i s t e di nFI 菖.2.. タバ コモザ イクウイル ス ( TMV) 感染 タバ コ兼. 1.核,封 入体の紫外部吸収. TMVの普通系. 統に感染 してはげ しいモザ イ ク症状 を示 した タバ コ. ( NL. C. O. I. L ana lb a ac um)葉の射 則表皮 を供試 した.こ ∫ e れを無染色で核の紫外部吸収 を測定 した結 果をTabl 4に示 した｡ す なわ ち殺高吸収波長 ではかな り明 ら.
(5) 27. 平井 :ウイルス感染葉の核 の異常 か な有意差が あ り,病葉核 お よび封 入体 は健菓核 よ. 形は封入体の それが特 異的 で, 立 ちあがった鋭 い曲. りt , 長波長の方にか たよっていた.また吸収曲線の. 線 を示 した.. Tb al3 e .Ne a r ul t r a v i ol eta bs or pt 1 0nOfGi e ms a S t a i ne dnuc l e ii nt hei nne rei pde r mi sofr i c el e a f se hat l l RDV) . if nc c t e dit w hr i c edwa rv fi us( r Heal t hynucl ei Wae vl eng. t hha vn ig g i on maxi mum abs or pt. 3545 . ± 29 .nm. Opt. i ca. ldens. i t yatte h wael v engt h. If nece tdnucl ei 3578 .± 1 . 6nm 07 .5±00 .5. 06 71±0. 0.. Bendi nggr adeof as bor pt i oncuⅣe( ヰr ee frt oFi g.5.. Tb al B4.Ul t r a v i ol e ta bs or pt l OnOfuns t a i ne dnuc l e ia nt fe iso c c ndi nc l us i onsi hel e a pi de r m ft oba oe s i ne fc t e dwi t ht oba c c omos a i cv i us r ( TMV) .. xel i W ma a V mu en m gt hh abs a o V r i p n t g i on. Heal t hynucli e. 1 nr ece tdnuce li. Ⅰ nc l us i ons. .mm 2726 . ± 29. 2803 . ± 1. 9nm. 283. 0± 2. 7mm. 08 .7±00 .5. t he t i wa a Vel Op cl de e n n s g. i t t ya ht. 91±00 .4 0.. 21 06 .5±0.. *r er e rt oFi gs .. 2a nd5. 2.キムザ染色核の可視部吸収 e .Wael r e ng. t v i ngma xi bs or pt i onOf Tb al5 hha mum a. Gi e ms as. xu tr e olt ui on,i t sc ons t i t ue ntdye sa ,ndi t smi wi t hRNAor. DNAa sdt ee r mi ne dbyt hemi. c r os pe c t ro poo htme t e r .. 次に キムサ 染. 色 した表皮につ いて,核 の可視部吸収 をi u l J 定 した. が/ i ,らいギムザ液は. エオンン Y( EY) , アズール I. ( AI) , メチ レン青 ( MB) の 3柿 の色素 か らな り,そ のおのおのの最高吸収波長 は DMSPでの測定では,. Dye s. Wael h( vn ig v e ngt nm)ha maxi mum abs or pt i on. 25 - 3 50 2 5. i e m s a Eo s i nY. 292. G. M b. l e ute hy l e. n. 5. 605. Tabl e 5に示す よ うであ る. 663. 2. 5nm の山はキムサ の組成 であるEY に め られた.5. 5. e. 292. AzurⅠ. 605 -. い まキムサI Lt 色 した タバ コ表皮の枝 につ いて測定 す る と.52 5,5 80,65 0nmにそれぞれ吸収の山が認. 573 -. 663 630 -. 基 (ものであ り.5 8 0,65 0nmの山は他の組成 で あ る MB と AIの共同 作 用 に よる と考 え られた ( Fi g. 6) . さらに他 のモデル実験 として,市販の酵母 RNAおよ. RNA +G* 290 350 525. び DNA をキムザ で独色 して DMSPで測定す る と,. *G:Gims e a. Tabl e5に併記 したような吸収の山が存7 r ' した(Fi g. 6) . この ことか らEYは RNAを染 色 し.MBは DNAを染 色す るこ とが明らかになった..
