凝集素抗体動員素の産生とその作用（Ⅰ）

（平目i曙町薩（鉾￥召皐言 ぎ葦 菱套 ≡｝：8 言）

凝集素抗体動員素の産生ごその作用（1）

大阪学芸大学衛生学研究室（指導 榊原栄一） 松 マツ 山 ヤマ 和 カズ

子

コ

（受付昭和33年8月6日）

著者らの研究室においては凝集素や沈降素抗体 の血流中移行に神経性調節1，の存在することと， これが作用を通して肝臓より一一種のホルモン様物 質2♪5）が産生きれ，血流巾に出現して抗体の急増 作用を司ることを立証している。すなわち前者は 侵入抗原の刺戟を頸動脈毬5・）が感受し，その刺戟 興奮は上行性線維を経て間1脳の自律神経中枢のb 交感帯（交感神経中枢4） 5））に伝達興奮を起す。そ の結果肝臓より凝集素急増物質の動員素が産生せ られ，抗体を血流中に動員急増するものである。 一方著者らは正一アスコルビン酸，塩化第一鉄， システインなどのような所謂生体内還元系に属す る物質によってあたかも動員素のような凝集素抗 体の急増作用を認めた6） 7〕。このことは産生され ている抗体の血流中移行に極めて複：雑な関係の存 在することが想定できるのである。そこで著者は まつ動員素の特性探究の手掛りをうる一門段とし て一抗原の感作により生じた動員素は他の異種抗 原を用いて免疫した動物の獲得抗俗を動員する性 質があるか：否か，すなわちその非特異性の存在を 明かにせんと試みた。今一つは動員素は正常ウサ ギにおいては抗原侵入後2∼3時間目血清に最も 多量に含有されていることが朗かであり，頸動脈 毬捌出ウサギではその時令に動員素の産生が確認 せられないところがら，頸動脈毬捌出ウサギにお いては，もしか遅発するものではないかという点 に疑問を抱いて実験した結果，前者では異種抗原 による動員素の産生と抗体の動員性における交叉 性を，後者では数時間の遅発現i象を認めることが できたのでここに発表する。 （1）ジフテリア毒素の製法 尾崎氏の改良P．LO培地8）を用い，これに型のご

とく，Corynebacterium diphtheriae P． W． No， 8

Toront Harvard株を接種，34nu35。Cで7臼問静置 培養しジフテリア菌純培養であることを確認した後， その濾液を粗毒素液とした。さらにこれをJacobs氏 の方法に応用して可及的精製純化した。このジフテリ ア毒素（以下D毒素と略称）はしf ・・57n一’78／ml， Kf＝ 8t， Mエエ）．＝2×10’4ml，体重20±1． OgのNA2♂マ ウスに対するLD50コ1．8×1⑪一’imlであった。 2509のモルモットに対してはM．L．D．＝・3×10弓皿1 本実験には3009前後のモルモットに対し1×10”3ml を用いて後脚静脈に注干した。 （2）赤痢外毒素の製法 志賀1型菌より村田氏の方法10）でNeuroloxinを抽 出して用いた。この毒素のウサギに対する致死量は ・…一3ml／・・であっ・・ので・の一 P一一量・一回の酬 量として用いた。 〔8）破傷風毒素 ブイヨン培養濾液を細谷，窟田図法1りにより可及的 精製して用いた。マウスに対するM．L． D．は0．5× 10−3ml／kgであった。本実験においては0．2x10−L’m l を2∼2．5kgのウサギの一一回量として用いた。

案 験 成績

1．正常モルモットのD毒素侵襲による凝集素 動員物質の血中出現 （ユ）D毒素1×10−3ml／0．5nnlとし，そのO． 5mI を300g前後の正常モルモットの左後脚静脈内に 注射し，1，2，3，5，6時間毎に採血し，血溝を分離 非動化した後，この血清を1m1／kgの割合に腸チ フスワクチン（以下T．Vと略称）免疫を施した ウサギの耳静脈に注射して，ユ5，30，60，ユ20分

毎に採血し，T．Vに対する凝集反応を実施し

Kazuko MATSUYAMA． （Hygienic Laboratory of the Osaka University of the Liberal Arts and

Education）：On the production of “promoting factor” of agglutinin antibody and its action． （1）

．表 1 ジフテyア毒素を応用した場合

＼響

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血清※ 検査時聞 第1回感作モ7レモツ油藩 の作用

T．V免疫ウサギ

嘱引・513・’圃・憂・i． 舞牙面感作モル宅ツb五浩 の作用

T．V免疫ウサギ

前1・5r」・・r6・’・2・ 第2’ _{感作モルモット血清} の作用 T．V．免疫頸動脈毬別出ウ サギ E’ii’_{Ppm，130，［ior’Titll16201} 前 1

