岡 山 医 誌 (1993) 105, 759∼770
気 管支喘 息 にお け る血清抗IgE自
己抗 体 の
基礎 的並 び に臨床 的研究
岡 山 大 学 医学 部 第 二 内 科 学 教 室(指 導:木 村 郁 郎 教 授) 山 縣 浩 一 (平成5年5月25日 受 稿)Key words:抗IgE自 己抗 体,ア トピー 型 喘 息,IgE抗 体,
IgGア イ ソ タ イ プ 抗 体,酵 素 抗 体 法 緒 言 気 管 支 喘 息 は,外 因 性 の 吸 入 抗 原 な どに 対 す るIgE抗 体 を介 した 即 時 型(Ⅰ 型)ア レル ギー 反 応 に よ り惹 起 さ れ る こ とが,1966年 石 坂 ら1)に よ るIgE抗 体 の 発 見 以 来 周 知 の 事 実 とな って い る.ま た,マ ウ ス 抗 ヒ トIgE抗 体 が 肥 満 細 胞 ・ 好 塩 基 球 系 の 細 胞 表 面 に 結 合 したIgE抗 体 を架 橋 し,Fcε レ セ プ タ ー を介 して 化 学 伝 達 物 質 を 遊 離 す る機 序 もそ の 後 の 研 究2)で 明 らか に さ れて い る.か か る機 序 は,一 般 に 発 作 性 で 比 較 的 軽 度 な 小 児 喘 息 を 中心 とす る 喘 息 病 態 の 基 本 型 と 考 え ら れ て い る が,し か し,成 人 喘 息 の 中 に も ア トピ ー 型 で は あ る が,そ の 病 因 が 不 明 な 重 症 例 が か な り存 在 し,そ の 病 態 解 明 が 急 が れ て い る. 一 方,ア トピ ー の 発 症 機 序 と し て,IgE抗 体 に対 す る 自 己 抗 体 が 関 与 す る可 能 性 が 報 告 さ れ て い る.か か る 抗IgE自 己抗 体 は1972年Wil liamsら3)に よ り提 唱 さ れ,そ の 組 成 はIgMア イ ソ タ イ プ で あ る と し た が,そ の 後Inganasと Johanssonら4)はIgGア イ ソ タ イ プ を報 告 して い る .前 者 は,ア レ ル ギ ー 疾 患 との 関 係 が 不 明 瞭 で 現 在 あ ま り注 目 され て い な い が,後 者 に つ い て は,追 試 に よ り気 管 支 喘 息 を 含 む 多 くの ア レ ル ギ ー 疾 患 患 者 血 清 中 で 高 値 を 示 す 事 が 判 明 し,そ の 生 物 学 的 意 義 につ い て は な お 不 明 な 点 が 残 さ れ て い る もの の,各 病 態 との 何 らか の 関 係 が 注 目 さ れ て い る. そ こ で著 者 は,病 因 の 不 明 な 成 人 型 の 難 治 性 喘 息 病 態 を解 明 す る教 室 の 研 究5)-9)の一 環 と し て,内 因 性 要 因 の 関 与 が 想 定 さ れ るIgE高 値 の 難 治 性 喘 息 の 病 態 に,か か る抗IgE自 己 抗 体 が い か な る役 割 を 有 す るか を 明 らか に す る 目 的 で, 喘 息 患 者 血 清 中IgGア イ ソ タ イプ の 抗IgE自 己抗 体 を 酵 素 抗 体 法 を 用 い て 測 定 し,喘 息 の 各 種 病 態 との 関 係 を 比 較 検 討 し た の で 報 告 す る. 対 象 と 方 法 1. 対 象 岡 山 大 学 第2内 科 呼 吸 器 外 来 を受 診 中 あ る い は 入 院 中 の 気 管 支 喘 息 患 者46例[男 性27例,女 性19例,平 均 年 齢43.9歳(14-70歳)]を 対 象 に 選 ん だ.そ の う ち ア トピー 型 は25例[男 性15例, 女 性10例,平 均 年 齢41.6歳(14-70歳)],非 ア ト ピー 型 は19例[男 性11例,女 性8例,平 均 年 齢 48.1歳(19-69歳)]で あ り,軽 症2例,中 等 症 7例,重 症14例 で さ ら に 重 症 例 は ス テ ロ イ ド依 存 群8例,ス テ ロ イ ド非 依 存 群6例 で あ っ た. な お,喘 息 病 型 の 分 類 は,1) 即 時 型 皮 膚 反 応 陽 性(真 菌 類 の み 陽 性 を除 く) 2) IgE RAST
score+2以 上 3) IgE RIST 300IU/ml以 上