(6) 近 畿 大 学 農 学 部 紀 要. 第 8号 (1975). l ! unJ ( J t ut T qJV 300. 400. 500. 600. 700. Wa v e l eng. t h(m) n Fi g.6.Abs or p. t i o. nc ur v ebyGi e ms a,i t sc ons t i t ue ntdye s( e os l nY,a z urI ,andmet hye lnebl ue )a , ndi t s xu tr. t ml ewi hRNAorDNA. e. a. ,EY:e os i nY,AI G:Gi ms :a z ur, IMB:met hye lnebl ue.. そこて キムサ ･色 . h f L Ll =タバ コ表皮核 の吸光 ) 2' (OD). L l ) iH 丈を t ,つ 色素 である. タバ コ衷 蚊 を耐色素 の 址 液. につ いて,OD5 8 0/ODs 2 5お よび OD6 5 0/OD52 5の 比 を. で拙 色 し,核の1 1 ) i 収 他線 を求め るととt , に,OD65 3/. 5 計弟 した .Ol )5 0と 0Ⅰ 0は Mb,A Iに よる 順 収 8 〕 6. ( )D5 5 ｡の比 を. 汁許 した .その結 氷をTabl c 7に示 し. )D52 で DNAのi i t色度 を, また ( 5は EYに よるL J h収 で. 姫核の /か ] - この比 た .この裏 に明 らか な よ うに, 痛一. RNAの1色度 , J さ を, いずれ も代 表する. LT =か ってこ. が 大 きい仰向 を示 したが, 他 納 l 山j 弓 削 刻H 】 に布. C ･ ､ 3: ･ _ は. の比 は矧 -の A l DNA/RNAの始 色度 を衷 わす もの と々. . i L ) .. め らiL: / A か った .. e 6に示 した .す なわ ち え られ る.その結 果 をTabl. 両者の比 とも明 らかに触発核 の他 が大 きか っT =.こ の ことは触菓核 で DNAの娘 色度 が高 く,病非核 では 反対 に RNAの 牡色度 が高 いこ とを示す もの であ る.. at i l C a Ta bl e6.Ther ooropt ldens l t i e saHwodl f f e r e nt wa v el e ngt h ort oba c c o nuc is t a i ned wl t hGi ems a l e t oba ai cvi r us( TMV) a ndi ne fce tdwi ht c c omos .. H. ednucl n r e c t e i. eal t hynuce li l. OD5 OD5 8 0/. 2 5. 0D 6 5 0. / OD5 2 5. 99±001 0.. 0 . 9 6±. 002. 87±0. 0. 04 0. .5 83±00. OD5 ebymet 8 0,OD65 0. :Abs ora b nc hye lnebl ue,OD5 25 : as bora b nc os i n Y,bot ebye t i t ue nt hdye saetec r h ons dye e. a, t heF sofGi ms me t or rs t ai nsDNA,a ndtel h at er RNA.. Tabl 87.The ･r at l OOrOpt l C a lde ns i t l e Satt wodi r r e r e nt wa v el e ngt hoft oba c c onuc l e)s t ai ne dwl t hpyr onn ie met hylgr e en(MG P )andi ne fce tdwi t ht oba c c omos a i c v l r uS( TMV) . nr ece tdnuce li Heal t hynuce ll I OD6 3 5/. OD5 5 0. . 12 ±0. 04 1. 1 . 30 ±0. 19. OD63 5. :Abs ora b nc ebymet hylgr e en,OD5 5 0:as bor ba nc ebypyr onn ie,t heF or me rdyes t ai nsDNAadt n he t at t erRNA. キ ュウ リモザ イ クウイル ス ( CMV)感染 ツユ クサ. 1.根の紫外 部順収. CMVに感独 して典T Mlな t J. モザ イ ク4状 .. l : を′ J ､. した ツユ クサ兼 の T i f l 仰 . l J 東庄 を材料 と Ll J.この 細 胞 内にはJI人体 を形成 しない .まず. 3.PMCJ LL色核 の可視 跳I I R収. ピロニ ン(ド)は. 550nm に. ノナノ L紬 (MC)は 630nmに それ ぞれ姑 吊. 撫独 色で核 の紫外部収収 をみ た結 果は Tabl e Hのよ うてあ る..
