組織培養法によるチューリップ球根の増殖に関する研究
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(2) . 北海道教育大学紀要 （第２部Ｂ） 第３ ３巻 第１号 ｌｏｆＨｏｋｋａ ｉ ｉ Ｊｏｕｒ ｄｏ Ｕｎ ｉ ｔ ｉ ｉ ｎａ ｒ ｔ ｌ ｖｅ ｓ ＩＢ）Ｖｏ ｏｎ（Ｓｅ ｃ ｏｎｌ ｙｏｆＥｄｕｃａｔ ．３３ ．Ｉ ，Ｎｏ. 昭和５７年９月 Ｓｅｐ ｔ ９８ ２ ｅｍｂｅ ｒ ，１. 組織 培養法によるチュ ーリ ッ プ球根の増 殖に関する研究＊. 西. 内. 義. 男. 北海道教育大学旭川分校農学研究室. Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ル ーｕ１ ｉｐ１ ｉ ｉｏｎ 。ｆ Ｔｕ１ ｔ ｉｐ Ｂｕ１ｂ ｂｙ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ ルーｅｔｈ。ｄ ｃａｔ Ｙｏｓｈｉｏ ＮＩＳＨＩＵＣＨＩ Ａｇｒ ｉ ｌ ＩＬａｂｏｒａｔｏｒｙ ｔｕｒａ ｌ ｌ ｃｕ ｉ ｄｏ Ｕｎ ｉｖｅｒｓ ｉ ｅｇｅ ｔｙ ｏｆＥｄｕｃａｔ ｉ ｏｎ ，Ａｓａｈｉｋａｗａ Ｃｏ ，Ｈｏｋｋａ ， Ａｓａｈ ｉｋａｗａ０７０. ｓｕ ｕｍｍａｒｙ Ａｔｐｒｅｓｅｎｔｈａｒｄｌｙ ａｎｙｔｈｉｎｇｉ ｓｋｎｏｗｎ ａｂｏｕｔｔｈｅｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓｏｆｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎｏｆｔｕｌ ｉｐｓｐｅｃｌｅｓ. ｉｎ ｖｉ ｔｒｏ ｉｇａｔ ｉｏｎ ａｉ ｉ ｔａｂｌ ｒ ・ ｌ ｓｔｏ ｅ ｓ ｓｈ ａ ｎｅｗ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｔｈｅ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｏｆ ． Ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｖｅｓｔ ｉ ｔｈｅｔｕｌ ｂ ｌ ｂ ｂ ｉ ｌ ｆ ｔ ｉ ｂｓ ｄｅｒ ｉ ｐ ｕ ｙ ｍｅａｎｓｏ ｓｓｕｅ ｃｕｔｕｒｅ． Ｔｈｅ Ｅｘｃ ｆ ｓｅｄ ｓｃａｌｅｓ ｏｆｂｕｌ ｖｅｄ′ ｒｏｍ ｅｌｅｖｅｎ. ｔＡ ｌｄ ’ｔ ’ ｔＤｅｆ ’ ｔＦｕ ’ ｉａ ｌｖａｒｉｅｔｉｅｓｉ ℃ ｃｏｍｍｅｒｃ ｉ Ｂｒｉ ｌ ｌ ｉａｎｔ ｉａｈｃｅ ｐｅ ｏｏｒｎ， ｃｅｓａｒ Ｆｒａｎｋ’ ［ 「 ーｏｉ ｓ ．ｅ ． ， ｇａ， ， ｒａｎ ， ， ｔＲｅｄ Ｅｍｐｅｒｏｒ，てＲｅｄ Ｂｉ ， ｔ ， て ’ ｔ ’ く ，ａｎｄ ｉ １ｏｔ ｔｅ ｔ， Ｒｅｄルーａｔａｄｏｒ， Ｐｕｒ ｒｄ， ルーｏｎｓ ｉ ｅｕｒｓ． Ｖ １ １ ｉ ｔ ｔ ｓｓｍａ， ｖｖｉ ａｍ Ｐｉ ， ｔ ｉｘ ｂｏ ’ ｌｓｐｅｃｉｅｓ，ｎａｍｅｌｙ， Ｔｕｌ ｉｐａ ｅｉ ｔａｎｉ Ｔ ｈ ｉ ｓ ｃａ Ｔ ｃｈｒｅｉ ｒ ， ． ａｇｅｒ， Ｔ．ｐｒａｅｓｔａｎｓ ， ．ｔｕｂｅｒｇｅｎ・ａｎａ Ｅｍｉ. ， Ｔ．ｓｙｌｖｅｓｔｒｉ ｉ ｔｕｒｅｄ ｏｎｓｙｎｔｈｅｔ ｉ ｓａｎｄ Ｔ．ｕｒ ｌｎｉｅｎｓ ｓ ｗｅｒｅｃｕｌ ｃ ｍｅｄｉａ ｆｏｒｔｈｅ ｐｕｒｐｏｓｅｏｆｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ. ｔｈｅ ｍｏｓ ｔｆａｖｏｕｒａｂｌ ｉ ｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒｔｈｅ ｒ ｏｒｇａｎ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．. ｔＲ ｄ Ｅｍ ’ｔ ｌｕｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｏｆｃｕｌ Ｃａｌ ｔｕｒｅｄ ｓｃａｌｅｓ ｏｂｔａ ｉｎｅｄｆ ｒｏｍ ｔＡｐｅｌｄｏｏｒｎ’ ｐｅｒｏｒ， Ｒｅｄ ， ｅ ’ｔＤｅｆｉａｎｃｅ’ａｎｄ１ ｒａｅｓｔａｎｓ ｗｅｒｅｓ ｏｎｔ △ｄａｔａｄｏｒ ｌｙｉ ａｎｅｏｕｓ ｆ ｉ ｌｕｒａｓｈｉｇｅ ｐ ｎｄｕｃｅｄｏｎｔｈｅｎ ｃ ｌ ．ｐ ｏｄｉ ｅｄ ｙ ‐ ， Ｓｋｏｏｇ ｍｅｄ ｉ ｔｈ α‐ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ‐ａｃｅｔｉｃ ａｃ ｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉ ｉｄ （ＮＡＡ） ｏｒ ２ ４ ｄ ｉ ｈ ｌ ｈ ー ｃ ｎ ｏｒｏｐ ｅ ｏ ‐ ， ｉｃａｃ ｉｄ（ ’ａｎｄ ２ ４ ｘｙａｃｅｔ ｉａｔｅｃｏｎｃｅｎｔ ‐Ｄ）ａｔｅａｃｈａｐｐｒｏｐｒ ｉｏｎ ｌ ｌ ｌ ｉａｍ Ｐｉ ｒａｔ ｔ ｔ ｅｓｏｆｔＷｉ ， ，ｗｈｅｒｅａｓｔｈｅｓｃａ ｔＣｒ ’ｆａｉ ｉ ｌ ｌ ｉ ｌ ｔ ａｍｏｉ ｓｉ Ｂｒ ｌ ｌ ａｎ ｅｄｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ｃａ ｕｓ ｕｎｄｅｒ ａｎｙ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．. １）. Ｗｉ ｔｈ ｒｅｇａｒｄ ｔｏ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ ｏｎ ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｓｃａｌｅｓ ． ｈ ，ｔ ｅ ｓｃａｌｅ ｔ ’ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｏｎｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ｉ ｔ ｆ Ａｐｅ ｌｄｏｏｒｎ ｓｓｕｅｓｏ ｉｎｉ ｉ ｔｈｅｒ ＮＡＡ ５ｍｇ／２ ｐ ｌｕｓｋｉ ｃｏｎｔａ ｎｇｅ ｔ ｎｅｉ ｎｌｍｇ／ ｌ ４ Ｄ１ ゑ ｏｒ２ ｋ ｉ ｉｎ１ｍｇ／ａ ｗｅｒｅｃａｐａｂｌ ｔ ｍｇ／ｇ ｐ ｕｓ ｎｅ ｉｎｇｔｈｅ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓｂｕｄｓ ｅｏｆｐｒｏｄｕｃ ，‐ ・ １ｎｔｈｅ ｆＴ，ｈａｇｅｒ ｉ ｈ ｄ ｔ ｉ Ｃａｓｅｏ ｉ ｂ ｄ ｔ ｔ ｆ ｄ ｈ ｉ ｅａ ｎ ｔ ｄ ｖ ｅ ｕ ｉ ｈ ｏ ｓ ｕ ＮＡＡ２ ｓｗ ｅ ｒ ｅ ｏ ｒ ｔ ｌ ｏ ｍｅ ｏｎ ｅ ｍｅ ｍ ｗ ， ， ａｎｄ２５ｍｇ／ ２）. ゑ，ｅａｃｈ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉ ｔｈ１ｍｇ〃 ｋｉｎｅｔ ｉｎ．. ｏｎｔｈｅｏｔｈｅｒｈａｎｄ ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔ ｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｍｂｉｎａ－ ，. ｉｏｎｏｆＩＡＡ， ＮＡＡ，ｉｎｄｏｌ ｔ ｉ ｉ ｄ（ ＩＢＡ） ｉｏｎ ｉ ｉ ｄ（ ｅｂｕｔｙｒ ＩＰＡ） ｃａｃ ４ ｅｐｒｏｐ ｃａｃ ‐Ｄ ａｎｄ ｃｙｔｏｋｉｎｉｎｓ ，ｉｎｄｏｌ ，２ ， ｉ ｄ ｉ ｈ ｔｈ ｏｔ ｅｒ ｎｇｒｅ ｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｕｌ ｔｕｒｅ ｍｅｄｉａ Ｗｅｒｅ ｍｏｄｉ ｆ ｉｅｄ ｔｏ ｄｉ Ｗｉ ｉｖｅ ｓｃｏＶｅｒ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｅｆｆｅｃｔ ＊北海道大学審査学位論文の一部である ４ ９ ） （.
