動 物 介 在 活 動 に 従 事 す る 動 物 の 内 分 泌 的 指 標 を 用 い た ス ト レ ス に 関 す る 研 究
酪 農 学 園 大 学 大 学 院 獣 医 学 研 究 科
獣 医 保 健 看 護 学 専 攻 修 士 課 程
黒 野 裕 史
動 物 行 動 学
指 導 教 員 准 教 授 佐 野 忠 士
2 0 1 7 年 度
目 次
緒 論 1
第 Ⅰ 章 A A A に 従 事 す る セ ラ ピ ー 犬 の 唾 液 中 C o r t i s o l 及 び
S I g A を 指 標 と し た ス ト レ ス 調 査
1 . 序 文 6
2 . 材 料 と 方 法 8
3 . 結 果 1 3
4 . 考 察 2 2
5 . 要 約 2 8
第 Ⅱ 章 人 と の 触 れ 合 い プ ロ グ ラ ム に 参 加 す る ハ ン ド ウ イ ル カ
（Tu r s i o p s t r u n c a t u s） の 血 中 C o r t i s o l を 指 標 と し た ス ト レ ス 調 査
1 . 序 文 3 0
2 . 材 料 と 方 法 3 1
3 . 結 果 3 5
4 . 考 察 3 8
5 . 要 約 4 1
第 Ⅳ 章 総 括 4 2
謝 辞 4 3
引 用 文 献 4 4
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緒 論
人 と 動 物 の 関 わ り は 遥 か 昔 か ら 存 在 し て い た が 、 学 問 と し て 注 目 さ れ 始 め た の は 近 年 で あ り 、 動 物 と 関 わ る こ と が 人 の 健 康 面 に 効 果 が あ る と 科 学 的 に 証 明 さ れ た こ と で 、 動 物 介 在 介 入 （A n i m a l A s s i s t e d I n t e r v e n t i o n s , A A I） と い っ た 動 物 を 用 い た 治 療 や 活 動 が 行 わ れ る よ う に な っ た[ 1 , 1 8 , 3 7 ]。A A I と は 、 す な わ ち 犬 や 猫 な ど を 伴 っ て 医 療 施 設 や 老 人 保 護 施 設 な ど を 訪 問 し て 癒 し を 与 え た り 、 馬 な ど の 動 物 に 乗 る こ と で 運 動 器 官 を 刺 激 し て 脳 を 活 性 化 し た り す る 活 動 で あ り 、 近 年 で は イ ル カ と 水 中 で 触 れ 合 う プ ロ グ ラ ム な ど が 挙 げ ら れ る 。A A I に 用 い る 動 物 に は 犬 、 猫 、 馬 、 イ ル カ な ど が 知 ら れ て が 、 ウ サ ギ や カ メ 、 鳥 や 金 魚 と い っ た 動 物 を 用 い ら れ て い る 。 選 択 さ れ る 動 物 の 必 要 条 件 と し て は 健 康 で あ り 対 象 者 に 危 害 を 加 え る 可 能 性 が 低 い 事 、 そ の 動 物 に お け る 人 獣 共 通 感 染 症 を 媒 介 す る 危 険 が な い こ と 、 さ ら に 訓 練 が 可 能 で あ る 事 な ど が 挙 げ ら れ る 。 現 在 で は こ れ ら の 条 件 を 満 た す 動 物 と し て 、 犬 が 広 く 用 い ら れ て お り 、 ま た 、 沖 縄 県 や 高 知 県 に あ る よ う な 一 部 の 施 設 で は イ ル カ と の 触 れ 合 い が 行 わ れ て い る[ 2 4 , 3 0 ]。A A I は 主 に 3 つ の カ テ ゴ リ ー に 分 け ら れ る 。1 つ 目 は 医 療 従 事 者 の 管 理 下 で 、 対 象 と す る 人 の 機 能 や 福 祉 を 促 進 す る た め の 治 療 目 的 を 設 定 し て 行 う 動 物 介 在 療 法（A n i m a l A s s i s t e d T h e r a p y, A AT）、
2 つ 目 は 参 加 動 物 の 知 識 を 持 つ 教 員 に よ り 教 育 の 目 的 で 行 わ れ る 動 物 介 在 教 育 （A n i m a l A s s i s t e d E d u c a t i o n , A A E）、3 つ 目 は 動 機 づ け や 教 育 、 レ ク リ エ ー シ ョ ン の 一 環 あ る い は 施 設 訪 問 な ど と い っ た 、 治 療 目 標 の な い 人 と 動 物 が 関 わ り 合 う 事 を 主 な 目 的 と す る 動 物 介 在 活 動（An i m a l A s s i s t e d A c t i v i t i e s , A A A） が あ る 。A AT が 医 療 に 携 わ る 有 資 格 者 、 対 象 個 人 の 治 療 目 的 に 沿 っ た プ ロ グ ラ ム の 作 成 や 効 果 判 定 が 必 須 な の に 対 し て 、A A A で は 明 確 な プ ロ グ ラ ム や 医 療 関 係 者 の 関 わ り を 必 要 と し な い こ と な ど か ら 世 界 中 で 圧 倒 的 に 多 く 活 動 さ れ て い る 。 米 国 最 大 級 の 組 織 で あ る デ ル タ 協 会 （D e l t a S o c i e t y） で は A A A を
「 生 活 の 質 を 向 上 さ せ る た め の 意 欲 喚 起 的 、 教 育 的 レ ク リ エ ー シ ョ ン 的 や 治 療 的 な 利 益 を も た ら す 機 会 を 提 供 し 、 一 定 の 基 準 を 満 た す 動 物 と 専 門 家 や ボ ラ ン テ ィ ア の ペ ア に よ り 行 わ れ る 活 動 」 と 定 義 し て い る[ 4 4 ]。 近 年 よ く み ら
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れ る 、 高 齢 者 施 設 や ホ ス ピ ス な ど の 病 院 施 設 へ の 訪 問 や 前 述 の イ ル カ と 人 の 触 れ 合 い プ ロ グ ラ ム な ど は A A A の 性 質 に よ く あ て は ま っ て い る 。
犬 や イ ル カ に よ る 動 物 介 在 介 入 が 青 年 期 の 人 の 短 期 精 神 病 障 害 の 患 者 の ス ト レ ス を 減 ら す 効 果 や[ 5 1 ]、ア ル ツ ハ イ マ ー 患 者 の 不 安 を 減 少 さ せ る 事[ 4 0 ]、
そ の 他 に も 子 供 で は 大 人 よ り も 友 好 的 な 犬 の 方 が 不 安 を 改 善 す る 事[ 6 ]、高 齢 者 の 幸 福 度 に 良 い 影 響 を 与 え る 事[ 1 1 ]な ど の 報 告 が あ り 、A A A に つ い て も 同 様 の 良 い 影 響 を 与 え る 事 が 明 ら か に な っ て い る 。 こ の よ う に 人 に 対 し て 苦 痛 の 緩 和 や 心 の 安 定 を 動 物 が 与 え る と い う 研 究 は 多 く さ れ 、 ま た 現 在 も 改 善 が 続 け ら れ て い る 。 し か し 一 方 で 、 動 物 介 在 介 入 に 参 加 し て い る 動 物 が 受 け る 影 響 に つ い て 調 べ る 事 は 動 物 福 祉 の 観 点 上 重 要 な こ と で あ る[ 2 9 ]。A A A に 従 事 し て い る 犬 が 、 相 当 の 訓 練 を 積 み 重 ね た に も 関 わ ら ず 、 精 神 的 な ト ラ ウ マ を 負 っ て し ま い 、 飼 い 主 以 外 の 全 員 を 無 視 す る よ う に な っ た 事 例 も 報 告 さ れ て い る[ 4 4 ]。 さ ら に 、 人 と 犬 は 共 感 で き 、 触 れ 合 い に よ っ て 同 様 の 生 理 学 的 反 応 を 示 す こ と が わ か っ て お り 、 イ ル カ に 関 し て も 自 己 と 他 者 を 見 分 け 、 個 体 間 で コ ミ ュ ニ ケ ー シ ョ ン を 取 る こ と が 出 来 る な ど 知 能 の 高 さ が 知 ら れ て い
る[ 4 3 ]。 こ れ ら を 含 め 、 参 加 者 へ の 事 故 防 止 、 福 祉 的 、 効 果 的 な セ ラ ピ ー 活
動 を 目 指 す た め に は 、 犬 や イ ル カ の 活 動 時 の 状 態 を 知 る こ と は 重 要 で あ る 。 活 動 時 の 状 態 を 知 る た め の 指 標 の 1 つ と し て ス ト レ ス を 調 べ る こ と が 挙 げ ら れ る 。S e l y e（1 9 5 6） に よ れ ば 、 ス ト レ ス は 環 境 ス ト レ ス に 対 す る 身 体 の 自 然 な 生 理 反 応 と 定 義 さ れ て い る 。 不 快 あ る い は 苦 痛 を 伴 う 刺 激 （ ス ト レ ッ サ
―） に よ り 視 床 下 部 、 脳 下 垂 体 、 副 腎 （h y p o t h a l a m u s - p i t u i t a r y - a d r e n a l : H PA） 系 が 起 動 し て 体 内 に 拡 散 す る ホ ル モ ン が 分 泌 さ れ 、 ス ト レ ッ サ ー が 除 去 さ れ る と 、 こ の ホ ル モ ン 分 泌 量 は 正 常 に 戻 る こ と が 明 ら か に な っ て い る[ 2 8 ]。 し か し 、ス ト レ ッ サ ー を 除 去 ま た は 回 避 出 来 な い 状 況 で は HPA 系 の ス ト レ ス が 慢 性 化 し 、 心 拍 数 の 増 加 や 血 圧 の 増 加 な ど 個 体 の 健 康 を 損 ね る 事 に 繋 が る 。 近 年 、 副 腎 か ら 放 出 さ れ る ホ ル モ ン で あ る 糖 質 ス テ ロ イ ド の C o r t i s o l が ス ト レ ス の 内 分 泌 的 指 標 と し て 用 い ら れ る こ と が 多 く な っ て き た[ 1 5 ]。C o r t i s o l は 視 床 下 部 か ら 放 出 さ れ る 副 腎 皮 質 刺 激 ホ ル モ ン 放 出 ホ ル モ ン （C R H） が 下
