形態的観察， PCR法及びLC/MS分析による育成牛シキミ中毒の診断

(1)

形態的観察、PCR法及びLC／MS分析による育成牛シキミ中

毒の診断

誌名

日本獣医師会雑誌 = Journal of the Japan Veterinary Medical Association

ISSN

04466454

著者

河津, 理子

福田, 昌冶

土門, 尚貴

茂木, 守

門田, 裕一

巻/号

64巻10号

掲載ページ

p. 791-796

発行年月

2011年10月

農林水産省農林水産技術会議事務局筑波産学連携支援センター

Tsukuba Business-Academia Cooperation Support Center, Agriculture, Forestry and Fisheries Research Council Secretariat

(2)

￨短報￨

形態的観察，

PCR

法及び

LC/MS

分析による

育成牛シキミ中毒の診断

河

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福田昌治 1

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門田裕一

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( ホルスタイン稲，雌，約 18 カ月 Îq~ì)が起立不能及び出撃を1i}.し，うち1

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は死亡した .*i:Ì"~ は，その 2 FIHíj に欣牧場周辺の~Uï:iを切定し，その枝葉を放が|に使JI1していた，生Ji:íーから十足取した葉及び化亡よ1-. の第一ー円内谷1-\:1 の ~J:'l は形態的制然，

PCR

-

RFLP

i

7ft..び分子系統解析によりシキミと

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定した. また，死亡1.1 ーの第一間内谷と Ifll 液をÌf副本クロマトグラフ質伝分析計 (LC/MS) で分析し，シキミの平-ï~l): 成分であるアニサチンを検 U-'，した.これらの!J)(; 最初、ら，本j，'I"例をシキミ '1:I:jI;;と診断した.形態的俗l~~ ，立f王子検査及び化学分析を制l み合わせることで，より的舶な植物

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診断が可能となった.一一キーワード.シキミ，

LC/MS

，

PCR

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RFLP.

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シキミ

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L) は仏~j:fや公|主|の柚j主に利用される比1'史的馴染みのある常締結

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だが，全草にi'III 走行去達物質 y-アミノ陥険 (GABA) と J川J'L し，主.~~ !lj-~:‘f/j; のネ

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を誘発するアニサチンを有しており [1]，その笑は H((物でIlfí~ー劇物に指定されている.シキミの災は '"1"，l!'(;

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r!される八角(トウシキミ

Ullicium

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Hook.f.)の実)によく似ており，人の誤食による)"~':flJ:三lH)iIJ が'W告されている [1-3]. ーブ]，五〈守iのシキミ

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，について， 7r~ 態的観察，

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定により多角的に診断したので;〆

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守ごろ，放牧場にいた育成工￨二4頭のうち1

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が起立不能となり，一ー時的に II!:I 肢の強直七1:.111]代ぞI.:)}l{~t を起こした. 述給資任者 i~fii)!:型I!子・ (tf，J:r 県 ':1' 火家帯保健 rij'cl'.所) 午後

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寺ごろには起立をしたが， ~{) 2

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もにタ巳亡が発見された.また，別の

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による治療をしたところ，約

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後には起立し，

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主は，

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J]に欣牧場開辺の ~I.::li'i:の樹木を指定し，その校~を放牧場の数字i に使用していた.

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二

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1'後に死亡

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を病理解古Ijし，検'i'

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材料を伴た. 材料及び方法死亡

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Iiにmいられていた樹木の葉(生垣の柴). 給与飼来￨のチモシー乾坤(輸入)泣ひ、ι

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の井戸水を検主計こ』

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いた. 死亡よ|二の.:t~1泌総は，定 i1; に従い病坦!組織検貨を行った.刻lI î箱分出IE は，肝臓，出~J版， Ii守j胤心臓 1 JJt¥iJ.えび

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神経系について

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被加寒天府地

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楽天府地(好気取養)により実施した.ウイルス分離は， )Jj

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， JJ~I 臓及びIfll

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について牛腎臓由来株化

(MDBK)