(3) . ５０. 西. ．. 内. 義 ・ 男. ｉｏｎｏｆｔＲｅｄ ＥｍＰｅｒｏｒ’ｏｒ ｉ ｉｏｕｓｂｕｄｆｏｒｍａｔ ｔ ｉｎｇｉｎｇ ａｂｏｕｔｔｈｅａｄＶｅｎｔ ｉｏｎｓ ｏ ｉａｆｏｒｂｒ ｆ ｍｅｄ ｔ ＣｏｍＰｏｓｉ. ’ ｔＲｅｄＤｄａｔａｄｏｒ ． ｌ ｔｕｒｅｄ ｗａｓＣ１ｏｓｅｌｙ ａｓｓｏｃｉａ‐ ｉａｔ ｉｏｎｏｆａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓｂｕｄｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｓｃａｌｅｓＣｕ ｉ Ｔｈｅｉｎ ｔ ３） ｉａｔｅ ｂｕｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｕｎ１ｅｓｓ １ ｔ ｂｓ ］ ゴ ー ｒｅｓ ｆ ｅｄ ｔｏ ｉｎｉ ａｉ ｔｅｄ ｗｉ ｔｈｔｈｅ ａｇｅ ｏｆｔｈｅ ｍｏｔｈｅｒ ｂｕ１ ． Ｔｈｅ Ｃｕ１ｔｔ ｉｏｎｓｗｅｒｅ ｉ ｈｔｈｅｏｔｈｅｒｃｏｎｄ ｔ ｂｓ ｔａｂｌ ｔｕｒｅｄ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｗｅ ｒｏｍ ｓｕｉ ｒｅｔａｋｅｎｆ ｙ ａｇｅｄｂｕｌ Ｃｕｌ ，ｅｖｅｎｔｈｏｕｇ ’ ｛ ｉ ｂｌｅｔ ｉｍｅｓ ｈ ｔ ｉ ｔ ｈ ｔ １ ｕ ａ ｍｏ ｓ ｓ ｆ ｄハ ４ ｒ ｅ ｅ ｌ ｄ ｒ ｗｅ Ａ ａ ｅ ｔｆｏｒ ｐｅ ｏｏｎｎ ａｎ ａｙ ｏｒ ． ｇ ｆａｖｏｕｒａｂｌ ｔ ｅｆｏｒｉ ． Ａｕｇｕｓ ｂ ｓｃａｌｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ． ｉ ｆｏｒｓａｍＰ１ ｎｇ ｅａｃｈ ｂｕｌ ｌｔｅ・ ｔｕｒａ ］ ［ ・Ｐｅｒａｔｕｒｅ ｌｙａｆ ｆｅｃｔｅｄｂｙｔｈｅＣｕｌ ｉｏｎｗａｓｍａｒｋｅｄ ｉａｔ ｉｏｎｏｆｔｈｅｂｕｄｆｏｒｍａｔ ４ ． Ａｎ ｔ ） ｌｎｉ. ｉｎＰ１ ｔ ｕｓ ｔｕｒｅｄｉｎｔｈｅＰｒｅｓｅｎｃｅｏｆ．ｍｇ／ａ ｋｉｎｅ ｉｍａｌｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｆｏｒｔｈｅｂｕｄｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｗｈｅｎｃｕｌ ｏｐｔ ｈ ｂ ｆ２ ４ Ｄ ｆ ｆ ｔ ｌ ｉ ｎ ６ ｉ ｔ ｈ ｔ ｏ ｕ ｔ ｍｕａ ｖｅｅ ｅｃ ｏ ，‐ ｅ ｄ ｔｕｒｅｄ ａｔ１５℃，ｔ ｅｓ ２３℃． ＷｈｅｎＣｕｌ ４ ．ｍｇ起 ２ ‐Ｄ ｗａｓ２ ‐ ， ｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｔｏ ２ｍｇ起． ｔ ｉ ｆ ｉ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｗａｓｉ ｎｅ ｎｔｅｎｓ ｅｄｂｙ ｒａｓｉｎｇｔｈｅ ｋｉ. ｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｏｆｔｈｅ ｉ ｉ ｂｌ ｌ ｔ ｗａｓ ｐｏｓｓ ｎｇ ａｂｏｕｔ ａ ｍａｒｋｅｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎｔｈｅ ｂｕｄｆｏｒｍａｔ ｅｔｏ ｂｒ ２ ｗｅｅｋｓ ３５℃ ｆｏｒ ｌ ‐ ‐ ｂｓ ｗｅｒｅ ｓｕｂ ｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ａ Ｃｕｒｅ ａｔ ３０ ｔｕｒｅｄ ｓｃａｌｅ ｓｅｇｍｅｎｔ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｂｕｌ Ｃｕｌ ｉ ｉ ｌ ｆｔ ｈ ｔ ｈ ｔｅｄｉｎ ａ ｏｗｅｒ ｎｇ ｏ ｅｒａ ｏ ｕｎｌｅｓｓ ｉ ｆ ｉ ｔ ｉ ｌｙ ａｆｔｅｒｌ ｓｒｅｓｕｌ ｉｍｍｅｄ ｎｇ ａｔｅ ，ｔｈｉ ． ｏｎｔｈｅ ｏｔ ｅｒ ｈａｎｄ ５）. ｆｏｒｅＣｕｌｔｕｒｅｓｔａｒｔｅｄ． Ｔｈｅｎｅｃｅｓｓｉｔｙｆｏｒ ｐｒｉｏｒ ｆ ｒｅｓｈｌｙ ｈａｒｖｅｓｔｅｄ ｂｕｌｂｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｂｙ ｃｕｒｉｎｇ ｂｅ ｉｎｇ ｔｏｉ ｉａｔｅｔｈｅｂｕｄｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆｔｈｅＣｕｌｔｕｒｅｄ ｓｃａｌｅｓｓｅｅｍｓｔｈｅｒｅｆｏｒｅｔｏ ｂｅｕｍｍｉｓｔａｋａｂｌｅ． ｔ コ ｒ Ｃｕ ｎｉ. 緒. 言. 球根繁殖は球根 生産上， 重要な問題であり， 繁殖能率を高めるために 多くの研究が行われてきた． 球根生産の効率の向 上には人為的な増殖方法として， ヒヤシンスではノッ チングやスクーピン グな. ） ９７２ ７３ どの増殖法が実用化 し， シクラメン では塊茎分割（中山昌明， １ ， ダリア， グロキシニア ， １９ ） ９４９ ） ８ では芽 ざしや葉 ざし （藤井利重， １９６ ， アマ ， 田村輝夫， １ ， ユリ （運完， 松下恵美子， １９７３ ざし（藤 リン片 ヒヤシンスなどでは ） ６４ ６４ リリス（藤岡作太郎， １９ ， スイセン，， ， １９ ， 坂西義洋， １９６２ ） が試みられ， このうちダリア （芽 ざし） 井利重， １９６ ８ ， アマリリス （芽つき ， ユリ （リン片 ざし） 技術の進歩に伴 ってシクラメ リン片 ざし） などでは既に実用化さ れている． また最近 では組織培養. １９７３ ）， ア マ リ リ ス ｉｋ，１９７１ ｌ ｉ ｉ ）， ヒ ヤ シ ン ス （Ｐｉ ｅｒ ン （Ｇｅ ｃｈｅ ｅｒｌ９７７ ， １９７８ ， ，田 村 親， １９７１ ，１９５９ ，Ｓｔ Ｍ ｌ ｌ ｉ ｉ Ｒ ９７９ プ ） （ ｖｅｒｅ ）， チ ュ ー リ ッ ）， スイ セ ン （細 木 高 志， 浅平 端， １９７６ （Ｍｉ ｊ ， ｕ ｅｒｌ ， など ，１９７４. で組織培養が試みられてし るが， 実用化には至づていない． チューリッ プでは球根の人為 的増殖が困難であり， これまでは播種から開花に至るまでの期間短 Ｓｔ ｉｍａ ｔ ） 縮に関する研究（ ｃｈｅ ｒ ｒ ，１９７８ ， 球根貯蔵中の高 温処理による球根増殖率の増大に関する ，Ａｓ. ８ ） などが行われているが， リン片繁殖などの増殖法はまだ 研究 （豊田篤治， 西井謙治， １９５７ ， １９５ 成功をみていない． 従って短期間で大量増殖の 可能な方法が確立されれば， チューリッ プの球根生. 産技術面に寄与する ことが大であると思われる． このような観 点からチュ ーリッフモ求根のリン片の組織培養を試み， カルスや不定根， 不定芽を誘 起し， さらに， この不定芽からの球根形成に必要な諸条件を検討した． 本研究を遂行するにあたり， 北海道大学名誉教授明道博博士ならびに同大学農学部教授岡浬養三 博士には終始 ご指導とご鞭達を賜わった． また恩師北海道大学名誉教授田川隆博士より日頃たえ ざ るご鞭達を賜 わっ た． これらのご厚情に対し衷心より深謝の意を表するものである．. ） （ ５０.
(4) . 組織培養法によるチューリッフ１求根の増殖. （１）. ５１. チ ュ ー リ ッ プ の リ ン片 培 養 に お け るカ ル ス 形 成. 実験材料およ び方法 ｌｓｐｅｃｉｅｓ か ら 任 意 に 選 択 し て 供 試 し た。 す ｉ ｔａｎ 本実験の材料は園芸品種の種々の系統およびｂｏ ｃａ ｔ ’ ’ Ｋａｕｆｍａ ｌ ｉ ｉＢｒ ｉ ｌ ｌ ｉａｎｔ， Ｍｅｎｄｅ ｌ系 統 の 品種 ではｔＦｕｇａ なわち Ｓｉｎｇｌｅ Ｅａｒ ｓ ‐ ｙ 系 統 の 品種 では Ｃｒａｍｏ ，. ’ ｔＲｅｄ Ｍ ａｔａｄｏｒ’ Ｄａｒ‐ Ｄ ｉ ｉ ｄ 系 統 ではｔＣ６ｓａｒ Ｆｒａｎｋ’ ｉ ｌｄｏｏｒｎ ｎｉａｎａ ｈｙｂｒ ｒｄ 系 統 で は（Ａｐｅ ， ａｒｗ ｎ ｈｙｂ ， ，. ’ Ｃｏｔ ’ Ｆｏｓ ｌ ｌ ｉａｍ Ｐｉ ｉ ｉａｎａ ｈｙｂｒ ｉｄ 系 統 では ｔ ｔ ｔａｇｅ 系 統 ではｔＭｏｎｓ ｔｅ ｔ ｔｅｒ ｗｉｎ 系 統 ではｔＷｉ ｅｕｒ Ｓ ． Ｍｏｔ ， ， ｔＲｅｄ Ｂｉ ’ て ’ ’ ｔ て ’ ｄ Ｒ ｄ Ｅ ｉ Ｐ ｉ ｉ ｉ ｌ ｓｐｅｃ ｉ ｌ ｉ ｒ， ｅ ｍｐｅｒｏｒ， Ｄｅｆａｎｃｅ， ｕｒｓｓ ｍａ を， ま た ｂｏｔａｎ ｃａ ｅｓ か ら は Ｔｕ ｐａ ｔＥｍｉ ’ Ｔ ｕｒｍｉｅｎｓ ｌ Ｔ ｉ Ｔ ｂ ｉ ｉ ｉ ｉ Ｔ ｈ ｉ ｔ ｔ Ｔ ｔ ｒ ａ ｅ ｓ ａ ｎ ｓ ｓ ｖ ｅ ｓ ｒ ｓ ｕ ｅ ｒ ｅ ｎ ａ ｎ ｒ ｅｒ ａ ａ ｓ ｅ ｃｈｌ ｅ ｒ を供試した ｙ ｇ ｇ ， ． ， ． ， ． ， ． ，. 。 本研究は大量増殖を目的としたため，同時に多量の材料が準備 できる球根のリン片を材料とした。 球根の基部， すなわち各リン片のえき部には球始原体が存在するので， リン片からの形態形成を目 的とした本研究には不都合であり， 球始原体を含む部分は全て除去した。 基部を除去したリン片を 厚さ １．５～２．５ｍｍ に 切 断 し， 生 体重 １００～１５０ｍｇ の切片を無菌的に調製し， これを培養材料とし た。. 培養基は Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ お よ び Ｓｋｏｏｇ の 培 地 （Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ，Ｓｋｏｏｇ，１９６２）を 用 い， こ の 添 加 物 と し て. カゼイン加水分解物２ ｇ地， グリ シ ン ２０ｍｇだ， ニ コ チ ン 酸 ５ ｍｇ舵， ピリ ドキ シ ン ５ ｍｇだ， チ ア ミ. ン ｌ ｍｇ鬼， イ ノ シ トー ル２００ｍｇだ を 含 む 処 方 に 修 正 した さ ら に 添加 オ ー キ シ ン と し て は α－ナ 。 ，. フ タ リ ン 酢 酸 （ＮＡＡ） ま た は ２．４－ジ ク ロ ロ フ ェ キ シ 酢 酸 （ ２，４－Ｄ） を 用 い， ま た サイ ト カイ ニ ン と. してはカイネチン （ＫＩＮ） を適宜の濃度で添加し， これに２％しょ 糖および０，７％寒天末を添加後， ） に調整した． このような培養液を ｌｏｏｍ８ 容 三角 フ ラ ス コ に は ３０ｍｇ， ２００ｍＢ 容 ｐＨ５，６（後に５．１ フ ラ ス コ に は ５０ｍｅ あて，それぞれ分注した これを２重のアルミ箔で覆い，７分間加圧滅菌（ １２ ０℃， 。 ｌ ｋｇ ／ｃｍ２ ） を行なった． このようにして調製した固型培地上に， 上記の組織片をｌ ｏｏｍ β 容フラス. コ では ２個， ２ ００鰯 容フラスコでは４個づつ置床し， 実験室または定温室 で人工照明下および暗所. で培養した。 （ １ ） サイ トカイニンの抽出方法. 試料５ ０ ｇ を 細 片 に して ７０％ メ タ ノ ー ル １２５ ｍＢ を加え， ２ ～ ４℃の暗所で２４時間浸漬抽出を ２. 回繰返した． この抽出液を ４０℃ ｗａｔｅｒｂａｔｈ 上 で減 圧 濃 縮 し， メ タ ノ ー ル を 除 去 した． こ れに 蒸 留 水 を加え ５０ｍ８ と し， Ｉ Ｎ‐塩酸でｐＨ２．５とし， 沈澱物を猿別後， ２Ｎ‐水酸化ナトリウムでｐＨ８ ．４. に調整した。これを水飽和ｎ‐ブタノール５ ０鰯 により，分液櫨斗中で３回，１０分間振畳抽出した後， 全ブタノール層を採取した． これを４０℃ で再び減圧濃縮し， ブタノールを除去した後， 蒸留水を加 えて ２０ ｍＢ と した。 こ れをイ オ ン 交 換 樹 脂 カ ラ ム（Ｄｏｗｅｘ‐５０× ４）上に添加し， 充分に水洗した後，. 毎分 ８ ｍＢ の流速 で３ Ｎ－ア ン モ ニ ア 水 ３ｏｏｍｇ を加えサイトカイ ニンを溶出し， これを４０℃減圧下. でア ン モ ニ ア を 除 去 し た． こ の 濃 縮 液 を ペ ー パ ー ク ロ マ ト グラ フ ィ 用 滝 紙 （Ｔｏｙｏ 滝 紙 Ｎｏ５０．２× ） の 基 部 に 塗 り， イ ン プ ロ パ ノ ー ル： ア ン モ ニ ア ： 水 ＝１０： １： １ の 展 開 剤 で展 開 し た ４０ 。. （ ２ ） ダイ ズカルスによるサイカトカイニン活性の測定. 上昇法によって展開したクロマトグラムを１ ０等分し， これらを培養基を加えたｌｏ ｏｍＢ 容三角フ. ラ ス コ に １枚 あ て 入 れ た。 培養基は Ｍｉ ｌ ｌ ｒ培地を前記のリン片培養培地に準じて修正した。 このよ ｅ. うにして調整した固型培地上に約 ６ ｍｇ のダイ ズ子葉カルス片 （品種：アクメ） を３個ずつ置床し，. ２５℃ 明所で培養した． 培養期間は２５日間とし， 培養後カルスの過剰水分を滴紙で除去 したのち生重 １ ） （ ５.