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垂 体 か ら 分 泌 さ れ る 副 腎 皮 質 刺 激 ホ ル モ ン A C T H の 分 泌 を 制 御 す る と い う 視 床 下 部-下 垂 体-副 腎 皮 質 系 の n e g a t i v e f e e d b a c k 機 構 に よ り 調 節 さ れ て い る 。
A C T H や C R H の 分 泌 に は ス ト レ ス の 影 響 と は 別 に 周 期 的 に 分 泌 さ れ 、こ れ が
C o r t i s o l の 分 泌 に も 影 響 を 与 え る 。 こ れ は 、 日 間 変 動 と し て 起 こ り 、 犬 で は
通 常 早 朝 に C o r t i s o l 濃 度 が 最 高 と な る と さ れ て い る が 、 は っ き り と し た 証 明 は な さ れ て い な い[ 2 8 ]。A C T H や C R H の 突 発 的 な 放 出 は C o r t i s o l の ネ ガ テ ィ ブ フ ィ ー ド バ ッ ク に よ っ て 制 御 さ れ る が 、 ス ト レ ス 時 に は 正 常 な 機 能 の 維 持 が さ れ ず 、 そ の 結 果 、C o r t i s o l 濃 度 は ス ト レ ス の 影 響 を 受 け て 増 減 す る[ 2 8 ]。
視 床 下 部 の ス ト レ ス に 対 す る 糖 質 コ ル チ コ イ ド の 反 応 は 速 や か に 行 わ れ 、 数 分 以 内 に C o r t i s o l 濃 度 は 正 常 の 数 倍 高 い 値 に ま で 達 す る 。 こ の 反 応 は ス ト レ ス の 強 さ に 相 関 し 、 弱 い ス ト レ ス で は 強 い ス ト レ ス に 比 べ 少 な い 量 の
C o r t i s o l 産 生 し か 起 こ ら な い 。 ま た 、C o r t i s o l に 関 し て 日 間 変 動 や 、 基 準 値 と
呼 べ る 値 が あ る 事 が 知 ら れ て い る が 、 影 響 を 与 え る 因 子 が 多 く 、 個 体 ご と の 基 準 値 を 厳 密 に 把 握 す る 事 は 難 し い[ 4 8 , 5 5 ]。 し か し 、 一 方 で ス ト レ ス の 指 標 と し て の 有 用 性 は 多 く の 研 究 で 認 め ら れ て い る[ 5 , 4 1 ]。
C o r t i s o l に よ る ス ト レ ス 測 定 は 広 く 普 及 し て い る が 、 近 年 で は ス ト レ ス マ
ー カ ー と し て 唾 液 中 に 分 泌 さ れ る イ ム ノ グ ロ ブ リ ン A （ s e c r e t a r y i m m u n o g l o b u l i n A : S I g A）が 注 目 さ れ て い る[ 3 3 ]。S I g A は 形 質 細 胞 か ら 分 泌 さ れ る 二 量 体 の 分 泌 型 I g A で 、 コ ル チ ゾ ー ル よ り も そ の 分 泌 量 は 多 く 、 測 定 が 容 易 で あ る 。 単 量 体 I g A は リ ン パ 節 、 脾 臓 、 骨 髄 の 形 質 細 胞 が 産 生 し 血 液 中 に 分 泌 さ れ 、 唾 液 に 含 ま れ る S I g A は 二 量 体 で あ り 、 粘 膜 下 の リ ン パ 組 織 で 産 生 さ れ る 。こ の S I g A の 放 出 量 は ス ト レ ス と 逆 相 関 す る と 考 え ら れ て お り 、 ス ト レ ス に よ る 刺 激 よ っ て 増 加 し た C o r t i s o l の 抗 炎 症 作 用 の 間 接 的 な 影 響 と 考 え ら れ て い る[ 4 5 ]。 つ ま り 、 免 疫 応 答 に お け る 細 胞 の 活 性 化 や サ イ ト カ イ ン の 産 生 に 重 要 な 転 写 因 子 で あ る N u c l e a r F a c t o r - k a p p a B（N F k B）の 機 能 抑 制 に よ っ て S I g A の 産 生 が 抑 制 さ れ る[ 4 5 ]。 こ の よ う な 仕 組 み に よ っ て 、S I g A の 分 泌 量 の 減 少 が ス ト レ ス の 指 標 と な る と 考 え ら れ て い る 。 た だ し 、 人 に お
い て S I g A は 慢 性 ス ト レ ス に よ り 減 少 し 、 急 性 ス ト レ ス で は 増 加 と 減 少 の 両
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方 が 起 こ り 得 る こ と が 知 ら れ て お り 、そ の 変 動 に は ま だ 不 明 な 点 が あ る[ 1 9 ]。 本 研 究 で は 主 に C o r t i s o l を 指 標 と し 、A A A に 従 事 し て い る 動 物 （ 犬 、 イ ル カ ） の ス ト レ ス 状 態 を 調 査 し た 。 第 Ⅰ 章 で は 主 に 老 人 福 祉 施 設 を 訪 問 し て い る セ ラ ピ ー 犬 を 対 象 と し 、 前 述 の C o r t i s o l に 加 え 、 イ ム ノ グ ロ ブ リ ン A
（s e c r e t a r y i m m u n o g l o b u l i n A : S I g A）濃 度 も 測 定 し た 。第 Ⅱ 章 で は 人 と の 触 れ 合 い プ ロ グ ラ ム に 参 加 し て い る ハ ン ド ウ イ ル カ を 対 象 と し 血 中 C o r t i s o l 濃 度 を 調 べ る 事 で 慢 性 的 な ス ト レ ス の 影 響 を 検 討 し た 。
以 上 、 動 物 が 人 と の 触 れ 合 い に 対 し て ど の 程 度 の ス ト レ ス を 感 じ る か 、 ま た 、 実 際 の 活 動 が 動 物 福 祉 的 観 点 か ら 考 え た 場 合 大 き な 問 題 を 抱 え て い る か を 本 研 究 で は 検 討 し た 。
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第 Ⅰ 章
A A A に 従 事 す る セ ラ ピ ー 犬 の 唾 液 中
C or tis ol 及 び SI gA を 指 標 と し た ス ト レ ス 調 査
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序 文
人 は 何 故 動 物 に よ っ て 癒 さ れ る の か 、 そ の 一 つ の 要 因 と し て 可 愛 ら し さ が 挙 げ ら れ る 。 こ の 可 愛 ら し さ と い う 要 因 に よ り 、 人 は 動 物 を 自 然 に 撫 で る 行 為 や 養 育 し た い と い う 欲 求 が 生 ま れ て く る[ 5 3 ]。ま た 、本 能 的 な 反 応 と し て 、 親 が 子 に 対 し て 愛 着 や 育 児 衝 動 が わ く こ と が 証 明 さ れ て お り 、 い わ ゆ る ロ ー レ ン ツ の ベ ビ ー ス キ ー マ と 呼 ば れ て い る 。 ロ ー レ ン ツ （1 9 4 3） は ベ ビ ー ス キ ー マ の 特 徴 と し て 、 体 に 対 し て 大 き く 丸 い 頭 や 大 き な 目 、 短 い 脚 、 丸 み を お び た 体 を 挙 げ て お り 、 こ れ ら の 特 徴 は 家 畜 化 さ れ た 動 物 に よ く 当 て は ま る 。 ペ ッ ト と し て よ く 飼 育 さ れ る 犬 は こ れ ら の 条 件 に よ く 当 て は ま っ て お り 、 特 徴 を 備 え て い る だ け で な く 、 ペ ッ ト は 人 の 心 理 面 の 健 康 に 不 可 欠 の 存 在 と な っ た 。 ペ ッ ト 所 有 者 は そ う で な い 人 よ り も 長 生 き す る と い う 報 告 さ え 存 在 す
る[ 1 8 , 3 7 ]。 他 に も ペ ッ ト を 飼 っ て い る 人 は 飼 育 し な い 人 よ り も 低 い 基 準 の 心
拍 数 や 基 準 血 圧 と な り 、 ス ト レ ス 負 荷 時 に は 血 圧 や 心 拍 数 、 発 汗 の 低 下 が 起 こ る 事 が 明 ら か に な っ て い る[ 2 , 3 ]。 犬 と の 触 れ 合 い に 関 し て 、 日 本 に お い て は 全 国 的 に A A A の 活 動 を 中 心 と し た A A I が 行 わ れ て い る 。 北 海 道 で は 、「 犬 を 介 し て 社 会 福 祉 事 業 を す る 」こ と を 目 的 に 1 9 9 6 年 に 発 足 さ れ た 北 海 道 ボ ラ ン テ ィ ア ド ッ グ の 会 が 主 に こ れ ら の 活 動 を 担 っ て い る[ 2 4 ]。 同 団 体 で 主 に 行 わ れ て い る 活 動 は 動 物 と ボ ラ ン テ ィ ア が 高 齢 者 施 設 を 訪 問 す る 、 訪 問 型 の 活 動 で あ る 。 こ う い っ た 活 動 に よ っ て 、 施 設 に 滞 在 す る 高 齢 者 の 疲 労 や 緊 張 感 を 和 ら げ る 効 果 や 不 安 や 抑 う つ 状 態 の 改 善 の 効 果 が 期 待 さ れ る[ 1 4 , 5 4 ]。
こ の よ う に 、 ア ニ マ ル セ ラ ピ ー に よ っ て 人 は 様 々 な 効 果 の 恩 恵 を 受 け て い る こ と が 明 ら か に な っ て い る が 、 こ れ ら の 活 動 に 従 事 し て い る 犬 の 状 態 、 つ ま り 受 け て い る ス ト レ ス 量 の 把 握 は 十 分 で は な い 。ス ト レ ス を 定 量 す る に は 、 分 泌 さ れ る ス ト レ ス 関 連 物 質 、特 に C o r t i s o l を 測 定 す る 方 法 が 一 般 的 で あ る 。 近 年 は 分 泌 型 イ ム の グ ロ ブ リ ン A（S I g A） や ク ロ モ グ ラ ニ ン A な ど 新 た な 物 質 も 検 討 さ れ て い る 。C o r t i s o l を 測 定 す る た め の 材 料 に は 、 血 液 、 尿 、 糞 、 毛 、 唾 液 な ど が 用 い ら れ る 。 血 液 サ ン プ ル は リ ア ル タ イ ム に ス ト レ ス を 評 価 で き る が 、 採 血 に 対 し て 訓 練 を 受 け て い な い 動 物 に 対 し て は 保 定 時 に ス ト レ