の3項 目 の うち2項 目 以 上 が 陽 性 の 症 例 を ア ト ピー 型 と し,そ れ 以 外 を非 ア ト ピー 型 と した. また,喘 息 の 重 症 度 は 日本 ア レ ル ギー 学 会 の 重 症 度 判 定 基 準 に従 い,ス テ ロ イ ド依 存 性 は,過 去1年 間 プ レ ドニ ゾ ロ ン換 算5mg/日 以 上 使 用 し て い た か ど うか で 分 類 した.ま た,対 照 と し て 健 常 人39例[男 性31例,女 性8例,平 均 年 齢35.3 歳(18-60歳)]を 選 び 同様 に検 討 し た. 759
2. 方 法 1) 患 者 血 清 測 定 に 供 し た 患 者 血 清 は,非 発 作 時 に 末 梢 静 脈 血5mlを 採 取 し,3000回 転10分 間 で 遠 心 分 離 し て 測 定 時 ま で-20℃ に て保 存 し た.ま た凍 結 保 存 した 血 清 は,測 定 直 前 に 室 温 融 解 して 使 用 した. 2) IgE結 合 活 性 の 測 定 IgE結 合 活 性 はNawataら10)の 行 っ た 酵 素 抗 体 法 に 準 じ て 測 定 し た.す な わ ちFig. 1の 如 く, (1) 精 製 し た ヒ トIgE骨 髄 腫 蛋 白(k鎖)(the
Binding Site Limited)をph 7.4の0.05Mリ ン
酸 緩 衝 生 理 食 塩 水(以 下PBS)に て20μg/mlに
希 釈 し,96穴 の ポ リス チ レ ン 製 マ イ ク ロ プ レー
ト(Date Packaging Corporation)の 各 ウ ェ ル
に50μl加 え,4℃ で 一 晩 静 置 して プ レー トにIgE を 固 着 させ 固 相 と した. (2) 0.05% Tween 20を 含 む0.05M PBS(以 下 PBS-Tween)で3回 洗 浄 した 後,10%ウ シ 血 清 ア ル ブ ミン(以 下BSA)加PBS 200μlを 加 え て 室 温 で2時 間 反 応 させ,IgE結 合 部 位 以 外 の ウ ェ ル の 壁 の 非 特 異 的 結 合 を ブ ロ ッ ク した. (3) PBS-Tweenで5回 洗 浄 後,検 体 と して1 % BSA加PBSで125倍 希 釈 した 被 検 血 清50μl を 加 え 室 温 で一 晩 反 応 させ た. (4) PBS-Tweenで10回 洗 浄 し た 後,ア ル カ リ フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ 標 識 ヤ ギ抗 ヒ トIgG(γ 鎖)
(Zymed Laboratories INC.)を 加 え,室 温 で
1時 間 反 応 させ た.
(5) PBS-Tweenで さ ら に10回 洗 浄 後,基 質 と
してph 9.0の1Mジ エ タ ノー ル ア ミン 緩 衝 液
で希 釈 した パ ラニ トロ フ ェ ニ ー ル フ ォ ス フ ェ イ
ト(Sigma Chemical Co.)を 加 え発 色 させ,吸
光 光 度 計EIAリ ー ダー(BIO-RAD)を 用 い て O. D. 405nmで 測 定 し た. 3) 至 適 血 清 希 釈 濃 度 の 検 討 及 び 抑 制 試 験 検 体 の 至 適 血 清 希 釈 濃 度 決 定 の た め の 予 備 実 験 と して,8例 中IgE結 合 活 性 が 最 も高 値 を 示 した ア ト ピー 型 喘 息 患 者(41歳,男 性)の 血 清 を 標 準 血 清 と し,酵 素 抗 体 法 を 用 い てIgE結 合 活 性 を 測 定 し た.す な わ ち,標 準 血 清 を5倍 か ら3125倍 まで の5倍 希 釈 濃 度 の 系 列 に 調 整 し, 2)の(1)(2)で 示 し たBSAで 処 理 したIgE固 相 プ レー トに それ ぞれ50μl加 え 室 温 で一 晩 静 置 し, さ ら に,2)の(4)(5)と 同 様 に してIgE結 合 活 性 を測 定 し た.
Fig. 1 Procedure for measurement of IgE bind
ing activity using the method of solid
phase enzyme immunoassay.
