Properties of NADH‑Methemoglobin reductase from bovine erythrocytes and the enzymatic levels in various animals

(1)

ウシ赤血球内NADH‑メトヘモグロビン還元酵素の性状ならびに各種動物におけるその酵素活性値

その他（別言語等）

のタイトル

Properties of NADH‑Methemoglobin reductase from bovine erythrocytes and the enzymatic levels in various animals

著者井上和幸, 前田勝美, 清水祥夫, 田村俊二

雑誌名帯広畜産大学学術研究報告. 第I部

巻 12

号 1

ページ 1‑8

発行年 1980‑11‑29

URL http://id.nii.ac.jp/1588/00002210/

(2)

相方粧乱12（1弾畔：1へ′汚．

ウシ赤IRL球内NADH一メトヘモグロビン還元酵素の性状ならびに各種動物におけるその形素油性伯

井上和幸普・l河川勝美づ÷・清水祥ノこ堵・田ネ寸俊二壷

（受理：1無礼）f卜5Jゴ3L＝ヨ）

Propcrties of NADH−Methernog】obin Reductase from Bovine

Erythrocytcs and the Enzymatic Levelsin Various AniTT．als

KazuyukilNOtJE率，Kat5uyOShiMAE】）A窄

Yoshio Sl肌tlZU事al】d ShuIlji「rAMIJRA率

要約

ウシ赤汀n雄エFJ，UEAE一セルロース，セファザックス G100およびヒドロヤシアノタイトを川いたカラムグロて、ミ、グラフイーにて、NAI1H・メト hb還元藤森を6，7叩倍に瀾製した。木酢恕はジ7ホラー王領ノトをホさなか／メた「二の自壊素のラミ鰯pHは5，2から5，5にあり，またp注8．1 で最もノ豪産であ′，た．ニフェロシ7ナイ1Jrf在下でのノト川，還元系あるい与エソユリシアブイド還元

系にこト．丁いて，若占製酵剋よN」〜l）Ⅰ−HよりもNADIiに特剰ゾ睦示す。メトHb，フェリシアナイド存在下におけるノトHl〕，7ユ・リ・ノアナイ「に対するKm伯はそれぞれ5x川￣負九†，1．25架1（「甑1，

コ．！）xlり−IN†であったゝ。フェロシアナイド，メナレンナル【．ビタミソK。．カタラ「ゼ，FAD．

亜掛澗は甘￡ノトl弟）に剖す刹噺奈的還冗を促遷しナニ。しかL，カタラーーピ：ノエー′ユrJシ7ナイドイ≠

在」勺こ来し、て醒射「こJなメト Hb還元を肌害した㌻つ′ソナてイシソA，2．3−DPGならびにGSSG は酵素清什にほとんど野宇j絃およはきなか′Jた．−1∵′丁デ，ノダスじ1勅ゾルろ過漂による分f・是

は38，00しIと敗走さ′巨た。

盲J穣助掛こお：「る射れ球I々NA工）HJ卜Hl）鼠／班睾素読性をa肘怒した紀凍，その括性1胤五動物随属肌でりけにり，とくiこりて立ウシでほ蛙べウサギとラットは遷しく．斑い。幼救お⊥び新生児の赤血球け成裸よりも点心心性を示し，隈裾祐におけ冬定男も認麿匂わとくに十川こにおいて著しい。

1ぞ（Ⅰと11）を楷製朝潮し，それぞれのメトtlJ還元能を偶べた精巣，その洒性ほきわめて低いものであ・つた

（S仁【）mら．1粥5）。その後，TTl…GESHとAvRON（1967）

：三フェロシ丁ナイド行灯卜○■／トHb♂）還元を苦しく捉越する陥素を楕儲Lた。近年，SuGJTA ら（1971），

1−ASSロN と HtTLTQUISl （197三2）らほチークロ←ム1〕与存1′！‡卜でメトHl〕を速やかに還元する酵素をヒト赤血球

緒

Scoり「、と L；ポ丹◆FITli（1g59）ほ，先方性メト＼÷グロt±ソ巾ほ†言患占・の訪吉山就内にNAl）H− ジり「ブ・・ゼがケこ軌することを梵見1ノ，本酵素がメトノ＼モグロビン川，