細胞を)l-Jいて災施した.チモシー乾草と井戸水は，長~lj:i宝液体クロマトグラフイ一法により硝酸態窒素〒

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形態的飢祭， PCR， LC/MSによる

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‘シキミ

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，}Jの診断表 l アニサチン分析

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試料の磁矧と調製法 No 試料の磁類調波法 l 第ー.'，~iI付芥 2 第一品

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夜 JOml試!数値ーに試利 1gを入れるアセトニトリル31111を力11える Mi;I~'~波処 J.m 遠心処型!I(2.800g， 10分) 迷心上 ii~'lmlにノlく41111を力11える 0.2μmフィルターでろ過 js心処迫!I(2.800g， 105})

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心

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:i青をろ紙ろ過 0.2μmフィルターでろ過 IH~外ろ過処理 3 円￨人]容の業)J( 10 m/試験管に試料05gを入れるアセトヱトリル3:111/を加える (以T.NO.1と￨青lじ) < 1 .Ifll li託 \;H外ろ過処J~\! 5 ~Iτ.!Eiの業 10ml試験管に試料0.5gを入れる (1:. J mm治11切) アセトニトリル3mlを加える

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百!じ) 6 ~I:JH.の業 10ml 試験管に試料 0.1gを入れる (;!吃1'dU.:s}昨) アセトニトリル31111を力

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える (以下、NO.1と!行lじ) 濃度をiHljiとした， ~t.垣の来は， 800 Cで24W!ili¥j'j吃燥させ，水分合置を

i

J!iJ1.にした. ~Iミ垣の~と死亡"-1'-の第一'1~117~ 'ú (間内谷)から検出された来一，'.)'(間内容の諜jJ1・)について， )I~態的観祭及びシキミ属リボソームRNA.iti:伝子ITS領域を械的とした PCR法 [5Jを実施した.DNAtll1日lは純物DNAtIIIli¥キ

ット1SOPLANT

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(件~jニッポンジーン， MI芳o により

行った.なお，試苧￨の粉

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ーは， 2m!チューブに試料0.2g，ジルコニアビーズ1.5g及びWashBuffer(ISOPLANT Hに添付， 0.5% 2-Mercaptoethanolを含む)1m!を人れ，ホモジナイザー (FastPrep FP120， 11.'，力6.5.90 秒 ) で行った， PCRはPCRキット (AmpliTaqGold PCR Master Mix，アプライドバイオシステムジャパン仰.東京)を)IJいて実施した.プライマーはシキミ}，iJ'!.

ITS f;j'[J或を噌￨附するIli-ITS-FO及びIli-ITS-R1 [5]を

).JIいた， PCR 混合液 (AmpliTaqGol

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PCR Master

Mix 25μ 1， Primer (lOOpmo

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μn 0.25μ 1， H:!O22.5 μ!， DNA 2μf)を94.C10分で熱変tl後，94

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30秒， 52

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30秒， 72'C 60秒のサイクルで351II1繰り返し，最後に72.C10分の11/1_長_反応を行_った.PCR産物は積の同定のため，制限時素

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1によるRFLP法 [5JにfAし，遺伝子型別を実施するとともに，外

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fl¥検究機

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J(北海道システムサイエンス仰，北海道)に委託して血基配列を決定した.1ぜられた~;\;i，~;~配列は.米国生物工学'l'j'f'flÆ センターのBLASTサーチにてキ1:1同性検察を行い.遺伝子テ' ータベース (GenBanlけに託銀されているシキミ服

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spp.) の ~tII~ 配列及びi既報 [5] のシキミ (J

機~ 分自11カラム移動+11 グラジエント iAt j主カラムjjA皮

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人ljf 機持イオンイヒ il~ モード lJ~íì寄煤カe ス i五 )Jl~ ì~f J;.h~ ilfit'lit 表2LC/MSiJ!U定条例 [LC条例j Al1iance2695(Waters) Allanlis c1C18(Wal巴rs) 内{王2.1x 150 mm. 3:μm A 蒸留水 (LC/MS!lJ) B ・アセトニトリル (LC/MS

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MD2000(Micromass) エレクトロスプレーイオンイヒ negative 7501/h 350"c コーンガス1'[¥ 1001/h イオンJiJ;lil"Uit 1 30"c キャピラリ-'~hl:EE -2.7kV コーンi'tU

