生 物 試 験 部 門
教 授 渡 辺 裕 司 （ 薬 学 博 士 ） 助教授 松 本 欣 三 （ 薬 学 博 士 ） 助 手 東 田 道 久 （ 薬 学 博 士 ） 技 官 村 上 孝 寿
く〉研究目的
本部門では，和漢薬の新しい薬効評価法を確立するための基礎研究，和漢薬の中枢作用を定量 的に評価し，その作用本体を追求する研究及びその作用機序を分子レベルで明らかにすることを 目的とした研究を行っている。
。研究概要
I .
和漢薬の新しい薬効評価法を確立するための基礎的研究1
）脳血管性痴呆病態モデル動物の確立とそれによる和漢薬および抗痴呆薬の薬効評価2
）情動ストレス反応の不安・うつ病態モデルとしての応用と和漢薬作用3
）新規リード化合物の開発をめざした各種民族薬の薬理作用の探索と作用機構の解析II. 中枢作用薬の神経薬理学的研究
1
）心理的ストレス反応に関わる神経機構，受容体機能修飾因子，分子機序の解析2
）神経伝達物質の脳内動態および代謝回転の解析と薬物作用III.遺伝子発現を指標とした薬物作用の解明と和漢薬作用に関する研究
1
）慢性脳虚血により発現する脳内遺伝子のクローニングとその機能解析2
）うつ病態関連脳内遺伝子の発現変化と抗うつ薬・和漢薬の作用解析。 著 書
1 ) Watanabe H . , Matsumoto
K.and Matsuda H . : P h a r m a c o l o g i c a l study o f t h e a n t i ‑ dementia e f f e c t o f S h i m o t s u ‑ t o (Si‑Wu‑Tang). I n P h a r m a c o l o g i c a l Research on T r a d i t i o n a l Herbal M e d i c i n e s , by Watanabe H . and Shibuya T . ( E d s ) 5 5 6 5 , harwood academic p u b l i s h e r s , 1 9 9 9 .
2 ) Nguyen T . T . H . , Nguyen T . N . , Matsumoto
K.,Yamasaki K . and Watanabe H . : E f f e c t s o f Vietnamese g i n s e n g on p s y c h o l o g i c a l s t r e s s ‑ i n d u c e d changes i n pharmacol‑
o g i c a l r e s p o n s e s . I n P h a r m a c o l o g i c a l Research on T r a d i t i o n a l Herbal M e d i c i n e s , by Watanabe H . and Shibuya T . ( E b s ) 7 7 ‑ 9 2 , harwood a c a d e m i c p u b l i s h e r s , 1 9 9 9 .
。 原 著
1 ) L i H. ー B . , Matsumoto K. and Watanabe H . : D i f f e r e n t e f f e c t s o f u n i l a t e r a l and b i l a t ‑ e r a l hippocampal l e s i o n s i n r a t s on t h e performance o f r a d i a l maze and o d o r ‑ p a i r e d a s s o c i a t e t a s k s . Brain R e s . B u l l . 4 8 : 1 1 3 ‑ 1 1 9 , 1 9 9 9 .
Abstract: The hippocampus p l a y s an important r o l e i n t h e d e c l a r a t i v e o r e x p l i c i t memory i n humans and i s n e c e s s a r y f o r a l l o c e n t r i c s p a t i a l l e a r n i n g and o l f a c t o r y memory i n a n i m a l s .
Inp r i m a t e s and r o d e n t s , t h e b i l a t e r a l hemispheres o f t h e b r a i n ( e s p e c i a l l y t h e f o r e b r a i n ) s y m m e t r i c a l l y and a s y m m e t r i c a l l y c o n t r i b u t e t o d i v e r s e c o g n i t i v e m a n i p u l a t i o n s . I n t h i s s t u d y , we i n v e s t i g a t e d t h e r o l e o f t h e hippocampus i n s p a t i a l memory and i n odor p a i r e d a s s o c i a t e memory by u n i l a t e r a l l y o r b i l a t e r a l l y l e s i o n i n g t h i s r e g i o n i n r a t s . The b i l a t e r a l r e m o v a l , but n o t t h e u n i l a t e r a l r e m o v a l , o f t h e hippocampus i m p a i r e d both t h e a c q u i s i t i o n o f s p a t i a l working memory i n t h e r a d i a l maze t a s k and t h e r e t r i e v a l o f maze performance t e s t e d 1 month a f t e r t h 8 a c q u i s i t i o n t r i a l s . I n c o n t r a s t , n e i t h e r b i l a t e r a l nor u n i l a t e r a l r e ‑ moval i m p a i r e d the o d o r ‑ p a i r e d a s s o c i a t e l e a r n i n g . These f i n d i n g s s u g g e s t t h a t t h e hippocampus i s c r i t i c a l t o t h e s p a t i a l memory, and t h a t a u n i l a t e r a l hippocampus i s s u f f i c i e n t f o r e x e c u t i n g a s p a t i a l t a s k . The p r e s e n t r e s u l t s a l s o i n d i c a t e t h a t t h e hippocampus p l a y s a minor r o l e i n odor‑dominated a s s o c i a t e l e a r n i n g and t h a t some k i n d s o f memories i n r a t s may b e p r o c e s s e d i n d e p e n d e n t l y by t h e l e f t o r r i g h t hippocampus.
