サルコイドージス患者末梢血、リンパ節リンパ球でのインターフエロン産生

演

題 28 

サ ル コイ ドー ジ ス 患 者 末 梢 血 、 リ ンパ 節 リ ン パ 球

で の イ ン タ ー フ エ ロ ン産 生

北 大 医 学 部

細 菌

藤 井 暢 弘 ・皆 川 知 紀

北 大 医 学 部

眼 科

大 野 重 昭 ・小 竹

聡 ・加 藤 富 士 子

札 幌 鉄 道 病 院

平 賀 洋 明

Ⅰ  目 的 抗 ウ イ ル ス 作 用 を 持 つ 因 子 と し て 発 見 さ れ た

現 在 少 な く と も 、 α-IFN、 β-IFN、 γ-IFNの3種 類 の 異 な る タ イ プ

に 分 け ら れ て い る 。 こ れ らIFNは 、 抗 ウ イ ル ス 作 用 ば か り で は な く 抗 腫 瘍

性 、 あ る い は 免 疫 系 に 対 し て 種 々 の 作 用 効 果 を 示 す こ と が 明 ら か に な つ て い

る 。 一 方 、 そ れ ぞ れ の タ イ プ のIFNは 異 な る 細 胞 に よ つ て 産 生 さ れ る 、 た

と え ば 末 梢 血 リ ン パ 球 の 場 合 、 α-IFNは ウ イ ル ス 感 染 な ど に よ り 主 にNK

細 胞(Natural Killer Cell)に よ り 、 ま た γ-IFNは 感 作Tリ ン パ

球 に よ り 産 生 さ れ る 。 特 に γ-IFNはCTL の 誘 導 、 あ る い は 遅 延 型 過 敏 反 応 と も 関 連 が あ る こ と が 示 唆 さ れ て い る 。

こ の よ うにIANの

産 生 機 構 や 作 用 効 果 は 生 体 防 御 の 観 点 か ら も重 要 な意味

を 持 つ に い た つ て い る。 そ こ でIFNの

生 体 に お け る 役 割 、 産 生 機 構 、 産 生

能 を 各 疾 患 で 検 討 す る こ と は 、IFNを

媒 介 と し て リ ン パ 球 の 機 能 や 免 疫 異 常

の 状 態 を 知 の得 る と云 う点 で 重 要 で あ る と考 え られ る 。 す で に 種 々の 疾 患 に

お い て 、 リ ン パ 球 の 幼 若 化 やIFNの

産 生 能 を検 討 す る こ と に よ り、 リン パ 球

の 機 能 を 推 察 す る 試 み が 行 な わ れ て い る。 ま た 自己 免 疫 疾 患 とみ な さ れ て い

112-イ ン タ ー一 フ エ ロ ン(IFN)は   

T Iyml)hocyte)

(Cytotoxic

るSLE、RAあ る い はVogt-Koyanagi-Harada病 、 ま た 何 ら か の 免 疫 異 常 が 病 因 と 考 え ら れ て い るBehcet病 な ど に お い て 、 血 中 に γ-IFN が 検 出 さ れ る こ と が 報 告 さ れ て お り 、 病 因 に 免 疫 異 常 が 関 与 し て い る こ と を 裏 づ け て い る 。 さ ら にKogt-Koyanagi-Harada病 、Behcet病 に お い て は 末 梢 血Tリ ン パ 球 は 自 発 的 に γ-IFNを 産 生 す る こ と が 明 ら か と な つ て い る 。 サ ル コ イ ド ー ジ ス 患 者 血 中 に お い て もIFNの 検 出 さ れ る 例 が 報 告 さ れ 、 ま た リ ン ホ カ イ ン を 自 発 的 に 産 生 す る 細 胞 の 出 現 す る こ と も 知 ら れ て い る 。

そ こ で 血 中 に お い て 検 出 さ れ るIFNの

産 生 細 胞 、 あ る い は 産 生 組 織 を 検

索 す る た め 、 末 梢 血 、 リ ン パ 節 リ ン パ 球 で のIFNの

自発 的 産 生 能 に つ い て

検 討 した 。

次 に 、 サ ル コ イ ドー ジ ス で は 種 々 の 免 疫 異 常 が 報 告 さ れ て お り 、 特 に 末 梢 血 リ ン パ 球 に お い てTリ ン パ 球 数 の 減 少 が み ら れ 、 ツ ベ ル ク リ ン 反 応 の 陰 性 化 な ど が 知 ら れ て い る 。 そ こ で 、 こ の よ う な 免 疫 機 構 の 異 常 を 伴 う 疾 患 に お い て 、 α-IFN、 γ-IFNの 産 生 能 を 指 標 と し て 各 リ ン パ 球 の 機 能 に つ い て 末 梢 血 、 リ ン パ 節 リ ン パ 球 で 検 討 し た 。