トメIHl））の還元に1共用・するものと措潮＝＿た。1ノかし．

たがlこノ，：ニト武川Lニ賢L：りヱ梯駁の NADil・ジ7」−ラー

尊称ム畜塵大学家畜龍雄学教軍

☆ t転即ttnentUf Veterillary Pharnacol鞘y，Ot）il一汗oUniver＄ity ofA即1Culture孔nd VeterjnaryMcdicil−e，

も）bibiro，H（〕kk乙最lo，、l叩11Ⅰ−．

(3)

井上和博ら

より培製し，その壌応櫻序としで本酵素忙より兢茄を受けた題元型チトグローム b妄が審撼メト Ⅱb を還元す患との説を撥唱し塩しかし，チトクロームbいを介ずるメ隼田bの還元か赤血球内irこおける主賓な貢禿弟であるか密か不明であるトまた，AmAC把JとO蛇口YA批Å

（19手羽ほウシ廊血球よ牒♪頓I升レタ7ホラーゼ奄構梨しそ碍性状軋璃き報告Lているが，メト昆b還元能紅対する伸銅はなきれていない）このよう豪こ幾夜，メド Hbを特異的に還元する解熱よ分嫉き九ていない。

凍寒放でほブ、エロツアナイド存在下で．才トHbの還元を促進するがAnH−メトロb森元酵素をウシ赤血族を用いて精製しそ西÷怖状にづいて若1鳩麿討を試み†さ

ら監各種動物嘩凛血幾内NAp注ノ下Hも還元野乗の正常値を求めたので，そのf武威を報告ずる℃

材料および方法

酵素沿鱒恕′私用いたウシ血敵地感掛こて．入手L∴凝固防止剤としてEロTAを∵使用Lた。謡精勤物におけみ酵素清作を比較するために使用した血痺ほプ、ダ（放血彼のEI〕TA加血液）を除きすべて静麻より採血し，ヘパ

5・4）コ、はキれぞれご575nm＝亜xlO8，e卿U皿m＝11．昏X

l畔王亜Onm＝1．鳩×108としたぐ

各種動雛ユ虎血球内NADH・メトHb革元酵率活性の測定はHEGl‡SH ら（1舗8）のノブ抜に獲・1た。この場合の活性僑ほ．Hbl皿g当り1分間忙遼元さ蔑1る巌質

メトHh魯キル数で示した。僚拝＝ノた分光光度計はRJ乙 1離と5野セある

結果

Ⅳ射師トメト艮b還元酵素の精製

ぎⅠしE‡）1：ウシ血液約3Jを3，f）り0吋的如虜庵闇成分離し，血蔑と白血球層を除去した，ひき統凄省き卸した

2溜昂：の生理的食塩水を加えて静かに温和し遠心分堆による赤血球の洗浄操作を31d揺り返した。

SでEl｝2ニHENNE＄SYらり962）め〟紘を用いて DEAE一 →h′レ†】−スによる酵素の吸着を試克た。まず赤

血球75mlgにど＄mJ田刃；を加え，闘，8朋Tp痴川舟聞の遠心により際蔑を除去した。さらに45鋸曲目り水を加え，1那須到許隆化壬EAETセルロ←ス渾遜液迅りmJと泥郡Lて冷蔵風J」で3D分操絆Lた。このDEAE・セル

P〟スに0．00曙Mワ㌢顧′くソファー（pH7．丑）を3綾敢加え，揖陣後3，∬00rpmlO奇問の韓心浄附こよ童Hb 除去操作を上清が錬色ぐこなるまで終り返Lたも酵義を吸着LたDEAE−セルロー和に掩剤Lたn．5M塩化カリ

ウム溶液1（削れJを加え，1野間の撹絆僅附こよ椚野秦を扇状したぐ酵素液を塵外ろ過きこより鮎1日憺サニ浪鹿穣一耽OLMリソ酸メくツワ7−（pti7・7）で平衡化Lたセフ