2 ) Dong E . , Matsumoto K . , Tohda M . , Kaneko Y. and Watanabe H . : Diazepam binding i n h i b i t o r (DBI) gene e x p r e s s i o n i n t h e b r a i n s o f s o c i a l l y i s o l a t e d and group‑housed m i c e . N e u r o s c i . R e s . 3 3 : 1 7 1 ‑ 1 7 7 , 1 9 9 9 .
Abstract: Diazepam b i n d i n g i n h i b i t o r ( D B I ) , a p u t a t i v e endogenous p o l y p e p t i d e l i g a n d f o r
b e n z o d i a z e p i n e (BZD) r e c e p t o r s , h a s been shown t o a c t a s an i n v e r s e BZD r e c e p t o r a g o n i s t
i n t h e b r a i n . We p r e v i o u s l y s u g g e s t e d t h a t t h e s o c i a l i s o l a t i o n s t r e s s ‑ i n d u c e d d e c r e a s e i n p e n ‑
t o b a r b i t a l s l e e p i n g t i m e i n m i c e was p a r t l y due t o an i n c r e a s e i n t h e a c t i v i t y o f endogenous
s u b s t a n c e s with an i n v e r s e BZD r e c e p t o r a g o n i s t l i k e p r o p e r t y s u c h a s DBI. I n t h i s s t u d y , we
examined whether t h e DBI gene e x p r e s s i o n i s a f f e c t e d by s o c i a l l y i s o l a t e d s t r e s s . C o n s i s t e n t
w i t h t h e p r e v i o u s f i n d i n g s , t h e i n s i t u h y b r i d i z a t i o n r e s u l t showed v e r y strong s i g n a l s o f
DBI mRNA around t h e r e g i o n s o f t h e t h i r d v e n t r i c l e , e s p e c i a l l y t h e l i n i n g c e l l s , t h e a r c u a t e
n u c l e u s o f t h e hypothalamus and t h e c e r e b e l l u m , i n both s o c i a l l y i s o l a t e d and group housed a n i m a l s . U n e x p e c t e d l y , h o w e v e r , s e m i ‑ q u a n t i t a t i v e e x p e r i m e n t s with r e v e r s e t r a n s c r i p t i o n polymerase c h a i n r e a c t i o n t e c h n i q u e r e v e a l e d t h a t s o c i a l l y i s o l a t e d m i c e had s i g n i f i c a n t l y l e s s e x p r e s s i o n o f DBI mRNA i n t h e hypothalamus than group housed a n i m a l s , and no d i f
白f e r e n c e i n t h e e x p r e s s i o n i n t h e o t h e r b r a i n a r e a s was o b s e r v e d between two animal g r o u p s . We d i s c u s s t h e r e l a t i o n s h i p between t h e d e c r e a s e o f DBI mRNA e x p r e s s i o n i n t h e hypothala mus and t h e d e c r e a s e o f GABAA r e c e p t o r f u n c t i o n f o l l o w i n g l o n g term s o c i a l i s o l a t i o n i n
百
n c e .