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30V iiJ!Ji.主イオン(scan) mlz 1 00~ 450 ili!Ji.工イオン(SIR) 削Iz327， m/z 127

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析ソフトMEGA4[6]を

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い， Clustal W 法により行った.分f系統樹{午j具にはNeighbor-Joining1去をJljい，待られた系統樹のイ削除IJ。を倹.rliーするため， bootstrap

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析を1，000IITI反復した. 死亡LI二のほ内容，間内容の葉 )~i・， ~I:)互の ~1! 第一13i傑及び、 i~lj tif~II-S に採取した Jfll Ì\反について，シキミの千J7b- 成分であるアニサチン (C'5H~oOs ・分子茸::328.315)のiJ[lJ定をLC/MSにより行った.LC/MS分析には，LC/MS 川蒸f'i.1/Jく (関東化学H~~. 東京) 及び LC/MS 別アセトニトリル (関東化学(t~;)，東京) をJI'Jいた. ろ紙は JISJ州各 5A (アドパンテック京 i 下似，~，東京)， 0.2μ111メンプランフィルターはDISM1C-13HP(アドパンテック東洋蜘，東京)をJ'IJいた. 1浪外ろj品処J'll日立分回￨分子fd:10，000の

Microcon

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tracelYM-10(MILLIPORE担. U.S.A.) により行った.超音波処JlI!は130Wで述統30分とした. それぞれの試料は表Iのとおり前処却を行い，

i

J!iJ定試来￨としたアニサチンの様準物質 (長111~f 大学薬学部河野功教授から分与)は， 8mgを10mlのアセトニトリルに溶解し，これを水で1/10に希釈し，iJliJ i，Eに供した. LC/MSiJ!iJ定条例ーはLeclererら [7]の方法を参考にし Ll j'民会~，& 64 791~796 (2011J 一一一792一一一

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角J(:~~'!Jにおいて IW にノ川市がみられ，組織工学(10 に IJilï のうっIfll，lJ

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、められた.イーJ芯;な*1II]{:i及びウイルスは分離されなかった.制限態主主素濃度は.チモシー乾物1"1"1で177mg/kg，J:I:}-I/j(、で12.5mg/kgであった. また干

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・への聞き取りにより，炭業

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文イfiはなかったことをMt~i，した.1!.!

~I)工fは，農場|人j の基地に沿ってあり，小 JI;=-i)本で，葉は

)草くつやがあり，傷をつけると折、香のような寄りがした. +.垣の柴の

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は67%であった. 死亡よ￨二のじj内存からは，給与飼料のチモシーとは肉11民的にIY-jらかに形状の呉なる

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J!i"が見つかった.その来一戸は間内符100gあたりがj0.6g (混主I:

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合まれ.大きいもので長径約1.5cm.短径約1C111と秘"かくなっていた

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RFLP ￨亙13 シキミi)奇PCR

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寸」ー fIIi川川川削s(AFIG3733) l/Iicilllll henryi(AFI6372S) ト一一一一一一一一一一→ 0.02 88I l/Iicilll11florid(l1日川I(AFI 637:1 ，1 ) fIIiciullllllexicaJ/1I1II(EFI38794) fIIicillJ/l仰rvif/ortllll(日、138796) l/Iicilllllhottellse(EF 1 38792I IIIicilllll eklllallii(EFI:187ω) IIIicillJ/ltar川河omJ/l(AFj(j3735) 1IIicilllll cllbemeSl1bsp.bissei(EF 1 38788) J KαdSllra印CClIl叩 (AF163716J 図4 シキミ以 rrSí!fU或の Jtllt)!~ 門~IiIJ に基づく分守系統樹 Kadsura coccille日(サネカズラ以)は系統樹

W

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析におけるl作外丸JI!化校分￨岐点、の数字はブーツストラ yプ伯 (%)を示す (1.000 1可)え復). J.fi GII¥ 1)'1はj立伝了一データベース (DDBJ/EMBL/ GenBank)のAccession併号. あること.さらに葉のまえf(J1にfi'UIII成分を合む?IIU.'，(が多数ある (1き12)ことからシキミとIfijj江'した.また.PCRit では.