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ス を 与 え る 可 能 性 が あ る 。 ま た 、 糞 と 尿 は 半 日 か ら １ 日 分 の C o r t i s o l が 蓄 積 さ れ る が 、 採 取 が 難 し い[ 1 , 7 , 1 5 , 4 7 ]。 一 方 、 唾 液 は 、2 0 分 程 度 の 遅 延 が 起 こ る が 、 採 取 も し や す い[ 5 7 ]。 そ こ で 本 章 で は ス ト レ ス の 内 分 泌 的 指 標 で あ る
C o r t i s o lや S I g Aを 用 い て 犬 の ス ト レ ス 状 態 及 び 活 動 内 容 が 犬 に 過 度 な 負 荷 を
与 え て い な い か 検 討 し た 。
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材 料 と 方 法
1）A A A（A n i m a l A s s i s t e d A c t i v i t y）
本 研 究 で は 、 北 海 道 ボ ラ ン テ ィ ア ド ッ グ の 会 に 所 属 し 、 A A A（ A n i m a l
A s s i s t e d A c t i v i t y） で 活 動 す る 犬 （ 以 下 、 セ ラ ピ ー 犬 ） を 対 象 と し て 、 そ の 活
動 時 の ス ト レ ス を 評 価 し た 。N P O 法 人 北 海 道 ボ ラ ン テ ィ ア ド ッ グ の 会 に 所 属 し て い る セ ラ ピ ー 犬 を 被 験 犬 と し た 。 セ ラ ピ ー 犬 は 年 に 2 回 開 か れ る 適 性 試 験 に 合 格 し た 犬 の み が 活 動 に 参 加 で き る 。 適 性 試 験 は 大 き く 分 け て 、 服 従 試 験（ 一 定 の 訓 練 の レ ベ ル に 達 し て い る か ）、マ ナ ー 検 査（ 触 ら れ る こ と や 目 を 合 わ せ る こ と に 対 し て 大 人 し く 出 来 る か ）、対 人 検 査（ 人 や そ の 行 動 に 対 し て の 不 安 が 強 す ぎ な い か ）、で 構 成 さ れ て い る 。 こ の 他 に 、 試 験 中 、 人 に 対 し て の 攻 撃 的 反 応 、 飼 い 主 と の コ ミ ュ ニ ケ ー シ ョ ン 、 さ ら に 健 康 及 び 公 衆 衛 生 上 の 問 題 が な い か な ど が 審 査 さ れ る[ 2 4 ]。 こ れ ら の 犬 た ち は 高 齢 者 施 設 に お い
て A A A に 従 事 す る 場 合 は 基 本 的 に 一 回 あ た り 3 0 分 間 行 わ れ た 。 そ の 時 間 帯
は 1 0 : 3 0 - 1 1 : 0 0 も し く は 1 4 : 0 0 - 1 4 : 3 0 に 設 定 さ れ て い た 。A A A が 行 わ れ る 各 施 設 の 会 場 の 広 さ は 施 設 に よ り 異 な っ て い た 。 あ る 施 設 で は 、 ま ず 参 加 者 は 円 形 に な っ て 座 り 、 そ の 円 の 内 側 を セ ラ ピ ー ド ッ グ と ハ ン ド ラ ー が 回 る 形 で 実 施 さ れ た 。 行 わ れ る 内 容 は セ ラ ピ ー ド ッ グ に 対 し て 愛 撫 し た り （ 触 れ る 、 抱 く 、舐 め ら れ る ）、犬 が 披 露 す る 芸 を 観 た り し な が ら 、適 宜 ハ ン ド ラ ー と の 会 話 を し た り す る 事 が 行 わ れ た 。 セ ラ ピ ー 犬 は 参 加 者 3 ~ 4 人 に 対 し て セ ラ ピ ー 犬 は 1 頭 程 度 の 割 合 で あ り 、 ハ ン ド ラ ー と セ ラ ピ ー ド ッ グ の ペ ア 1 組 が 参 加 者 1 人 と 触 れ 合 う 時 間 は 2 分 程 度 で あ っ た 。 活 動 場 所 の 特 徴 と し て 、 高 齢 者 施 設 を 利 用 し て い る 多 く の 人 は 独 居 生 活 が 困 難 で あ り 、 そ の 理 由 の 一 つ に 認 知 症 が あ る こ と が 挙 げ ら れ る 。 そ の た め 、 犬 や ハ ン ド ラ ー が 繰 り 返 し 同 じ 場 所 で の 活 動 を 行 う 場 合 で あ っ て も 、 利 用 者 に と っ て は 毎 回 初 め て の 経 験 と 感 じ る 事 が 多 い 。 そ の た め 、 力 の 加 減 が 上 手 く い か ず 、 犬 に 対 し て 触 れ る 動 作 が 強 く な っ て し ま う 場 合 や 急 に つ か む 動 作 を 行 っ て し ま う 場 合 も あ る 。 中 に は 犬 に 対 し て 拒 否 の 動 作 を 行 っ て し ま う 人 も い た 。 こ の 他 に 、 高 齢 者 施 設 で
の A A Aを 行 う 犬 に と っ て 、高 齢 者 と の 触 れ 合 い 以 外 に 活 動 毎 に 変 化 す る A A A
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へ の 参 加 者 や 施 設 の ス タ ッ フ 、 他 の セ ラ ピ ー 犬 と 関 わ り 等 の 要 素 が ス ト レ ス と な る 可 能 性 が あ っ た 。
2） セ ラ ピ ー 犬
北 海 道 ボ ラ ン テ ィ ア ド ッ グ の 会 に 所 属 し 、A A A に て 活 動 し て い る 犬 2 3 頭 か ら 唾 液 の サ ン プ リ ン グ を 行 っ た 。 犬 種 は ゴ ー ル デ ン ・ レ ト リ ー バ ー 、 ラ ブ ラ ド ー ル ・ レ ト リ ー バ ー 、 ヨ ー ク シ ャ ー ・ テ リ ア 、 チ ワ ワ 、 ゴ ー ル デ ン ・ ド ゥ ー ド ゥ ル 、 ペ キ ニ ー ズ 、 シ ー ズ ー 、 柴 犬 、 サ モ エ ド 、 ミ ニ チ ュ ア ・ ダ ッ ク ス フ ン ト 、 キ ャ バ リ ア ・ キ ン グ ・ チ ャ ー ル ズ ・ ス パ ニ エ ル 、 オ ー ス ト ラ リ ア ン ・ ラ ブ ラ ド ゥ ー ド ゥ ル で 、 年 齢 は 2 才 か ら 1 3 才 、 性 別 や 避 妊 去 勢 の 有 無 、 活 動 歴 、 参 加 犬 の 年 齢 や 性 別 、 活 動 歴 、 避 妊 去 勢 の 有 無 や ハ ン ド ラ ー の 経 験
は 表 1 - 1 の 通 り で あ る 。
3） 唾 液 の 採 取
唾 液 は A A A 開 始 約 1 5 分 前 （p r e）、 終 了 約 1 5 分 後 （p o s t） に 飼 い 主 の 同 意 を 得 て 、 非 侵 襲 的 に 唾 液 採 取 ス ワ ブ （Sa l i me t r i c s Ch i l d r e n ’s S w a b , S a l i me t r i c s 社 ） を 口 腔 内 に 1 0 ~ 3 0 秒 間 入 れ 唾 液 を 採 取 し た 。 活 動 前 後 の サ ン プ リ ン グ 回 数 は 犬 に よ っ て 異 な り 1 ~ 5 回 の 範 囲 で 行 わ れ た 。 ま た 、 普 段 の 生 活 環 境 に お け る 唾 液 を 、5 頭 か ら セ ラ ピ ー 活 動 の 時 間 と 同 じ 時 間 帯 で 採 取 し た 。 こ れ ら の 唾 液 は 採 取 し た 後 す ぐ に 氷 で 冷 や し た 状 態 で ラ ボ に 持 ち 帰 っ た 。 サ ン プ ル
は 3 0 0 0 × g で 5 分 間 遠 心 分 離 を 行 い 、固 形 物 を 取 除 い た 後 そ の 上 澄 み を －3 0℃
で 保 存 し た 。 唾 液 の 採 取 か ら 保 存 ま で は 3 時 間 以 内 に 行 っ た 。
4） 唾 液 中 C o r t i s o l の 測 定
唾 液 中 の C o r t i s o l は C o r t i s o l E I A k i t （A r b o r A s s a y s , U S A）に よ り D u p l i c a t e で 測 定 し 、p r e と p o s t の 値 を 比 較 し た 。E L I S A 法 の 手 順 は キ ッ ト の プ ロ ト コ ル に 従 い 行 っ た 。簡 単 に 述 べ る と 、ま ず ス タ ン ダ ー ド（3 2 0 0 p g / m l～1 0 0 p g / m l） を 準 備 し 、 唾 液 サ ン プ ル を 希 釈 倍 率 4 倍 に 調 整 し た 。 ス タ ン ダ ー ド 及 び サ ン
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プ ル を 入 れ た 後 、 手 順 に 従 い C o r t i s o l C o n j u g a t e お よ び C o r t i s o l A n t i b o d y を E L I S A プ レ ー ト へ 加 え 、M T S 2 / 4 d i g i t a l m i c r o t i t e r s h a k e r（I K A、G e r m a n y） で
3 0 0 r p m × 1 時 間 反 応 さ せ た 。 洗 浄 後 、T M B を 加 え て 発 光 さ せ マ イ ク ロ プ レ ー
ト リ ー ダ （B i o - R a d , U S A） を 使 用 し 4 5 0 ㎚ で 吸 光 度 を 測 定 し た 。C o r t i s o l 濃 度 は A r b o r A s s a y s [ 4 1 ]の 計 算 式 に 当 て は め て 算 出 し た 。
5） 唾 液 中 S I g A の 測 定
唾 液 中 の S I g A は D o g I g A E L I S A Q u a n t i t a t i o n S e t （B e t h y l L a b o r a t o r i e s , I n c .