3 ) Dong E . , Matsumoto K . , Tohda M. and Watanabe H . : Involvement o f diazepam binding i n h i b i t o r and i t s fragment o c t a d e c a n e u r o p e p t i d e i n s o c i a l i s o l a t i o n s t r e s s ‑ induced d e c r e a s e i n p e n t o b a r b i t a l s l e e p i n m i c e . L i f e S c i . 6 4 : 1 7 7 9 ‑ 1 7 8 4 , 1 9 9 9 . A b s t r a c t : Diazepam b i n d i n g i n h i b i t o r (DBI) and i t s f r a g m e n t , o c t a d e c a n e u r o p e p t i d e
(ODN), a r e p u t a t i v e endogenous l i g a n d s f o r b e n z o d i a z e p i n e (BZD) r e c e p t o r s and have b e e n shown t o a c t a s an i n v e r s e BZD r e c e p t o r a g o n i s t i n t h e b r a i n . A p r e v i o u s s t u d y s u g g e s t e d t h a t t h e s o c i a l i s o l a t i o n s t r e s s i n d u c e d d e c r e a s e i n p e n t o b a r b i t a l s l e e p i n m i c e was p a r t l y due t o endogenous s u b s t a n c e s w i t h an i n v e r s e BZD r e c e p t o r a g o n i s t ‑ l i k e p r o p e r t y . I n t h i s s t u d y , we examined t h e e f f e c t s o f DBI and ODN on p e n t o b a r b i t a l s l e e p i n group housed and s o c i a l l y i s o l a t e d m i c e t o t e s t t h e p o s s i b l e i n v o l v e m e n t o f DBI and ODN i n a s o c i a l i s o l a t i o n ‑ i n d u c e d d e c r e a s e i n p e n t o b a r b i t a l s l e e p . The s o c i a l l y i s o l a t e d m i c e showed s i g n i f i c a n t l y s h o r t e r d u r a t i o n s o f p e n t o b a r b i t a l ( 5 0 mg/kg, i n t r a p e r i t o n e a l l y , i . p . ) s l e e p compared t o t h e g r o u p ‑ housed a n i m a l s . When i n j e c t e d i n t r a c e r e b r o v e n t r i c u l a r l y C i . c . v . ) , DBI and ODN ( 3 and 1 0 nmol) d o s e ‑ d e p e n d e n t l y s h o r t e n e d t h e p e n t o b a r b i t a l ‑ i n d u c e d s l e e p i n g t i m e i n group‑housed m i c e a t t h e same d o s e r a n g e , but t h e s e p e p t i d e s had no e f f e c t on t h e s l e e p i n g t i m e i n s o c i a l l y i s o l a t e d a n i m a l s . I n c o n t r a s t , f l u m a z e n i l ( 1 6 . 5 3 3 n m o l , i . c . v . ) , a BZD r e c e p t o r a n t a g o n i s t , r e ‑ v e r s e d t h e p e n t o b a r b i t a l s l e e p i n g t i m e i n s o c i a l l y i s o l a t e d m i c e t o t h e l e v e l o f group housed a n i m a l s without a f f e c t i n g t h e s l e e p i n g t i m e i n group housed a n i m a l s . The e f f e c t s o f DBI and ODN i n group‑housed m i c e were s i g n i f i c a n t l y b l o c k e d by f l u m a z e n i l ( 3 3 n m o l , i . c . v . ) . M o r e o v e r , t h e e f f e c t o f f l u m a z e n i l i n s o c i a l l y i s o l a t e d m i c e was s i g n i f i c a n t l y a t t e n u a t e d by DBI and ODN ( 1 0 n m o l , i . c . v . ) . These r e s u l t s s u g g e s t t h a t t h e changes i n t h e a c t i v i t y o f DBI and/or ODN a r e p a r t l y i n v o l v e d i n t h e s o c i a l i s o l a t i o n ‑ i n d u c e d d e c r e a s e i n t h e h y p n o t i c a c ‑ t i o n o f p e n t o b a r b i t a l i n m i c e .
4 ) Tohda M . , Zhao Q . and Watanabe H . : I n f l u e n c e o f c h r o n i c treatment with imipramine on mRNA l e v e l s i n r a t b r a i n : e l e v a t i o n o f g l y c e r a l d e h y d e ‑ 3 ‑ p h o s p h a t e dehydrogenase l e v e l s . Jpn. J . Pharmacol. 8 1 : 3 9 3 ‑ 3 9 6 , 1 9 9 9 .
A bs tr ac t: The d i f f e r e n t i a l d i s p l a y method was u s e d t o i d e n t i f y t h e i n t r i n s i c f a c t o r t h a t
changes i t s mRNA e x p r e s s i o n l e v e l i n r a t b r a i n a f t e r a 1 4 day o r a l a d m i n i s t r a t i o n o f 2 0
mg/kg i m i p r a m i n e . The e x p r e s s i o n o f a 1 8 0 bp band was markedly enhanced by i m i p r a m i n e .
The r e s u l t s o f s e q u e n c i n g and a d a t a b a s e s e a r c h r e v e a l e d t h a t t h e i s o l a t e d c l o n e was
g l y c e r a l d e h y d e ‑ 3
同phosphate dehydrogenase (GAPDH) with a o n e b a s e d i f f e r e n c e . Enhancement o f t h e e x p r e s s i o n by imipramine was o b s e r v e d i n t h e amygdala. Q u a n t i t a t i v e PCR showed t h a t imipramine treatment s i g n i f i c a n t l y e l e v a t e d t h e GAPDH/ / 3 a c t i n r a t i o i n t h e c o r t e x . These f i n d i n g s s u g g e s t t h a t l o n g ‑ t e r m t r e a t m e n t with imipramine s t i m u l a t e s GAPDH mRNA e x p r e s s i o n .