(7) 29. 平井 :ウイル ス感妓菜 の核 の異常. o .Ul Tb a l8 t r a v 1 01 e ta bs or p. t 1. 0nOrunS t a i ne dnuc l e ii n / i n G Cmm O unl sl e a fe Comme p) de r mi s) ne fce tdwl t h c uc umb e rn 1 0Si acv i r us( CMV) .. l Cl a de ns l t i e sa tt wodl f f e r e nt Ta bl o1 0.Ther at i oofopt wa y el e ng. t h ofComme l l ' n GCmm O unL snuc l e is t a i ne d wi t. hGl e ms ao. IP. MGa ndi ne fce tdwl t hCMV.. uce li1 nr ece tdnuce li Heal t hyn. uce lil ne fce tdnuce li Heal t hyn. Wael v engt h. nm. nm. l a t e i t o n t n g t m h t c ew h a a l b s a o y e X n r e p 1 s i 730 .. 8± ±030 . 0 . 4 2. 08 760 .. 7± ±040 . 0 . 9 mu Opi h a vn l gm a d t y 208. O D 5 9 as 0/ O D52 57 09 .9±0. 01 e ms t an i Gi. 0. 95±00 .1. 02 09 .6±0. PMG t an i O OD D6 s 5 5 5 / / O OD D5 52 55 5 3. 03 08 .8±0.. OD50 9 , OD6 5. 5: Abs ebymet ebl OD525: ora bnc hl ye n ue , ta h tbye os l nY,bot hdye sa r etec h ons t i t ue ntdye sor or a,t n h a e e h. Gi ms ef me rs t t rRNA. t a i nsDNA adtel ora bnc. hl yg OD635:Abs ht a by r e e n,OD555:t ebymet pyr onn ie,t hef or me rs t a i nsDNA a ndtel h at t e rRNA.. *r ee frt oFi gs .2and5. す なわ ち有意差 はみ られ ないが,柄発根 のL r i. 高峻. 上表の よ うに ギムザ淡色 では馳兼核 の方が病発根. 収 は他発 根 よI )も長波長の h にず れ る仰 向が あった .. よ り吸収比 が有意的 に大 きく,これ は由 ; J 者 が DNAの. また吸収 曲線の形 も痛斐核 では よ り平j r l ,. であっ1 =.. 娘 色度 が RNAの娃 色腔 よ りも大 きいこ とを示 した .. 次に キムザ . LL 色の f 真の紫外部 におけ るL l h収 を測延. 3nmにG･ した.Tabl e 9に示 すように,2 91-29. 高吸. しか しPMC淡 色 では このば あいも脚 丙両兼 の核の間. にI i L色度 L の有慈善 は なか った .. 収が あ り,病薬核 の殺 ㍍L J )収が継発根 i よ りも長波長 の方にずれ る傾 向が認め られ1 =.. Ⅳ.考. 察. この実験 でえ られ た結 米 を総捕 す る と, まず無淡. Tb a l9 e .Ul t r a v l Ol e tas bor pt i onorGi e. ms a ･ s t a i ne dnuc l e l i e a fe pi de r nComme lac L ' n ommunE Sl ml Sl nr e C t e. dwl t h CMV.. 色核. キムザ塊 色棺の紫外 部お よび近紫外部吸収 を 通 じて,感始発核 の殺 高吸収波 良は健全集核の それ より長 波長 の方 にずれ る傾 向が認め られ た .TMV悠. Heal t hyn uce. li1 nr ece tdnuce li v engt h Wael. nm. nm. 姓 タバ コ発 のば あい を除 くと,健柄両核問に統計 的 に有意差 は なか ったが, 供試材料のすべ てにおいて. bl e. 同一傾 向がみ られ た (Ta. s2 ,3,4,89 , ).この煉凶 は後述の色素独 色相の実験 で も明 らか なよ うに,感 淡 に よる核 の成分変 化 を反映 す るのか もしれない .. Opi a l h m t e i t a o n u vn t n g t m h l t c ew h gm a a l b d a s o a v e X e r n p 1 s i t y. . 0±0, 208 9. 18± 23 0 . 4. .. 2 0 9. 3 90 1± ±0. 37 0 . 4. あ るいは病兼 では他全糞 にはない, 紫外部 または j J i 紫外部 に吸収 の あ る物 質が形成 さt L . これが病1 #核 のl 吸収 に; ; ! 3響 するのかもしtない.なぜ L I Jらば : DMSP では核 の岐収 とともに その裏側に あ る細 胞のL 吸収 t ) 同時 に測定 してい るか らで あ る.この可能性 は イネ. *r ee frt oFl g. S 2and5.. の雅 抑表皮の核 で t ,述べ た .ただ イネのは あいには. 健菜 内に t ,その よ うf J : 物I E 了が存在 したの であ る.ウ. LL 色核の可視部( ] h収 2.色或 i. キムザおよび PMC. イル ス感 kL 榊物 内に フラボ ン, ポ リフ ェノール化合. l 七色 した盛の点 J iにつ いて,枝の' n Tネ 舶I 州川丈を測定. 物 が生ず るこ とは純 々述べ られ てい る .CL . 1 5トト H. N. した .前 FT では前述のように OD5 9 0/OL ) , 2 , , OD655/. はサ クラの r usy t mot t l eやモモの Wese tr nX柄 でフ. oL)52 5の比 を, また後者 では OL)63 5/OU55 5の 比 をそ れ ぞれ求め た .それ らの結 氷 を-J1 3とLl =のが Tabl e. Dll i川 L T ∼らは イチゴの cr i nkl ey , eHow柄 で クロロゲ ン. ( ) であ る. 1. 酸の存在 をT } , また BL. n● は ス コポ レチ ン をh I , それ. ラボ ン化食物 や クロロゲ ン酸.コー ヒ-酸のT l : / J 三 をし,.