T X U S A） に よ り D u p l i c a t e で 測 定 し 、p r e と p o s t の 値 を 比 較 し た 。 測 定 手 順
は プ ロ ト コ ル に 従 っ て 行 っ た 。簡 単 に 述 べ る と 、ま ず ス タ ン ダ ー ド（1 0 0 0 n g / m l
～0 n g / m l） を 準 備 し 、 ま た 、 唾 液 サ ン プ ル を 希 釈 倍 率 2 0 0 0 倍 に 調 整 し た 。 そ
の 後 手 順 に 従 い C o a t i n g B u f f e r で 希 釈 し た 抗 イ ヌ I g A 抗 体 を プ レ ー ト に コ ー ト し 、1 時 間 イ ン キ ュ ベ ー ト し た 後 洗 浄 を 行 い 、 ブ ロ ッ キ ン グ 液 を 加 え て 1 時 間 イ ン キ ュ ベ ー ト し た 。洗 浄 を 行 っ た 後 に ス タ ン ダ ー ド 及 び 2 0 0 0 倍 に 希 釈 し た サ ン プ ル を 入 れ 、1 時 間 室 温 で 反 応 さ せ た 。 洗 浄 後 、H R P コ ン ジ ュ ゲ ー ト を 入 れ 1時 間 反 応 さ せ た 。洗 浄 し た 後 に T M Bを 加 え て 発 光 さ せ 最 後 に S T O P 液 で 反 応 を 停 止 さ せ 、 マ イ ク ロ プ レ ー ト リ ー ダ （B i o - R a d , U S A） を 用 い て
4 5 0 n m で 吸 光 度 を 測 定 し た 。M P M ソ フ ト ウ ェ ア （B i o - R a d） を 用 い て 検 量 線
を 基 に S I g A 濃 度 を 算 出 し た 。
6） 解 析
・C o r t i s o l 濃 度 及 び S I g A 濃 度 の 測 定 ・ 比 較
唾 液 中 の C o r t i s o l 濃 度 を ス ト レ ス の 指 標 と し て 用 い 、A A A 活 動 の 前（P r e） と 後 （P o s t） の 濃 度 を 比 較 し た 。 さ ら に 、 唾 液 中 濃 度 が C o r t i s o l よ り も は る か に 多 く 、 近 年 注 目 さ れ て い る S I g A 濃 度 も 同 様 に 活 動 の 前 後 で 比 較 し た 。 本 研 究 で は 、 近 年 報 告 の あ る S I g A も 測 定 し た[ 3 2 ]。 そ れ ぞ れ の 犬 の C o r t i s o l 濃 度 （C） お よ び S I g A 濃 度 （A） の 変 化 を 増 加 （↑） と 減 少 （↓） に 振 り 分 け
11
て 分 類 し た （C ↑ A↓、C↑ A↑、C↓ A↑、C ↓ A↓）。 犬 の 基 準 値 を 厳 密 に 決 め る 事 は 難 し い た め[ 4 8 ]、A A A 前 後 の C o r t i s o l お よ び S I g A の 差 は 微 量 な 変 化 で あ っ て も 増 加 か 減 少 の グ ル ー プ に 振 り 分 け る こ と と し た 。ま た 、C o r t i s o l 濃 度 、S I g A 濃 度 に 関 し て 、 複 数 回 の 測 定 を 行 っ た 個 体 に つ い て は 、 そ れ ぞ れ の 結 果 を 分 類 す る と 共 に p r e - p o s t 間 の 増 減 を 統 計 分 析 し た 。
・ 年 齢 、 活 動 歴 と の 関 連 性
セ ラ ピ ー 犬 は 様 々 な 犬 種 、年 齢 、経 験 値 、雌 雄 、避 妊 去 勢 な ど が 異 な る が 、 こ れ ら の ス ト レ ス に 影 響 を 与 え る 要 因 と ス ト レ ス 値 と の 関 連 性 を 調 べ た 。
7） 統 計
全 2 3 頭 の C o r t i s o l 及 び S I g A 濃 度 の 値 は 正 規 性 の 検 定 を 行 っ た 結 果 、 そ れ
ぞ れ に つ い て 正 規 性 が な か っ た た め 、 ス ピ ア マ ン 順 位 相 関 係 数 検 定 に よ り 統 計 解 析 を 行 い 相 関 係 数 に よ り 関 係 性 を 比 較 し た 。
活 動 前 後 で ス ト レ ス の 指 標 C o r t i s o l濃 度 の 変 化 と S I g A濃 度 の 変 化 の 関 係 や 、 そ れ ぞ れ と 他 の フ ァ ク タ ー に つ い て 以 下 の よ う な 視 点 か ら そ れ ら の 関 連 性 を 検 証 し た 。p r e - p o s t 間 の C o r t i s o l 及 び S I g A 濃 度 の 増 減 は 対 応 す る t 検 定 ま た は ウ ィ ル コ ク ソ ン 符 号 順 位 和 検 定 を 行 っ た 。そ の 他 に a）C o r t i s o l 濃 度 の 変 化 と 年 齢 や 活 動 回 数 、 避 妊 去 勢 と の 関 連 性 、b）S I g A 濃 度 の 変 化 と 年 齢 や 活 動 回 数 、 避 妊 去 勢 と の 相 関 、c）C o r t i s o l 濃 度 の 変 化 と S I g A 濃 度 の 変 化 と の 相 関 に つ い て 、 ピ ア ソ ン 相 関 係 数 検 定 、 ス ピ ア マ ン 順 位 相 関 係 数 検 定 に よ り 統 計 解 析 を 行 っ た 。 全 て の 統 計 は p< 0 . 0 5 を 有 意 差 あ り と し た 。
12
表 1 - 1： 参 加 犬 の 詳 細 （I D、 犬 種 、 年 齢 、 性 別 （ 避 妊 去 勢 ）、 活 動 回 数 ）
I D 犬 種 年 齢 性 別 活 動 回 数
# 1 ラ ブ ラ ド ー ル ・ レ ト リ ー バ ー 1 1 S F 1 1 6
# 2 ラ ブ ラ ド ー ル ・ レ ト リ ー バ ー 9 S F 3 0
# 3 ラ ブ ラ ド ー ル ・ レ ト リ ー バ ー 6 S F 8 7
# 4 ラ ブ ラ ド ー ル ・ レ ト リ ー バ ー 4 M 1 7
# 5 ラ ブ ラ ド ー ル ・ レ ト リ ー バ ー 7 F 2 0
# 6 ラ ブ ラ ド ー ル ・ レ ト リ ー バ ー 4 C M 1 2
# 7 ゴ ー ル デ ン ・ レ ト リ ー バ ー 1 1 C M 1 2 8
# 8 ゴ ー ル デ ン ・ レ ト リ ー バ ー 6 M 1 9
# 9 ゴ ー ル デ ン ・ レ ト リ ー バ ー 1 2 S F 1 2 1
# 1 0 ゴ ー ル デ ン ・ レ ト リ ー バ ー 8 S F 2 0
# 1 1 ゴ ー ル デ ン ・ ド ゥ ー ド ゥ ル 5 C M 2 6
# 1 2 サ モ エ ド 3 M 1
# 1 3 オ ー ス ト ラ リ ア ン ・ ラ ブ ラ ド ゥ ー ド ゥ ル 5 S F 2 2
# 1 4 キ ャ バ リ ア ・ K ・ C ・ ス パ ニ エ ル 8 S F 1 8
# 1 5 キ ャ バ リ ア ・ K ・ C ・ ス パ ニ エ ル 8 S F 1 0 1
# 1 6 シ バ イ ヌ 9 S F 8 4
# 1 7 ヨ ー ク シ ャ ー ・ テ リ ア 4 S F 1 7 6
# 1 8 ヨ ー ク シ ャ ー ・ テ リ ア 2 S F 6 7
# 1 9 チ ワ ワ 5 C M 1 3 4
# 2 0 チ ワ ワ 4 C M 8
# 2 1 シ ー ズ ー 6 C M 2 0 5
# 2 2 ペ キ ニ ー ズ 3 S F 9
# 2 3 ミ ニ チ ュ ア ・ ダ ッ ク ス フ ン ト 1 3 S F 3 7
M : 雄; C M : 去 勢 雄; F : 雌; S F : 避 妊 雌
13
結 果
本 研 究 で は A A A を 行 っ た セ ラ ピ ー 犬 の 唾 液 中 C o r t i s o l 濃 度 お よ び SI g A 濃 度 を 測 定 し 、 そ の 犬 の 年 齢 や 、 活 動 回 数 、 避 妊 去 勢 と の 相 関 を 調 べ た 。 1 ）A A A 前 後 に お け る C o r t i s o l 濃 度 変 化
2 3 頭 の セ ラ ピ ー 犬 が 活 動 し た の べ 4 4 回 の A A A に お い て 、C o r t i s o l 濃 度 は 表 1 - 2 に 示 す 値 と な り （P r e : 0 . 3 0±0 . 4 2 n g / m l , P o s t : 0 . 1 6±0 . 1 7 n g / m l）、C o r t i s o l 濃 度 （C） の 差 （P o s t－P r e） は 表 1 - 2 の よ う に な っ た 。 そ の 内 で ス ト レ ス 反 応 で あ る C o r t i s o l の 増 加 を 示 し た の は 全 体 の 2 0 %で あ っ た （ 図 1 - 1）。
2）A A A 前 後 に お け る SI g A 濃 度 変 化
2 3 頭 の セ ラ ピ ー 犬 が 活 動 し た の べ 4 4 回 の A A A に お い て 、ス ト レ ス 反 応 で
あ る S I g A の 減 少 を 示 し た の は 全 体 の 2 3 %で あ っ た （ 表 1 - 2 , 図 1 - 3）。
3）A A A 前 後 に お け る Co r t is o l と S I g A の 濃 度 変 化
2 3頭 の セ ラ ピ ー 犬 が 活 動 し た の べ 4 4回 の A A Aに お い て 、C o r t i s o l濃 度（C）
及 び S I g A 濃 度 （A） の 増 減 を 4 つ の グ ル ー プ に 分 類 し た （ 表 1 - 4、 図 1 - 3）。
そ の 結 果 、ス ト レ ス の 指 標 で あ る C o r t i s o l が 増 加 し て い た も の が 9 回（2 0 %）、
減 少 し て い た も の が 3 5 回 （8 0 %） で あ っ た 。 こ の 中 で 、C o r t i s o l が 増 加 し 、
か つ S I g A も 減 少 し た 両 方 の 指 標 が ス ト レ ス 増 加 を 示 し た の は 1 個 体 （2 %）
の み で あ っ た 。 ま た 、 図 に は な い が 、C o r t i s o l と S I g A の 増 減 に 関 連 性 が あ る か 調 べ た が 、 明 ら か な 相 関 は み ら れ な か っ た （p = 0 . 7 6）。
4）C o r t i s o l 濃 度 お よ び S I g A 濃 度 と 年 齢 お よ び 累 計 活 動 回 数 の 相 関 関 係
A A A 前 後 の C o r t i s o l 濃 度 及 び S I g A 濃 度 の 変 化 の 割 合 と 年 齢 及 び 累 計 活 動
の 相 関 関 係 を 分 析 し た 。年 齢 と A A A 前 後 の C o r t i s o l 濃 度 変 化 に お い て 相 関 係
数 （r） は 0 . 1 3 と 関 連 性 は み ら れ な か っ た （ 図 1 - 4）。 累 計 活 動 回 数 と A A A 前
後 の C o r t i s o l 濃 度 値 変 化 に お い て 相 関 係 数 （r） は 0 . 2 3 と 関 連 性 は み ら れ な
か っ た （ 図 1 - 5）。 ま た 、S I g A 濃 度 変 動 率 と 年 齢 は 相 関 係 数 （r） が 0 . 0 4 で あ り （ 図 1 - 6）、 累 計 活 動 回 数 と S I g A 濃 度 変 動 率 は 相 関 係 数 （r） が− 0 . 0 4 で あ り 関 連 性 は み ら れ な か っ た （ 図 1 - 7）。
14 表 1 - 2：A A A 前 後 の 唾 液 中 C o r t i s o l 濃 度
I D P r e P o s t P o s t - P r e I D P r e P o s t P o s t - P r e