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えび白内符の紫)?ともにシキミ J，!"g，

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'11当のバンドが検n'l された.これらのPCRy';:ii

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知は， RFLP i1;において • íliリ líl~ 解禁Pst

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の報告したシキミ

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ド1:吠会誌 64 i91 -i96 (2011)

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1

5

アニサチン i

l

:t

l

試験

(

SCAN

モード) J或~íl~~~I!~四日IJと 100%-' 致し，シキミであることが係~H~，で

きた. 今IITI，干!?られた ~tl仏L配ヲIjは円本 DNAデータパンク

(DDBJ)

に笠録した

(

A

c

e

s

i

o

nN

o

.

AB578859).

LC

/

MS

によるアニサチン?記正

i

j

↑性￨モ一ド (，作

m

勾

z

/

z

1

0

~

4

5

0 ω

)

による

i

洲則

l

日

!

I

J

;

定との車布斜結

i

f

古

t

i

井栄ミ，標準

1

1 i

l

は

7 .

3

うfにピークを

t

i

f

!

1

リ

1

し，ピーク十余nIII~i のおもなイオンは

m/z

127と

m/z

327であった . 第一目減 (試料

No

2 )

と生江

i

の葉 (;;式料

N

o

.5

，

N

o

.

6 )

は，+J~~ i\f~ _"₁₁_"が検

1

1'. された H引

U

]

付近にピークが見られ，

m/z

127と

m

/

z

327 のイオンが政i~: に検出され，アニサチンが合まれることが作認できた (1~15).間内容(試李

.No.

1

1)，

I

，

t}内容の染 }

r

'

(

試ギ

1 N

o

.

3 )

及び￨削減(試す

.No. 4

1 )

は，

SCAN

モードでは株式主

1

1 !

と同

1

寺聞に

j

l

I

j

l

僚なピークが

f

r

r:

U

'

，されず . アニサチンの * ¥'，徴イオンも微弱であったため，

S

e

!

e

c

t

e

d

i

o

n

r

e

c

o

r

d

i

n

g

(

SIR

)

モードにより

i

!J

ι

にした.

SIR

モードでは . アニサチンの斜微イオンである

m/z

1

2

7

と

m/z

327を選択した.

SIR

モードによる測定の結果，同内容 (i『式:flNo. 1)，間内符の~}十 (llM'i

N

o

.

3 )

及び

J

f

l

i

夜(試.f

.

l

N

o

.

4 )

でも楳準品と同様な

i

時間にアニサチンの判徴イオンである

m

/

z

127と

m

/

z

327のそれぞれ明{íÚ~なピークが検IHされ，アニサチンが合まれることが作認できた(l

j

g

I

6 )

.

考察本持:例は， ①

1

4 W

;

J

ねiI.'状， ②同内容からシキミの諜片が検

11

1

されたこと， ①間内谷と

r

f

l

液からアニサチンが検出されたことからシキミ

1 :

1 .

¥

奇と診断した. 有毒成分アニサチンは

GABA

レセプターにおけるも!; 抗により，人の

r

!

l

，

n

i

:

で"(;;l:，

1

恒

l

止めまい及び位祭，ときクロマトグラム

(

m

/

z

127) 標準品 1川J 標準品クロマトグラム (問/z327)

1 代

2 4 1 2 4 J U f

N

o

l

第一回肉容司

N

-

o

]

第一胃肉容

1 M

2 0 1 U

也

7

6

4

0

6 I

!

Slo

:

¥

0

2

第一間渡可o}第一胃，直 1 :!3c6

U

4

2 _止

_二

:

i

L

J

t

f

L

を

N

o

3

胃内容の葉片

1

"1¥ミNo3間内容の葉片

7 :

7 ，

.

1 M L

一二

_{U J J i}

-ド肘血液 ₁_.