(8) 30. 近 畿 大 学 農 学 部 紀 要. 第 8号 (1975). よう｡. ぞれ証 明 した. 次に核の吸収 曲線の轡曲度 をみ ると. Fi gs . 2 ,5に その一例 を示 したよ うに,病菓核の方が健葉核 よ り. の立 ちあが り状態は, その物質の純度 を判定す るた. Ⅴ. 摘 要 1.オ リンパ ス製顕微分光光度計 ( DMSp-Ⅰ Ⅰ)を 使用 して. ウイルスに感染 した植物葉 内の核の異常 について実験 した.供試材料 として,典型的な額粒 状封 入体 を多数生ず るイ ンゲン黄斑 モザ イ クウイル. め に用 いられるが,組織中にある物質で DSMP測定. ス ( BYMV) -ソラマ メ,大型封入体 を生ず るイネ萎. のばあいには, その判定が無理 なのか もしれ ない. 最高吸収波長 な ど吸収 曲線の諸性質では,偉業核. 縮病 ウイル ス ( RDV) -イネ,結晶性封 入体 を生ず る. に対 して病棄核 と封 入体 (それが形成 され るばあい. 入体 を生 じないキュウ リモザ イ クウイル ス ( CMV) ツユ タサの各組合せ を用いた.. 轡曲度が よ り平坦 なばあい, あ るいは反対 に立 ちあ が った鋭 い曲線 を示すばあいなどあって一定の傾 向 がなかった .一般 に分光光度計で測定 した吸収 曲線. には)とは同 じ傾 向 をとった ( BYMV-Tabl e2, TMVTa bl e4).ウイルス性封 入体は核酸成分 は RNAの み であるから9 ) ,この事実 は後述のように病葉核 で DNA/. TMVト タバ コ, お よび封 タバ コモザ イ クウイル ス (. 2.無染色の核の紫外部 あるいは近紫外部吸収 曲 線 をみ る と,病薬核は健菓核 よ りも,最高吸収波長. RNAの比が よ りRNAにかた よっているこ とを嚢付. が よ り長波長 にずれ る傾 向が認め られ た.しか し吸. け るものであろ う. また病菓核 と封入体 との間に密. 収曲線の形 (轡曲度 )には健病両核 間に一定の傾向. 接 な関係があること, た とえば封 入体は病葉核か ら. はなか った.. 流失 したウイル ス RNA を中心 に形成 されることm)ち 上記の事 実か ら支持 され る. キムサ,PMGなどの色素染色核の可視部吸収では, それ ら色素の各組成色素 に該 当す る最高吸収が確認. 3.封 入体 を生ず るものでは, その紫外部最高吸 収波長 その他 の性質は病葉核 のそれ と一 致 し,健葉 核の それ とは相違 した .. 4.ギムザ染色核 の可視部吸収 をみ る と, その成. された.さらにモテル実験 その他から各色素の DNA,. MB) , ア ズール Ⅰ (A I) 分色素 であるメチ レン青 (. RNAに対す る染 色特性 も決定 された.ギムザ染色の 吸収波長 と,RNAを主 として染め る EYの最高吸収. (いずれも DNA染色)の吸光度 と,エオシン Y( EY, RNA染色)の吸光度 との比 は, 明 らかに病葉核 で小 さかった.すなわち病棄核 は懐柔核 に比較 して,RNA. 波長の比は健葉核 よ り有意的に′ トさか った ( Tabl es. 染色度が よ り高 いこ とが推定 され た .ただ し, ピロ. .つ ま り病葉核 では RNAの始色度が高 まっ 6,1 0) ていた.このことは感染核 における RNA代謝の活性. ニ ン (P) ,メチル 緑 ( MG)染色では この傾 向は認め. 病葉核 では DNAを主 として染め る MB,AIの最高. 化 11･ 1 2 1 な どからも推定 される.一方, PMG染色核 で は この傾 向は認め られなか った.ピロニ ンは明らか. られなか った .. 5.以上 の事実か ら,封 入体形成 の有無 と核の異 常 との関連につ いて主 として考察 した.. に RNAを染色 し, メチル緑は DNAを染色す る.