Ⅱ  対 象 お よび 方 法

北 大 眼 科 ぶ ど う膜 炎 外 来 を 受 診 し た 患 者 の う ち 、 サ ル コ イ ドー ジ ス と 診 断 さ れ た も の を 対 象 と し た 。 サ ル コ イ ドー ジ ス の 診 断 は 厚 生 省 特 定 疾 患 サ ル コ イ ドー ジ ス 調 査 研 究 班 の 診 断 基 準 に 従 つ た 。 男 性3名 、 女 性15名 よ り ヘ パ リ ン 採 血 し た29検 体 に つ い て リ ン パ 球 の 分 離 を 行 な つ た 。 リ ン パ

球 は 採 血 後 、Ficoll-Pague比 重 遠 心 法 に よ り 分 離 し 、MEPS buffer

RPMI 1640培 地(血 清 不 含)で 洗 浄 後 、24穴 マ ル チ トレ イ に1×10 6

個/wellに て 培 養 し た 。 培 養 に は10% FCSを 含 むRPMI 1640培 地 を

イ ン タ ー フ エ ロ ン の 測 定 はFL細 胞-VSV を 用 い た 、 セ ミ ー マ イ ク ロ ー ダ イ バ イ ン デ ン グ 法 に よ つ て 行 な つ た 。

Ⅲ  結

果

1)  末 梢 血 リ ン パ 球 に よ る 自 発 的 イ ン タ ー フ エ ロ ン 産 生 18名 の サ ル コ イ ドー ジ ス 患 者 よ り 得 ら れ た 末 梢 血 リ ン パ 球29検 体 に つ い てIFNの 自 発 的 産 生 に つ い て 検 討 し た 。 図 の1に は 、 自 発 的 産 生 の み ら れ る 例 と し てVogt-Koyanagi-Hamda病 を 示 し て あ る が 、 本 疾 患 の 場 合 は 健 常 人 リ ン パ 球 と 大 差 は 認 め ら れ ず 、 自 発 的 産 生 能 は 無 い こ と が 示 唆 さ れ た 。 リ ン パ 球 数 を1×106個/well、2×106個/well、 5×106個/Wellと 増 加 さ せ た 場 合 、 ま た リ ン パ 球 を ヒ ツ ジ 赤 血 球 を 用 い た ロ ゼ ツ ト法 に よ り 分 画 し た 後 の 各 画 分(adherent細 胞 、Tリ ン パ 球 、Non-Tリ ン パ 球)か ら の 自 発 的 産 生 も み ら れ な か つ た 。 2)  末 梢 血 リ ン パ 球 の イ ン タ ー フ エ ロ ン 産 生 能

種 々 のIFNイ ン デ ユ ー サ を 使 用 し 、 γ-IFN、 α-IFNの 産 生 能 を 健

常 人 と 比 較 検 討 し て み た 。 図 の2(Ⅰ)に 示 す よ う にPHA-P (50μg/

ml)、 あ る い はConA (10μg/ml)に よ る γ-IFNの 産 生 、HSV

(Herpes Simplex virus、PH Strain、m・o・i=0.01)に よ る

IFNの 産 生 は い ず れ も 健 常 人 に 比 べ て 低 く 、IFNの 産 生 能 は 低 下 し て い た 。 し か し 図 の2(Ⅱ)に 示 す よ う に 、 本 疾 患 と 関 連 が あ る と 考 え られ て い る 、P・acnesを 使 用 し た 場 合 は サ ル コ イ ドー ジ ス 患 者 の リ ン パ 球 に お い て 高 力 価 の α-IFNが 産 生 さ れ た 。 3) 末 梢 血 リ ン パ 球 と リ ン パ 節 リ ン パ 球 で のIFN産 生

同 一 人 に お い て 末 梢 血 リ ン パ 球 と リ ン パ 節 リ ン パ 球 でIFN産

生 に 関 し

て 反 応 性 の 違 い が あ る もの か ど うか に つ い て 検 討 した 。 表 の1に

示 す よ う

(Vesicular

Stomatitis

ViVus)

に 末 梢 血 リ ン パ 球 で のIFN産 生 はP・acnesに よ る 誘 発 の 場 合 以 外 は い ず れ も 健 常 人 よ り も 低 下 し て い た が 、 リ ン パ 節 リ ン パ 球 で のIFN産 生 は 健 常 人 と 同 等 か 、 あ る い は 増 加 し て い た 。 特 にP・acnesに よ るIFN産 生 は 健 常 人 の20倍 程 度 増 強 さ れ て い た 。 さ ら に リ ン パ 節 リ ン パ 球 は 自 発 的 に γ-IFNを 産 生 し た 。 こ れ ら リ ン パ 節 リ ン パ 球 に よ るIFNの 産 生 は 、 表 の2に み ら れ る よ う にadherent細 胞 (マ ク ロ フ ア ー ジ)を 除 去 す る と 、 い ず れ も 低 下 し た 。

Ⅳ  考

察

サ ル コ イ ドー ジ ス 患 者 血 中 にIFNが 検 出 さ れ る と い う 報 告 が す で に な さ れ て い る 。 こ れ ら 血 中 に お い て 検 出 さ れ るIFNを 抗-IFN抗 体 を 用 い て