5 ) Dong E . , Matsumoto K. and Watanabe H . : Involvement o f p e r i p h e r a l type o f benzodiazepine r e c e p t o r i n s o c i a l i s o l a t i o n s t r e s s ‑ i n d u c e d d e c r e a s e i n p e n t o b a r b i t a l s l e e p i n m i c e . L i f e S c i . 6 5 : 1 5 6 1 ‑ 1 5 6 8 , 1 9 9 9 .
Abstract: Our p r e v i o u s s t u d i e s have shown t h a t c e n t r a l ‑ t y p e b e n z o d i a z e p i n e (BZD) r e c e p ‑ t o r s (CBR) and n e u r o s t e r o i d s c a p a b l e o f modulating GABAA r e c e p t o r f u n c t i o n a r e i n v o l v e d i n t h e d e c r e a s e o f p e n t o b a r b i t a l (PB) i n d u c e d s l e e p c a u s e d by s o c i a l i s o l a t i o n s t r e s s i n m i c e . I n t h i s s t u d y , t o f u r t h e r c l a r i f y t h e mechanism u n d e r l y i n g t h i s d e c r e a s e , we i n v e s t i g a t e d t h e p o s s i b l e i n v o l v e m e n t o f p e r i p h e r a l ‑ t y p e BZD r e c e p t o r s (PER) which p l a y an important r o l e i n n e u r o s t e r o i d o g e n e s i s i n PB s l e e p i n s o c i a l l y i s o l a t e d m i c e . S o c i a l l y i s o l a t e d mice showed s i g n i f i c a n t l y s h o r t e r d u r a t i o n o f PB i n d u c e d s l e e p than group‑housed a n i m a l s . When i n ‑ j e c t e d i n t r a c e r e b r o v e n t r i c u l a r l y C i . c . v . ) , FGIN‑l‑27 (FGIN, 2 5
』1 0 0n m o l ) , a s e l e c t i v e PER a g o n i s t , and PK11195 ( P K , 1 4 2 8 n m o l ) , a PER a n t a g o n i s t , and p r e g n e n o l o n e (PREG, 1 5 ‑ 3 0 n m o l ) , a n e u r o s t e r o i d p r e c u r s o r , d o s e ‑ d e p e n d e n t l y n o r m a l i z e d t h e PB s l e e p i n i s o l a t e d m i c e without having an e f f e c t on t h e group housed a n i m a l s . I n c o n t r a s t , p r e g n e n o l o n e s u l f a t e ( P S , 2 4 n m o l ) , an endogenous n e u r o s t e r o i d a l n e g a t i v e a l l o s t e r i c modulator o f t h e GABAA r e c e p t o r , r e d u c e d PB s l e e p i n group‑housed b u t not i s o l a t e d m i c e . P S , a t t h e same d o s e , s i g ‑ n i f i c a n t l y a t t e n u a t e d t h 8 e f f e c t s o f FGIN ( 1 0 0 nmol), PK ( 2 8 nmol) and PREG ( 3 0 nmol) i n i s o l a t e d m i c e , w h i l e FGIN ( 1 0 0 nmol), PK ( 2 8 nmol) and pregnenolone ( 3 0 nmol
〕s i g n i f i ‑ c a n t l y b l o c k e d t h e e f f e c t o f PS ( 2 4 nmol) i n group‑housed m i c e . These r e s u l t s s u g g e s t t h a t t h e PER‑mediated d e c r e a s e i n t h e g e n e s i s o f n e u r o s t e r o i d ( s ) p o s s e s s i n g a G ABAA r e c e p t o r a g o n i s t i c p r o f i l e i s a l s o p a r t l y i n v o l v e d i n t h e down r e g u l a t i o n o f t h e GABAA r e c e p t o r f o l ‑ lowing l o n g ‑ t e r m s o c i a l i s o l a t i o n and c o n t r i b u t e s t o t h e d e c r e a s e o f PB‑induced s l e e p i n i s o ‑ l a t i o n s t r e s s e d m i c e .
6 ) Matsumoto K . , Yobimoto K . , Nguyen T . T . H . , Abdel‑Fattah Mohamed A . ‑ F . , Tran V. H. and Watanabe H . : P s y c h o l o g i c a l s t r e s sinduced enhancement o f brain l i p i d p e r o x i d a t i o n v i a n i t r i c oxide systems and i t s modulation by a n x i o l y t i c and anxiogenic drugs i n m i c e . Brain R e s . 8 3 9 : 7 4 ‑ 8 4 , 1 9 9 9 .