2

4 o

No4 血液

l

j

性巳仁

一

1 :

j

Z

1

8

1 s

0

0 .

f ¥'<t;隼t亘の葉 ( 生 - 1i:Sc6:--J

o

5

生垣の葉(生 1S5t:G I

円。

_~I:j

_P\O

_Jz

8

9

五τ冶6生垣の業{車t燥 _~3Sl!S Noo生垣の菜(乾爆

:

0

6

必

1:~

L

_Jl

O7U

;

J

KE6

6

0

8

0

1

0

0 "

U

O

1

4

口口 {'.OO

8 .

0

日

1

0

口口

1

2

0

斗

0

0 I

g

l

6

アニサチン;じ￨可試験

(

S

Il<モード) にH予￨脱出

₁

_~_{!Ifを示し，} _主_{iIt持と立;}_{殺虫失は繰り返すとされる}

[

8

，

9 ]

.

本抗例で死亡した他

l

体は，起立不

f

i

E

となり II~J的な 1l!:IJ伎の強直性11\j代tl，主~{

!

i

t

を示した.数H剖(.¥j後には一旦J包立をしていたが，死亡しているのが発見されるまでの!日jには，起立不能

l

えび広撃を繰り返していたとも考えられた. ￨勾11民的及び組織学的にみられたJJJijの;J()j重性病変は，

J

日j のうっ

I

f

l

により，

J

Jili

J

包!i

i

t

と

J

JijJJ包

J

宅に扱

f

i

!i.が

i

参"'"したと考えられたが，死後変化かアニサチンの号

i

f

d

t

に起因した病変であるか，判断が￨示

I

l

j

¥

1iであった. !以来|に使川した~U互のl)Uえび問内容から検出されたJiE J"

_r

の問主を形態的制祭と

PCR

1

1:によって行った.

PCR

1'1.;は家??i保(住 ili;j~I:Jリ「で FI常的に行っている検脊ブ')11;で、あり，ネ

M

史JJIJ

DNAtlllW

キットが市販されていることからも，他物による家系

1 .

l

.

J

i

j':診断の手法として有}!)と考えられた.や

1

，[1'ら[I

o

J

のヰ

'

;

1

告でも，放牧

L

I

二などでさ

=

1 :

.

r

i

の採食行動が不

I

l

j

4

なうえ，消化仕!大jに未消化物が認められず，

1

勾

1

艮的な形状椛認も

1

3;

1

~jjí である場合， 1ì~化管内科物の

PCR

法によるJJi

l

返

l

'

1 i

l(物ぽ食の

n

J

E

l

j

が梢物J.j

.

I

71tのや

i

l

i

W

J

診断

1 *

として有効であるとしている. 壬汁

u

!

P

C

R

σ

の

)

t

樗椋望致:的としたリボボ、ソ一ム

RNA

遺一造

f

荘

E

去

J

子

I

T

S

1

領

j

1

浜J良i J域或の 1呪i瓦:X~込恭L何問配己列は杯納{物において極判特-与主災1 込守引4々，性| 的に分子系統

1

解伴ui1_平

_F

_仰_布_析

₇

_に￨目j月jいし、られている

[

l

リ].今回の遺伝子JiJ!oi析により符られたシキミ

ITS

.

f

i

域指基西日夕

J

I

は，

Techen

ら

[

5 J

の宇

l

i

告と

100%

一致し，

Hao

ら

[

1

2 ]

が

r

t

録している問符

l

主主.l

_t

_l

_{ili~ 配列} ₍_Accession

_No

_.

AF16

3729

)とは見なる配列であった .

Techen

ら

[

5 J

は

Hao

ら [I

2 J

の佼録配列がシキミのものではない可能性を示l唆しており，今回の成績はこれを支持するもの日以会総

6

4

7

9

1 -

7

9

6 (

2

0

1

1) 一一一

7

9

4

一一一

(6)

i可 ì~tJ!j!子伺 BI畠治 j::I"J 尚氏他と考えられた.今後，シキミ

l

民

j

i

l

;