(5) . 西 内. ５２. 福 義. 男. 量を測定した． 対照区との差を求め， これをヒスト グラムとして示した． ヒスト グラムは４反復実 験の平均値を示した． 果. 結. （ ｉ ｌｄｏｏｍ’ ａｎ ‐ リ ン 片 培 養 にお け る カ ルス 形 成 は 品種 に よ っ て 難 易 が み ら れ た． す な わ ち，ｔＡｐｅ ， Ｄｅｆ ’ （ ’ ｔ ’ ｉ ｉ ｔａｎｃｅ な どは， い ず れ も カ ルス形成が容易 ｅｒ ｃｅ， Ｒｅｄ Ｂｉ ｒｄ， ＲｅｄＥｍｐｅｒｏｒ， Ｔ．ｅ ｃｈｌ ， Ｔ．ｐｒａｅｓ ’で は い か な る 濃 度 の ＮＡＡ ある ｔ ｔ ’ ｌ ｌ ｉａｎｔ Ｃ ｉ ｉＢ ｉ ｉ Ｐ ｉ Ｗｉ ｌ ｌ こ ｔ ｔ よ び し お ｒａｍｏｓ ｒ ａｍ であ っ た． れに 反 ， ， ’ ℃きｓａｒＦｒａｎｋ’ ｔＭｏｎｓ ｉ ｅｕｒ い は ２，４－Ｄ の 添加 に よ っ て も カ ルス 形 成 は 極 め て 困 難 であ っ た．ｔＦｕｇａ ， ， （ ’ ’ ｌ ｉ 続 培 Ｅ ｉ Ｔ も 長 の ｈ ｉ Ｔ ｂ ｉ ｔ い ず れ 期 間 継 Ｔ ｔ な どは Ｓ． Ｍｏｔ ｔ ｔｏ ， ． ａｇｅｒ， ． ｕ ｅｒｇｅｎａｎａ ｍ ｒ， ．ｓｙｖｅｓｒｓ ，. 養の結果カルス形成が認められた．これらのカルス形成は培 地のオーキシン濃度によっ て左右さ れ，. （Ａ ｅｌｄｏｏｒｎ’ （ ’ Ｔ ｐｒａｅｓ ｔａｎｓ は い ず れ も ＮＡＡ を 添 加 した 場 合 に は， そ の 低 濃 度か ｒｏｒ ｐ ， ＲｅｄＥｍｐｅ ， ．. ら高濃度ま でカルスの形成がみ られたが， ２ ，４－Ｄ添加培地ではカルスが形成さ れる濃度範囲は狭. ） ７６ かっ た （西内・明道， １９ ．. ’で は ＮＡＡ 単独添加の場 カ ルス 形 成 に お よ ぼ す ＫＩＮ 添加 の 影 響に つ い て み る と，ｔＲｅｄＥｍｐｅｒｏｒ. ０ 合に比し， ＫＩＮ Ｉ ～ ５ ｍｇ化 の共存によりカルスの形成が促進された， しかし ＫＩＮ 濃度を１０～２ ｉ Ｔ ｈ 一方 では した ａ ｅ ｒ 片が増加 鬼 に高めるとカルスの増殖は抑制され ｇ 褐変壊死するリン ｍｇ ， ． ， ． ＮＡＡ 単独の場合に比して ＮＡＡ と ＫＩＮ を同時に添加しても， その効果は殆ど認められなかった． しか し， ２，４‐Ｄ と ＫＩＮ を 組 み 合 わ せ た 場 合， ２，４－ＤＯＩ．－ｌ ｍｇ鬼 の単独添加 ではカルスの形成はな. ８を添加すると， いずれもカルスが形成された． 他方， ＫＩＮ 単独添加培 いが， これに ＫＩＮＯ ．ｌｍｇ／ 地では全ての添加濃度においてカ ルスは形成さ れなかった． すなわち ＫＩＮ の添加はオーキシンに よるカルス形成効果を高めるものと思われる． そこ でオーキシンと ＫＩＮ の組合わせ培地を用い，. ｉａｎｃｅ， （Ｒｅｄ Ｂｉ 種々 の 品 種 に つ い て 検 討 し た． そ の 結 果， 第 １ 表 お よ び ２ 表 の よ う に（Ｄｅｆ ｒｄ， ｔＡｐｅ （ ｉ では， い ず れも オ ー キ シ ン単 独 の 場 合 に 比 し， ＫＩＮ の共 ｌｄｏｏｒｄ， ＲｅｄＥｍｐｅｒｏｒ， Ｔ．ｅ ｉ ｅｒ ｃｈｌ （ ’ ｔＣきｓａｒＦｒａｎｋ’ （Ｍｏｎｓｉｅｕｒ Ｓ Ｍ ｏｔｔｅｔ’ Ｔ ｔｕｂｅｒｇｅｎｉａｎａ 存 は カ ル ス 形 成 をさ ら に 好 転 さ せ， Ｆｕｇａ ． ， ， ． ， ｔＷｉ ’お よ び（Ｃｒａｍｏｌ く ’ ｌ Ｐ ｌ ｉ ｔ ｔ しか し Ｅｍｉ 進が Ｉ などを用いた場合もカ ａｍ ｓ ルス形成の促 みられた ｒ ， ． ｌ ｌ Ｂｒ ｉ ｉａｎｒで は， こ れ ら の 培 地 に お い て も カ ルス は 形 成 さ れ な か っ た．. 各種オーキシンの共用による相乗効果を調べるためにＩＡＡ，ＮＡＡ ２ ，４－Ｄ およびイン ドール酪酸 ＩＢＡ） を各種濃度の組合わせで添加 したところ， 第７表のようにＩＡＡ と ＮＡＡ， ＩＢＡ と ＮＡＡ （. ２，４‐Ｄ と ＮＡＡ， ＩＡＡ と ２，４－Ｄ な どの 組 合 わ せ では， い ず れ も 良 好 な カ ル ス 形 成 を き た した． こ の 第１表. 培養リ ン片のカ ルス形成におよ ぼすオーキシンとカイ ネチンの影響 （７週間培養）. オーキシン濃度. カイネチン濃度. （ｍｇ／８）. （ｍｇ／必）. ＮＡＡ. ５. Ｋ工 Ｎ. 種. 、Ｄｅｆ ｌ ｌ ｄｏｏｒｎ′、Ｒｅｄ Ｅｍｐｅｒｏｒ ｉ ｉ ｃｈ ｅｒｒ 、Ｒｅｄ Ｂｉ ｒｄ′、Ａｐｅ ａｎｃｅ′ 、Ｔ，ｅ ＋. ０. ５. １. 十. １５. １. ＋. ２，４－ Ｄ Ｏ．２ １ ５ ：カルス形成なし. ＋ ＋. ＋. ＋. ０．２. －. １. 十. 一. １. 十. ＋. ＋：カルス形成あり. ＋. ＋＋＋ ＋. ＋＋ ＋ ＋. ＋＋＋. ＋＋ ＋ ＋. －. ＋＋＋. ２ ） （ ５. ＋ ＋. ＋. ＋ ＋. ＋. ： カルスの増殖が極めて良好. ＋. ＋. ＋＋ ＋.