# 1① 0 . 0 7 0 . 0 8 0 . 0 1 # 1 0 0 . 0 2 0 . 0 5 0 . 0 3
# 1② 0 . 1 5 0 . 2 7 0 . 1 2 # 1 1① 0 . 4 7 0 . 2 5 - 0 . 2 2
# 2① 0 . 4 5 0 . 4 2 - 0 . 0 3 # 1 1② 0 . 4 4 0 . 2 1 - 0 . 2 3
# 2② 0 . 5 8 0 . 1 2 - 0 . 4 6 # 1 2 0 . 4 8 0 . 2 8 - 0 . 2 0
# 2③ 0 . 3 7 0 . 0 8 - 0 . 2 9 # 1 3 0 . 0 7 0 . 0 4 - 0 . 0 3
# 2④ 0 . 5 8 0 . 4 1 - 0 . 1 7 # 1 4 0 . 1 1 0 . 0 3 - 0 . 0 8
# 3① 0 . 0 7 0 . 0 3 - 0 . 0 4 # 1 5 0 . 0 7 0 . 0 2 - 0 . 0 5
# 3② 0 . 0 5 0 . 0 3 - 0 . 0 2 # 1 6① 0 . 4 3 0 . 1 8 - 0 . 2 5
# 3③ 0 . 0 4 0 . 0 3 - 0 . 0 1 # 1 6② 1 . 1 7 0 . 3 8 - 0 . 7 9
# 3④ 0 . 1 2 0 . 1 4 0 . 0 2 # 1 6③ 2 . 4 9 0 . 9 5 - 1 . 5 4
# 3⑤ 0 . 2 3 0 . 1 9 - 0 . 0 4 # 1 7 0 . 0 8 0 . 0 7 - 0 . 0 1
# 4① 0 . 0 9 0 . 0 4 - 0 . 0 5 # 1 8 0 . 0 5 0 . 0 3 - 0 . 0 2
# 4① 0 . 0 7 0 . 0 6 - 0 . 0 1 # 1 9 0 . 1 7 0 . 0 6 - 0 . 1 1
# 4② 0 . 1 2 0 . 1 6 0 . 0 4 # 2 0 0 . 7 8 0 . 3 1 - 0 . 4 7
# 4③ 0 . 1 4 0 . 1 0 - 0 . 0 4 # 2 1① 0 . 0 6 0 . 0 5 - 0 . 0 1
# 4④ 0 . 1 8 0 . 1 2 - 0 . 0 6 # 2 1② 0 . 0 2 0 . 0 1 - 0 . 0 1
# 5 0 . 3 1 0 . 2 5 - 0 . 0 6 # 2 1③ 0 . 1 5 0 . 0 4 - 0 . 1 1
# 6 0 . 0 3 0 . 0 2 - 0 . 0 1 # 2 1④ 0 . 1 3 0 . 0 7 - 0 . 0 6
# 7① 0 . 1 0 0 . 1 3 0 . 0 3 # 2 2① 0 . 6 9 0 . 0 3 - 0 . 6 6
# 7② 0 . 0 5 0 . 0 8 0 . 0 3 # 2 2② 0 . 1 3 0 . 3 2 0 . 1 9
# 8 0 . 1 5 0 . 1 4 - 0 . 0 1 # 2 2③ 0 . 7 0 0 . 3 4 - 0 . 3 6
# 9 0 . 1 2 0 . 1 0 - 0 . 0 2 # 2 3 0 . 2 5 0 . 4 8 0 . 2 3
*赤 字 は ス ト レ ス 反 応 で あ る C o r t i s o l 濃 度 が 増 加
15
図 1 - 1 : A A A 前 後 の C o r t i s o l 濃 度 変 化 （Y 軸 P o s t－P r e）
A A A に 参 加 し た 犬 の う ち 、C o r t i s o l の 増 加 が み ら れ た 犬 は 全 体 の 2 0％ で
あ っ た 。
-1.80 -1.60 -1.40 -1.20 -1.00 -0.80 -0.60 -0.40 -0.20 0.00 0.20 0.40
#23
#22③
#22②
#22①
#21④
#21③
#21②
#21①
#20
#19
#18
#17
#16③
#16②
#16①
#15
#14
#13
#12
#11②
#11①
#10
#9
#8
#7②
#7①
#6
#5
#4⑤
#4④
#4③
#4②
#4①
#3⑤
#3④
#3③
#3②
#3①
#2④
#2③
#2②
#2①
#1②
#1①
Cortisol濃度（ng/ml）
16
表 1 - 3：A A A 前 後 の 唾 液 中 S I g A 濃 度
I D P r e P o s t P o s t - P r e I D P r e P o s t P o s t - P r e
# 1① 0 . 5 0 2 . 2 0 1 . 7 0 # 1 0 0 . 1 7 1 . 2 0 1 . 0 3
# 1② 1 . 2 0 2 . 1 0 0 . 9 0 # 1 1① 0 . 2 7 1 . 3 2 1 . 0 5
# 2① 0 . 5 8 0 . 8 8 0 . 3 0 # 1 1② 0 . 2 3 1 . 0 1 0 . 7 8
# 2② 0 . 2 2 0 . 3 0 0 . 0 8 # 1 2 0 . 3 7 0 . 7 1 0 . 3 4
# 2③ 0 . 3 7 0 . 2 0 - 0 . 1 7 # 1 3 0 . 1 6 0 . 1 7 0 . 0 1
# 2④ 2 . 6 8 0 . 1 0 - 2 . 5 8 # 1 4 0 . 1 4 0 . 2 2 0 . 0 8
# 3① 0 . 5 7 1 . 1 2 0 . 5 5 # 1 5 0 . 1 5 0 . 3 5 0 . 2 0
# 3② 0 . 9 5 0 . 3 0 - 0 . 6 5 # 1 6① 0 . 0 6 0 . 4 7 0 . 4 1
# 3③ 0 . 4 4 1 . 9 9 1 . 5 5 # 1 6② 0 . 2 0 0 . 8 4 0 . 6 4
# 3④ 0 . 6 9 0 . 8 7 0 . 1 8 # 1 6③ 0 . 1 0 0 . 4 7 0 . 3 7
# 3⑤ 1 . 9 3 0 . 3 7 - 1 . 5 6 # 1 7 0 . 0 9 0 . 0 8 - 0 . 0 1
# 4① 0 . 3 5 0 . 6 1 0 . 2 6 # 1 8 0 . 0 7 0 . 4 0 0 . 3 3
# 4① 0 . 3 0 0 . 3 2 0 . 0 2 # 1 9 0 . 1 5 0 . 1 1 - 0 . 0 4
# 4② 0 . 3 7 2 . 2 0 1 . 8 3 # 2 0 0 . 3 6 0 . 3 5 - 0 . 0 1
# 4③ 0 . 5 3 0 . 5 6 0 . 0 3 # 2 1① 0 . 4 0 0 . 2 1 - 0 . 1 9
# 4④ 0 . 9 6 0 . 4 9 - 0 . 4 7 # 2 1② 0 . 0 6 0 . 2 0 0 . 1 4
# 5 0 . 3 3 1 . 7 6 1 . 4 3 # 2 1③ 0 . 1 9 0 . 4 2 0 . 2 3
# 6 0 . 2 4 0 . 4 9 0 . 2 5 # 2 1④ 0 . 1 9 0 . 2 3 0 . 0 4
# 7① 0 . 5 7 0 . 7 4 0 . 1 7 # 2 2① 0 . 0 7 0 . 2 1 0 . 1 4
# 7② 0 . 8 7 0 . 9 6 0 . 0 9 # 2 2② 0 . 1 4 0 . 3 1 0 . 1 7
# 8 0 . 2 5 0 . 2 6 0 . 0 1 # 2 2③ 0 . 1 3 0 . 2 6 0 . 1 3
# 9 0 . 3 3 0 . 5 4 0 . 2 1 # 2 3 0 . 9 9 0 . 7 9 - 0 . 2 0
＊ 赤 字 は ス ト レ ス 反 応 で あ る S I g A 濃 度 が 減 少
17
図 1 - 2 A A A 前 後 の S I g A 濃 度 変 化 （Y 軸 P o s t－P r e）
A A A に 参 加 し た 犬 の 中 で 、S I g A の 減 少 が み ら れ た 個 体 は 全 体 の 2 2％ で
あ っ た 。
-3 -2.5 -2 -1.5 -1 -0.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5
#23
#22③
#22②
#22①
#21④
#21③
#21②
#21①
#20
#19
#18
#17
#16③
#16②
#16①
#15
#14
#13
#12
#11②
#11①
#10
#9
#8
#7②
#7① #6
#5
#4⑤
#4④
#4③
#4②
#4①
#3⑤
#3④
#3③
#3②
#3①
#2④
#2③
#2②
#2①
#1②
#1①
SIgA濃度（ng/ml）
18
表 1- 4：C o r t i s o l（C） お よ び SI g A（A） の 増 減 の 関 係
C↑A↓ C↑A↑ C↓A↑ C↓A↓
n = 4 4 1 / 4 4
（2 %）
8 / 4 4
（1 8 %）
2 6 / 4 4
（5 9 %）
9 / 4 4
（2 0 %）
* C o r t i s o l（C）、SI g A（A）、 増 加 （ ↑ ）、 減 少 （ ↓ ） で 表 記
図 1 - 3：C o r t i s o l（C） お よ び S I g A（A） の 増 減 の 関 係
* C o r t i s o l（C）、S I g A（A）、 増 加 （↑）、 減 少 （↓） で 表 記
C↑A↓
2%
C↑A↑
18%
C↓A↑
59%
C↓A↓
21%
19
図 1 - 4 : A A A 前 後 の C o r t i s o l 変 動 率 と 年 齢 の 関 係 性
A A A前 後 の C o r t i s o lの 増 減 と 年 齢 の 関 係 を 調 べ る と 相 関 係 数 r = 0 . 1 3 で 明
ら か な 相 関 は な か っ た 。
図 1 - 5 : A A A 前 後 の C o r t i s o l 変 動 率 と 活 動 回 数 の 関 係 性
A A A 前 後 の C o r t i s o l の 増 減 と 活 動 回 数 の 関 係 を 調 べ る と 相 関 係 数 r = 0 . 2 3
で 明 ら か な 相 関 は な か っ た 。
0 2 4 6 8 10 12 14
-2 -1.5 -1 -0.5 0 0.5
年齢（才）
Cortisol濃度（pg/ml）
0 50 100 150 200 250
-2 -1.5 -1 -0.5 0 0.5
累計活動回数（回）
Cortisol濃度（pg/ml）
20
図 1 - 6 : A A A 前 後 の S I g A 変 動 率 と 年 齢 の 関 係 性
A A A 前 後 の S I g A の 増 減 と 年 齢 の 関 係 を 調 べ る と 相 関 係 数 r = 0 . 0 4 で 明 ら
か な 相 関 は な か っ た 。
図 1 - 7 : A A A 前 後 の S I g A 変 動 率 と 活 動 回 数 の 関 係 性
A A A 前 後 の S I g A の 増 減 と 活 動 回 数 の 関 係 を 調 べ る と 相 関 係 数 r = - 0 . 0 4
で 明 ら か な 相 関 は な か っ た 。 0 2 4 6 8 10 12 14
-3 -2 -1 0 1 2 3
年齢（才）
SIgA濃度（pg/ml）
0 50 100 150 200 250
-3 -2 -1 0 1 2 3
累計活動回数（回）
Cortisol濃度（pg/ml）
21
5）C o r t i s o l 濃 度 お よ び S I g A 濃 度 と 避 妊 去 勢 と の 関 係 性
雄 に お い て 去 勢 及 び 未 去 勢 に よ り C o r t i s o l 濃 度 に 差 が 出 る の か 検 討 す る た
め に p r e と p o s t の C o r t i s o l 濃 度 そ れ ぞ れ に 差 が あ る の か を 比 較 し た が 有 意 な
差 は 認 め ら れ ず （p r e : p= 0 . 3 , p o s t : p= 0 . 6）、 同 様 に S I g A 濃 度 の 比 較 も 行 っ た が 有 意 な 差 は み ら れ な か っ た （p r e : p= 0 . 7 , p o s t : p= 0 . 9）。 未 避 妊 の 雌 は 1 頭 の み で あ っ た た め 、 避 妊 済 み と 未 避 妊 の 濃 度 差 を 確 か め る 事 は 出 来 な か っ た 。