さ らに,こ の 測 定 系 がIgE結 合 活 性 を正 確 に 検 出 して い るか 否 か を検 討 す る た め に,標 準 血 清 を用 い て 抑 制 試 験 を行 っ た.す な わ ち,固 相 に 用 い た ヒ トIgE骨 髄 腫 蛋 白(k鎖)を50μg/ mlか ら3.125μg/mlの 各 濃 度 に 調 整 し,標 準 血 清 に 等 量 を混 和 した 後 に 室 温 で4時 間 静 置 した. こ の 混 和 血 清 を,2)の(1)(2)で 述 べ たBSAで 処 理 し たIgE固 相 プ レー トに そ れ ぞ れ50μl加 え 室 温 で 一 晩 静 置 し た.さ らに,2)の(4)(5)と 同 様 に し てIgE結 合 活 性 を測 定 し た. 4) IgGサ ブ ク ラ ス及 び リ ンパ 球 幼 若 化 反 応 ダ ニ(Dermatophagoides farinae)及 び カ ン
ジ ダ(Candida albicans)抗 原 特 異 的IgG1, IgG4
抗 体 の 測 定 は,小 栗 栖 ら7)の考 案 し た酵 素 抗 体 法
を用 い た.す な わ ち,ダ ニ 抗 原 ま た は カ ン ジ ダ
抗 原 をプ レ ー トに 固相 化 し,被 検 血 清 と反 応 後,
血 清 中抗IgE自
己抗体 と喘息 病 態 との関連
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抗 体,二 次 抗 体 と して ビ オ チ ン化 抗 マ ウ スIgG 抗 体,さ ら に ビ オ チ ン化 ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ ・ア ビ ジ ン複 合 体 を順 次 反 応 させ,オ ル ト ・フ ェ ニ レ ン ジ ア ミン を発 色 基 質 と して 用 い て 吸 光 度O. D. 492nmで 測 定 し,血 清 の 抗 体 価 をO. D.値 に て 表 示 し た. ま た,ダ ニ 及 び カ ン ジ ダ に よ る リ ンパ 球 幼 若 化 反 応 は,金 廣 ら8)に よ る 測 定 法 を用 い た.す な わ ち,比 重 遠 沈 法 に よ り単 核 球 を採 取 し,そ の 浮 遊 液 に ダ ニ 抗 原 液 ま た は カ ン ジ ダ 抗 原 液 を添 加 後6日 間 培 養 した.こ の 反 応 液 に3H-チ ミジ ン を加 え7時 間 再 培 養 後 シ ン チ レー シ ョ ン カ ウ ン ター に て 細 胞 内 へ の 取 り込 み を測 定 した.測 定 値 は 抗 原 非 添 加 群 と の 比 に よ りstimulation index (S. I.)を 求 め リ ン パ 球 幼 若 化 反 応 の 指 標 と した. 5) 測 定 値 の 処 理 検 体 は す べ てduplicateで 測 定 し,得 ら れ た 被 検 血 清 のIgE結 合 活 性 は,被 検 血 清 の 希 釈 に 用 い た1% BSA加PBSをback groundと し て 差 し 引 い て 算 出 さ れ たO. D.値 で 示 し た.平 均 値 はM±SDで 表 示 し,推 計 学 的 検 討 は, student-T testを 用 い て 検 定 し,p<0.05を 有 意 差 あ り と し た. 結 果 1. 抗IgE自 己 抗 体 測 定 法 の検 討 まず,前 述 の 酵 素 抗 体 法 を用 い て 標 準 血 清 の 5倍 希 釈 濃 度 系 列 に お け るIgE結 合 活 性 を測 定 して 標 準 曲 線 を得 た.そ の 結 果,Fig. 2の 如 く 濃 度 依 存 性 に 結 合 活 性 の 増 加 が 認 め られ た.ま た,125倍 希 釈 濃 度 が 至 適 血 清 希 釈 濃 度 と考 え ら れ た た め,こ の 濃 度 で 以 下 の 検 討 を 行 っ た. 次 に,標 準 血 清 を用 い た 抑 制 試 験 を行 っ た.そ の 結 果,Fig. 3の 如 くIgE添 加 に よ りIgE
結 合 活 性 は 濃 度 依 存 性 に 抑 制 さ れ た.な お,こ の 測 定 系 の 二 次 抗 体 は ア ル カ リフ ォ ス フ ァ タ ー ゼ 標 識 ヤ ギ抗 ヒ トIgG(γ 鎖)を 用 い て い る こ と よ り,得 られ たIgE結 合 活 性 はIgGア イ ソ タ イ プ の 抗 体 に よ る もの と判 定 さ れ た.以 下, 本 測 定 系 に て 測 定 され るIgE結 合 活 性 は ⅠgGア イ ソ タ イ プ の 抗IgE自 己抗 体 と し て 評 価 し た. 2. 気 管 支 喘 息 に お け る抗IgE自 己 抗 体 の検 討
Fig. 2 Standard curve for detection using the
method of enzyme immunoassay of IgE
binding activity.
Fig. 3 Competitive inhibition test of the serum
from one asthmatic patient by human
IgE antibody of myeloma protein. The
values represent the percent inhibition of IgE binding activity in the presence of
human IgE antibody of myeloma pro
tein. 1) 健 常 人 との 比 較
気 管 支 喘 息 患 者46例 と健 常 人39例 の 抗IgE自 己抗 体 値 を比 較 す る と,Fig. 4の 如 く健 常 人 は
で は 平 均0.937±0.227と 推 計 学 的 に 有 意 に 高 値 を示 した(p<0.01).
Fig. 4 The serum levels of anti-IgE
autoantibody from 46 bronchial asth
matics and 39 healthy subjects.
Fig. 5 The serum levels of anti-IgE
autoantibody from 25 atopic and 19 non
atopic asthmatics. The results are ex
pressed as O. D. 405nm.
Fig. 6 Correlation between total serum IgE
levels and serum anti-IgE autoantibody in 46 bronchial asthmatics.
Fig. 7 Relation between house dust and Can
dida specific IgE antibodies and serum
anti-IgE autoantibody in 41 and 43 asth
matics, respectively. House dust and
Candida specific IgE antibodies are ex
pressed as RAST score.