検 討 し た と こ ろ 、7名 中1名 が γ-IFN、2名 が α-IFNと γ-IFNの 混

合 型 で あ り 、 他 の4名 は α-IFNで あ つ た 。(未 発 表)こ の こ と はSLE、 RA、Behcet病 、Vogt-Koyanagi-Harada病 等 の 自 己 免 疫 性 疾 患 の 強 い 場 合 に は 血 中 に γ-IFNが 検 出 さ れ る こ と と は 大 き く 異 な る 。 サ ル コ イ ドー ジ ス が 単 な る 免 疫 異 常 の み に よ つ て 病 態 が 形 成 さ れ る と は 思 わ れ な い 、 む し ろ 向 ら か の 感 染 と 、 そ の 感 染 を 主 体 と す る リ ン パ 球 の 感 作 、 活 性 化 が 生 じ て く る も の と 思 わ れ る 、 そ の た め2次 的 に 免 疫 異 常 と し て の 現 象 が 出 現 し て く る 可 能 性 が あ る と 思 わ れ る 。 そ れ ゆ え サ ル コ イ ドー ジ ス 患 者 血 中 に は α-IFN、 γ-IFNが 検 出 さ れ る も の と 考 え ら れ る 。

さ ら に サ ル コ イ ドー ジ ス 患 者 リ ン パ 球 はBchcet病 、Vogt-K  

oyanagi-Harada病 と は 異 な り リ ン パ 球 に よ るIFNの 自 発 的 産 生 は 認 め ら れ ず 、 こ

の 点 に お い て も サ ル コ イ ドー ジ ス は 自 己 免 疫 的 疾 患 と は 考 え 難 い 。IFNの

自 発 的 産 生 は 認 め ら れ な い が 、 こ れ はTリ ン パ 球 数 の 減 少 、 あ る い は 抑 制 マ

パ 球 の 数 を 増 加 さ せ た 場 合 、 リン パ 球 を 分 画 した 場 合 に も 自発 的 産 生 は

み と め られ 左 か つ た 。

サ ル コ イ ドー ジ ス 患 者 末 梢 血 リ ン パ 球 の γ-IFNの 産 生 は マ イ トー ジエ ン 刺 激 で み た 場 合 低 下 し て お り 、 末 梢 血 で のTリ ン パ 球 数 の 減 少 を 反 映 し て い る 、 あ る い は 抑 制 マ ク ロ フ ア ー ジ の 出 現 に よ る こ と が 考 え ら れ る 、 し か しIFN産 生 に 関 す る 機 能 そ の も の が 低 下 し て い る か ど う か に つ い て は さ ら に 検 討 が 必 要 で あ る 。 ま た わ ず か で は あ る が 、NK cellに よ る α-IFNの 産 生 も 低 下 し て い た 、 し か し 本 疾 患 の 病 因 に 深 く 関 係 し て い る と 考 え ら れ て い るP・acnesに よ る α-IFNの 産 生 は 増 加 し て い た 。 こ の

こ と はP・acnesに よ る α-IFNの 産 生 に はNK cell以 外 、 お そ ら く マ

ク ロ フ ア ー ジ が 関 与 し て い る 可 能 性 を 示 唆 す る も の と 思 わ れ る 。 す な わ ち 本 疾 患 に お い て は マ ク ロ フ ア ー ジ の 活 性 化 が 何 ら か の 役 割 を は た し て い る も の と 思 わ れ る 。 今 後 はPolyI: PolyC等 を 用 い て マ ク ロ フ ア ー ジ に よ るIFN産 生 を 検 討 す る 必 要 が あ る 。 リ ン パ 節 リ ン パ 球 で の マ イ トー ジ エ ン、HSr・P・acnesに よ るIFN産 生 は 末 梢 血 リ ン パ 球 よ り も 増 加 し て い た 、 し か し 、 こ の 系 か ら マ ク ロ フア ジ を 除 去 す る とIFN産 生 に 関 す る 反 応 性 が 低 下 す る こ と か ら 、 本 疾 患 に お い て は 感 作 リ ン パ 球 は リ ン パ 節 な ど の 局 所 に ト ラ ツ プ さ れ て お り 、 活 性 化 マ ク ロ フ ア ー ジ や 抗 原 な ど と の 相 互 関 係 に よ りIFNや リ ン ホ カ イ ン を 産 生 し て い る こ と が 示 唆 さ れ る 。 こ の よ う に 本 疾 患 に お い て は マ ク ロ フ ア ー ジ の 活 性 化 が 重 要 な 役 割 を は た し て い る こ と が 考 え ら れ た 。 今 後 マ ク ロ フ ア ー ジ とP・acnesの 関 連 性 に つ い て 検 討 し て ゆ き た い 。

表 1

Production of interferon in PBML and lymph node of patient with Sarcoidosis

図 1

PRODUCTION OF INTERFERON IN PBML OF PATIENT WITH SARCOIDOS

図2   -1

表 2

Production of interferon in culture of lymph node cells obtained from patient with Sarcoidsis

) Interferon titer (IU/ml)

PRODUCTION OF IFN IN PBML