6）C o r t i s o l の 日 間 変 動
活 動 に 参 加 し て い る セ ラ ピ ー 犬 の 内 5 頭 （# 1 , # 2 , # 7 , # 1 6 , # 2 1） を 対 象 と し て
A A A 活 動 時 と 同 時 刻 の 3 日 間 で 日 間 変 動 の 影 響 を 調 べ た（ 表 1 - 5）。明 ら か な
変 化 が あ っ た の は# 2 の み で 有 意 に 減 少 し て い た （p= 0 . 0 2）。 他 の 4 頭 で は 有 意 な 変 化 は み ら れ な か っ た が い ず れ も 中 央 値 は 増 加 し て い た（# 1 : p= 0 . 6 2、# 7 : p= 0 . 5 6、# 1 6 : p= 0 . 1 5、# 2 1 : p= 0 . 4 1）。
表 1 - 5 :家 庭 に お け る C o r t i s o l 濃 度 変 化 （3 日 間 ）
I D P r e P o s t
# 1 0 . 1 0 9 0 . 1 1 3
# 2 0 . 1 5 4 0 . 1 0 7
# 7 0 . 1 5 6 0 . 2 4 5
# 1 6 0 . 1 3 3 0 . 1 4 5
# 2 1 0 . 0 7 9 0 . 1 2 5
22
考 察
本 研 究 で は 唾 液 中 の C o r t i s o l 濃 度 及 び S I g A 濃 度 を 指 標 と し 、A A A に お け る セ ラ ピ ー 犬 が 受 け る ス ト レ ス に つ い て 評 価 し た 。
1）C o r t i s o l に よ る セ ラ ピ ー 犬 の ス ト レ ス 評 価
C o r t i s o l の 分 泌 は HPA 系 、 ネ ガ テ ィ ブ フ ィ ー ド バ ッ ク 機 構 に よ っ て 制 御 さ
れ て お り 、 多 少 の 負 荷 や C o r t i s o l の 分 泌 変 動 と い っ た も の は 直 ち に 正 常 値 内 に も ど る 。 そ の 許 容 を 超 え た 場 合 に ス ト レ ス に よ る C o r t i s o l の 過 剰 分 泌 が 起
こ る[ 2 8 ]。A A A の 活 動 中 に 犬 が 受 け る ス ト レ ス と し て は 見 知 ら ぬ 人 々 と の 触
れ 合 い や 環 境 の 極 端 な 変 化 、 騒 音 な ど が 考 え ら れ る[ 1 2 , 1 3 ]。 本 研 究 に お け る セ ラ ピ ー 犬 は 高 齢 者 施 設 の 利 用 者 に 対 し て A A A を 行 っ て い た が 、 そ こ で は 初 め て 会 う 人 や 慣 れ な い 施 設 に よ る ス ト レ ス だ け で な く 、 高 齢 者 特 有 の 参 加 者 の 突 発 的 な 動 き や 声 、 犬 と 触 れ 合 う 際 の 力 加 減 の 調 整 が 上 手 く い か な い 等 の 要 因 が 考 え ら れ た 。 ス ト レ ス に よ っ て 犬 は 副 腎 皮 質 か ら の C o r t i s o l 分 泌 量 を 増 や す が 、 そ れ 以 外 に も パ ン テ ィ ン グ や あ く び 、 流 涎 あ る い は 攻 撃 行 動 を 引 き 起 こ す と い っ た 行 動 に 変 化 が 現 れ る[ 5 , 9 ]。 セ ラ ピ ー 犬 た ち は AA A に 従 事 す る 間 、 そ う い っ た 行 動 を み せ る こ と は な か っ た 。 本 研 究 の 結 果 か ら も
C o r t i s o l が 上 昇 し た 個 体 は 2 0 %に 止 ま り 、 さ ら に そ の 中 で も 値 が 高 値 を 示 し
た 個 体 は い な か っ た 。 こ れ は 、 北 海 道 ボ ラ ン テ ィ ア ド ッ グ の 会 が 行 う セ ラ ピ ー 犬 適 性 試 験 に よ り ス ト レ ス 負 荷 に 対 す る 反 応 が 一 般 的 な 犬 と 比 較 し て 少 な い 個 体 が 選 ば れ 、 そ の 上 で 活 動 が 行 わ れ て お り 、 活 動 の 際 の 犬 と 人 の 双 方 の リ ス ク の 軽 減 が な さ れ て い る 結 果 で あ る と 考 え ら れ た 。G l e n k ら[ 2 0 ]の 報 告 に よ れ ば 、薬 物 患 者 に 対 す る A A A に お い て も 、セ ラ ピ ー 犬 の C o r t i s o l 濃 度 は 低 く 抑 え ら れ て い た 。 ボ ラ ン テ ィ ア ド ッ グ の 会 の セ ラ ピ ー 犬 も A A A に 対 す る ス ト レ ス 抵 抗 を 持 っ て い る 事 が 考 え ら れ た 。
C o r t i s o l 濃 度 に 影 響 を 与 え る 要 因 と し て ス ト レ ス 以 外 に も 日 間 変 動 や 疾 病
が あ る[ 2 0 ]。犬 に お け る C o r t i s o lの 日 間 変 動 は 未 だ 正 確 に は わ か っ て い な い 。 本 研 究 に お い て も 参 加 犬 数 頭 に 対 し 調 査 を 行 っ た が K e m p p a i n e n ら[ 3 1 ]の 報
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告 と 同 様 に 一 定 し た 日 間 変 動 は み ら れ な か っ た 。 家 庭 で の 唾 液 採 取 時 に
C o r t i s o l の 増 加 が み ら れ た 場 合 も あ っ た が 、 日 常 生 活 の 中 で の 増 減 が 軽 微 な
理 由 か ら 起 こ る 為 、 そ れ ら の 範 囲 内 で あ れ ば 過 度 の ス ト レ ス で は な い と も 考 え ら れ た 。 ま た 、 疾 病 に よ っ て 体 内 C o r t i s o l が 高 値 を 示 し た り 低 い 値 を 示 し た り す る 場 合 が 考 え ら れ る が 、 北 海 道 ボ ラ ン テ ィ ア ド ッ グ の 会 で は セ ラ ピ ー 犬 に 対 し て 健 康 診 断 及 び 血 液 検 査 を 行 っ て お り 、 重 大 な 疾 病 が あ る 個 体 は い な い 。
こ の 様 に 、 北 海 道 ボ ラ ン テ ィ ア ド ッ グ の 会 に 所 属 す る セ ラ ピ ー 犬 は A A A に よ っ て 過 度 な ス ト レ ス を 感 じ て い な い こ と が わ か っ た 。 そ れ は 唯 一 行 わ れ る 適 性 試 験 が 適 切 な 内 容 で あ る こ と 、 ま た セ ラ ピ ー プ ロ グ ラ ム も 適 切 な 内 容 で 行 わ れ て い る 証 拠 で あ ろ う 。
2）C o r t i s o l 濃 度 値 変 化 と S I g A 濃 度 値 変 化 の 関 連 性
通 常 、 人 を 含 め た 動 物 の ス ト レ ス を 評 価 す る 際 に 血 液 中 や 唾 液 中 、 尿 中 、
糞 中 C o r t i s o l が 指 標 と な る 。C o r t i s o l は 視 床 下 部—下 垂 体—副 腎 皮 質 の よ う に
そ の 分 泌 が 制 御 さ れ て お り 、ス ト レ ス 下 で は 速 や か に 血 液 中 に 放 出 さ れ る が 、 唾 液 中 に は 2 0分 程 度 の 時 差 の 後 、分 泌 さ れ る こ と が 明 ら か に な っ て い る[ 5 ]。 近 年 、唾 液 中 S I g A で も ス ト レ ス の 評 価 が 出 来 る と い う 報 告 が あ る[ 3 2 ]。S I g A は 免 疫 グ ロ ブ リ ン の 一 つ で あ り 、 形 質 細 胞 か ら の 唾 液 中 、 血 液 中 へ の 分 泌 は
C o r t i s o l の 免 疫 機 能 抑 制 の 影 響 を 受 け る こ と が 明 ら か に な っ て い る [ 5 7 ]。 つ
ま り 、本 来 で あ れ ば C o r t i s o l の 増 加 に 合 わ せ て S I g A の 分 泌 が 低 下 す る こ と か ら 、ス ト レ ス 負 荷 の 指 標 と し て S I g A の 分 泌 減 少 が 起 こ る と 考 え ら れ て い る 。 し か し 本 研 究 に お い て C o r t i s o l の 増 加 に よ る ス ト レ ス 反 応 を 示 し た デ ー タ が 全 体 の 2 0 %あ っ た の に 対 し 、C o r t i s o l の 増 加 と S I g A 減 少 と い う ス ト レ ス 反 応 を 示 し た デ ー タ は 2 %の み と 、 ス ト レ ス 反 応 の 相 関 は な か っ た 。S I g A 濃 度 が 減 少 し た 2 2％ の う ち 、C o r t i s o l の 増 加 と 相 関 し た 個 体 は 2 %に と ど ま っ た 。さ ら に 、統 計 解 析 を 行 っ た 全 6 頭 に つ い て も 有 意 な 減 少 を 示 す 個 体 は な か っ た 。 免 疫 機 能 の 低 下 に 影 響 す る 要 因 と し て 加 齢 が 挙 げ ら れ る が 、 年 齢 と の 関 連 性
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は な か っ た 。 ま た 、 活 動 経 験 の 差 に よ っ て ス ト レ ス に 対 か ら の 回 復 時 間 に 差 が あ る と 推 測 さ れ た が 、 本 研 究 に お い て S I g A と 年 齢 の 関 係 性 を 調 べ る と
r = 0 . 0 4 と 関 係 性 は な く 、 活 動 回 数 と の 関 連 も な か っ た （r = - 0 . 1 8）[ 5 9 ]。 人 に
お い て S I g A は ス ト レ ス が か か れ ば 基 本 的 に 減 少 す る こ と は 証 明 さ れ て い る が 、 急 性 ス ト レ ス の 場 合 、S I g A の 変 化 が 異 な る 事 が 報 告 さ れ て い る[ 2 1 ]。 つ ま り 、F a n ら （2 0 0 9） の 報 告 に よ れ ば 人 で は 長 時 間 の 運 動 に よ っ て S I g A が 減 少 し 、 逆 に 短 時 間 だ と 変 化 が な い か 、 あ る い は 増 加 を 示 す こ と が 明 ら か に な っ て い る[ 1 7 ]。犬 に お い て も そ う い っ た S I g A と 多 様 な ス ト レ ス と の 関 連 性 を ま ず は 明 ら か に す る 必 要 が あ ろ う 。
目 、 鼻 、 喉 、 気 管 、 消 化 管 と い っ た 上 皮 表 面 を 防 御 す る S I g A は 、 そ う い っ た 粘 膜 付 近 に 存 在 す る 形 質 細 胞 か ら 分 泌 さ れ る 。 本 研 究 で 検 証 し た イ ヌ に お い て は 、 食 餌 の 影 響 は な く 、 さ ら に 獣 医 師 が 判 断 で き る 口 腔 内 の 炎 症 は な か っ た 。 し か し 、 先 行 研 究 の 様 に 一 定 の 飼 育 環 境 下 に 置 か れ た イ ヌ を 調 べ た わ け で は な い た め 、 口 腔 環 境 が S I g A 量 に 与 え た 影 響 を 今 回 は 判 断 で き な か っ た[ 3 2 ]。
こ の よ う に S I g A 濃 度 に 影 響 を 与 え る 要 因 は 様 々 で あ る こ と が 知 ら れ て お り 、 と C o r t i s o l と は 必 ず し も 相 関 が な い こ と が 明 ら か に な っ た 。 こ の 結 果 は