2) 気 管 支 喘 息 の 病 型 別 検 討 ア トピー 型 と非 ア ト ピー 型 喘 息 で の 抗IgE自 己 抗 体 値 を 比 較 し た と こ ろ,Fig. 5の 如 く非 ア トピ ー 型 が 平 均0.775±0.140で あ る の に 比 し, ア トピー 型 は 平 均1.070±0.202と 有 意 に 高 値 を 示 した(p<0.01). 3) 血 清 総IgE値 と の 相 関 喘 息 患 者 血 清 中 に お け る抗IgE自 己 抗 体 と, 血 清 中総IgE RIST値 と の 関 係 を検 討 し た.そ
の 結 果,Fig. 6の 如 くIgE RISTが 高 値 を示 す
に 従 い抗IgE自 己 抗 体 も 高値 を 示 し,両 者 間 に
血清 中抗IgE自
己抗 体 と喘 息病 態 との関 連
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Fig. 8 Correlation between mite specific IgG1
and IgG4 antibodies and serum anti-IgE
autoantibody in 9 and 7 asthmatics,
respectively. Mite specific IgG1 and IgG4 antibodies are expressed as O. D. 492nm.
Fig. 9 Correlation between Candida specific
IgG1 and IgG4 antibodies and serum anti -IgE autoantibody in 9 and 7 asthmatics
,
respectively. Candida specific IgG1 and
IgG4 antibodies are expressed as O. D.
492nm.
4) ハ ウ ス ダ ス ト・ダ ニ 及 び カ ン ジダ 特 異 的IgE 抗 体 と の 相 関
さ ら に,ア トピー 型 喘 息 の 病 因 の 一 つ と考 え
ら れ るハ ウ ス ダ ス ト ・ダ ニ 及 び カ ン ジ ダ 特 異 的
IgE抗 体(RAST値)と,血 清 中抗IgE自 己
抗 体 と の 関 係 を検 討 した.そ の 結 果,Fig. 7の
如 くハ ウ ス ダ ス トのIgE RAST score 2以 上
の 群 は 平 均1.046±0.214と,RAST score 0の 群 の 平 均0.901±0.231よ りも高 値 の傾 向 を示 し, ま た カ ン ジ ダRAST score 2以 上 の 群 は 平 均 1.263±0.085と,RAST score 0の 群 の 平 均 0.896±0.204に 比 し有 意 に 高 値 を 示 し た(p< 0.01).な お,ダ ニ に つ い て は 相 関 は 認 め られ な か っ た. 5) ダ ニ 及 び カ ン ジ ダ 特 異 的IgGサ ブ ク ラ ス抗 体 との 相 関 成 人 喘 息 の 重 症 難 治 化 と 密 接 に 関 係 の あ る IgG抗 体 と血 清 中 抗IgE自 己 抗 体 の 関 係 を検 討 し た と こ ろ,ダ ニ 特 異 的IgG1抗 体 とIgG4抗 体 及 び カ ン ジ ダ特 異 的IgG1抗 体 とIgG4抗 体 は, Fig. 8, 9の 如 く,い ず れ も抗IgE自 己 抗 体 値 と有 意 な相 関 を示 さ な か っ た. 6) ダ ニ 及 び カ ン ジ ダ に よ る リンパ 球 幼 若 化 反 応 との 相 関 気 管 支 喘 息 の病 態 に リ ンパ 球 の 関 与 が 想 定 さ れ て い る こ とか ら,抗IgE自 己 抗 体 と ダ ニ 及 び カ ン ジ ダ抗 原 に 対 す る リ ンパ 球 の 幼 若 化 反 応 と の 相 関 を検 討 した.そ の 結 果,Fig. 10の 如 く, い ず れ も有 意 な相 関 は 得 られ な か っ た. 7) 喘 息 重 症 度 との 相 関 喘 息 重 症 度 を,軽 症,中 等 症,重 症 ・ス テ ロ イ ド非 依 存 群,重 症 ・ス テ ロ イ ド依 存 群 の4群 に分 け て 検 討 した.そ の 結 果,Fig. 11の 如 く, 抗IgE自 己抗 体 は 重 症 ・ス テ ロ イ ド依 存 群 で む
し ろ 低 値 傾 向 を示 した が,い ず れ も有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た.
Fig. 10 Correlation between mite and Candida
specific lymphocyte blastogenesis and
serum anti-IgE autoantibody in 18 and
21 asthmatics, respectively. Mite and
Candida specific lymphocyte blas
togenesis is expressed as S. I.
Fig. 11 Relation between clinical severity of
asthma and serum anti-IgE
autoantibody in 23 bronchial asthmatics.
Fig. 12 Correlation between bronchial hypersen
sitivity and serum anti-IgE
autoantibody in 25 asthmatics. Bron
chial hypersensitivity is expressed as
concentration of methacholine at respi
ratory threshold.