ァヂヅ′クスG一番かラムで脱垢☆行った。

STEP3：活附ヒした躍丸正・七′レローズ☆ラム（2

×5恥m〉をn．1）lMリソ酸ノミッフγ−（p官ア．7）で平衡化し，S′rEP21こより得た紛4鰐のタン′ミニタをd等斉してカラム忙鼠加†し，た。平衡化に用いたノミ，シフア、−でめラムな腕押し1塩化カリウムrl孔3Ⅳtの濃度勾附こよるソニ7グラブエソF・挨で溶持したひ路鮮出液にりいて NAl蘭Ⅰ−ジノホラーゼ，NAT）H一フエ；jシ7：ナげド濁元酸素∴軋Ⅵ沖−メトHb遣先酵素妙所性・を測定しゎ伴庵．1）。NADH− メトHl）還元酵素と NAD王i・プ∵土

リシアデイド避丘酵素のビータほ一致したn NADIi■汐アホラー一郎よNADH− メ】、Hb過元酵讃を・賂に潜むがi輿なる分1如こその活性ビータとしで出楓L．た。

STEP4＝S■1、EP3で得られたNA工刃もメl：Hお、還元酵寒村薗を限外ち廼でこ稗10甲gに猿轡像．射孤鱒l

タス塩酸ノて・′7 ′−（1）H乱招）で平衡化したセプ7ヂグリン加血液としたn

NADH とNÅppHほSIGMA 用したウシヘモグロビンはS虹池良

￠製品であ愚。なお置板書れろメト

♭化を驚けていろが，NAf〉路メ′ト

い転

酵素の精製段階払おくサるメト書旭

ほ，10mM 冗ロTA溶液臥15mJ．

礼遇質として健祉および某新化成

規b はほとちどメ Hb選元締牲を欠

盈元酔顔の測定に

1伽mMリソ簡ノ‡

ッファー（p土i説4）く）．5mJ，0．135mMHb溶液仇8mg，

0．毒血M マエやシアン化カリ∴溶液0．徴血J，適俵の酵素終．革にて糠星2・‡櫓mJかち威左反応液に1nm九一対ApH溶液ひ．0二Z疏Jを湊ノウl【して反応を開髄し・，575nm における吸光鹿の変化を25Vc￣賢訊隠した。DClI｝を基

♪質とすあいわゆるジアホラーゼ活性は基暫メト Hb と予算ロシアン化カリの代わりに0、朗血M Dul 浴狭 1．5距Jを加え，同一条件Fで1静間紅塵ザ漆餌和明

の躾光度変化を求めたリブエリシアナイドに対す私選元

油性は基質とLて【）．5山南フェリシア㌢イヒカリ1．如如

教ゎりゑ，阿箪反応灸件「Fで5分間軋生ず各磁犯如血相個光度安此を漸濯Lた。酵索括極値柁酵素タンパク1瑚腐当牒1分間旺還元する基質のモル数として表おした。Jな料酵素綺軽燈を欝捜す竃に当り．メトロ鞄〕Ⅸ卸㌣東

よぴマユウタアナイドの分子吸光係数〔elnヤ通がlすな粛

一ニ・

(4)

NAl〕H一ノー・へモグ亘ピソ還元酵素タスG1御舟ラムほ．与不7りcm）による展

開を試みた。Fig，2に示すように，NA［）ロメtⅥh還元酵素ほ明らかをこNADH−ジ 7ホラーゼとほ異・な患労働として分蘭された。

STl、EI−5：STlミP4で得られたNAr）H・

ノーEb還元酵素分画をライホゲノいこて約 5mJに漁紹後，あらかじめり．U、1Mトリス塩酸／ニッファー（pH鰯．（う）で斗1衡化したヒ

ト√pキシアノミタイトカラム（1．5〉りcnl）に添加したu まずn，日加優トリス塩酸バッワ

ァー（pH軍．6）蒔mg，ついで0．川・Tトリス塩醸ノミップアー（pH8・6、）115mJでカラ

ムを洗浄しn・2訂れ′1の酌酸アンモニウムを倉科l・1Mトリ・ス塩懸パヅ77−くpIl 路．6）ヤ酵素を帯出した。

以上の酵素精製段卿こおける収風発

らぴに比活性をTal〕】elに・折衷示

した。最終段階で得られた最も純度の高い酵素轢晶は溶血破より約6．700倍

に精製された。

酵素の講性状

pHに対する二女定怖：Fig．3は酵素のpH一宏走向線である。試醸したpH 葡周胚で pH臥1が最も安定であノーた〔この場合，その残＃括性ほ53％

で，脚吊．0のリン敢バッファーの33

％と比較して，トリス塩酸／ミヅファー

ほ明らかに酵素の安定性を保将する。

温度に対するノ安定性1温度一変定肺腺をFig．4に点す。霊pCで3u分借」

に20タざ，33CCで50％の窮性消失が認

められたン

M︶h盲⁝⁝︻一言已・＝；一＼竜ニ

叩 5D 6□ 7D 88 ）0 1【0

†r】rtl□【nl爪ber

Fjg，1．Fractiorlation of NADH・mCthcmoglobinreductascby DEAE−Cell11lose coluInn CllrOmatOgraplly．Tl−e Sam−