S v o b o d o v a ら[ 5 7 ]の 報 告 と 同 様 で あ り 、S I g A を ス ト レ ス マ ー カ ー と し て 用 い
る た め に は 厳 密 な 条 件 設 定 を 行 っ た 上 で の 運 用 が 必 要 で あ る と と も に 、 更 な る 研 究 が 必 要 で あ る と 考 え ら れ た 。
3） 年 齢 、 活 動 歴 、 去 勢 と ス ト レ ス と の 関 連 性
年 齢 や 活 動 歴 と ス ト レ ス の 関 係 性 は な か っ た 。 高 齢 に な る こ と に よ る 活 動 へ の 影 響 は 少 な く 、 ま た 、 経 験 に よ る ス ト レ ス の 緩 和 効 果 も 大 き く な い と 考 え ら れ た 。 通 常 、 年 齢 が 上 が る 事 に よ り 柔 軟 性 が 失 わ れ 、 新 規 刺 激 に 拒 否 反 応 を 示 す 場 合 が あ る 。 し か し 、A A A に 参 加 す る 回 数 が 増 え 、 経 験 数 が 上 が っ て い け ば 、 馴 化 に よ り ス ト レ ス の 緩 和 に つ な が る と 考 え ら れ て い た[ 5 9 , 6 0 ]。 他 の 研 究 報 告 で も 経 験 が 増 え る 事 で 、 活 動 開 始 後 の 緊 張 度 や ス ト レ ス の 低 下
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が 早 期 に 起 こ る と い う 報 告 が あ る[ 5 9 , 6 0 ]。 つ ま り 、1 0 回 目 の 活 動 と 11 回 目 の 活 動 に お け る 馴 化 の 程 度 は ほ と ん ど 変 化 が な い が 、 初 回 の 活 動 と 2 回 目 の 活 動 差 は よ り 大 き い と 考 え ら れ る 。 こ の よ う に 経 験 の 影 響 は 個 体 に よ っ て 変 動 す る た め 、 関 係 性 を 比 較 し た 場 合 に 相 関 が 現 れ に く か っ た と 考 え ら れ た 。 し か し 、 初 回 の 活 動 に も 関 わ ら ず C o r t i s o l の 増 加 、S I g A の 減 少 と い っ た ス ト レ ス 反 応 を 示 さ な か っ た 個 体 が い た こ と か ら 、 必 ず し も 経 験 が ス ト レ ス の 大 き さ を 決 め る わ け で は な い 可 能 性 も 考 え ら れ た 。 今 回 関 連 性 を 調 べ た 要 因 以 外 に も 、A A A に お け る 参 加 犬 の 組 み 合 わ せ の 違 い や 、参 加 頭 数 に よ る ス ト レ ス 、 あ る い は 人 が 理 解 し て い な い そ の 他 の 影 響 が あ る の か も し れ な い 。 し か し 、 何 に し て も セ ラ ピ ー 犬 た ち は 過 度 の ス ト レ ス を 受 け る こ と な く 活 動 し て い た こ と が 明 ら か に な っ た 。
こ の よ う に セ ラ ピ ー 犬 は 人 と の 関 わ り 合 い に お い て ス ト レ ス 耐 性 が 高 い こ と が 証 明 さ れ た が 、 そ れ 以 外 に も 活 動 内 容 の 工 夫 に よ っ て ス ト レ ス へ の 感 作 が 起 き な い よ う に 調 整 さ れ て い た の で あ ろ う 。例 え ば 、活 動 時 間 は 3 0 分 と 時 間 を 短 く 設 定 し て い る と 共 に 、 一 人 の 参 加 者 に 対 し て 数 分 程 度 の 触 れ 合 い に 止 め る と い う セ ラ ピ ー 犬 の 不 安 を 高 め な い 工 夫 も さ れ て い た 。 医 療 従 事 者 を 対 象 と し た 実 験 で は あ る が 、 セ ラ ピ ー 犬 と の わ ず か 5 分 の 触 れ 合 い に よ り ス ト レ ス の 低 下 が 起 こ り う る こ と が 示 さ れ て い る[ 4 ]。よ っ て 活 動 時 間 を 長 く 設 定 す る 必 要 は な い こ と が 考 え る 。 人 が そ う で あ る よ う に 、 犬 に お い て も 生 得 的 因 子 や 飼 育 環 境 に よ る 習 得 因 子 が 人 に 対 す る 反 応 性 に 影 響 し て い る と 考 え ら れ る 。 よ っ て 、 事 前 の 適 性 試 験 が 重 要 で あ る こ と を 改 め て 確 認 で き た 。
一 般 的 に コ ル チ ゾ ー ル と テ ス ト ス テ ロ ン は 競 合 的 に 分 泌 が 変 化 す る こ と が わ か っ て お り 、 ス ト レ ス の 影 響 を 受 け る と テ ス ト ス テ ロ ン 分 泌 が 減 少 し 、 コ ル チ ゾ ー ル 分 泌 が 増 加 す る 。 ま た 、 去 勢 を 行 っ て い な い 雄 犬 は そ う で な い 犬 に 比 べ て ス ト レ ス ホ ル モ ン が 高 い こ と が わ か っ て い る[ 3 5 ]。 テ ス ト ス テ ロ ン は 攻 撃 性 に 影 響 す る こ と が わ か っ て い る が 、 去 勢 に よ る テ ス ト ス テ ロ ン の 減 少 が 、 セ ラ ピ ー 犬 に よ い 影 響 を 与 え る か ど う か は わ か っ て い な い 。 本 研 究 で は 3 頭 の 雄 犬 が 未 去 勢 で あ っ た が 、 そ れ ら の 犬 の C o r t i s o l は 活 動 の 前 後 で 減
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少 し て い た こ と か ら 、 本 研 究 で 対 象 と し た セ ラ ピ ー 犬 達 に 去 勢 の 影 響 は な い と 考 え ら れ た[ 3 5 ]。
H a u b e n h o f e rら[ 2 3 ]の 報 告 で は セ ラ ピ ー に 参 加 す る た め の 5日 間 の ト レ ー ニ
ン グ を 行 っ た 犬 達 に お い て 、3 日 目 ま で C o r t i s o l の 明 ら か な 増 減 は な く 、 最 終 日 に は 参 加 犬 の C o r t i s o l 濃 度 の 中 央 値 が 最 も 低 く な る と い う 結 果 が 示 さ れ て い る[ 2 3 ]。 ま た 、 最 近 の 研 究 で 社 交 性 の 高 い 犬 の 方 が 、 人 や 新 し い 環 境 へ の 適 応 性 が 高 く ス ト レ ス を 感 じ に く い と い っ た 報 告 も あ る[ 5 0 ]。 こ れ ら も 踏 ま え る と 、 セ ラ ピ ー 犬 が ス ト レ ス を ど の 程 度 受 け る の か は セ ラ ピ ー 犬 と し て 働 き 始 め た 後 の 経 験 な ど の 習 得 的 因 子 よ り も そ の 犬 が セ ラ ピ ー 犬 と し て 働 く ま で の 習 得 的 因 子 や 元 々 犬 が 持 っ て い る 生 得 的 因 子 の 重 要 性 が 高 い と 考 え ら れ た 。
4） セ ラ ピ ー 犬 が 感 じ る ス ト レ ス
犬 が 従 事 す る 人 と 関 わ る 仕 事 に と し て 従 事 す る 代 表 的 な も の と し て に 盲 導 犬 が 挙 げ ら れ る が 、 こ ち ら は 1 年 近 く に も 及 ぶ 訓 練 、 そ し て 訓 練 士 に よ る 評 価 に よ り 適 正 を 測 る 。 し か し 、 そ の 合 格 率 は 低 く 3 割 ほ ど で あ り 、 そ の 効 率 を 上 げ る た め に 系 統 の 維 持 や 性 格 遺 伝 子 の 評 価 な ど が 行 わ れ て い る[ 3 6 ]。 セ ラ ピ ー 犬 は 3 0 分 程 度 の 試 験 に 合 格 し た だ け で A A A に 従 事 し て い る の に も 関 わ ら ず 実 際 の 活 動 で は 8 割 近 く の 犬 が 大 き な ス ト レ ス を 受 け て い な い こ と が 示 唆 さ れ た 。「 人 と 関 わ る 」と い う 点 で 考 え る と 1 回 の 適 性 検 査 で の 見 極 め の み で も 十 分 評 価 が 可 能 で あ る 事 が 明 ら か に な っ た 。 盲 導 犬 に お い て も 盲 導 犬 に な る た め の 訓 練 に 入 る 検 定 、 い わ ゆ る 稟 性 試 験 が あ り 、 遺 伝 的 に 優 れ た 犬 に お い て も こ の 試 験 で 適 性 が な い と 早 々 に 判 断 さ れ る 犬 が 一 定 数 い る 。 ス ト レ ス の 影 響 を 強 く 受 け な い 犬 の 判 別 は 、 セ ラ ピ ー 犬 適 性 試 験 の 中 で 犬 の ス ト レ ス サ イ ン を 検 出 す る こ と で 行 わ れ て き た が 、 実 際 の 活 動 中 も モ ニ タ リ ン グ す る こ と で 十 分 に 動 物 福 祉 に 配 慮 さ れ た 運 営 が 可 能 で あ ろ う 。 実 際 、 今 回 コ ル チ ゾ ー ル が 増 加 し な か っ た 個 体 は 活 動 中 ス ト レ ス サ イ ン を ほ と ん ど 見 せ る こ と は な か っ た 。 ま た 、 セ ラ ピ ー 犬 は 飼 い 主 に よ り 躾 が 行 わ れ て お り 、 そ う
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い っ た 日 々 の 努 力 も 今 回 の 結 果 に 結 び つ い た と 考 え ら れ る 。
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要 約
動 物 介 在 介 入 に 参 加 し て い る 動 物 が 受 け る 影 響 に つ い て 多 く は 研 究 さ れ て い な い た め 、本 研 究 で は 唾 液 中 の C o r t i s o l 濃 度 及 び S I g A 濃 度 を 指 標 と し て セ ラ ピ ー ド ッ グ の 状 態 を 把 握 す る こ と を 目 的 と し た 。
北 海 道 ボ ラ ン テ ィ ア ド ッ グ の 会 に 所 属 し 、 動 物 介 在 活 動 （A A A） に 参 加 し て い る セ ラ ピ ー ド ッ グ 2 3 頭 を 対 象 と し 、A A A の 1 5 分 前 を p r e、1 5 分 後 を p o s t と し 、唾 液 の サ ン プ リ ン グ を 行 っ た 。サ ン プ リ ン グ し た 唾 液 の 唾 液 中 C o r t i s o l 濃 度 と S I g A 濃 度 は E L I S A を 用 い て 測 定 し 、A A A 前 後 の 濃 度 を 比 較 し た 。 ま
た 、A A A 前 後 の 唾 液 中 C o r t i s o l 濃 度 変 化 と S I g A 濃 度 変 化 の 関 連 や 、 そ れ ぞ
れ と 他 の フ ァ ク タ ー に つ い て も 関 連 性 、C o r t i s o l 濃 度 の 日 間 変 動 を 検 証 し た 。 唾 液 中 C o r t i s o l 濃 度 、S I g A 濃 度 測 定 は 全 2 3 頭 4 4 サ ン プ ル 行 わ れ 、増 減 を 比 較 し た と こ ろ 、 唾 液 中 C o r t i s o l 濃 度 、S I g A 濃 度 共 に ス ト レ ス 反 応 を 示 し た の は 約 2 0％ の 個 体 の み で あ っ た 。ま た 同 一 個 体 で 複 数 の デ ー タ が あ る も の に つ い て は 統 計 解 析 を 行 っ た が 、 明 ら か な ス ト レ ス 反 応 を 示 す 個 体 は い な か っ た 。唾 液 中 C o r t i s o l 濃 度 と S I g A 濃 度 の 相 関 を 調 べ た が 有 意 な 関 係 性 は み ら れ な か っ た 。唾 液 中 C o r t i s o l 濃 度 と S I g A 濃 度 そ れ ぞ れ と 年 齢 、累 計 活 動 回 数 の 相 関 に つ い て も 明 ら か な 関 連 性 は み ら れ な か っ た 。 唾 液 中 C o r t i s o l 濃 度 の 日 間 変 動 を 調 べ た が 、 明 ら か な 変 化 は み ら れ な か っ た 。