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表2 赤痢1型外毒素を応用した場合

ウ番 サ ギ号

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6 一一一

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第1回感作ウナギ血清の作用

第2回感作ウナギ血清の作用

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表の成績は腸チフスワチンによる凝集反応

表3 破傷風毒素を応用した場合

「薄歯「鶏．「冨亜感作ウサギ血清の作用＿第・画轡！遊細細亙ニ

ギ号1鯛前｝・5引・・引・・引・2・・前｝・5■・・■・・11・2・・

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1・例32・・い4・・i・…い28・・164・・［32・・〔64・・i・28・・1・28・・「・28・・ ロ コ の ヒ 表の丁壮は腸チフスワクチンによる凝集反応 48時闇経過してから再び同量の毒素を注射した 観合，それぞれ2時丁目に心臓穿刺により揉治 し，皿L清を分離した後，非動化して，これを1．O ml／kgの割合にT．V活動免疫ウサギに静注して 15，30，60，120分毎に採血してT．Vに対する凝集 反応を実施した。その成績は表3のごとくであっ た。 4． 頸動脈毬劉出ウサギの赤痢外毒素，破傷風

表 4

毒素侵襲による凝集素動員物質の出現 赤痢外毒素並に破傷風丁丁の前条記載量をT．V で免疫した後頸動脈毬を別出したウサギに静注 し，各2時間後の．［紅清を分離非動化した後1，0 ml／kgの割合にTV活動免疫ウサギに静注して， 15ノ，30t，60i，120分ごとに採血して， T．Vに対す るこれら血清の凝集反応を実施した。その成績は 表4のごとく凝集価の上昇は認められなかった。 頸捌ウサギにおける赤痢，破奪取毒素の場合

ウ番1血条】

サ ギ号 清件

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赤痢外毒素第1回注射例

前1・51．1．七生60’12・「

破傷風毒素第1回注斜子

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5．動員物質の産生に及ぼす頸動脈毬の意義 前条に記載したごとく正常ウサギの頸動脈毬を 叩出したウサギに抗原を静注した群籍の2時間目 の血清にはT．Vに対する凝集素抗体の動員作用 は認められなかった。この現象は動員物質の産生 が全く起らないのか，あるいは時聞的に遅発する ものであるのかいつれかである。この点を究明せ んがため次の実験を行つアこ。すなわち，正常ウサ ギの頸動脈毬を捌出し，これにT．Vを0．5m正／kg の割合に静注し，注射後4，6，8，エ0，12時聞に採 血して」血清を：分離i非働化し，各時間毎の」血清をT ．Vの活動免疫ウサギlc 1．0 rll／k9つっ注射して， その前後（前後エ5t，30「，60’，120’）の凝集反応を 実施した。その成績は表5並に図1に示した通り である。

表5 頸劉ウサギに抗原注射」血清の効果

時間血清 4 ＼ウサギ 1

＼季号、6、7、8

前132・・132・・164・・ 6 ’ 19 1 20 i 21 8 22 1x＊（ 13 23 X． 9 10

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l」一“WVU［ S“UVVI JL“UVVI 一L“UVvl FL“uvv［ “uwvi u一＝vvl I 表中※印は前条実験に使用した免疫ウサギを7日間の後再び使用したウサギを示した。 12goo一 6卿＼ ．n’一．一’『’一一哨’需胸一＝7 ノ！ ．，・・〆 一t一”一t−’ ”’一t”’一

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twv rイノ一一 40鋤 ζβノ…一一一一・・一 6時面 1600． goo ・ 40v・ teo 一 1ダ 30ノ 60 ／￡c ， 図 1 備考：正常ウサギの頸動脈毬刎出後T．V注射による時閥毎血清の・凝集素抗体動員物質の 出現状況………T．V注射後ABCDの各時聞心臓穿刺により採血してその血清を T．マ免疫ウキギに！．Occ／kgの割合に静注して凝集素価を測定した。 総括並に考察 以上の実験成績により正常モルモットにジフテ リア毒素，正常ウサギに赤痢1型菌外毒素あるいは 破傷風毒素を静注すれば早期に凝集素抗体の動員 素三瀬且流中に証明されアこ。すなわちこれらモルモ ットやウサギの2時聞済血清をT．V活動免疫ウ サギに1．Oml／kgの割合に静注すれば直ちに血流 功凝集素抗体は増加し，1時聞乃至2時間にして 4倍乃至8倍の値を示した。また各毒素を注射し たモルモットやウサギに3日後再び同量の毒素を それぞれ注射した場合の2時聞ド師1浩は前者に比 してさらに一一・層著明な急増脅1用を発揮した。この 現象は吉田21によるウサギのT．V感作過程の実験 成績によく一致して興味深い。ところが氏はT．V 一 74・8 一