ple from Step2was applied to a column（2x5Ocm）

equilibrated witllO．01M T）h（〉SPhAte buffer．pTI7．7，

Fraclions of15n17were colleぐ1ed．

EコH盲：n七三t−富〇一冊いま㌔＼竜こ

〇．N mノロ．﹁い▼U

︵ト⊂ロ崇︶巴∪3LO小吉

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下ig・2．アractiomatioIlOfⅣADH−metbem叩lobLn fedu弛se t】y Sep王はdヒ且G−1（ルeolumnchromat｛lgraphy，Thes鱒ple

from Step諸鱒＄ appiied10 a COlumn（2．5x7UcIn）

eq11ilil−ratedwitl＝〕．01hすTrisHCl，pH嵐6．Fr札止ion石

田f3mJwere coll郎ted．and80W ratヒWaS12m〃h．

T札blel puri負eatぬn ofNADH−methemロglobin redu｛：taSe Ttal

a亡hvity

nlnOles min￣1 担g ⁿ nmole苓m】n￣1ノmgPr

5 UU q︶︵れ

㌣％笠比7．＆

6 2221抑．伊トトニ■

37．9 2鋸：∃．9 993．6 2．DEAE，Celtulo鑓biltCt＝無血血l．‥．149174．4 3936．0

3．DEAE・Cellulnseぐhromat￠grapky‥532盟．0 187．5 4．Sepbade嵐G100cllrOmaモロgfaphy‥2餌1？．1） 28．6

5．HydTQXyap台tile chrumat（）graptly‥，31567．3 2．9 10885、3 尤 Based upon hemoglobiIldeterrnillこ1tion

・：l ・

(5)

井上和十ら

八−hご■三・●て一・●︳l

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Fig．3．Elfeぐt r）f pH・−11St良心ility of NAl）H・

metllビInOglobin redu′亡モaヨe−n・58膵Of enzymcs w亡feiIl…1〕ated at25UC f離

＝1 】uTil−0，2mJof U．削‖ⅥpllOSpbat七 l〕uffers or〔川1M′rris．HClbu鮎【皇−

AfLefiIICしIbatioll，NAnHmethem（哨IQ・

hin reductasc a山il・ity wa5dモterl11i間d asde汚Uril柑ぐIine叩er血enlalprucヒdurel

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Fig．臥 R鮎山）Jtmperat甘り叩鳳姐潤一江咋tll省一 n…gl（｝bin redlJCt寧狸．ノ＼fter re評Cti珊 mixtures wefeiわCul隈t震d at e注dt傍m．

1）er添上ul・e，NAIきH・m翫hemd度l0嶺nredlle−

し就SF且仁iivity桐尊d静細雨m融纏d琶・

』Cribed exp母上imentalpfOじedure．

朝鹿川：励己、液のp‡｛を変え，泰酵素の東通p班な健討l＿た♂二〉がFi掛5ヤある。雪雪道pHほ5‥』から瓦5

顧問に存小三Lた⊂

や題瀦灘：あらかじめ甜たて液をFi鰐・6泣示した各鼠腰に加温した後，本邸素♂ユ活性を調べた。そのこ至適温度は淡ト35仁Cにあって，鮮Cでは著しい河童の機ドを糾いた、

鵜野こ対する特異＼性：NApHとNAI）Ptlに対応する祐基質の本酵素による遜元活性削ヒ較1ノた点暴虐とL．てメトHlきを川いた軋 NAmがNÅDp壬1の紛2倍の臆さを示t．た抗いザれの凝台、も基肇軸真紅よる本酵素の