Abstract: We i n v e s t i g a t e d t h e e f f e c t o f p s y c h o l o g i c a l s t r e s s on l i p i d p e r o x i d a t i o n a c t i v i t y
i n t h e mouse b r a i n , t h e mechanism u n d e r l y i n g t h e p s y c h o l o g i c a l s t r e s s ‑ i n d u c e d change i n
t h e a c t i v i t y , and t h e e f f e c t s o f a n x i o l y t i c and a n x i o g e n i c drugs on t h e a c t i v i t y i n p s y c h o l o g i ‑
c a l l y ‑ s t r e s s e d a n i m a l s . P s y c h o l o g i c a l s t r e s s exposure u s i n g a communication box paradigm
f o r 2 ‑ 1 6 h s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d t h e c o n t e n t o f t h i o b a r b i t u r i c a c i d r e a c t i v e s u b s t a n c e
(TEARS), an i n d e x o f l i p i d p e r o x i d a t i o n a c t i v i t y , i n t h e b r a i n , and t h e e f f e c t was maximal
a f t e r peaked by a 4 ‑ h s t r e s s e x p o s u r e . I n t h e a n i m a l s s t r e s s e d f o r o v e r 4 h , t h e i n c r e a s e d b r a i n TEARS c o n t e n t l a s t e d f o r 3 0 min a f t e r t h e s t r e s s e x p o s u r e , w h i l e no s i g n i f i c a n t i n c r e a s e o f t h e TEARS c o n t e n t was o b s e r v e d i n t h e l i v e r o r s e r u m . Trolox ( 6 7 . 6 mg/kg, i . p . ) , an a n t i o x i d a n t d r u g , b u t n o t monoamine o x i d a s e i n h i b i t o r s , c l o r g y l i n e ( 2 . 5 ‑ 5 mg/kg, i . p . ) o r 5 ‑( 4 ‑ b e n z y 1 pheny D‑3
ベ2 ‑ c y a n o e t h y l ) ‑ ( 3 H ) ‑ 1 , 3 , 4 ‑ o x a d i a z o l ‑ 2 ‑ o n e ( 1 5 mg/kg, i . p . ) , s i g n i f i
』c a n t l y s u p p r e s s e d t h e e f f e c t o f p s y c h o l o g i c a l s t r e s s . The n o n ‑ s e l e c t i v e n i t r i c o x i d e (NO) s y n t h a s e (NOS) i n h i b i t o r N ° ‑ n i t r o L a r g i n i n e methyl e s t e r CL‑NAME, 1 0 1 0 0 mg/kg, i . p . ) and t h e s e l e c t i v e n e u r o n a l NOS i n h i b i t o r 7 ‑ n i t r o i n d a z o l e ( 2 5 and 5 0 mg/kg, i , p . ) , but not t h e i n d u c i b l e NOS i n h i b i t o r aminoguanidine ( 1 1 0 0 mg/kg, i . p . ) , d o s e d e p e n d e n t l y s u p p r e s s e d t h e p s y c h o l o g i c a l s t r e s s ‑ i n d u c e d enhancement o f l i p i d p e r o x i d a t i o n i n t h e b r a i n . L ‑ A r g i n i n e ( 3 0 0 mg/kg, i . p . ) , a s u b s t r a t e o f NOS, a n t a g o n i z e d t h e e f f e c t o f L‑NAME. Measurements o f NO m e t a b o l i t e s r e v e a l e d a s i g n i f i c a n t i n c r e a s e o f NO p r o d u c t i o n i n t h e b r a i n s o f s t r e s s e d m i c e . The b e n z o d i a z e p i n e (BZD) r e c e p t o r a g o n i s t diazepam ( 0 . 0 5 ‑ 0 . 5 mg/kg, i . p . ) , t h e 5 ‑ HT1A r e c e p t o r a g o n i s t s
（士）8 hydroxy d i p r o p y l a m i n o t e t r a l i n and b u s p i r o n e ( 0 . 1 ‑ 1 mg/kg, i . p . ) , b u t n o t t h e 5 ‑ H T 3 r e c e p t o r a g o n i s t MDL 7 2 2 2 2 , d o s e ‑ d e p e n d e n t l y s u p p r e s s e d t h e psycho l o g i c a l s t r e s s ‑ i n d u c e d enhancement o f b r a i n l i p i d p e r o x i d a t i o n . I n c o n t r a s t , t h e a d m i n i s t r a ‑ t i o n o f a n x i o g e n i c d r u g s , FG7142 ( a n i n v e r s e BZD a g o n i s t : 1
10mg/kg, i . p . ) and 1 ‑ ( 3 ‑ c h l o r o p h e n y 1 ) p i p e r a z i n e ( a mixed 5‑HT 2 A
；町ca 2 g o n i s t : 0 . 1 ‑ 1 mg/kg, i . p . ) , p o t e n t i a t e d i t . The e f f e c t s o f diazepam and FG7142 were a b o l i s h e d by t h e BZD r e c e p t o r a n t a g o n i s t f l u m a z e n i l ( 1 0 mg/kg, i . p . ) . These r e s u l t s i n d i c a t e t h a t p s y c h o l o g i c a l s t r e s s c a u s e s o x i d a t i v e damage t o t h e b r a i n l i p i d v i a enhancing c o n s t i t u t i v e NOS‑mediated p r o d u c t i o n o f NO, and t h a t drugs with a BZD o r 5 ‑ H T 1 A r e c e p t o r a g o n i s t p r o f i l e h a v e a p r o t e c t i v e e f f e c t on o x i d a t i v e b r a i n membrane damage i n d u c e d by p s y c h o l o g i c a l s t r e s s .