伝子情報のさらなる務積と整理が必要と考えられた. LC/MSによる分析では，シキミの毒成分であるアニサチンが間内容とJfll液から検出され，シキミを採食した発症牛の血液中にアニサチンが移行したことが示唆された.今回は標i争

d

i

l

の純度が未確定であったため定性分析としたことから，

1

2 j

内容とJfll11:_'の

i

E

確なアニサチン含有濃度は不明で、ある. シキミの葉のアニサチン濃度は，鵜飼 [9Jの報十17では碕1守 (0.12 -0.14

%)の

1/9(530 - 620mg/kg)とされ，小林ら [4Jの被告では約500mg/kg(乾物

R

C

f

:

f

k

)

とされる.業の水分~l~は 67% であったので， ~I~ 葉 III のアニサチン濃度は約170mg/kgと.j([;定された. ブ3，

1

5

内科100gあたりの紫

K

w.:量は約0.6gで，死亡よl二の間内谷を50kgとすると，約 300gの葉，つまり 51mgのアニサチン (死亡牛の休重500kgとすると約 O.lmg/kg)を県llKしたことになる . これはマウスの LD50 他 1mg/kg [3J の 1/10，犬の致死量 1 .2 -2mg/kg [9Jの1/20-1/12に相当する.今IITI，円内容1-)"1から検山された栄一の量は，小林ら [4Jの，.)i!ifL-'jに比べても少なかったが，

m

化の促進により肉

1

民的に判別できないまで治

1

かく粉砕されていたことや消化され

f

?

i

l

W

i

化管に移行していたことも考えられた . また，第一円減にi制1"したアニサチンiilーも考慮する必要があり， 1.1ニの致死量については今後の検討課題として残った. 中毒の診断は系統的な手法がなく，原因ごとに診断jーよが黙なることなどから，確定診断に主らず，発生実態が不Ilj:Jな:I'J)j合も多いといわれている.診断の精度及び速度の向

l

二のためには，個々の事例の情報を共有化していくことが主要と考えられる. アニサチン標準品を分」チしていただいた長崎大学薬学部天然物化学研究五河町 J)J教授，ご助言いただいた似合成業・食品 !託業校術総合研究機構動物衛生研究所安全性研究チーム山rl" 典子上席研究員に深謝する. 一一一 795 引用文献 [ 1) Tt:'~I~i j'k，符本亨，利￨羽正美 111長津敏夫賓!削除文，久保正

i

1 ;

，橋谷 '!t-J.:.，徳、久秀一，門間裕一・シキミ，写真でみる家畜の有7UA植物と1'.'袴， 23， IWifiJi

t

技術協会，耳L京 (2000) [2 ]新谷茂，石沢淳子，辻川明子，~I~ 本 1:1:1美子，遠藤容子，磯村千鶴，誌i):l!:!i芯子.出馬智恵子，

r

!11愛7色村l戸シキミ集￨討t/"奇，中毒研究， 5， 95-99(]992) [3 ) 河野信

H

リJ・裕の有毒成分，化学，13， 54-60 (1958) [4 ) 小林弘ゆJ. 久 i~ll干l 若手徳， LlI川

t

W

道， i~l本朋宏， ;1/'111美紀， "IZI11 /l古美，金森久?~7，控::111安JL江

:

m

毛利根繁殖+におけるシキミ仁I] TlJ~， 1:1初、会誌， 56， 15-20(2003) [5] Techen N， Pan

Z

， Scheffler BE， Khan IA : Detection

of IlliciulIlanisatulIlas adulterant of Illiciun! verum，

Planta Med， 75， 392-395 (2009)

[6 J Tamura K，Du11cey J， N ei M， Kumar S : MEGA4 :

Mol-巴cularEvolutionary Genetics Analysis (MEGA) soft

-ware version 4.0.， Mol Bio Evol， 24，1596-1599 (2007)

(7) Lec1巴1巴r!， Schulzki G， Gross J， Steffen JP : Combi

nation of TLC and HPLC-MS/MS methods Approach to a rational quality control of Chinese Star Anise， J Agric Fooc¥ Ch巴m，54， 1970-1974 (2006) [8 ]新谷茂シキミ，

'

t

"

r

;lJi研究， 6， 627 (1993) [9 ]鵜がiJ

!

.