Fig. 13 Correlation between eosinophil in
peripheral blood and serum anti-IgE
autoantibody in 46 asthmatics. 8) 気 道 過 敏 性 と の 相 関 重 症 度 に 関 連 し て,さ ら に 抗IgE自 己抗 体 と 気 道 過 敏 性 と の 関 係 を検 討 した.気 道 過 敏 性 の 指 標 に は,型 の 如 くア ス トグ ラ フ(チ ェ ス トエ ム ・ア イ株 式 会 社)を 用 い て メサ コ リ ン吸 入 に よ り気 道 抵 抗 が 上 昇 す る 閾 値 濃 度 を求 め た が, Fig. 12の 如 く,両 者 間 に 有 意 な 関 係 は 見 い だ せ な か っ た. 9) 末 梢 血 好 酸 球 数 及 び 好 塩 基 球 数 との 相 関 気 管 支 喘 息 患 者 に お け る抗IgE自 己 抗 体 と, 末 梢 血 好 酸 球 数 及 び 好 塩 基 球 数 の 関 係 を検 討 し た.そ の 結 果,推 計 学 的 に有 意 な 相 関 は得 られ な か っ た が,Fig. 13の 如 く,好 酸 球 の 増 加 に伴 い 抗
血 清 中抗IgE自
己抗体 と喘息病 態 との 関連
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IgE自 己 抗 体 値 が 上 昇 す る傾 向 が 認 め ら れ た. 考 察 近 年,喘 息 病 態 の 重 症 難 治 化 に 関 す る さ ま ざ ま な 報 告 が な さ れ て い る が,木 村5)は,中 高 年 発 症 で Ⅰ型 ア レ ル ギ ー の 関 与 が 少 な い 重 症 喘 息 を 「中 高 年 発 症 型 難 治 性 喘 息 」 と し て 報 告 し て お り,独 立 疾 患 と し て の 地 位 を確 立 しつ つ あ る. こ れ ら の 病 態 の 臨 床 的 特 徴 は,非 季 節 性 ・通 年 性 発 作 を反 復 して 重 症 難 治 化 し,ス テ ロ イ ド依 存 性 とな り易 い こ とが 挙 げ ら れ,発 症 機 序 と し て は,抗 原 は カ ン ジ ダ が 中心 で あ り,IgG優 位 の Ⅲ型 及 び リン パ 球 を 介 す る Ⅳ 型 ア レ ル ギー 反 応 が 想 定 さ れ て い る6).ま た,従 来 内 因 性 と ま で い わ れ た 様 に 血 清 総IgEは 低 値 を示 し,さ ら に 重 症 例 ほ ど顕 著 で あ る こ とが 判 明 して い る.一 方,血 清IgEが 高 値 を 示 す ア トピー の 免 疫 学 的 修 飾 を 受 け た様 な 難 治 性 喘 息 も存 在 す る.こ れ らの 病 態 に お い て,内 因 性 の 要 因 と し て 抗IgE 自 己抗 体 の 関 与 が 推 察 さ れ る こ とか ら,今 回 ま ず,気 管 支 喘 息 患 者 血 清 中 のIgGア イ ソ タ イ プ の 抗IgE自 己抗 体 測 定 法 を確 立 し た.そ の 方 法 を用 い て 得 ら れ た 結 果 か ら,抗IgE自 己 抗 体 は 健 常 者 に 比 し喘 息 患 者 で 有 意 に 高 値 を示 し(p< 0.01),し か も 非 ア トピ ー 型 に 比 し ア トピ ー 型 で 有 意 に 高 値 で あ り(p<0.01),さ らに,ハ ウ ス ダ ス ト及 び カ ン ジ ダ 特 異 的IgE抗 体 陽 性 例 で 高 値 を示 す こ とが 判 明 し た.し か し,重 症 度,抗 原 特 異 的IgG抗 体,リ ン パ 球 幼 若 化 試 験,気 道 過 敏 性 等 の 指 標 と は 相 関 が 認 め られ な か っ た.従 っ て,抗IgE自 己 抗 体 は ア トピー 型 の 喘 息 病 態 に 何 らか の 関 与 を 有 す る こ とが 明 らか とな っ た. まず,酵 素 抗 体 法 を用 い た 抗IgE自 己抗 体 測 定 法 の検 討 で 濃 度 依 存 性 の 曲 線 が 得 られ,さ ら に 抑 制 試 験 に て 抗 体 価 の 抑 制 が 認 め られ た 点 よ り,本 測 定 系 で 測 定 され る抗 体 はIgE特 異 的 な 抗IgE自 己抗 体 と考 え られ た.な お,か か る抗 体 に は,IgMア イ ソ タ イプ とIgGア イ ソ タ イ プ の2種 類 が あ り,IgMア イ ソ タ イ プ に 関 し て は,寄 生 虫 感 染 症 患 者 血 清 中 で や や 高 値 を 示 す と の 報 告11)12)があ る が,特 定 のIgE骨 髄 腫 蛋 白 と の み 反 応 す る こ と よ り抗 ア ロ タ イ プ抗 体 と推 定 さ れ,ア レ ル ギ ー 病 態 との 因 果 関 係 も不 明 瞭 で,最 近 こ の 方 面 の 研 究 は 少 な い.