7 ) Matsumoto K . , Uzunova V , Pinna G, Taki K . , Uzunov D . P . , Watanabe H . , M i e n v i l l e J . M . , G u i d o t t i A. and Costa E . : Permissive r o l e o f b r a i n a l l o p r e g n a n o l o n e content i n t h e r e g u l a t i o n o f p e n t o b a r b i t a l ‑ i n d u c e d r i g h t i n g r e f l e x l o s s . Neuropharmacol. 3 8 : 9 5 5 ‑ 9 6 3 , 1 9 9 9 .
Abstract : A l l o p r e g n a n o l o n e [ 3 α
−hydroxy 5αpregnan 2 0 o n e ] CALLO), a p o t e n t
n e u r o s t e r o i d t h a t p o s i t i v e l y m o d u la t es r ‑ a m i n o b u t y r i c a c i d (GABA) a c t i o n a t v a r i o u s
GABAA r e c e p t o r s u b t y p e s i s s y n t h e s i z e d i n nanomolar c o n c e n t r a t i o n s and s t o r e d non u n i ‑
formly i n v a r i o u s b r a i n s t r u c t u r e s o f mammals. We have measured b r a i n ALLO c o n t e n t and
i t s p r e c u r s o r s by n e g a t i v e i o n c h e m i c a l i o n i z a t i o n ‑ m a s s ‑ s p e c t r o m e t r y a f t e r p u r i f i c a t i o n and
s e p a r a t i o n o f t h e d i f f e r e n t s t e r o i d s with HPLC and gas chromatography. Our p r o c e d u r e
measures s t e r o i d s i n t h e femtomolar range with s t r u c t u r a l i n f o r m a t i o n and unsurpassed s e ‑
l e c t i v i t y . We were a b l e t o e s t a b l i s h an a s s o c i a t i o n between t h e d e c r e a s e i n c o n t e n t o f ALLO
i n mouse b r a i n c o r t e x e l i c i t e d by e i t h e r l o n g l a s t i n g s o c i a l i s o l a t i o n o r by t h e a d m i n i s t r a t i o n
o f 1 7 β
−1 7 [ b i s C l ‑ m e t h y l e t h y l ) amino c a r b o n y l ] a n d r o s t a n e ‑ 3 , 5 d i l e n e 3 c a r b o x y l i c a c i d
( S K F 1 0 5 1 1 1 ) , an i n h i b i t o r o f Types I and I I 5αreductases, and t h e s h o r t e n i n g o f t h e r i g h t ‑
i n g r e f l e x l o s s e l i c i t e d by pen t o b a r b i t a l (PBT). SKF105111 added t o c o r t i c a l b r a i n s l i c e s i n
c o n c e n t r a t i o n s up t o 1 0
5M f a i l e d p e r s e t o a l t e r GABAergic c u r r e n t s o r t h e i r p o t e n t i a t i o n by PTB r e c o r d e d from pyramidal n e u r o n s . F l u o x e t i n e ( 1 . 4 5 o r 2 . 9
μmol/kg i . p . ) d o s e s t h a t f a i l t o change t h e PTB‑induced l o s s o f r i g h t i n g r e f l e x and t h e l e v e l o f b r a i n ALLO i n g r o u p ‑ housed mice n o r m a l i z e d both parameters i n s o c i a l l y i s o l a t e d m i c e .
Ina d d i t i o n , we c o u l d d e t e c t both f l u o x e t i n e a c t i o n s i n s o c i a l l y i s o l a t e d m i c e p r e t r e a t e d with d o s e s o f p ‑ c h l o r o p h e n y l a l a n i n e C l . 2 mmol/kg i . p . a t 7 2 , 4 8 , and 2 4 h ) t h a t s u b s t a n t i a l l y i n h i b i t b r a i n s e r o t o n i n 5HT s y n t h e s i s a s shown by an 80% drop o f b r a i n 5HT c o n t e n t . These s t u d i e s f o r t h e f i r s t t i m e have p r o v i d e d e v i d e n c e s u g g e s t i n g t h a t t h e endogenous c o r t i c a l s t o r e s o f ALLO p h y s i o l o g i c a l l y u p r e g u l a t e GABAergic t o n e and by s u c h a mechanism p l a y a p e r m i s s i v e o r f a c i l i t a t o r y r o l e on t h e PTB i n d u c e d l o s s o f t h e r i g h t i n g r e f l e x . I n t h e a b s e n c e o f s u c h a p e r ‑ m i s s i v e p h y s i o l o g i c a l i n f l u e n c e by endogenous ALLO, t h e r i g h t i n g r e f l e x i n h i b i t i o n by PTB i s down r e g u l a t e d .