こ の原因は PMG混液の染色には pH,時 臥. 温度 , 浴. 媒 などの複雑 な条件が影響す るため と思 われ る. 最 後に核の異常 と封 入体形成 との関係 をみ る と, 螺粒状封 入体がで きる BYMV-ソラマメ,結 晶状封 入 体 をつ くる TMV-タバ コ,封 入体がで きないCMVツユ タサの各組合せ を通 じて,病葉核 では紫外部最. 引用 文献 1)T.. HI RAlad n Y. NAKACAKl:Vl r ue SSOfPl a ns t J. K. S. T. R. A,. Eds. (A.B.R.. BEEMSTERan dJ .DI . ) , p. 9 0-9. 3N , or t h. -Hol l an d Pub. . ,Amse tra d m(1 966). 度の比 な どて代表 され る核の異常が認め られ た.こ. SAWA . , S,KAO T ad' n 1 ､ .SUZUKl:Toou 2)T.. MI hk 6 ,2 65-27 4(1 9 J .Agr.Res. 1 66) . 3)野間正喜 :細胞 6, 46-51( 1 97 4) .. の こ とは, た とえ封 入体 を形成 しないばあいで も,. 4)H.I SAKA( Ed) . :I nr tou d ct i o nt oMi cr os p ecr to-. 病徴が出現 しておれば,核の異常が進行 しているこ とを想像 させ る.この意味 か らす る と,封 入体の形. poo htmer ty,Ap pl i cat i o nt obl Ol o gc ial Res ear ch,pp.. 1 7. 4,Ol ymp usOpt .Co. ,Toy ko (1 972) .. 高吸収波長のずれ,ギムザ染色核の DNA/RNA妻 女色. 成は ウイルス と宿主析物 との組合せ に よって決定 さ れ る一つの細胞内変化(た とえば抵抗 反応の現われ) であって川, それは ウイル スの感染あるいは病徴の 出現 を一義的に決定す る要 因にはな りえない といえ. 5)T.HI RAlN , .SUzuKl ,Ⅰ .KI MURA,M.NAKAZAWA an d Y.KASHI WAC工:Phyo tp at hl oo gy5 4,3 673 68(1 96 4) ..
(9) 平井 :ウイル ス感染葉の核 の異常. 6)T. A.CES ISMAN:Arh c .B1 0h Cem.Bipy. oh s 60,21 -26(1 956) .. HIA R lad n S. G.WI[ L) MAN:P一n a t& Cel l 1 0)T. Physo. i14,25 6 -25(93. 7 16 ). I,B.S. CASTL IL)ad ( n T. H.KIC N 7)R.D.DURBN Pl anLDi s ease Rept . 44,536-537(1 960) . 8)R.. ∫ BEST:Autain srla J .ExplB 上. l o. tMe. d. Scl .26,223-230(1948) .. 9)平井篤造 ･越水幸男 ･小岩竜衛 :ウイル ス 2,. 257-262(1 952) .. 31. ll)H.ZECH:Expt LCel lRes ear ch6,560-562. (1 954) .. HIA R l:ExpLC t el lRee sac. rh. 1 2)Y.YASUL A ad ) n T. 34,21 0-21 2(1 964) .. 1 3) 平井 篤造 :植物 ウイル ス病学 , p.71 -7 4,南江堂,. 東京 (1959) .. ( 昭和49年11月 1日受理 ).
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