注射後のウサギ血清中にT，V活動免疫ウサギの 凝集素抗体の急増を証明したのである。前記の実 験において最初の抗原はT．v以外のジフテリア 毒素，赤痢外毒素及び破傷風毒素のようなT．V以 外の抗原をもつて，しかもT．V活動免疫ウサギの 凝集素抗体を末棺血中に動員することを確認した ものである。この現象は極めて重要な興味あるこ とであると思う。すなわち ’‘鼈鼈鼈鼈?is S， T 一一一一一一一一一一一一一？

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／f ’T！ormai 5eTUM 抗原注射2時間後血清 て．》

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＞ ± 図 2 註 T．Vは腸チフスワクチン D。Tはジフテリア毒素 痢毒素 丁。Tは破傷風毒素を指す S．Tは赤 抗原注射2時聞後血清 A一一…認動賭

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β一一一う勃舅素一 抗休 抗原抗体反応（急増） A ’一…一→細乙＿一 C4 一一 9X ，4Aノノ ノ ノ 8一・一一一一一．→SB……一一（4−8〆BB少 図 3 註抗休A’とは抗原Aで感作した活動免疫ウサギの特異抗体 を指す。抗体Btとは抗原Bで感作した特異抗体を指す。 ※ 動員素とは抗原注射後2時間巨の末携血流中に含有される もので抗原の異ることにより動員素が異ると仮定してA．B なる名称を附した。 ある種の抗原の侵襲に対して生体内に産生される 凝集素抗体の動員素は全く抗原の異なる免疫抗体 を動員急増することは本動員素の非特異性を示す ものである。 つぎにこのように抗原侵襲直後産生される動員 素も，頸動脈毬捌出ウサギの観合には前記抗原を 静注するも2時間目血清中には認められなかっ た。ところが抗原侵襲6時三二に漸く認められ， 8∼10時閥の血清において正常ウサギにおける2 ∼3時間酌笠清とほぼ同程度の動員効果を認める ことができた。頸動脈毬を劉出したウサギは正常 ウサギに比し，5時間前後遅延したことになる。 この現象は抗原侵襲の感知臓器としての頸動脈毬 の意義の重要性を示すもので生休の適応反応機序 の上から極めて：重要な現象と考えられる。 結 論 以上の実験成績から次のごとく結論する。 ．1． ジフテリア毒素（1×亙0 m 3m−1／1モルモット）を 250g前後のモルモットに静・注したる後，2時 間1緬t清並びに第1回感作後3日目同量の毒素 を注射した後，2時闇後llil．清をT．V活動免疫ウ サギに1ml／kgの割合に静注すればT．Vの凝集 素抗体を急増し，1∼2時間後には注射前の4 ∼8倍値を示した。 2．赤痢外毒素並に破傷風毒素を正常ウサギに静 注し，2時闇後の血清は前項同様T．V活動免 疫ウサギの凝集素抗体を4∼8倍に急増動員し た。 3・1．2項にみるごとくT．V活動免疫ウサギの凝 集素抗体の動員素の産生に異種抗原差は認めら れなかった。 4． モルモット血清中に含まれる動員素もT．V 活動免疫ウサギの凝集素抗体の動員作用を呈し た。

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5．頸動脈毬別出ウサギの抗原侵襲2時問目血清 中には動員素は全く認められなかった。 6．正常ウサギに比し頸動脈毬捌出ウサギの抗原 侵襲による凝集素抗体の産生能（血流移行）は 5∼7時間遅延された。 これらの現象から頸動脈毬は生体の適応反応に とって極めて：重要な役割を演ずるものであると考 えられる。 掴筆に当り恩師榊原栄一先生の御指遵御校閲を深謝 いたします。なお教室同人上林助手，前田，寛紀君 の御支援を深謝する。 女 献 1）榊原栄繭：第4回細菌毒素シンポジアム発表・ （1957， 8） 2）吉田貞一：日本細菌学雑誌，13，7（1958） 3）蓋谷 茂：日：本細菌学雑誌，12，769（1957） 4）黒津敏行：脳研究，苫，39（1949） 5）榊原栄一，神田隆吉；第31回日本細菌学会総会 発表 （1958， 4） 6）蓬 隆夫：日本細菌学雑誌，10，1035（1955） 7）高田 親：日本細菌学雑誌投稿中 8）尾崎彌之助：大阪女医学雑誌1，4（1951）

9） Jac6bs， M．B． et al．：J． Pharmacol．， 40， 488

（1952）

10）村田良介：日本細菌学雑誌，5，279（1950） 11）伝研編：細菌学実習提要，丸善書店（1953）