。 総 説
1
）南里真人，渡辺裕司：慢性脳循環障害モデルとしての両側総頚動脈永久結索ラットの有用 性．日本薬理学雑誌，1 1 3: 8 5 ‑ 9 5 , 1 9 9 9 .
。学会報告
1
）渡辺裕司，董而博，松本欣三：Diazepamb i n d i n g i n h i b i t o r ( D B I )
のマウス血禁中テス トステロン及びエストラジオール量に対する抑制効果．第7 2
回日本薬理学会年会，1 9 9 9 , 3 / 2 2 2 5
，札幌．2
）李紅彬，松本欣三，渡辺裕司，加藤総夫：ラット海馬CAl
錐体細胞におけるNMDA
誘発 膜電位変化 赤外線ビデオ顕微鏡下パッチクランプを用いた検討．第7 2
回日本薬理学会 年会，1 9 9 9 ,3 / 2 2 2 5
，札幌3
）金子喜彦，松本欣三，グエンチー・ス−・フォン，東田道久，プーイアジュリア，笠井良次，山崎和男，渡辺裕司：アフリカツメガエル卵母細胞上に再構築させた
GABAA
受容体に対 するベトナム薬用人参の主要成分Majonoside‑R2
の作用．第7 2
回日本薬理学会年会，1 9 9 9 , 3 / 2 2 2 5
，札幌．4
）アブデルファッタ−・アリ，松本欣三，村上孝寿，モスタファファイェズ，ハテムガンマー ズ，渡辺裕司：中枢セロトニンの放出，取り込み及び代謝回転に及ぼすharmine
及びharmaline
の影響．第7 2
回日本薬理学会年会，1 9 9 9 ,3 / 2 2 ‑ 2 5
，札幌．5
）松本欣三，李紅彬，渡辺裕司：ラット空間認知及び連想記憶に及ぼす単側及両側海馬破壊 の影響．第7 2
回日本薬理学会年会，1 9 9 9 ,3 / 2 2 2 5
，札幌6
）東田道久，渡辺裕司：イミプラミン慢性投与によるラット脳カルモジュリン相同性因子の 発現増大作用．第7 2
回日本薬理学会年会，1 9 9 9 ,3 / 2 2 ‑ 2 5
，札幌．7
）呼元香保里，松本欣三，NguyenThi Thu Huong
，渡辺裕司，笠井良次，山崎和男：心理 的ストレス負荷マウスの脳内脂質過酸化反応に対するベトナム薬用人参サポニン及び主要 成分majonoside‑R2
の効果．日本薬学会第1 1 8
年会，1 9 9 9 ,3 / 2 9 3 1
，徳島．8) Matsumoto K . and Watanabe H . : P s y c h o l o g i c a l s t r e s s i n d u c e d d e c r e a s e i n p e n t o b a r b i ‑
t a l s l e e p and t h e e f f e c t o f n a t u r a l m e d i c i n e s .
国際東洋医学会，1 9 9 9 ,5 / 2 7 3 0
，東京9
）田畑恵市，松本欣三，渡辺裕司：抗コリン薬s c o p o l a m i n e
によるラット海馬長期増強現象 の抑制とそれに対する巧薬成分p a e o n i f l o r i n
の効果．第1 6
田和漢医薬学会大会，1 9 9 9 , 8 / 2 8 2 9
，千葉．1 0 ) Abdel F a t t a h Mohamed A . ‑ F .
，渡辺裕司，松本欣三：Ni g e l l a s a t i v a s e e d
（黒種草子）油の抗侵害受容作用．第
1 6
田和漢医薬学会大会，1 9 9 9 ,8 / 2 8 2 9
，千葉．11）渡辺裕司，張夢H軍，松本欣三：四物湯の学習障害改善効果ーマウス受動的回避学習課題に よる検討一．第
1 6
回和漢医薬学会大会，1 9 9 9 ,8 / 2 8 ‑ 2 9
，千葉．1 2
）東田道久：D i f f e r e n t i a lD i s p l a y
法における単離配列解析の改良．第4 2
回日本神経化学会（広島）大会，
1 9 9 9 ,9 / 1 5 1 7
，広島1 3 ) Abdel Fattah Mohamed A . ‑ F . , Matsumoto
K.,Takayama
H.,Aimi
N.,Watanabe
H:Uncaria a l k a l o i d s improve memory d e f i c i t i n d u c e d by c h o l i n e r g i c d y s f u n c t i o n s i n m i c e .