(6) . 組織培養法によるチューリッ プ球根の増殖. ５３. うち各種オーキシンと ＮＡＡ との組合わせがより良好であった。. ｔ ’ カ ルス 形成 は 培 地 の 水 素イ オ ン 濃 度 に よ っ て も 影 響 をう け ｔＡｐｅ ｌｄｏｏｍ’ ， ， ＲｅｄＥｍｐｅｒｏｒ は 共 に Ｈ ０～６ が 適 Ｈ ５ ０ 好 酸 で こ れよ り 性 の ｐ ４．０～４．５ で は， そ の 形 成 率 が低 下 し た。 さ らに カ ルス ｐ ． ． ， ｔ ’ 形 成 は 培 地 の しょ 糖 濃 度 に よ っ て も 左 右 さ れ た Ｔ．ｐｒａｅｓ ｔａｎｓ ， ＲｅｄＥｍｐｅｒｏｒ は 共に ０．５～ ４ ％ で ．. カルスの形成がみられるが， ８％ではカルス形成の抑制が顕著となった 培地にしょ 糖を全く加え ． ない場合もカ ルスは形成されたが， その後の生育は みられなかった 。 第２表. 培養リン片のカ ルス形成におよぼすオーキシンとカイネチ ンの影響 （９週間培養）. オーキシン濃度. カイネチン濃度. （ ／ｅ） ｍ ｇ. （ ／尼） ｍ ｇ. ＮＡ Ａ. Ｉ. Ｋ工Ｎ. 種. 、Ｆｕｇａ′ 、Ｃｅｓｅｒ Ｆｒａｎｋ′ 、Ｍ Ｓ Ｍｏｔ ′ Ｔ ｔ ｔ ｅｔ ａｎａ、Ｅｍｉ ｒ′ ，， ． ｕｂｅｒｇｅｎｉ. Ｉ. －. １. ＋. １０. １. ＋. ２５. １. ＋. ２，４－ Ｄ Ｏ．１ ０．５. －. 一. ０，Ｉ ０，Ｉ ０．Ｉ Ｉ. １０ カルス形成なし. 考. ＋. １. ＋. ＋：カルス形成あり. 察. 組織培養におけ る不定芽や不定根の形成の際に培養組織から直ちにそれらの器官を分化する例は 少なく （Ｐｉｅｒｉｋ，Ｓｔｅｅｇｍａｎｓ ）， ま ず 培 養 組 織 の 脱分 化， す な わ ち カ ．１９７５ ．１９５７ ， Ｒｏｂｂ ， 田 村， １９８０. ルス化を起こし， その後このカルスより不定芽や不定根を再分化する場合が多い このため培養組 ． 織からのカルス形成は器官分化の前提条件として重視されてきた 一般に単子葉植物は双子葉植物 ．. よ り 組 織 培 養 が 困 難 であ る。 チ ュ ー リ ッ プ の リ ン 片 培 養 に お い て も Ｆｏｓ ｉａｎａｈｙｂ． の 系 統 を 除い ｔｅｒ. て， カルスの形成は比較的困難で， さらにカルス形成に長期間 （１～２ ヶ月） を必要とするも のが 多い， したがって， リン片培養の脱分化を抑制する何らかの要因の存在が推察さ れる 本実験結果 ． より， チューリ ッ プのリン片培養におけるカルスの形成は添加オーキシン濃度によって左右される こ と が明 ら かに な っ た が， 用 い た オ ー キ シ ン の 種 類 に よ っ て も カ ルス 形 成 が 著 しい 影 響 を 受 け る こ. とも認められた。 ２，４ －Ｄ のカルス形成に対する特異的な促進効果については バレイショ（桂， 岡沢，. 田川，１９７０ ）， サ ツ マイ モ（中 島， 山 口，１９６８）， イ ネ（前 田，１９６５ ）な ど で知 ら れて い る． ま た Ａｐｐｅ ｌｇｒｅｎ. ら（ ） は各種オーキシン間の効果の相違の原因の一つとして， 培地中におけるオーキ シンの耐 １ ９７２ 久性の相違をあげている． 本研究結果においても， ＮＡＡ はそのカルス形成と増殖に ２ ４－Ｄ よりも ，. 有効であり， その作用性の相違が認めら れた。 一般に， ２４－Ｄ のようにオーキシン作用の強いもの ， は比較的高濃度でカ ルスを誘導する例が多い． しかし， この低濃度におけるカルス誘導にはサイ ト カイニンの共存を必要とする事実も ダイ ズ子葉やタバコ茎組織の培養 （Ｗｉ ｈａｍ，１ ｔ ９ ６８ ） において認 められている． 本実験においても， オーキシンの単独施与ではカルス形成が困難な品種がみられ， こ れ ら の カ ル ス 形 成 に は カ イ ネ チ ン の 共 存 に よ っ て の み 可 能 な こ と が 認 め ら れ た し た がっ て ， ． ） （ ５ ３.
(7) . 西. ５４. 内. 男. 義. チュ ーリッ プのリ ン片培養においても， その脱分 化に あ た り オ ー キ シ ン と サイ ト カイ ニ ン の 相 乗 効. 果が認められた． しかしながら， 各種のオーキシ. ◎ ダ. ン と カ イ ネ チ ン を 組 み 合 わ せ た 培 地 に お い て も， ィ ズ ’で は カ ル ス カ ’や ℃ｒａｍｏ ｔＷｉ ｉ ｌ ｌ ｉａｎｔ ｉ ｉ Ｂｒ ｌ ｌ ｉａｍ Ｐｉ ｔ ｔ ｓ ま ラ成 され か っ た． し か し， こ れ らの 培 養 に お な の い も ５～６. レ ノ. 云 . ヶ月以上の長期間 継続培養による 書 と不定根が形成されたことから， これらの添加ホ ）. ． . ルモンに対する反応が培養中に 変化し， 培養初期. では反応でき なかっ たものが長期間培養により可 能になっ たものと考えられる． すなわち， 培養材. ０ ５ ．. ０. 料 の 内 生 ホ ルモ ン あ る い は 生 長 抑 制 物 質 の 量 的，. 第１図. 質的変動を伴い， 不定根形成をもたらしたという. １ ０. ０ ５ ．. １. チュ ーリ ッ プ球根 のサイ トカイニン. 活性 （７月中旬測定）. 考え方も成り立つ． また， 季節に伴うチュ ーリッ プ球根の内的性質の変動に 応じて， その培養におけるカルス形成能 に変化がみられ， ６～８月 ではその形成が容易であるが，１２月以降ではカルス形成能の消失がみら. れた． しかし， 材料球根を７～８月以降， 長期間５℃貯蔵しておくと， １２月以降においても僅かな がらカルス形成が可能であった． このような低温処理は球根の生理的諸活性の低下に伴う貯蔵養分 の消耗を防止し， これがカルス形成の維持に役立つものと推察さ れる． このように， 培養材料の貯. 蔵条件によるカルス形成能の顕著な変動を考慮すると， カルス形成の困難な品種の培養に 際し， リ ン片に含まれる内生生長物質の動行について検討を加える 必要がある．. このようなカ ルス形成に関する品種間の難易やリン片の齢による差異 を明らかにする目的で， リ ン片中に含まれる サイ トカイニン活性の変化を調 べた． その結果， 第１図にみられるように， カル ’と の 間 に は サイ トカ イ ｌ ｌ ｉａｍ Ｐｉ ｔ ｔ ｌｄｏｏｒ口と， そ れ が困 難 な（Ｗｉ ス 形 成 の 容 易 なくＲｅｄＥｍｐｅｒｏｒやくＡｐｅ 球根肥大期. 開 花期. 茎葉伸長期. 萌芽 期. 収 穫期. （ ） ｍ ｇ ２００. ダ イ ズ カ ル ス （ 生 ｌｏｏ 重 量 ）. Ｒ ｆ ｏ. ０ ５ ．. １ ０. 第２図. ０ ５ ．. １ ０. ０ ５ ．. １ ０. ０ ５ ．. 生育中の球根リ ン片のサイ トカイ ニン活性 （Ａｐｅ ｌ ｄｏｏｒｄ） （ ４ ） （ ５. １ ０. ０ ５ ．.
(8) . 組織培養法によるチ ー ッフ１※ 求根の増殖 ューリ ｍ 昔 － 臼. ５５. ニン活性において顕著な相違があ り， 前者は後者に比較してリン片中のサイ トカイニン活性の 高い. こ と が 確 か め ら れた。 ま た， こ れ ら の 活性 は ク ロ マ ト グラ ム 上 の ピー ク が Ｒｆｏ ５～０ ６ 附 近 に あ る こ ． ． と か ら， 主 に ゼア チ ン と そ の リ ボ シ ドであ る と 推 定 す る こ と が でき る （Ｋｏｄａ ｏｋａｚａｗａ １９７７ ）。 さ ， ， らに， 第２図に示したよう に 生育中のｔＡｐｅｌｄｏｏｍ’球 根 の サイ ト カイ ニ ン 活 性 は 茎 葉伸 長 期 つ ま り ，. 球根肥大生育の開始直前にはサイ トカイニン活性は著しく高まるが その肥大生育開始と共に急減 ， し， ６月下旬の収穫期には最低 値を示した。 このような収穫期のリン片を用いた培養 ではカルス形. 成に対し良い結果は得られなかっ たが， これに反し， 球根が比較的高いサイ トカイニン活性を示す ７月中旬以降のリン片を培養に供すると良好なカルス形成がみられた。 したがって， リン片中のサ イトカイニン活性が高いことは， そのカルス形成に好適な内的条件を与えるものと考 えられる ．. （１ １） チ ュ ー リ ッ プ の リ ン片 培 養 によ る 不 定 芽 形成 に つ いて 実験材料およ び方法 ｉｍａｒｔ ユリ （Ｓｔ ） や ヒ ヤ シン ス （Ｐｉ ｉｋ， Ｗｏｅ ｔｓ ｓａｗａ ） ｅｒ ，Ａｓｃｈｅｒ ，１９７８ ，Ｔａｋａｙａｍａ ， Ｍｉ ，１９７９ ，１９７１ のリン片培養 では， リン片から直接， 不定芽が形成され， これはやがて子球を形成することから ， チ ュ ー リ ッ プ の リ ン 片 培 養 に お い て も こ れ ら の 形成 に つ い て 追求 し た し か し 本 実 験 で はカ ルス ， 。. 形成はみられた が， 不定芽が直接形成されることはなく， 培養２ヵ月 で既形成のカルスから不定芽 が形成された。 そこで， リン片より形成させたカルスから不定芽を形成さ せ 個体再生の手 がかり ，. をつかむ目的 で不定芽形成の条件を追求した。. 材料およ び基本培地はカルス形成実験と同一である オーキシンおよびサイ トカイ ニンの最適濃 ． 度や， これらの相乗効果を検討した。 また， 炭素源の糖の種類と その濃度および窒素源の種類とそ の濃度などの培養成果におよ ぼす効果についても追求した。 培養材料に用いたリン片の採取時期お よび母球根の貯蔵温度とそれぞれの貯蔵期間， さらにリン片の培養温度な どについても検討を加え た．. 結. 果. １ （ ） 不定芽形成におよ ぼす植物ホルモンの影響 予備実験として多く の品種のリン片を培養し，これらの不定芽形成能について比較した（第３表） 。 この結果より 不 定 芽 形 成 の 容 易 なｔＡｐｅｌｄｏｏｒ口 と Ｔ． ｈａｇｅｒ ｉを主として以下の実験材料と して用い た． ｔＡｐｅ ’の 培 養 リ ン 片 に お け る 不 定 芽 形 成 は ２ ４－ＤＩ ０～１ ２ｍ 鬼 と ＫＩＮ ｌｄｏｏｒｎ Ｉ．０～２．ｏｍｇ鬼 の ． ． ｇ ， 濃 度 範 囲 で極 め て 良く， Ｔ．ｈａｇｅｒ ｉ で は ＮＡＡ５．ｏ ｍｇだ と ＫＩＮ １ ０～２ ｏｍｇ鬼 で良 好 であ っ た （西 ， ． 内， １９７９ ）． 不 定 芽 形 成 に 対 す る オ ー キ シ ン 要 求 性 はｔＡｐｅ ｌｄｏｏｍ’と Ｔ．ｈａｇｅｒ ｉで は 異 な る 点 を 考 慮. し， ２，４‐Ｄ や ＮＡＡ の添加 によって も不定芽形成のなかったそ の他 多く の品種に つ い てＩＡＡ や １ＢＡ などのオーキ． シンを用いて ＫＩＮ との組合わせ培地を作り培養した。しかし， この結果いずれも 不定芽の形成はみられなかっ た．. そこで， 異なったオーキシンの組合わせを作り， その相乗効果について検討した その結果 第 ， 。 ） （ ５ ５.