メl・Hh還元俸はきゎめて低し、・′NAけ注ぎを虎そ供与体

としフェロ・ンノりド掛紆FせがAn路メト1劾遵元酵素を榔若した博，その活性ほ著しく用人Lた。これに対しフェアシ了ナイド抒在下のNAl）Ⅰ−H反応系で膵，附聖の促進効果は全く認められ接かゃふた．また本酵寮軋ノトHl卜の基質濃度と比戒て仁よろかに尚も、濃度で

あるアユ！ごシ7ナイド恕超克型スクレオヂド節介在下寵で磯く還元する〔しかしメトHl】とフェロシアナイドめ共有トてのNAl｝H′・ NÅD門Ⅰ満作比が7，捌湘であった研こ対L↓ フェリシアナイド単独明モ′れはl柑セありた 1このように′7ェロケ㍗十イト存瀧下に褒げ萄メト Hb還元酵素はフェリシアナイド誕元酵素と∧とも紅 N叙DHに特別くJであった。酵

を Ll麒EWEAVE取−Bt一浪拓プロットにより輝レ鮮紅私 NAUH・メトIib還元酵素のⅤ叩a葛煉P．鶴野メ」mpl隋 111jlで￣1ノm莱PT．，Km億は5￥10￣5R4であった。こ如こ対

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rig．4，威α即t nf temperature（〜nぬ㌫1jt㌢りf 保AnlIlnethem￠globinreduct藁紙．臥5払揮lうト血互ynleS雨r亭inぢuぬ撫一重威‡ぬCh 陪叫匪：ー幻〕re fりr3u一曲lし頻畠in O・2取J 8f（用1九11、ris・托Cll｝u壬【eT，pH、路．1．

Aft即；ncl】batil）n．NAけK・血油画叫頼・

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騨恕．説」甜永川flがnmNADH−111ethe血qgl（）bin rだ砿1uc【a急転，NノゝDII・methtゝmUglobin feナ duet8Se 且亡til由y w圧さ determined ぉ止モ吊：l・ibedinだ式perimentalprocだdtlre．

一 4

(6)

NAI〕11ノトへモグロく■ソ還元酵素

1 フェロシ7ナイニ・甘在下におけるNAl）H−メトHl）

還元酵素およぴNADH− フェリシノナイド還元酵素汐）

17maxはそオ1ぞれ40／JmOleslni【1−1加持f，ー．，堪／県−1nl￠誉 lⅥiTl￣竹哩」一丁．であり，K】n佃土1．ご5xl（）】ヰM，2．9x 川￣lM と欝鮒された〔

活性剤および阻害剤の影響：反応礪中に活性ないL阻

害椚に作用すると思わかる物質を添加してその節響を調

べ，これを′1、able2と一rable3に点しノた。最も破い促進作用を示したも♂〕咤7エロシアナイドで，メチレノフル〈，ピ♂jソKもかこ．れにつて、・′2ないし3倍の促進

作用の羞健止れたものとしてカ＝タラー▼ぜ，柄杓憮軋 FAD などカ；あり，セレニウム胤塩化第曾鉄，グルタ

チオンなどにコこる影響ほほとんと｝みられなかった）興味あること代，■7エリチッがむLろ阻害作捕を示す。一九仏式した阻害剤のうち塩化第2水銀を除き，ほとんど5tt宰が認めらわなかっ∵た。とくに麗子伝達系を阻害す T乱ble2 一三抒cct uf a山ivators r）n N八DH−

nl亡：thヒmOglobi11re〔luctase

Relaしive adiv恒・

A【lllition ％ NoIle∴．

0．1汀1Ml′ itami山犬い，．

0．1nl丸1So〔lium sele上1a†e‥

0．1血M fu月．．．．．

0．1mM GSSG．…

0．1mXISo（1iumllitrite‥

0こ1mMIご群ricビhlorjde‥

d．1r−1丸4Ⅳ1etl−yleIleblu巳．．．

1）．1mM CaIal那e．．．

∩．f）1m〜1Catala弧．

∩，15mM Ferroじyallide‥．

軋1√鳩（〉f Fur止血L＝

珊靴111釧闇淵123㈲肌用汎脚

る7ンチー′イシ∵／AおよぴHbと酸素との鶴倉に7日ステ打γダ勒巌を示す3．3ジ

ホスホグリーヒリン酸も奉酵素め活性にほと

んど景子響Lなか一つた七

分了・鱒二（）．（）5Mトリス塩曜′、こ、ツ7プー

（pHS．1）にて平衡化1＿たセファチッ〃ス G」用）カラム（2．5〉く80c【n）に酵素液1mJ を濾如し．て各3】llJの分両を採取Lた〕標準タンハクとしてウシ血清フルプもソ，卵什ア7ニプ∴′，チト＝クローム（：をml一、ヒ再挙索の溶出液勒よノユドシ7ナイト存呑三トヤNAnH一メト TIb還元酵素活性を制定することによりノ長めた。その紐鼠算了，縁は約肺00【）と推定される∴