第5 0
回日本薬理学会北部会，1 9 9 9 ,1 0 / 1 5 1 6
，仙台．1 4
）東田道久，渡辺裕司：慢性脳虚血により発現増大する新規因子v o f ‑ 1 6
のクローニングとそ の脳内分布，機能の検討．第5 0
回日本薬理学会北部会，1 9 9 9 , 1 0 / 1 5 1 6
，仙台．く〉その他
1
）松本欣三：月経前症候群にGABAA
受容体の発現変化が関与するか？．ファルマシア，3 5 : 2 6 2 2 6 3 1 9 9 9 .
。共同研究
相見則郎、高山虞光：千葉大学薬学部「タイ薬用植物中のインドールアルカロイド類に関する 創薬基礎科学研究」
1 9 9 4 ,4
山崎和男，笠井良次：広島大学医学部，グエン・チ−・ス−・フォン：ベトナム薬用人参センタ一，
「ベトナム人参の薬理作用の研究」
1 9 9 4 ,4
Erminio C o s t a , A l e s s a n d r o G u i d o t t i
：イリノイ州立大学シカゴ校精神医学研究所，「ストレス 病態における神経活性ステロイドの役割J 1 9 9 7 , 4 ‑
。研究費取得状況
文部省科学研究費，萌芽的研究（代表：渡辺裕司）「慢性脳虚血ラットの記憶障害に関与する内 因性物質の分子生物学的研究」
5 0 万
特別研究員奨励費（代表：渡辺裕司）「エジプト薬用植物成分の中枢セロトニン神経賦活作用」
1 2 0 万
文部省科学研究費，基盤研究
B ( 2 )
（代表：渡辺裕司）「白質脳症モデル動物に関する薬理学的 研究」7 7 0 万
文部省科学研究費，基盤研究
c( 2) （代表：松本欣三）「ニューロステロイド系を介した
GABA A
受容体機能制御と新規中枢作用薬への応用J 7 0 万
文部省科学研究費，奨励研究（
A)
（代表：東国道久）「内因性の学習障害誘発因子の単離同定と その生理機能・発現制御機構の解明J 9 0 万
平成 11年度創造開発研究費（代表：松本欣三）「ストレス病態に対する天然薬物作用の研究」
3 8 . 9
万。研究室在籍者
学部
4
年生：中島隆太郎，久保山友晴 大学院前期l
年：野村浩明大学院後期
l
年：張紹輝 大学院後期2
年：田畑恵市研究生：南里真人（大鵬薬品工業株式会社，
1 9 9 6 ,4 1 9 9 9 , 3 )
外国人特別研究員：
AbdElF a t t a h M. A. F .
（日本学術振興会，1 9 9 8 , 5~2000, 4 )
中国政府派遣研究員：越埼( 1 9 9 8 ,1 0 1 9 9 9 , 9 )
外国人特別研究学生：徐静華
( 1 9 9 9 ,6 2 0 0 0 , 3 )
外国人客員研究員：
MayureeT a n t i s i r a
（私費，チュラロンコン大学，1 9 9 9 ,8 1 9 9 9 , 1 0 )
。学位取得者 修士：
Boonyong T a n t i s i r a
（日本学術振興会，チュラロンコン大宅1 9 9 9 ,8 1 9 9 9 , 1 0 ) Monrudee Sukma
（日本学術振興会，シラパコーン大学，1 9 9 9 ,9 1 9 9 9 , 1 0 )
金子喜彦：アフリカツメガ、エル卵母細胞上に再構成させた
GABAA
受容体に対するベトナム 人参主要サポニン成分Majonoside
四R2
の作用瀧一洋：隔離飼育ストレスによる中枢
GABA
系機能低下と脳内神経ステロイドの役割張紹輝：ラット学習行動に対する
NS‑105 ( (
+)‑ 5 ‑ o x o ‑D‑p r o l i n e p i p e r i d i n a m i d e monohydra t e )
の作用松田嘉弘：両側総頚動脈永久結葉ラッ卜の学習行動障害および情動に関する薬理学的研究 呼元香保里：心理的ストレス負荷マウスの脳内脂質過酸化反応及びそれに対する薬物作用 課程博士：
董而博：隔離飼育ストレス誘発のペントパルビタール睡眠短縮における
diazepamb i n d i n g i n ‑ h i b i t o r (DBI)
の役割李紅彬：海馬およびイオン型ク、、ルタミン酸受容体の空間・非空間記憶における役割 論文博士
南里真人：ニコチン性アセチルコリン受容体アゴ、ニス卜