(9) . 西. ５６. 内. ４ 表 に 示 す よ う に ２，４‐Ｄ １ ｍｇ／２ と ＫＩＮ Ｉ．２. 義. 男. 第３表. ｍｇ鬼 の組合わせ添加により不定芽形成率は３３％. 種々 の品種およ び原種における不定. 芽形成. 品 種 お よ び 原 種. ８ を 示 し た の に 対 し， こ れに， さ ら に ＩＡＡ ３ ｍｇ／. を 添加 す る と そ の 形 成 率 は ２ 倍 に 増 加 し， 不 定 芽. ３ ｍｇ鬼 を 組 合 わ せ た 場 合 も 同 様 に 顕 著 な 増 加 が み ら れ た． しか し，２，４‐Ｄ と １ＢＡ の 組 合 わ せ では， その相乗効果は少なかっ た． 次に ２，４－Ｄ を 添 加 せ. Ｄｅｆ ｉ ａｎｃｅ Ｆｕｇａ ＧｅｎｅｒａＩ Ｅｉｓｅｎｈｏｗｅｒ. ＋ 十 －. Ｍｏｎｓｉ ｔ ｅｔ ｅｕｒ Ｓ， Ｍｏｔ. ず，ＩＡＡ， ＮＡＡ，ＩＢＡ の 組 合 わ せ では 第 ５ 表 の よ. ｏｘｆ ｏｒｄ 。. うに工ＡＡ と ＮＡＡ を組合わせた場合，不定芽形成. ．. Ｐａ ｄ ｐ ｄ ａ ｅ ａ ｒ ａ ｅ ｒ. Ｐｕｒ ｉ ｉｍａ ｓｓ. 率 は 最 も 良く，ＩＡＡ と １ＢＡ， ＮＡＡ と １ＢＡ では 形. ｄ Ｂｉ Ｒ ｄ ｅ ｒｄ Ｒ ｅ. 成率が低が低下した．. 十 ＋. Ｒｅｄ Ｅｍｐｅｒｏｒ. ’は（Ａｐｅ くＲｅｄＥｍｐｅｒｏｒ ｌｄｏｏｒ口 と 近 縁 の 品種 で あ. るが， 不定芽形成に対するオーキシン 要求性は異. Ｒｅｄ Ｍａｔ ａｄｏｒ ｌ ｌ ｐｉ 帆 ′ ｉ ｉ ｔ ｔ ｌ ｌ ｗ ｉ ｉ ａ ｍ ａｍ Ｐ. 表 に み ら れ る よ う に， ＫＩＮ Ｉ．ｏ ｍｇ鬼 に ＮＡＡ と. ， Ｔｕ ｌ ｉ ， ｒｅｉ ｐａ ｅｉｃｈｌ ｉ Ｔ ｈ ｅ ， ａｇ ｒ Ｔ ｔ ａｎｓ ． ｐｒａｅｓ. な り， ２，４－Ｄ と ＫＩＮ の 組 合 わ せ 培 地 で は カ ル ス の 形 成 の み 旺 盛 で 不 定 芽 を 形 成 し な か っ た． 第 ６. Ｔ Ｔ ， ・. ＩＢＡ を同時に添加 した場合も不定芽の 形成は な. ｌ ｍｇ ／“こ対 し ＮＡＡ ３ ｍｇ化 と イ ン ドー ル プ ロ. ＋＋ ＋＋. Ｃ６ｓａｒ Ｆｒａｎｋ ， ｌ ， ｌ ｉ Ｃｒ ｉ Ｂｒｉ ｃ ｉ ａｎｔ ｏ ｓ Ｓ ａｍ。. 数 も 著 しく 増 し た． ま た，２，４－Ｄ １ ｍｇ鬼 と ＮＡＡ. い． しか し， ＫＩＮ を １，５～２．ｏ ｍｇ鬼 で 添加 す る と ＩＢＡ Ｉ ～ ３ ｍｇ／ ８ で 芽 が 形 成 さ れた． ま た， ＫＩＮ. 不 定 芽. Ａｐｅｄ ｌ ｏｏｒｎ. 十 ＋. ＋＋ ＋＋ ＋. ｓ ｓｙｌ ｖｅｓｔｒｉ. Ｔ ａｎａ、Ｅｍｉ ｒ′ ｕｂｅｒｇｅｎｉ ． ｔ ・ Ｔ， ｕｒｍｉ ｅｎｓｉ ｓ. 一：不定芽形成なし、. ＋：不定芽形成あり. ＩＰＡ）を添加した場合， ＩＰＡ２４ｍｇ駕 において不定芽の形成は最も良好で， 同時に不定根 ピオン酸（ も形成さ れた． しかし， ＩＰＡ のみでは不定根は形成さ れたが， 不定芽は形成さ れなかった．. （Ｒｅｄ Ｍａｔａｄｏｒ ’も（Ａｐｅ ｌ ｄｏｏｒ口と 近 縁 関係 に あ る が， オ ー キ シ ン に 対 す る 反 応 はくＲｅｄ Ｅｍｐｅｒｏｒと ｔ 異なり， むし ろ Ａｐｅｌｄｏｏｒｄ に 類 似 した も の で あ っ た． す な わ ち， ２，４－Ｄ と １ＡＡ， あ る い は ２，４－Ｄ と. ＮＡＡ を組合わせた場合に不定芽の形成がみられ，とくに前者の組合わせで良好な結果を得た．しか し，ＩＡＡ と１ＢＡ，ＩＡＡ と ＮＡＡ， ＮＡＡ と１ＢＡ などの組合わせ では殆ど不定芽の形成はなく， 僅か に不定芽様突起の形成がみられたにすぎなかった． しかも， これらは培養を継続しても不定芽には ならなかった （第７表）. 一 方， 各 種 サイ ト カイ ニ ン の 影 響 に つ い て み る と， 第 ８ 表 の よ う に ＫＩＮ やイ ン ペ ン テ ニ ル ア デニ. ＺＩＡ ン（２ｉｐ）に比し， ペ ンジルアデニン（ＢＡ）１ ．２ｍｇ鬼 は不定芽形成率が著しく高く， ゼアチン（ ）. ’で ’どＲｅｄ Ｍａｔａｄｏｒ ｌｄｏｏｒｎ １．２ｍｇ他 は 最 高 値 を 示 した． す な わ ち， サイ トカ イ ニ ン の 要 求 性 もｔＡｐｅ. は異なることが認められた．. ｉ Ｔ．ｓｙｌｖｅｓ ｔ ｒ ｓ の 場 合， ＮＡＡ ５ ｍｇだ と ＫＩＮ １ ｍｇ鬼 の組合わせ培地ではカルス形成とその生育 が極めて良好であっ たが 不定芽の形成は阻害さ れた そこで第９表のように ＩＢＡ を添加 したとこ. ，. ．. ろ， ＮＡＡ ３ ｍｇ βと１ＢＡＩ ／ ．５ｍｇ鬼 の組合わせにおいて不定芽形成率は９２％に達し， リン片あたり. の不定芽数も増加 した． 培養組織における不 定芽や不定根などの器官分化におよぼす植物ホルモンの影響については， こ ）， ベ ゴニ れ ま で 多く の 植 物 で 観 察さ れ て い る． 最 近 では ペ チ ュ ニ ア （Ｒａｏ ，Ｈａｒａｄａ ，１９７３ ，Ｈａｎｄｒｏ ｌｍａｎｎ ｉｄｅ ） な どの 葉， 茎， 葉柄， フ ｔ ）， キ ク （Ｒｏｅｓ ア （Ｆｏｎｎｅｓｂｅｃｈ，１９７４ ，１９７３ ， Ｂｏｋｅ ， Ｈｅ ，１９６５. ）， グラ ジ オ ラ ス の 球 茎 （Ｈｕｓｓｅｙ リージアの花芽 （Ｐｉｅｒｉｋ， Ｓｔｅｅｇｍａｎｓ ， ， １９７７ ， Ｓｉｍｏｎｓｅｎ ， １９７６ ） ６ （ ５.
(10) . 組織培養法によるチューリッフ１求根の増殖. ５７. ｌ Ｈｉ ｄｅｂｒａｎｔ ｉ ｉ ）， ヒ ヤ ，１９７６）， ア マ リ リ ス （藤 岡， １９６４ ， Ｍｉ ， Ｍｏｒ ，ｌｗａｓｅ ，１９７４ ， 梁川， 坂 西， １９７７ ｉｋ， Ｗｏｅ １ ９ １ Ｐ ｉ ｉ ｋ ｔｓ ７ Ｒ ｂ ｉ シン ス （Ｐｉ １ ９ ３ ｅｒ ７ Ｒ ） ｂ ｂ ）， チ ュ ー リ ッ プ （Ｒｉ ｖｉ ｅｒｅ ， ， ｅｒ ， ｕ ｎｇ ， ， ユ リ （ ｏ ，１９７５ ，. ｌ Ｍｕ ｌ ）などのリン片組織培養においても不定芽が形成さ れた これらの不定芽分化はオーキ ｒ ｅ ，１９７９ 。. シン濃度に対し， サイトカイニン濃度が高い場合に起る傾向 がある 逆にオーキシン濃度に対し ． ， サイ トカイニン濃度が低い場合は不定根が形成されやすい 一方 オーキシン単独添加 で不定芽を ， ． 形成する場合 （浅平， 河原林， １９７４ ） や， サイ トカイニン単独で不定芽 を形成する場合 （Ｐｉ ｉ ｋ ｅ ｒ ， Ｓｔｅｅｇｍａｎｓ Ｖａｎ ｄｅ Ｍ １ ９ ４ ７ ｒ ） も知られ ｅ ｓ ているが これらは培養組織の内生サイト ｙ， カイニンあ ， ， 第４表. 培養リン片の不定芽形成に およぼす種々 のオー キシン組合わせの影響 （１３適間培養）. オ ー キ シ ン 濃 度 （ｍ ｇだ） ２，４－ Ｄ １ ▲ １ １ ←. 工Ａ Ａ ０. 不定芽形成率 （％）. ＮＡ Ａ ＩＢ Ａ ＾ ＝ Ｖ ｎ ｖ. 不定芽数 イン片組織. ３３ Ｑ ）. １ ｎｔ Ｘー Ｕ. ＾ Ｕ. ＾ ＝ ｖ. 紙７ 十. ハ ｎ４ アＵ ム. Ｑ Ｕ. ハ ＝ Ｖ. ５５ ハ ＝ ｖ. ｎ ｎ／Ｖム. ｎ Ｖ. ｎ ｛ Ｕ. ３８ （ 一 リ. （ にＵＶ. （ Ｖ. ｎ ｖ. ハ に＝ＵＵ. ＾ ＝ Ｖ. ＾ に＝Ｕｖ. （ ｄ. ｎｒ ｖヘ リ. １ １. ｎ ｎ／ ／ム ”. ７ｎ ／ ｕ. ハ ワ＝ルＶ. ハ ＝ Ｖ. １８ ｎ ／ ”. （ ハ＝ ｂＶ. ハ ＝ Ｖ. ２５ ハ ＝ Ｖ. （ ハＵ ｈ Ｖ. （ ＝ Ｖ. Ｑ Ｕ. １１ Ｉ 十 上Ｑ Ｕ. （Ｑ ＶＵ. ＾ ｒＵ ｏ. （ ）. （ Ｖ. ３３. Ｉハ １．. ｎｒ ｖへ り. ハ ｈ Ｖ. ｎ ｖ. ５０ （ Ｕ. ハ ｎｄ ソ ム. ＾ 〔＝ＯＶ. ハ Ｕ. ハ ○. １８ ７ 十. （ ｎ＝ ＸＶ Ｕ. （Ｆ ）Ｏ. ハ Ｕ. ３０ ＾ ＝ Ｖ. ｎ ハ／ ｈ山 Ｖ. ＾ にＵＵ. （ ｄ. ３３ ｎ ｄ. ．Ｑ ▲Ｕ. ハ に＝リ）. Ｑ Ｕ. ５５ （ ＝ Ｖ. ｎ ハ／ ＝ム Ｖ. ′ 培地：Ｋ工Ｎ １２ｍ 培養材科：、Ａｐ ｌ ｄｏ ／ｇ 含有 ｅ ｏｒ ｎ ． ， ｇ. 第 ５表. 培養リン片の不定芽形成におよ ぼす種々 のオー キシン組合わせ の影響 （ １ ３週間培養）. オー キシ ン 濃度 （ ／の ｍ ｇ 工ＡＡ. １２. 不定芽形成率. 不定芽数 イン片組織. ＮＡ Ａ Ｑ Ｕ. 工Ｂ Ａ （ Ｖ. 綿（ Ｖ. 《 Ｕ. （ Ｖ. 幻Ｒ Ｕ. （ ヴＵ十. Ｑ Ｕ. （ ＝ Ｖ. ２５ ハ Ｕ. ｎ（ ｖＭ Ｊ. （ ＝ ｖ. （ ｄ. （％）. ５（ Ｕ. Ｉ ｎ１ ノ ム. （ｎ ｖ‘. （ Ｕ. １ｎ １／ ”. ２２ （ ソ ム. ハ （＝ 一ｖ Ｊ. ｎ ｄ. “ ｛ リ. １４ ヘ ｛ Ｕ. （ｒ Ｖ。. ｎ ｄ. ハ ｈ Ｖ. ２５ （ Ｕ. ｎｎ ｖＸ Ｕ. ハ ○. Ｑ Ｕ. ｎＩ Ｉ. （ ＝ Ｖ ′ 培養材料：、Ａｐ ｌ ｄｏｏｒ ｅ ｎ. 培地：ＫＩＮ １ ／８含有 ｇ ，２ｍ. （ ５７ ）. （Ｑ ｖＵ （ ｖ.