各種動物の赤血球内 ⅣAI）江−メトlIb

還元酵素活性値

ウシ，t．巨γ，ブタ，ウサギ．ラット．イ或，ヒツジの赤血球内酵素活性をTat〉lだ4

；こ示す言これらの動物仁）うちウサギが屈も r恥、活性を布1りラ、ソトとブタがこ如こ縦ぎ，ウシとウては低い．．少数例でぁるれラット新／仁児とイ7幼獣ほ戌獣に比較して明ちかに高い活性をメJミした（成牛と1月二に

心ける平均偶の差は凝汁的に有意である

（Pくn．晒）、．重た個体聞における活性順の差も．認めら：れとくにけ叶シこおいて酎．く，

その範囲ほ（1．27〜2．B9nm｛1ks miI）【1．′ tIl只

Table3 E鮎Lミt（）finhibitors oTINAr）H−methem毎再）bin

redu（1tA錐

Relative aぐtivity

聖霊悪豊㌧嘲加瀬血

％％

Ad〔】itin11

00鋸叩5 川∵掴錮 75 仰 03 ㈹㈹ ‖ 94 81

ひ．】mM∠〜ntirn〉・Ci11A．…

1Llm〜1ゝ1arcLlriビChl心ri〔1e‥

n．lm≠lN−EtllVlI11訝1e；mide、．

n．1mMヨ．：トロPG、．‥

n．1mゝ1lr〉dわaぐetiぐ肌i〔l．，

軋1mト1Cとしは1a5e．．．

T8ble4 NADHme†llem（嗜1り†−i¶Teduし：t払SヒaCtil・iti亡S qF var血瀬田巾叩1s

凡1亡iln十S．E．かⅠ，

N聞berufcぬ持 nmnlesmin−■′′mg＝b

Speビi亡S

1、48 ± 0．18 l．7（う士 0．22 1．54 士 0．1月 2．川卜（）．ボ8 2．′l【）上り．3〔；

5．H（）、l住用），8．コ5 L．餅）．ユ測

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(7)

井上卸準ら

Hbであノユた√

考察

庵蔑験癒構激した酵素の季題pH ほ5．2かち5．5モこあ訝，生理的蔑血液のp日と比較してか′なり低い砥やありた。担拓ES灯ら（1967）Ⅰこよる酵素め登滴pHほ5．2 であ：る。アAS分村ち、（1g7扮シ乏Delわを甚質ょする至遜pHが鼠以下，チきタワームbi恕凄蕉ゝとす細説脚 8〜gであ笥と報告している。また．TÅNIS知ユMA ら

（l野均ほ7エリ、ツアナイドせこ射す悉還元柄蛙め至通辞拭をア．5としている、。このように用いる素質により末節粛の登酒p壬まが異なる。メトHbおよびDCIPを怒賢と

して用いた均胤低い至適pHとなる理由激甚贅智こ耐熱藤森殴弟卿性ゐ腐太区よる庵均せ想転毎臥しかL．

償いpIi条件下で酵素それ白樺冶；不安窟（Fig、4）となる押せ，酸素基質廣合体町形成旺より奮起他が計らおる

も申達想像きれる、。酵菌虹対すが錘勅封鯨球恒拍

−ムb蓼で盛ると仮定ずれば，／生体内ヤ養分な満牲を発探するた酎こ程の賓邁 pH は高すぎる。．駄匿ITA ら佳節1苛め精製した藤森略pH6．0で最も、楽延恐あると