一 方,今 回 用 い た 測 定 系 は,二 次 抗 体 に 抗 ヒ トIgG抗 体(γ 鎖)を 用 い て い る こ と よ り,IgGア イ ソ タ イ プ の 抗IgE自 己 抗 体 と考 え られ た が,か か るIgG ア イ ソ タ イプ の 抗IgE自 己 抗 体 に 関 し て は,気 管 支 喘 息 の み な ら ず,ア レ ル ギ ー 性 鼻 炎,ア ト ピー 性 皮 膚 炎13),蕁 麻 疹14)等,種 々 の ア レ ル ギー 性 疾 患 患 者 血 清 中 に 高 率 に 存 在 す る こ と が 報 告15)さ れ て い る.さ らに,寄 生 虫 感 染 症16)17),高 IgE症 候 群18)-20),川 崎 病21)な ど の 非 ア レ ル ギー 性 疾 患 で もIgEが 高 値 を示 す 患 者 血 清 で は 高 値 を呈 す る こ と が 報 告 さ れ て お り,各 種 病 態 との 関 連 が 注 目 さ れ て い る. 今 回 著 者 の 確 立 し た測 定 法 で 得 られ た 抗IgE 自 己抗 体 値 は,健 常 人 血 清 と比 べ 喘 息 患 者 血 清 中 に有 意 に 高 値 に 存 在 す る こ とが 判 明 し,本 抗 体 が 生 理 的 な 状 態 で は 低 値 で あ り,気 管 支 喘 息 全 般 に 高 値 に 存 在 す る こ とが 判 明 し た. か か る抗 体 と各 喘 息 病 態 との 関 連 を検 討 し た と こ ろ,ア ト ピー 型 は 非 ア トピー 型 に比 べ 有 意 に 高 値 を示 し て お り,さ ら に,抗IgE自 己抗 体 が 血 清 総IgE値 と正 の 相 関 関 係 を示 し た こ とか ら も,明 らか にIgEを 介 す る Ⅰ型 ア レ ル ギー 反 応 と関 連 して 増 加 す る も の と考 え られ た.一 方, 前 述 した 中 高 年 発 症 型 難 治 性 喘 息 を は じめ とす る 非 ア ト ピー 型 喘 息 に は Ⅰ型 ア レ ル ギー の 関 与 が 乏 し く,こ の よ う な 病 態 で は 抗IgE自 己抗 体 の 関 与 も少 な い もの と推 定 さ れ た.す な わ ち 気 管 支 喘 息 に お い て は,抗IgE自 己抗 体 は Ⅰ型 ア レ ル ギ ー 反 応 に 密 接 に 関 与 し た 病 態 で 高 値 を 示 す も の と思 わ れ た.さ ら に,Ⅰ 型 ア レ ル ギー 反 応 に 基 づ く病 態 との 関 連 に 注 目 し て 抗 原 特 異 的 IgE抗 体 との 関 係 を検 討 し た と こ ろ,抗IgE自 己 抗 体 は,ハ ウ ス ダ ス ト及 び カ ン ジ ダ に特 異 的 IgE抗 体 陽 性 者 に 高 値 で あ った こ と よ り,抗IgE 自 己抗 体 が ア レ ル ギー 反 応 に お い て 外 因 性 抗 原 と密 接 に 関 係 して い る こ と も示 唆 さ れ た. 一 方,抗IgE自 己 抗 体 が Ⅲ 型,Ⅳ 型 ア レ ル ギ ー 反 応,す な わ ちIgG系 の 反 応 や リ ンパ 球 系 の 反 応 に係 わ っ て い る か ど うか を,ダ ニ や カ ン ジ ダ特 異 的IgGサ ブ ク ラ ス 抗 体 及 び リンパ 球 幼 若 化 反 応 で 検 討 した が,両 者 と も有 意 な関 係 は 認 め られ ず,Ⅰ 型 以 外 の 反 応 系 と は 直 接 的 な 関 係は 推 定 し 難 か っ た. か か る抗 体 が,生 体 内 の ア レ ル ギー 反 応 に ど の よ う な役 割 を有 して い るか が 最 大 の 問 題 で あ ろ う.す な わ ち,抗IgE自 己抗 体 に は,過 剰 に 存 在 す るIgEの 産 生 あ るい は 活 性 を抑 制 し免 疫 系 を 調 整 す るdown regulationの 役 割 と,細 胞 表 面 のIgEと 架 橋 結 合 しア レ ル ギ ー 病 態 を悪 化 さ せ る方 向 に 働 くup regulationの 役 割 の 相 反 す る 考 え 方 が 想 定 さ れ る.こ の よ う な 観 点 か ら, 重 症 度 及 び 気 道 過 敏 性 との 関 係 を検 討 した が, 抗IgE自 己 抗 体 と は い ず れ も有 意 な関 係 を示 さ な か っ た.従 っ て,今 回 の 検 討 か らは,抗IgE 自 己 抗 体 が い か な る役 割 を果 た し て い る か は 明 ら か に し得 な か っ た. こ の 点 に 関 す る諸 家 の 報 告 で は,抗IgE自 己 抗 体 がup regurationの 作 用 を有 す る こ と を 示 唆 す る 成 績 と して,Nawataら10)は 抗IgE自 己抗 体 活 性 の 強 い 血 清 を正 常 人皮 内 に 注 射 す る と膨 疹 紅 斑 を 惹 起 す る こ とが で き,こ の 反 応 は 当該 血 清 がIgEあ る い は 抗IgGに よ り吸 収 さ れ る の で 特 異 的 で あ る と報 告 し て い る.