(11) . 西. ５８. 内. 義. 男. るいはオーキシンの含量が充分に存在し， 添加オーキシンや サイ トカイニンが内生ホルモン含量の バランスを変え， その結果， 内生オ←キシンに対し， サイ トカイニン含量が高くなる場合に不定芽 の形成がみられるものと考えられる．. ｉで は オ ー キ シ ン と カ イ ネ チ ン が 共 存 す る 場 合 に の ｌｄｏｏｒｄお よ び Ｔ． ｈａｇｅｒ 本 実 験 に お い てｔＡｐｅ. み不定芽が形成さ れ， オーキシン単独ではカルスおよび不定根が形成されている． これは不定芽や 不定根の分化におよぼすオーキシンとサイ トカイニンの 比が， これを左右するものと思われる． ’で は ２ ４－Ｄ １ ｍｇ虐十 ＫＩＮ １ ｍｇだ 培 地 を 用 い る と カ ル ス 形 成の み 促 進 さ れて，不 （ＲｅｄＥｍｐｅｒｏｒ ，. 定芽形成はみられなかった． しかも， この培養において添加ホルモン濃度を変えても不定芽形成は なく， ま た，２，４‐Ｄ の か わり に ＮＡＡ あ る い は ＩＡＡ を用いた場合も なお不定芽の形成は起らなかっ た． こ れ に 対 し， 添 加 オ ー キ シ ン が ＩＢＡ あ る い は ＩＰＡ 単 独 で は 不 定 芽 形 成 は な い が， こ れ ら に. ＮＡＡ を組合わせると不定芽が形成された． この事実はオーキシン組合わせ 効果の重要性を示唆し て い る．. 一般に， 組織培養において器官分化とその後の生育は異なるホルモン条件を必要とし， この条件 ） はバレイショ 塊茎組織の培 １９７０ 調節はその器官の正常な生育にとって重要な問題である． 桂ら （ 論じているが 養における根の分化と生長過程のホルモン条件の変動について ， 本研究においても不 定芽の誘導とその後の生育に対するホルモン条件の相違がみられる点を考慮すると， 芽の正常な生 長にはホルモン条件の時間的調節の重要性を看過 できない． ２ （ ） 不定芽形成におよぼす球根の生育， 貯蔵時期の影響 一般に不定芽形成の成否を決める最も重要な要因として， 添加オーキシンとサイトカイニンの相 第 ６表 ＮＡＡ. 培養リン片の不 定芽形成におよ ぼす種々 のオーキシン 組合せの影響 ＩＢＡ. ＩＰＡ ＫＩＮ濃度 （ｍ ／足） ｇ. 不定芽形成率. 不定根形成率. （％）. （％）. ３. １．５. ０. １. ０. ０. ３. ３. ０. １. ０. ０. ３. ０. １. ０. ０. ３. ４．５ ６. ０. １. ０. ０. ３. ０．３. ０. ８．３. ０. ０. ３．３. ３. ０．６ １. １．５ １．５. ０. ３. ０. ６．３. ０. ３. １．５. ０. １．５ １．５. １２，５. ０. １２．５. ０. ３. ３. ０. １，５. ３. ４．５. ０. １．５. ０. ０. ３. ６. ０. ０. ０. ３. ３. ０. １．５ ０，５. ０. ６．２. ３. ３. ０. ２ １. ８．３ ８．３. １７. ０. ３. ０. ３. ３. ０. ６. １. ０. １５. ３. ０. １２. １. １１. ５０. ３. ０. ２４. １. ２３．５. １２. ０. ０. ２４. １. ０. 培養材料：、Ｒｅｄ Ｅｍｐｅｒ ｏｒ. ８ ） （ ５. １３．３.
(12) . 組織培養法によるチューリ ッフ１求根の増殖. 第７表. 培養リン片の不定芽形成におよぼす種々 のオー キシン組合わせ の影響 （１ ７週間培養）. オ ー キ シ ン 濃 度 （ ／ｇ） ｍ ｇ 工ＡＡ. ５９. Ｎ 、ＡＡ. 不定芽形成率. カルス形成率. （％）. （％）. 工Ｂ Ａ ２，４－ Ｄ. ３. ３. ０. ０. （ ２１ ）. ３. ６. ０. ０. （ ７）. ８６. １２. ３. ０. （ ２８ ）. ｌｏｏ. ′. ｌ ｏｏ. ３. ０. ０ ・３. ０. ０. ３. ０. １２. ０. ０. ８８. １２. ０. ３. ０. ０. １４. ６９. ３. ０. ０. ０．５. ２１．４. １００. ３. ０. ０. １. １００. １２. ２８，６. ０. ０. ８６. ３. ３. ０，５ ０. ０. ０ ０. ３. ６. ０. ｌ ｏｏ. ０. ６. ３. ．０. ７，１ （ ３１ ） （ ３６ ）. ｌ ｏ ｏ. ０. ３. ０. ０. ３. ０. ．. １００. ０，５ １. ７，４. １００. ０. １００. ６，３. １００. ０. ６. ０. ０. ０. ３. ０．５ ０，５. ０. ０. ３. １. （ ８）. ７５. ３. ０. ３. ３. ３. ５，９ （ １５）. １００. ３. ０．５ ０，５. ０. ７８. ｌｏｏ. ′ 培地：Ｋ工Ｎ Ｉ２ｍ 培養材料：、Ｒｅ ｄ Ｍａ ｔ ／２含有 ａｄ ｏｒ ． ｇ （ ）は不定芽様突起がカルス化したもの. 第８表. 培養リン片の不定芽および不定 根形成におよ ぼす 各種サイ トカイ ニンの影響 （ １週間培養） ２. サイトカイニン濃度 （ｍ ／ｅ） ｇ Ｋ工Ｎ. 不定芽形成率. 不定根形成率. （％）. （％）. カ ルス 形成. Ｉ．２ １．８. １１. ６０. 十十. １４. ５０. 十＋＋. ＢＡ. １，２. ６１. ０. 十十. ３７. ０. 十＋ ＋. Ｚ ＩＡ. １．８ １，２. ７４. ０. 十＋＋. ６５. ０. 十十. ２ｉ Ｐ. １．８ Ｉ．２. １５. ７６. ＋十＋. １，８. ２０. ５３. ＋＋＋. ′ 培養材料：、Ｒｅ ｄ Ｍａ ｔ ａｄ ｏｒ ４－Ｄ １ｍｇ と ２， ／ｅ 含有. 培地にはＩＡＡ. （ ５ ９ ）. ３ｍｇ ／２.
(13) . 西. ６０. 第９表. 内. 義. 男. 培養リ ン片の不 定芽形成におよ ぼす ２種 類のオーキシン組 １ ７週間培養） 合わせの影響 （. ） 濃度（言え 喜ニメシン ｒ. 不定芽形骸 弄. 不定芽芽 欄． ２．２ ３．９. ３. ０．６. ５６．３. ３ ３. １，５ ３. ９２．３ ５０．５. ３. ４．５. ６４．２. １．４ １，８. ３. ６. ５６．３. ２．ｏ. ｏ. ３. ０. ｉ ｌ ｔ 培養材料：Ｔ ｓ ｅｓ ｒ ｖ ．ｓｙ ， 培地：ＫＩＮ. ０. ／ｇ含有 １ｍ ｇ. 互比率が挙げられている． しかるに， 本実験結果で指摘された事実として， 同一の培地条件 であっ ても， 供試材料であるリン片の採取時期によ って， その不定芽形成に大きな差異がみられた（西内，. １９７９）．. 球根類 では生育時期によ って， それぞれ生理的諸 活性が異なり， 貯蔵物質や内生ホルモン含量に 組織におけ ７４ ） ｓ も大きな変動があるといわれる （Ａｕｎｇ ．１９ ，Ｒｅｅ ． 例えばタマネギやニンニクの培養 １ ９ ） 大沢ら ７ ７ ７９ る旺盛な不定芽形成には休眠覚醒後の母球を使用している（藤枝ら， １９ ， ． これら ．. は母球の生理的齢の相違により， 培養材料のホルモン含量の変動と同時に， その添加ホルモンに対 する感受性の差異によるものと言われる． 球根類ではないが， シンビジュウムの生長点培養（Ｕｅｄａ ） では 内生サイ トカイ ニン含量が苗条形成を支配する 要因として知られている． ら， １９７０ ’の培養リン片に おいてもその不定芽形成に対する添加カイネチンの適濃度が， 球根の ｔＡｐｅ ｌ ｄｏｏｒｎ ’球根の内生サイトカイニン ｔＡ ｌ ｄ ｒｎ ） 齢に応じて時期 的に変化した（西内， １９７９ ． 他方， 生育中の ｐｅ ｏｏ 活性は第２図のように， 新球の肥大 がはじまる茎葉伸展期はサイ トカイニン活性が極めて高いが， 球根の肥大生育に伴って急減し， 収穫時には最 低値を示した． さらに， その後の球根貯蔵中の温度 によっても著しい影響をうけている． したがって， 球根の継時的リン片培 養にあたっては， その不 定芽形成に季節的変動がみ られるのは当然で， この一因として， リン片組織のサイ トカイニン含量 が関与しているものと推察さ れる．. ） 不定芽形成におよぼす培養 温度の影響 （ ３ ） ９７８ チュ ーリ ッ プの種子の発芽（幼芽， 幼根の伸長生産）には５℃低温が適しているが（新美， １ ， ℃と 能な１ ５ リン片培養における不定芽形成には 低温要求性はみられなかっ た． また不定芽形成が可 ２３℃ では， それぞれの温度条件に 応じて， 必要な添加カイネチン濃度が異なり， その濃度は１５℃ で チン濃度の違い ） ０ は高く， ２３℃ では低いことが認められた（西内， １９８ ． このよう な温度対応力イネ はオーキシンによ って誘起される不定芽形成促進効果にも相違をもたらし， 培養温度による不定芽 形成能の差異として表現さ れるものと考えられる． ｔ ’ ｔ ‐ ｓｅｎ チューリ ッ プの光合成の適温は， 早 咲 き の ＲｅｄＥｍｐｅｒｏｒ で は １０～１５℃， 遅 咲 きの ＧｅｎｅｒａＩＥｉ. ’でも １５～２０℃ を 示 し て い る（折 谷 ら １９７５ ）． チ ュ ー リ ッ プ に は 早 春 の 比較 的 低 温 が 適 温 であ ｈｏｗｅｒ ，. ３０℃） 培養による培養 組織の枯死は高温に よる生育障害のためと解され ることからみて も， 高温 （ る． また， 不定芽は２０～２３℃ で良く形成さ れたが， この温度は チューリッ プの生育適温より若干， 高いことから， 不定芽形成の適 温と形成後の生育 適温は異なることが予想される． 一方， 低温（５℃） で培養したリン片は， その後の室 温培養により不定芽形成をみた． これは５℃のような低温はリン （ ０ ） ６.