している風本賓駿で持た酵素はpIi鼠1で最も安定で

あった。これかビトとウシとの篠場裏虹よるか番かは不

明であ道心

軋翫酎・メト出b還元酵素書こよるメトHぁの還元を蝕進する物事とLて不メÅ／トー凡ヘキサリソ酸（LEROUX

ら11針7；Mみが細l】恥19翔）とαアジル上等イブダ彰ジ牒￣ン（p恰Ⅴ以由ら−19弼が報告嘗れでい苺。

務努険臨終した活性化物質耶うち，鯛短か響こ恥過勤其め認めちれた生野約化合物とLてビタミ、ツK6がある

（取浦泡弧洩倉と吉川（1g蒔）ほ，ピタミy Kをメ、ト化した蘇血謙にダルコースとともに加えるとメト注b．の還元が堰渡叢丸，その作用をペソトースサイ虜ル艦長素材A没ア豆の産生な介する酵素的なメ′一肌の還元と説明してもノ｝をり一あピβミ㍍Kがジア應テーゼの基質となり浄るこ之もすでをこ知られている￡蜘ら，l事砧）。

したカ、；りて，がAI曳HJト Hh還元勲こおいてピタ、ミ

ソ立が電子倍達謎として件用す惑ものことも考えら奴るク

東硝酸塩のごときHlぅに対する強力な酸化剤参i′メh恥

俊酵素的還元嘉応を悔遺す惑事実ほ興味溶い∴洪卸吋

（iち桁7）旺、よれば．哨酸眩ならば虻フエ白かアナイ持戒

Ⅰ払起、壌命林む形成し酎ヒと同時虹還元層澱凍も帝易にするという。Lかし，フェロジアナイドの瘍暫，単純

な藤倉棒形成終よ∨る廃港勃発モ説明できない撞着な満性

一 8

増進作用が認められた。すたわも，酵素反応速度諭約解析結果で，ノF Hbに対するX軌値がメ11日b＋7エ pかアナイドに対するそ．わよりも小さい。いずれ監してもワエロシ丁ナイドがメト汁bの酵素釣遼東を阪進することほ明白であるが，そ紆作用横棒旺ついて不明指頭か多い。Yl賊SVlら（′1977）はr ヒト赤血球よ射隋製したNAl）PH・虜卜凱避元酵素牲プラポタノブパタで，アラピンによりメ†Hも遺∬析畦が促進きれるこ孝牽報告 Lてし、る。しかL一ながち，奉賀鰍こ融、ぞフラピソによ昏活性化は疎められなか′つた．

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ロシ？ナイド有産Fでほわずかながら添性吟常温を超くか．ニれを欠く場合遵〜こ促進的に作用する。こ沿事実の説明として，まず酵素反応−こ先行して，メト注bとの法令が考えられ，この結合に際しカダラーぜとアユ戸ケアナ宵ドによる読替現象カミ生じ，低い活性促進を示す、分

属ヲ←ゼの結弁紅より見掛け上の活惟低下としそ現ぬ

れ為ものと解したい。SUGITÅら（1耶1＝もノト昆b の遊動こカ鰯ラーゼほ作用しないと述域PAS輔と HIJLでQUJ5T（1斬2）もチトクローム転還元紅対す漆

頚タラ・・一ゼの膨響を否定し宅いる

魔化韻2水鍬去メトⅠ弘一「アユPシアかイドを盛徳と Lた即仁を完全忙阻害したがトÅナHbめみを基質とする反応を阻害し恕かったu したカミって。水銀イオyほ泰酵素に対する底塞約な阻常体となり許簸いカミ！フユP少

アナイド忙よる介在反応を完篭解瀾眉するも、む走考えられる丹SccITTとMACGRAW（1や彊）紅より、キ、チタリソ

やpヒドロキ☆マ【キュリペンゾエイトなどは不酵素

軋対する阻害剤はされてい為じ

従来，報告きれたヒト赤血球エり分郎した耽姐椚一メトIIb還元酵封ますペて魔力なジアホラ岬ゼ活僕を率ずリ Lかし，今回めサツ赤血球よ壕精製したボApH

メトt甑還元酵森が≠7ホラーゼ路傍を欠く頚確は廃疾

漂い卸昆であ私

各種動物に科する赤血球内NAI調一メトRb腰元酵

斎を比駁した練乳動物磯鯛忙その轟が認めらねた。

反スウ家畜が摂取した硝酸塩はルー．＝〃拒タ亘て≠≠ト∵

ラ詣こよと川1ミ嫡徴堀，ヒ「Pキシアごソを経てアyモエア

に腰元される．取備考並柄酸塩の番請により，重液中絃移行して．Hb☆！強化す＆ここと蜃こよりメ一斑も血症の発腐要因となる（LEⅥS．1951；l、SHエGAMIとⅠⅣ8UE，Ⅰ耶臥したが一マて．かかる危険を回避するた捌こ草食嶺￠療血