F

シキミ.急性

q

J

ぷ処置の手引， OIJ)日本 II'ilj情 rliセンター編，第三日I!j， 568-569，似lじほう，東京 (1999) [10J布￨!?!7 武，小絞利!il:(， I; iji;11i知l悲， :t>'川I .TE : PCR法をJtJ いた

i

'

i

化管内容物からのワラビ遺伝子の検iJL Flj扶会誌， 62， 457-459 (2009)

[l1]Alvarez 1， Wenclel JF : Ribosomal ITS s巴quencesancl

plant phylogenetic inference， Mol Phylogenet Evol， 29， 417-434 (2003) [12J Hao G， Saunclers RMK， Chye ML : A phylogenetic analysis of theIlliciaceae basecl on sequences of internal transcribecl spacers(ITS) of nuclear riboso -mal DNA， Plant Syst Evol， 223， 81-90 (2000) 日獄会 ~.L; 64 791~ 796 (2011)

(7)

)I手!iMI/~MtM ， PCR， LC/MSによるよ￨ユシキミrrl'jjjの診￨祈

Diagnosis of

J

apanese Star Anise

(

I

llicium仰zisatum

L

.

)

Poisoning in a Holstein Heifer by Morphological Observation， PCR Methocl ancl LC/MS Analysis

Satoko KAWAZU叶，Masaharu FUKUDA， Naoki DOMON， Mamoru MOTEG1 ancl Yuichi KADOTA

*

Saitama Prefectural Chuo Livestock Hygiene Service Center， 107-1 Besshocho， Kita-ku， Saitama-shi， 331-0821， Japan

SUMMARY

1n September 2009， two of four Holstein heifers in a farm in Saitama Prefecture showecl astasia ancl convul -sions， ancl one

1 c

ied. Two days earlier， the owner of the farm hacl proviclecl new beclcling for the heifers by cut

-ting branches from trees near the paclclock. Partially digestecl leaves were founcl in the rumen of the

1 c

eacl heifer， ancl were iclentifiecl as ]apanese star anise (Illicium anisatum L.)by morphological observation， the PCR-RFLP methocl， ancl phylogenetic analysis. Anisatin， the toxic compouncl naturally occurring in ]apanese sta1'anise， was also

1 c

etectecl in the ruminal content ancl se1'um by liquicl ch1'omatog1'aphy-mass spectromet1'y

(LC/MS). On the basis of these finclings， the

1 c

eath of the heife1'was

c

1

ete1'minecl to be a 1'esult of

J

apanese sta1'

anise poisoning. A combination of mo1'phological， genetic， ancl chemical methocls is available fo1'

c

1

iagnosis of

plant poisoning.一一-Key worcls : Illicium anisatum L.，LC/MS， PCR-RFLP

Correspolldence to・SatolwKA WAZU (Saitama Prefectural Chuo Livestocll Hygiene Service Cel1ter)

107-1 Besshocho， Kita-lw， Saitama-shi， 331-0821， Japan

TEL 048-663-3071 FAX 048-666-8731 Eサnail:[email protected]

]. Jpn. Vet. Med. Assoc.， 64， 791 ~796 (2011)

形態的観察， PCR法及びLC/MS分析による育成牛シキミ中毒の診断

形態的観察、PCR法及びLC／MS分析による育成牛シキミ中

毒の診断

誌名

誌名

日本獣医師会雑誌 = Journal of the Japan Veterinary Medical Association

ISSN

ISSN

04466454

著者

著者

河津, 理子

福田, 昌冶

土門, 尚貴

茂木, 守

門田, 裕一

巻/号

巻/号

64巻10号

掲載ページ

掲載ページ

p. 791-796

発行年月

発行年月

2011年10月

￨ 短 報 ￨

形 態 的 観 察 ，

PCR

法 及 び

LC/MS

分 析 に よ る

育 成 牛 シ キ ミ 中 毒 の 診 断

m

n

l

J

l

子

福田昌治 1

I

l

'

門尚

買

門田裕一

1

1

3

3

1

0

8

2

1

T

l

i

I

I

I

T

l

0

7

-l

)

2

)

i

350

-

0837

i

l

'

i

1

1

1

5

￨短報￨

形態的観察，

法及び

分析による

育成牛シキミ中毒の診断