(14) . 組織培養法によるチューリッフ１求根の増殖. ６１. ◆対し抑制的に作用するが 不定芽形成能を消失させるもの ではない 不定芽 ， ． ５℃処理はその生育 を促進するものと解される ． 不定芽の形成 数に対する培養 温度と カイ ネ チン濃 度の関連性 について みると 比較 的低 温 の ， ℃， ２０℃ ではカイネチン濃度が高い場合に不定芽数が増加するが ２５℃ では逆に減少す る傾向が ， られた （第１ ０表） ． 結局， 不定芽形成率が良好な場合には不定芽数も増加する傾向がみられた． れらの結果から培養温度は２０～２３℃が不定芽形成のた めの適温と考 えられる ．. 不定芽形成におよぼす母球の温度処理の影響. 収穫後の球根は外観的には休眠状態にあるが 球根内部では次年度の茎 葉 花器などの器官形 ， ， ， が除々に進み，これに伴い，リン片内の糖や窒素含量の顕著な変動がみられる（西内 奥山 １９７２ ） ， ， ． 方， 収穫後は内生ジベレリン活性 が低下する（Ａｕｎｇ １９ ６ ７ ） 種々の温度によ る培養材料の前処理 ， ． 影響 に つ い て Ｂｅｇｏｎｉ ｉｍａｎ ｔｈａ では １５℃ あ る い は １８℃ で２ ～ ４週間の前処理 をすると培 ａ × ｃｈｅ 第ｌｏ表. 培養リン片の不定芽形成 におよ ぼす培養温度とカイネチン濃度の影響 （１３週間培養）. 培 養 温 度. カイネチン濃度. 不定芽形成率. （腿／８）. （％）. １３. ２２，４ ２４，０. ２０. ０．６ １，０. １，２. ２０. ４２．０ ４６，０. ２，０. ２５. １．８ １．２. ２．３. ２６．７. ２５. １．２. １，８. ２４，４. ０，７. 培養材料：、Ａｐｅ ｌ ｄ ｏ ｏｒ ｎ′. 培地：２， ４－Ｄ. １ｍｇ ／ｅ 含有. 培養リン片の不定芽形成に およ ぼす母球の高温処理の 影響 １ ３週間培養） （. キ ュ アリ ン グ. キ ュ アリ ン グ. 処理温度（℃）. 期間 （週）. 不定芽形成率. 不 定芽数. イン片組織. ２０. １. ３９．５ （％）. ３０. １．５. １. ８３．３. ７. ３５. １. ５３．３. ２０. ２. ６８. １．５ ４. ７６. １０，３. ４８. ３．８ ３，３ ５，５. ３０. ２. ３５. ２. ２０. ３. ３０. ３. ５８．４ ７０. ３５. ３. ５２. ２０. ６. ４２．３. ３，７ １，２. ６. ２２，２. ０，６. ６. ５０. １，３. ３０ 室. ン片組織. １．２ １，８. １３. 第１１表. 不定芽数. 温. ，. 培養材料：、Ａｐｅ ｌ ｄｏｏ ｒげ球根を各々の温度でそれぞれ１週キュアリン グは７月２ ０日、 ２週キ ュアリングは７月２７日、 ３週キュアリン グは８月３日、 ６週キュ アリン グは８月２４日に培 養した。. （ ６ １ ）.
(15) . 西. ６２. 義. 内. 男. ｌ ｉ ｉ ｉ ｓｏｒ ｅｎｔａ ｓ では １６℃ で７ ～２１ ｂｅ ｓ ｃｈｌ９７４ａ，１９７４ｂ）． Ｈｅｌｏｎｉｏｐｓ 養中の不定芽数を増加させ（Ｆｏｎｎｅ ｔｏ ら， １９７９）． タ マ ネ ギや ニ ンニ ク の 組 織 培 日間の前処理により形成さ れる不定芽が増加する （Ｋａ ９ ７９ 養では休眠覚醒後の母球を使用すると不定芽の形成が活発に行 なわれる （藤枝ら， １ ， 大沢ら，. 求根の場合は， 外観上の休眠は夏の高温によって深まり， 続いて秋から冬の低 ） １９７７ ． チュ ーリ ッフ筆 グした材料を用いる ） ７６ 温によって覚醒する（青葉ら， １９ ． したがって， 収穫後の室温でキュアリン ） 事実は培地の添加ホルモンに対するリン片組織の感受性 ０ と不定芽形成が促進される （西内， １９８. の変化に 基ずくもので， キュアリン グによる球根目身の内生ホルモン量の 変動も不定芽形成能の増 強に関与する可能性につ いて否定できない． ３％を示し， そ ３０℃１週間キュアリン グした球根のリン片培養では不定芽形成率が極めて高く， ８ １表） の不定芽数もリン片あたり７本を示した （第１ ． 収穫後の球根を高 温でキュアリン グすること. は球根の休眠を一層， 深めることに なるが， 第３図のように高 温１週間処理ではリン片のサイ トカ イニン活必が著しく 高まっ た．. （ ｍの ダ イ ズ カ ルス（ 生重. 量. ｆ Ｒ. ０ ５ ．. 処理前. ０. １ ０. ３０℃ １週間処理. 第３図. 考. ０ ５ ．. ０ ５ ．. １. ３０℃４週間処理. . . ０. ３５℃ １週間処理. ０ ５ ．. １. ３ ５℃４週間処理. 高 温処理球根のサイ トカイ ニン活性 （Ａｐｅ ｌ ｄｏｏｒｄ） （. 察. リン片培養においてカルス形成の容易な品種を選び， 不定芽形成の可能性を追求した と こ ろ， カ ’ （ （ Ｍ ｄ ’ ル ス 形 成 が 容 易 で， そ の 後 の 増 殖も 盛 ん な Ｔ．ｐｒａｅｓｔａｎｓ ， ＲｅｄＥｍｐｅｒｏｒ， Ｒｅｄ ａｔａ ｏｒ な ど では ｔ ｌｄｏｏｒｄ では 培 養 ２ ヶ月 で不定芽が形成 ｉ 不 定 芽 の 形成 が 困 難 で あ っ た． こ れに 対 し， Ｔ．ｈａｇｅｒ ， Ａｐｅ （ ｌ ｄｏｏ ｒｄではリン片横断切片の維管束附近に された． これらの不定芽はその形成部位が異なり， Ａｐｅ 生 じ た． こ の よ う な 相 違 は 栽 培 品 種 のｔＲｅｄ 形成さ れたが， Ｔ． ｈａｇｅｒｉ では 表 皮 附 近 の カ ル ス か ら. ’と 原 種 の Ｔ ｓｙｌｖｅｓ （ ｔＲｅｄ Ｍａｔａｄｏｒ ｉ ｔｒ Ｅｍｐｅｒｏｒ ｓ の 間 でも み ら れ， 結局， 栽 培 品 種 と 原 種 と の 不 定 ． ，. 芽形成能の相違によるものと考えられる．. 培養片やカルスか らの器官形成には２つの型があり， ニンジンのカルス細 胞から不定庭形成を経 ） と， 芽や根 の 器官 形成に よる 型 ９５７ 由する植物体再生 を１つのモ デルとする 型 （Ｓｋｏｏｇ ら， １ ｌｄｏｏｒｄ の 不 定 芽 形 成 は 明 ら か に 不 定 芽 （Ｓｔｗａｒｄ ら，１９６４）と が知 ら れ て い る． 本 実 験 に お け るｔＡｐｅ. ｉの場合は形成される不定芽数が極めて多いことから， 不定雁形成によ 形成型に属するが， Ｔ．ｈａｇｅ ｒ ） （ ６ ２.
(16) . 組織培養法によるチ 求根の増殖 こ ーリ ツ の日 ュー ユ ジ ッフ１ ｍ 、舌 ，. ６３. る も の では な い か と 思われた． しかし， そのカ ルス培養を行なったところ不定芽様の分化が多数 み. ｉも不定芽形成型に属するものと思われる。 られたことから， Ｔ．ｈａｇｅ ｒ 組織培養における器官分化は適当 な培地条件や培養条件を与 えることによ り誘導さ れる力～. チューリ ッ プではこれに加えて培養材料の調製の条件が問題となった。 すなわち， 材料のリン片を 採取する母株の生育段階との関連で， いっ調製し培養するか， また， その材料に対してどのような 温度の前処理をするかなどによ っ て’ 不定芽の形成は顕著な影響を受けた。 培地条件では無機塩類， 炭素源， 生長調節物 質， ビタミン， 天然抽出物， 寒天， 水素イオン濃度 などが問題となるが， 本実験における培養リン片の不定芽形成は， 基本的にはオーキシンとサイト. カイニンの適度な濃度の組合せによって調節さ れることが明らかにされた， 不定芽形成に 必要な ’やｔＲｅｄ Ｍａｔａｄｏｒ ’ ＲｅｄＥｍｐｅｒｏｒ オ ーキ シ ン やサイ トカイニンの種類や濃度は品種によっ て異なり，ｔ では オ ー キ シ ン の 混 用 に よ っ て 不 定 芽 形 成 が可 能 と な っ た。 こ の よ う な オ ー キ シ ン 混用 の 例 は キ ク ｌ ｉ の頭状花の培養 （ ） でも み ら れ て い る。 ま た， ２，４－Ｄ の よ う な 活性 の 強 い オ ー キ シ ｚｕｋａ ら， １９７３. ンを含む培地からＩＡＡ のよう な活性の 比較的弱いオーキシンを含む培地に移 植することにより （Ｃａｒｔｅｒ ら， １９６７， Ｎｉｓｈｉ ら， １９７３）， あ る い は， オ ー キ シ ン を 含 む 培 地 か ら， こ れを 含 ま な い か，. ま たは 濃 度を下 げた 培地 に移 植す ることによっ て 器 官分 化を引 きおこすこ とも知 ら れて いる. ｌ ｉｎ ｉｎｅ （Ｈａ ） ９６ ８ ｐｅｒ ，１９６９ ， Ｌｅｖ ，１９５０ ， Ｒａｏ ら， １ 。 すなわち， オーキシンの混用や培養中のオーキ. シン濃度を種々調節することなどによって器官分化が可能となる例も多い． これはオーキシン要求 性が品種によって異なり， また， 脱分化と再分化におけるオーキシン要求性の相違によ るものであ る．. 培地の水素イオン濃度は不定芽形成に関与し， 最適水素イオン濃度は ｐＨ４．５～５ ．３の範囲にあっ. た． 一 般 に は， 組 織 培 養 の 培 地 の ｐＨ 価 は ５．５～５．８ の 間 に 調 節 さ れ る こ と が 多 い が， レ タ ス で は. ） ０が良好 ｐＨ５ ，５～６．５で不定芽形成が良好 であり（佐々 木， １９７９ ， ユリの幼膝培養 では ｐＨ４．４～５． ）など， 結局， 組織培養における最適 ｐＨ 価は植物種により異なるといってよ である（浅野ら， １９７７ ｉ ｔ い． 培地の水素イオン濃度は養分吸収などを左右し （Ｍａ ） ７５ ｒ ｎ ら， １９ ， これを介して不定芽形成 にも影響をおよぼすものと 思われる。. 培養条件では， 一般に温度や光の影響が考えられるが， チューリッ プは感温性植物で， 生育の各 段階に応じて， その最適温度は著しく変化し， また， 貯蔵中の球根においても球根内での器官形成， ） ０ 発育と関連した複雑な温度要求性が認められている（伊東ら，１９６ ， 志佐ら，１９６７ ， 高野ら，１９６６ 。 ｌ ｌ ｌ ｉａ の 葉 片培 養 （Ｗｅ ） では 低 温 が 不 ） や， Ｌｕｎａｒ ｅｎｓ ｅｋ，１９６１ ニ ン ジ ン の カ ルス 培 養 （Ｓｙｏｎｏ ，１９６５. ｈｅ ｔ ｔ ｒｅ 定芽 形成を促進し， キクイ モの塊茎 組織からの発芽は 変 温処理により促 進さ れる （Ｇａｕ ， 知られているが 本実験 でも培養温 １ ９７ ９ 培養温度が器官分化に影響を与えることが ） このように ， ， ． 度によって植物ホルモンの最適濃度が変化したことから， 結局， 植物ホルモン要求性も培養 温度に よって異なるものと推察さ れた． チュ ーリッ プ種子の雁培養では４℃ で良く生長し， 幼根や子葉の伸長もみられるが， ２４℃ では奇. ） 形化することが知られている（新美， １９ ７８ ． 本実験において培養後， 約９週で不定芽の原基が形成 されるが， その後の低温処理により不定芽の発育は 良好となる。 しかし， 培養後直ちに５℃ 処理す ると不定芽原 基の形成は抑制され， 室温に移した後， はじめて不定芽が形成された。 室温でキュア リン グした球根から１０月以降にリン片を採って培養すると不定芽は全く 形成されない．この原因と して， 球根の室温キュアリン グ中における齢の進行により， リン片の生理的諸活性の低下や抑制物. 質の蓄 積などをきたし， これが不定芽形成の阻害要因と なる可能性も考慮される。 これに対し， 収 穫直後にリン片を採取し， 直ちに９週間低温処理 （５℃） した場合は低温により生理的齢の進行の ） （ ３ ６.