ま た Maroneら22)は,ア トピー 性 皮 膚 炎 患 者6症 例 中1例 で は あ るが,精 製 抗IgE自 己 抗 体 が ヒ ト 好 塩 基 球 か ら ヒ ス タ ミ ン遊 離 を 引 き起 こ し,こ の 反 応 は 乳 酸 添 加 で 細 胞 表 面 か らIgEを 取 り除 く こ とに よ り抑 制 され る こ と を 報 告 し た.以 上 の こ とは,Ishizakaら2)が 報 告 し た マ ウ ス 抗 ヒ トIgE抗 体 を 用 い て,肥 満 細 胞 ・好 塩 基 球 系 の 細 胞 表 面IgE抗 体 を架 橋 させ 化 学 伝 達 物 質 遊 離 を 引 き起 こ す 反 応 が,抗IgE自 己 抗 体 に お い て も 同 様 の 機 序 で 起 こ り得 る こ と を示 唆 す る も の で あ ろ う. ま た抗IgE自 己抗 体 は,IgE免 疫 複 合 体 の 形 で 存 在 す る こ とが 証 明 さ れ て い るが,抗 原-IgE 抗 体 複 合 物,凝 集IgE抗 体,抗IgE抗 体,あ
る い は 抗IgE Fcε receptor I (Fcε RI)抗
体 が そ の レ セ プ ター を介 し て 肥 満 細 胞 ・好 塩 基 球 系 を刺 激 し,化 学 伝 達 物 質 を遊 離 さ せ る こ と が 報 告23)され て い る.従 っ て,抗IgE自 己 抗 体 の 単 量 体 の み な らずIgE-抗IgE自 己 抗 体 の 免 疫 複 合 体 もFcε RIを 介 して 肥 満 細 胞 ・好 塩 基 球 系 を刺 激 し,ア レ ル ギ ー 反 応 の 増 幅 に 関 与 し て い る可 能 性 が 考 え られ る.
一 方,抗IgE自 己抗 体 がdown regulationの
作 用 を有 す る 可 能 性 を 示 唆 す る も の と し て は, Iwamotoら24)が 重 症 喘 息 例 で は 軽 症 例 と比 べ 有 意 に抗IgE自 己 抗 体 が 低 値 を示 す こ と を報 告 し て い る.ま たMarshallら25)は,純 系 ラ ッ トに ラ ッ トIgE骨 髄 腫 蛋 白 で 感 作 し,抗IgE抗 体 を 産 生 す る よ うに な っ た ラ ッ トの 血 清IgE値 は 減 少 す る こ とや,抗IgE抗 体 を注 射 した ラ ッ トの 肥 満 細 胞 数 の 減 少 を観 察 して い る.さ ら にSherr
ら26)は,in vitroでIgE免 疫 複 合 体 がIgE合 成
を抑 制 す る こ と を報 告 し,Hassnerら27)は ヒ ト
IgEと マ ウ ス 抗IgE抗 体 の 免 疫 複 合 体 がIgE特
異 的 抑 制T細 胞 を活 性 化 す る こ と よ り,抗IgE 自 己抗 体 ま た は そ の 免 疫 複 合 体 がIgE特 異 的 抑 制T細 胞 に よ りIgE産 生 を 抑 制 す る 可 能 性 を 報 告 して い る.こ れ ら の 報 告 は,抗IgE自 己 抗 体 の 単 量 体 ま た は 免 疫 複 合 体 がIgEの 産 生 を 抑 制 し,ア レ ル ギ ー 病 態 を 緩 和 させ る 可 能 性 を示 唆 して い る. な お,免 疫 複 合 体 に 関 し て は さ ら に 詳 細 な報 告 が あ る.す な わ ち,Itoら28)はin vitroで 作 成 したIgE-抗IgE免 疫 複 合 体 が 好 中 球 の 遊 走 能 を低 下 させ る こ と を示 し,ア レ ル ギ ー 疾 患 患 者 の 続 発 性 免 疫 能 低 下 に 関 与 し得 る こ と を報 告 し た.こ の よ うに,免 疫 複 合 体 が さ ま ざ ま な 反 応 相 で 免 疫 系 を 調 整 し て い る こ とが 示 さ れ て い る が,生 体 内 に お い て も抗IgE自 己抗 体 を含 む 免 疫 複 合 体 が 免 疫 系 に 深 く関 わ っ て い る可 能 性 が 想 定 さ れ る. ま た,抗IgE自 己抗 体 のIgGサ ブ ク ラ ス に つ い て も検 討29)30)がな され て お り,IgG1サ ブ クラ ス が 最 も 高値 を示 す が,IgG4が 相 対 的 に 高値 を 示 す こ と も報 告 され て い る.ま たShakibら31) も,免 疫 複 合 体 で 存 在 す る抗IgE自 己 抗 体 の サ ブ ク ラ ス はIgG4が 相 対 的 に 高 値 を示 す と報 告 し て い る.こ のIgG4サ ブ ク ラ ス が 減 感 作 療 法 の 効 果 と してdown regulationの 作 用 を果 た して い る 可 能 性 も 否 定 で き な い. 一 方Stadlerら32)は ,IgE抗 体 のFc部 分 の 異 な るepitopeを 認 識 す る2種 類 の マ ウ ス モ ノ ク ロー ナ ー ル 抗 体 を作 成 し た.か か る 抗 体 の う ち の 一 方 は,ヒ ト好 塩 基 球 よ リヒ ス タ ミン 遊 離 を 惹 起 し得 るが,他 方 の 抗 体 で は 遊 離 で きな か