(8)

NAl）lトメトヘモグロビン還元酵素

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9〕1SHIGA如1，K．，andI硝凡IⅨ，Ⅰこ．（197勒：Metal）の1i畠m 8r Nitratだ且n〔】M正k血戦1めInemiain RuIlli−

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11）〕L∬WIS．D．（1951）：The Metabolisrn t）f Nitr払te 抽dNLtritein tke Slle恥Ⅰ．TbモReductionof Nitfitein thくさR11merlOftbe軌ビep− Bioellem．

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〔1977）：Interacti〔）11beしWeellh†etllem｛■gl（）lliれ Iieductase（NA工）H・Cyt舶hrりm￠l〕．ReduぐtaSe）

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12）hlANSOtI求Ⅰ．A．〔1979う：R！−7y【1−ati【・h4ethe−

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球ー／」メトHIJ還元隠三伯の動物に比べて由、ものと㌢洲される√ Lかし一．実験結果によれば速にウシ，ヒツジ，

ウー′における NÅDH− メト Hl）還元酵素活性ほ低い

（Tal）】e4）−ノブ，BART伐（1粥4）によれほ，亜硝酸でメト化を証｛た赤血球を38か仁に加温した曜，ウシとヒツジでiよそ身？ぞれ蘇嘩7％と9％のメトHl）還元率で，

ウて（1．鴫）とブタ（5プざ）エりも高い還元儲惣示すという。また，ウマ♂〕赤血球内のNADH・ノミ、1Ib還元酵素は］、とに比べて一筋大きな役刊を果たすという R（〕もINとIIAR】，EY（1967）の壬張がある。このような乳跡土非酵素的ないしlよ他の酵素にエる還元系に去引月す

るものと且ほっれ冬。そこで．・各種動物におけるメナ11t）

還元に対する各還元系の比率な明らかにすることが今後

の課題となるたお7、且hle月にホした測届値ほAcAIモとHARLEY（1折2）♂ラ値とほぼ一致する．ヒトにおいて

は成人に比べ胎児および幼児の或て血球再酵素れ引生が低く

（ⅠIFGESHら．1日庸二AGAR と11AIモ1EY，1972），ウシでは成牛止り肌i児や新ごじ把♂〕活性が．射、（SMITH と

随UTl．ER，1舶即とされている。本実験にお汁るウシ，

イヌ，ラットにりいでり瑚J完結果でも．軌酌ま成猷よりも高い酵素活性を示した仁おそらく，この差駅ほ，流血中に幼君刊赤血球の．与める比率が酎にとに、［るものと

推察されるt

メトⅠIb血症の「1然東通例で敏察さ才Lる動物の個体差がNADIi一りⅠIb還元酵素活性といかなる関係にあ

り，ヒl、の隠育と「何様な本酵素欠如症か家畜においても存在するれさらに慢性のメトロb血症でこれに対する

嵐応酵素が請萄されろか布かなど今後に残された閏軌ユである′

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(9)

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Properties of NADH‑Methemoglobin reductase from bovine erythrocytes and the enzymatic levels in various animals

ウシ赤血球内NADH‑メトヘモグロビン還元酵素の性 状ならびに各種動物におけるその酵素活性値

その他（別言語等）

のタイトル

Properties of NADH‑Methemoglobin reductase from bovine erythrocytes and the enzymatic levels in various animals

著者 井上 和幸, 前田 勝美, 清水 祥夫, 田村 俊二

雑誌名 帯広畜産大学学術研究報告. 第I部

巻 12

号 1

ページ 1‑8

発行年 1980‑11‑29

URL http://id.nii.ac.jp/1588/00002210/

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ウシ赤血球内NADH‑メトヘモグロビン還元酵素の性状ならびに各種動物におけるその酵素活性値

著者井上和幸, 前田勝美, 清水祥夫, 田村俊二

雑誌名帯広畜産大学学術研究報告. 第I部