(17) . 内. 西. ６４. 義. 男. ２月に至ってもなお不定芽形成能をもつ事実は前記の示唆と矛盾しない． 遅延をきたし，その結果，１ さらに器官形成を支配する要因の 一つとして 内生サイ トカイ ニン含量があげられる （Ｕｅｄａ ら，. ｌｄｏｏｒ口 の リ ン 片 の サイ トカイ ニ ン 活 １９７０）． 本 実 験 に お いて 示 し た よ う に， 不 定 芽 形 成 の 容 易 なｔＡｐｅ ’では そ の 活 性 が 低 い こ ｔ ｔ ｔ ｌ ｌ ｉ ａｍ Ｐｉ 性は高いが 不定芽形成のみ ならず カルスの形成も困難な Ｗｉ ，. ， ， のような内生サイ トカイニン活性と不定芽形成の関連は球根を高温処理した場合にもみられた． こ のように， 不定芽形成の容易な品種において， あるいは不定芽形成を高める処理によ り， いずれも. サイ トカイ ニン活性の増加をきたす事実より， 培養リン片の不定芽形成能は内生サイトカイニン活. 性と関連しているものと推察される．. 引用文献 １一５ ４ ３： ５ ７６ 山形農林学会報 ３ 青葉高 渋谷幸男 １９ ．. ｌ ｉ － － －４２３ ） 公仏 Ｈｅにｈ Ｂ ＡＰＰｅ ｌｇｒ ｏ ｅｎ ・ ． ２７：４１７ ． Ｐ１ａｎｔ ． Ｐｙｈｓ ． ． １９７２ ，ルエ ａｎｄ（. ２２一３ ２ ３ ９年秋 ３ ４ 園芸学会昭４ ９７ 浅平端 河原林和一郎 １ ． ３ ２ ）：２ ６７一２ ７ ７７ 図学雑 ４６（ 浅野義人 明道博 １９ ，. ｌ ＩＰｈｙｓ ｉｏ ｌ Ａｕｎｇ ｔｏｇｈ ａｎｔ ＆ Ｃａ ． ． ８：２０１－２０５ ． １９６７ ． Ｐ１ ． Ｈ．ａｎｄ Ａ． Ａ．ＤｅＨｅｒ ，Ｌ ２ １ ４：１０２９－ Ｎ ｋ ｈ ｈ ｉ １ ９ ６ －１０３０ ｄ ｄ Ｂ Ｔ ７ ｔ Ｙ Ｃａｒ 。 Ｙ ｕ ｒ ｅ ａ ｔｅ ａ ａ ａ ｓ ａａ ｎ ａ ｌ ｍ ー ａ ｒ ． ． ． ． ， ・ ， ・ ｉ ｄ Ｆｏｎｎｅｓｂｅｃｈ ｏｌ ・ ・ Ｐ１ａｎｔ ． ３２；４９－－５４ ． １９７４ ． Ｐｙｈｓ ，Ｄ ｉ ｌ － － －２８６ ＦｏｎｎｅｓｂｅＣｈ ｏ ． ． Ｐ１ａｎｔ ． ３２：２８２ ． １９７４ ． Ｐｙｈｓ ，Ｄ江. ４ ２ ）：１ ８６－１９ ８（ ９７ ９ 園学雑 ４ 藤枝国光 松岡法恵 藤田幸雄 １ ． ８４ ６ ６一１ 藤井利重 １ ９６ ８ 園芸植物の栄養繁殖 誠文堂新光社 １ ．. ２ ）：１５９一１７０ 藤 岡作 太 郎 １９６４ 園 学 雑 ３３（ ． Ａ １ ６ ９ Ｇａｕｔｈｅｒｅｔ Ｒ ９ Ｊ ｍ ｅ ｒ ． ． ５６：７０２一７１７ ， ｊ ． ． Ｂｏｔ ， ． ． １ ｉ ｌ ８ １ ６ ７ ７ ５ Ａ Ｈ ７ Ｔ １ ９ ｔ ｔ － － Ｇｅ ｉ ７ ７ ｔ ｕ ｒ ａ ｅ ： ｒ ｃ ｕ ｃ ａ ｏ ｅｒ ． ． ． ． ｉ 一４１８ 日ａ １ｐｅ ｉ ａｎｔｐｈｙｓ 。１ ｎ ｒ ． ． ２０：３９５一 ・ １９６９ ． Ｐ１ ，頓／ １ ｉ ｌ Ｐ １ ８ ８ ９ Ｐ ｈ ‐９２０ ｎ ｄ １ ９ ６ ５ ｔ Ｈｅ ｉ ｄｅ ： １－ ａｎ． ｙｓｏ． ． ． ． ，○．. ４一２５ ５ １年秋 ２ ５ ９ ７６ 園芸学会昭５ 細木高志 浅平端 １ ． ｉ ｉ ｉ ｔ － －２９６ Ｈｕｓ ｅｎｔ ａ Ｈｏｒ ｓ ｅｙ ． ． ６：２８７ ． Ｓｃ ，Ｇ． １９７７. ３ ０ ９：３２ ３一３ ６０ 園学雑 ２ ９ 伊東秀夫 加藤徹 豊田篤治 １ ．. ｔ ｉｍａ ｉｇａ ｌ ａｎｄ Ａ． Ｆｕｋｕｓｈ ｌ ｉ ． ４８：７９ ． Ｇｅｎｅ ｚｕｋａ ． ｊ ． ｊｐｎ ． １９７３ ， Ｒ． Ｍａｄｒ ， Ｍ． ，Ｅ． Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ， Ａ． Ｄｏｉ －８７ ． ｉ ｌ ｌ ＩＰｈｙｓ ３ ）：４９１一４９７ Ｋａｔｏ ｏ ａｎｔ ＆ Ｃｅ ． ． ２０（ ． １９７９ ． Ｐ１ ，Ｙ． ａｎｄ Ｎ． ｏｚａｗａ. 桂直樹 岡運養三 田川. ２ ０１一３０６ ）：３ 隆 １ ９７０ 北大農邦文紀要 ７（ ．. ｉ Ｋｏｄａ ， ． ４６：４９２一４９８ ． Ｓｃ ． １９７７ ． ＪａｐａｎＪ ． Ｃｒｏｐ ，Ｙ， ａｎｄ Ｙ． ｏｋａｚａｗａ ２ ９ ２ ４ Ａ Ｂ ３ ６ ３ ７ ｔ Ｌｅｖ ｉｎｅ Ｍ １ ９ ５ ０ ： Ｊ ｏ ｍ ｅ ｒ ． ． ． ． ． ． ． ． 前 田 英 三 １９６５ 日作 紀 ３４：１３９一１４７ ． ｉｎ Ｍａｒ ｔ ． ． Ｂｏｔ ． ５４：１２６４一１２７０ ． Ｃａｎ ． １ ． １９７５ ． Ｍ． ａｎｄ Ｄ． Ｒｏｓｅ ，Ｓ Ｈ ４ ｔ ｌ １ ９ ７ ｄ Ｎ Ｍｉ ｉ Ｍ Ｔ ｉａｎ ． ｗａｓｅ ｒ ． ． ４９：２４１一２４４ ． ． Ｊ ． ｏｒ． Ｓｃｉ ， ． ， ． Ｍｏ ｉ ｌ ： １５：４７３ ‐ 一４７９ Ｍ 【 ａｎｔ ｏ ｕｒａｓｈｉ ． ｇｅ ． Ｐ１ ． Ｐｈｙｓ ． １９６２ ，Ｔ． ａｎｄ Ｆ． Ｓｋｏｏｇ. ２ ３ １ ９一６ ９ ６８ 日作紀 ３７：６ 中島哲夫 山口俊彦 １ ． ８一３１ ９ ７年春 ３１ ２ 園芸学会昭４ 中山昌明 １９ ７ ． 中山 昌明 １９７３. 園芸 学 会昭４８ 年春 ４０２一４０３ ．. ４一３５ ３年春 ３５ ５ ８ 園芸学会昭５ 新美芳二 １９ ７ ．. － －１８８ ｉ ｉ ａｇ Ｎｉ ］ ｍａｄａａｎｄ Ｅ． Ｔａｋａｈａｓｈ ｓｈ ． ， Ｔｏｋｙｏ８６：１８３ ． Ｍ［ ． Ｂｏｔ ． １９７３ ，Ｔ． ， Ｙ． Ｙａ. １ ）：３２一３９ ７ ２ 北教大紀要２部Ｂ ２３（ 西内義男 奥山清 １９ ． ４ ９一６ ７ ６ 園学雑 ４５：５ 西内義男 明道博 １９ ． ｉ １ ｔ ）：９９一１０５ Ｎｉ ｓｈｉ ｕｃｈｉ ． 」 ． ４８（ ． Ｓｃ ． Ｈｏｒ ． Ｊ ． ｊａｐａｎ． Ｓｏｃ ，Ｙ． １９７９ ） （ ６４.
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