唾 液 中 C o r t i s o l濃 度 と S I g A濃 度 の 結 果 か ら 、ほ と ん ど の セ ラ ピ ー 犬 は A A A に 参 加 す る 事 に よ る 大 き な ス ト レ ス は 受 け て い な い 可 能 性 が 示 唆 さ れ た 。 セ ラ ピ ー 犬 は 適 性 検 査 を 通 過 し た 個 体 の み が 活 動 を 行 っ て お り 、 検 査 の 有 用 性 が 証 明 さ れ た 。 し か し 、 明 ら か な ス ト レ ス 反 応 を 示 す 個 体 も い る た め 、 活 動 開 始 後 も モ ニ タ リ ン グ は 必 要 で あ る と 考 え ら れ た 。
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第 Ⅱ 章
人 と の 触 れ 合 い プ ロ グ ラ ム に 参 加 す る ハ ン ド ウ イ ル カ （ Turs io ps trunc atu s ） の
血 中 C or tis ol 濃 度 を 指 標 と し た ス ト レ ス 調 査
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序 文
ハ ン ド ウ イ ル カ （Tu r s i o p s t r u n c a t u s） は 熱 帯 、 亜 熱 帯 、 温 帯 地 域 の 沿 岸 海 域 に 生 息 し て お り 日 本 近 海 に も 多 く 生 息 し て お り 、 ま た 、 水 族 館 で の 飼 育 例 も 多 く 、 日 本 に お い て 最 も ポ ピ ュ ラ ー な イ ル カ の 一 種 で あ る[ 1 6 ]。 近 年 で は 水 族 館 に お け る シ ョ ー 以 外 に も 、 新 た な 触 れ 合 い と し て イ ル カ と 実 際 に 触 れ 合 う プ ロ グ ラ ム が 人 気 を 博 し て い る[ 3 0 ]。犬 の 場 合 と 同 様 に A A A に 参 加 し て い る イ ル カ に お い て 、 ス ト レ ス の 評 価 は 動 物 福 祉 上 、 重 要 で あ る 。 こ れ ま で の 、 報 告 の 中 に は 触 れ 合 い プ ロ グ ラ ム に 参 加 し て い る イ ル カ の 状 態 を 行 動 評 価 で 行 っ た 報 告 が あ り 、 ま た 、 ベ ル ー ガ と い っ た 他 の 種 で の ふ れ あ い プ ロ グ ラ ム （D I P） に お け る 内 分 泌 的 評 価 が 報 告 さ れ て い る[ 4 1 , 6 2 ]。 そ こ で 、 本 章 第 1 章 に お い て 、ス ト レ ス の 内 分 泌 的 指 標 と し て 広 く 用 い ら れ て い る C o r t i s o l に よ り A A A へ の 参 加 犬 の 評 価 を 行 っ た 。 こ れ を 応 用 し て 、 ふ れ あ い プ ロ グ ラ ム に 参 加 す る ハ ン ド ウ イ ル カ の ス ト レ ス に つ い て 評 価 を 行 う こ と に し た 。 沖 縄 県 も と ぶ 元 気 村 に て 飼 育 さ れ て い る ハ ン ド ウ イ ル カ の 血 液 サ ン プ ル を 基
に D I P の 内 容 と 影 響 を 調 べ た 。
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材 料 と 方 法
1） イ ル カ ふ れ あ い 施 設 「 も と ぶ 元 気 村 」
も と ぶ 元 気 村 は 、沖 縄 や ん ば る の 豊 か な 自 然 と 文 化 に 触 れ 、”健 や か な 心 と 身 体”を 育 ん で ほ し い 、と い う 考 え の 下 、豊 か な 大 自 然 を 舞 台 に 海 の 動 物 、自 然 、 伝 統 文 化 と い っ た 様 々 な プ ロ グ ラ ム を 提 供 し て い る 施 設 で あ る[ 3 0 ]。 2） ハ ン ド ウ イ ル カ
本 研 究 で は も と ぶ 元 気 村 （ 沖 縄 県 ） で 飼 育 さ れ 、 人 と の 触 れ 合 い プ ロ グ ラ ム に 参 加 し て い る ハ ン ド ウ イ ル カ 5 頭 を 対 象 と し た 。 各 個 体 に つ い て 年 齢 、 性 別 、 活 動 歴 を 調 査 し た （ 表 2 - 1）。
3） 人 と の 触 れ 合 い プ ロ グ ラ ム
人 と の 触 れ 合 い プ ロ グ ラ ム に は 主 に 桟 橋 か ら イ ル カ と 遊 ぶ 、 ド ル フ ィ ン ス ク ー ル プ ラ ス （D S＋ ） や 水 に 入 っ て イ ル カ を 触 る 、 ス イ ム ウ ィ ズ ド ル フ ィ ン
（S W D）、 水 に 入 っ て イ ル カ と 一 緒 に 泳 ぐ ロ イ ヤ ル ス イ ム （R S） が あ り 、 プ
ロ グ ラ ム の 概 要 は 表 2 - 2、 プ ロ グ ラ ム 概 要 に 用 い ら れ て い る 用 語 の 詳 細 は 表
2 - 3 の 通 り で あ る 。
4） 血 液 の 採 取
血 液 は プ ロ グ ラ ム が 始 ま る 前 （a m 9 : 0 0） に 担 当 す る 獣 医 師 に よ っ て 行 わ れ た 。 採 血 は ト レ ー ニ ン グ の 一 環 と し て 、 尾 ビ レ か ら 採 取 さ れ 、 保 定 な ど に よ る 過 度 な ス ト レ ス が か か ら な い よ う に 行 わ れ て い た 。 こ れ ら の 血 液 は E D TA 管 に 採 取 後 、3 0 0 0 × g で 1 5 分 間 遠 心 分 離 を 行 い 、 血 漿 を 冷 凍 保 存 し た 。 そ の 後 送 付 さ れ 、 測 定 ま で- 3 0℃ で 保 存 し た 。
6）E I A 法 に よ る 血 漿 中 C o r t i s o l 濃 度 の 測 定
血 漿 中 の C o r t i s o l は C o r t i s o l E I A k i t （A r b o r A s s a y s , U S A）に よ り D u p l i c a t e で 測 定 し た 。E L I S A 法 の 手 順 は キ ッ ト の プ ロ ト コ ル に 従 い 行 っ た 。 簡 単 に 述 べ る と 、 ま ず ス タ ン ダ ー ド （3 2 0 0 p g / m l～1 0 0 p g / m l） を 準 備 し 、 血 液 サ ン プ ル を 希 釈 倍 率 1 6 倍 に 調 整 し た 。ス タ ン ダ ー ド 及 び サ ン プ ル を 入 れ た 後 、手 順 に 従 い C o r t i s o l C o n j u g a t e お よ び C o r t i s o l A n t i b o d y を E L I S A プ レ ー ト へ 加 え 、
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プ レ ー ト シ ェ イ カ ー （M T S 2 / 4 d i g i t a l m i c r o t i t e r s h a k e r , I K A、G e r m a n y） で
3 0 0 r p m × 1 時 間 反 応 さ せ た 。 洗 浄 後 、T M B を 加 え て 発 光 さ せ マ イ ク ロ プ レ ー
ト リ ー ダ （B i o - R a d , U S A） を 使 用 し 4 5 0 ㎚ で 吸 光 度 を 測 定 し た 。 C o r t i s o l 濃
度 は A r b o r A s s a y s の 計 算 方 法 に 従 い 、 ホ ー ム ペ ー ジ 上 で 算 出 し た[ 4 1 ]。
7） 解 析
人 と の 触 れ 合 い プ ロ グ ラ ム に 参 加 し て い る ハ ン ド ウ イ ル カ 5 頭 の 結 果 に つ い て 、 ① ハ ン ド ウ イ ル カ 5 頭 の C o r t i s o l 濃 度 の 分 布 、 ② 繁 忙 期 （6 - 9 月 ） や 閑 散 期（1 0 - 1 2 月 ）に お け る C o r t i s o l 濃 度 の 変 化 、③ 年 齢 が C o r t i s o l 濃 度 に 与 え る 影 響 に つ い て 分 析 し た 。
8） 統 計
① 各 個 体 の C o r t i s o l 濃 度 に 差 が あ る か 調 べ る た め に 、 バ ー ト レ ッ ト 検 定 で 分 析 し た 後 に 一 元 配 置 分 散 分 析 法 を 行 っ た 。 ② 繁 忙 期 と 閑 散 期 に お け る
C o r t i s o l 濃 度 に 差 は あ る か に つ い て 対 応 の な い t 検 定 を 行 っ た 。 ③ 年 齢 と
C o r t i s o l 濃 度 と の 関 連 性 に つ い て ス ピ ア マ ン 順 位 相 関 検 定 を 行 っ た 。 全 て の
統 計 は p< 0 . 0 5 を 有 意 差 あ り と し た 。
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表 2 - 1： ハ ン ド ウ イ ル カ の 個 体 情 報
I D プ ロ グ ラ ム 参 加 状 況 性 別 年 齢（ 推 定 ） サ ン プ ル 数
# 1 全 プ ロ グ ラ ム 雌 1 5 1 3
# 2 D S＋ 、R S（プ ラ ッ ト） 雌 1 4 1 2
# 3 全 プ ロ グ ラ ム 雌 1 2 1 2
# 4 全 プ ロ グ ラ ム 雌 1 1 6
# 5 全 プ ロ グ ラ ム 雌 9 8
表 2 - 2： ド ル フ ィ ン プ ロ グ ラ ム
プ ロ グ ラ ム 名 説 明
ド ル フ ィ ン ス ク ー ル プ ラ ス D S ＋ （ 2 セ ッ シ ョ ン 構 成 ）
プ ラ ッ ト と ド ッ ク で 1 セ ク シ ョ ン ず つ 触 れ 合 う プ ロ グ ラ ム 。水 中 に ゲ ス ト が 入 っ て 泳 ぐ こ と は な い 。対 応 時 間 ： 約 3 0 分
ス イ ム ウ ィ ズ ド ル フ ィ ン S W D （ 3 セ ッ シ ョ ン 構 成 ）
フ リ ー と プ ラ ッ ト を 組 み 合 わ せ た 物 を 2 セ ッ シ ョ ン 、ド ー サ ル を 1 セ ッ シ ョ ン 行 う プ ロ グ ラ ム 。 対 応 時 間 ： 約 3 0 分
ロ イ ヤ ル ス イ ム R S （ 3 セ ッ シ ョ ン 構 成 ）
プ ラ ッ ト で 1 セ ッ シ ョ ン 、フ リ ー で 1 セ ッ シ ョ ン 、ヒ ュ ー マ ン ・ ベ リ ー ・ 2 頭 ド ー サ ル 3 0 分 。 ※ こ の プ ロ グ ラ ム に 関 し て は 1 頭 で 3 セ ッ シ ョ ン 全 て 行 う 事 が な い 為 、各 セ ッ シ ョ ン に 対 応 す る イ ル カ が 異 な る
* 1 回 に つ き 2 セ ッ シ ョ ン も し く は 3 セ ッ シ ョ ン で 構 成 さ れ て お り 、1 セ ッ シ ョ ン 行 う ご と に 1 度 対 応 を 終 わ り ノ ー コ ン ト ロ ー ル 下 に 置 く 時 間 が 1，2 分 程 あ る