血 清 中抗IgE自
己抗体 と喘 息病 態 との関連
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っ た.ま た,前 者 はFcε RⅡ (CD23)を 発 現
す るB cell lineに 結 合 し たIgEをremoveで
き た が,後 者 で は ほ と ん ど で き な か っ た.さ ら に ヒ トに お い て も,精 製 抗IgE自 己 抗 体 に は ヒ ス タ ミン 遊 離 を惹 起 す る 抗 体 と,抑 制 す る抗 体 の2種 類 が 存 在 す る こ とが 示 唆 され て い る.ま た,免 疫 複 合 体 よ り得 られ た 精 製 抗IgE自 己 抗 体 は,Fcε RⅡ か らIgEをremoveし 得 る が, 単 量 体 で 血 清 中 に 存 在 す る抗IgE自 己抗 体 で は で き な い こ とが 報 告 さ れ て い る33)34).従っ て,ヒ トで も動 物 と同 様 に抗IgE自 己抗 体 にはFcε 上 の 異 な るepitopeを 認 識 す る二 種 類 以 上 の 抗 体 が 存 在 し,異 な っ た 機 能,す な わ ちup regulation とdown regulationの 相 反 す る作 用 を発 現 して い る可 能 性 は 否 定 で き ず,今 後 の 残 され た 課 題 と考 え ら れ る. 以 上,喘 息 病 態 に お い て抗IgE自 己 抗 体 がIgE 系 の 反 応 と連 動 し た 態 度 を示 す こ とが 明 らか と な っ た.さ らに,抗IgE自 己 抗 体 が ア トピー 型 喘 息 に お け る重 症 化 要 因 で あ り う る か とい う点 に 関 して は,今 回 検 討 した 抗 原 特 異 的IgGサ ブ ク ラ ス 抗 体 や リ ン パ 球 幼 若 化 反 応,さ ら に 気 道 過 敏 性 や 特 に 重 症 度 と の 関 係 に お い て,そ の よ う な推 察 を 示 唆 す る明 瞭 な結 果 は 得 られ ず,今 後 その 観 点 で さ ら に 追 求 す る必 要 が あ る と考 え られ た. 結 論 IgE抗 体 を介 す るア レ ル ギ ー 反 応 の うち,内 因 性 要 因 に 基 づ く気 管 支 喘 息 の 発 症 機 序 を解 明 す る 目 的 で,ま ず 抗IgE自 己 抗 体 の 測 定 法 を確 立 し,そ の 方 法 を用 い て 喘 息 患 者 血 清 の 測 定 を 行 い 以 下 の 結 果 を得 た. 1) 固 相 酵 素 抗 体(ELISA)法 に よ り,IgEに 特 異 的 なIgGア イ ソ タ イ プ の 抗IgE自 己 抗 体 を 測 定 す る 方 法 を確 立 した. 2) 気 管 支 喘 息 患 者 血 清 中 に は,健 常 人 に 比 し有 意 に 高 い 抗IgE自 己 抗 体 が 存 在 し た(p< 0.01). 3) ア ト ピー 型 喘 息 で は,非 ア トピー 型 に 比 し て 抗IgE自 己 抗 体 が 有 意 に 高 値 を示 した(p< 0.01). 4) 抗IgE自 己 抗 体 は 血 清 総IgE値 と正 の 相 関 を示 し た(r=0.576, p<0.01). 5) 抗IgE自 己 抗 体 は ハ ウ ス ダ ス ト及 び カ ン ジ ダ特 異 的IgE抗 体(p<0.01)と 相 関 が 認 め られ た. 6) ダ ニ 及 び カ ン ジ ダ 特 異 的IgGサ ブ ク ラ ス 抗 体 や リン パ 球 幼 若 化 反 応 とは 有 意 な 関 係 は 認 め られ な か っ た. 7) 重 症 度,気 道 過 敏 性 と も有 意 な 関 係 は 認 め ら れ な か っ た. 以 上,抗IgE自 己 抗 体 は ア トピ ー 型 喘 息病 態 と何 らか の 関 連 が 疑 わ れ たが,そ の 病 態 下 で の 役 割 は 明 らか に し得 ず,今 後 の 検 討 が 必 要 と考 え ら れ た. 稿 を終 え るに あ た り,終 始 御指 導 御校 閲 を賜 った 恩 師 木 村郁 郎 教 授 に深 甚 の 謝意 を表 す と共 に,直 接 御 指 導戴 い た高橋 清 講 師 に深 謝 い た します. 本 稿 の要 旨は,第68回 日本 内科 学 会 中 国地 方 会 に お いて発 表 した.
文
献
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