１
はじめに
国民の健康の保護を図ることを目的とした「食品衛生 法等の一部を改正する法律」（平成１５年５月３０日公布） により，食品中に残留する農薬等に関し，いわゆるポジ ティブリスト制が平成１８年５月２９日から施行されるが， 残留動物用医薬品については，新たに約２００物質につい て残留基準が設定される（現行の残留基準は３３物質）。 これにより各都道府県では，迅速に多くの物質を検査す ることが必要になるとともに，多くの物質について定量 値を求めることが要求される。 当部では，高速液体クロマトグラフ（HPLC）分析に よる残留動物用医薬品検査を担当しており，平成１２年度 からは前処理法にメタリン酸・有機溶媒混液による方法１） を採用２）３） し，平成１６年度には食肉を対象とした行政検 査（モニタリング）において１８物質の検査が可能となっ た。しかし，HPLC分析はマトリックスの影響を受けや すく，測定精度に問題があるため，HPLC分析で検出さ れ た 場合は，高 速 液体ク ロ マ トグ ラ フ／ 質 量分析計 （LC／MS）またはLC／MS／MSによる確認検査を行なう ことが要求されている。当部においても，LC／MSによ る分析に移行することにより，上記問題点を解決し，検 査物質数の増加を図る必要がある。 一方，四重極LC／MSの選択イオンモニタリング（SIM） モード分析は高感度かつ定量性に優れた分析法として， 動物用医薬品の分析にも利用されている４）。しかし， SIM測定は極性が類似の物質を一斉分析する場合，感度 が低下することがある。そこで，一般的に用いられてい るオクタデシルシリカゲル（ODS）カラムに加えて，カ ルバモイル基化学結合型シリカゲル（Amide）カラムを 用いた一斉分析法の有効性を検討したので報告する。２
方
法
２．１ 試料および試薬 試料は宮城県内で市販されている鶏肉・豚肉・牛肉を 用いた。 標準品は合成抗菌剤２７種，抗生物質２種，寄生虫駆除 剤９種，ホルモン剤３種を使用した。 ２．２ 装置および測定条件 LC／MSは，Agilent製１１００シリーズLC／MSDを使用し， LC／MS測定条件は表１，グラジエント条件は表２，物 質毎のMS条件およびグループ化条件は表３に示した。 ２．３ 検量線の作成 各 標 準 品 の２，１０，２０，１００，２００お よ び１０００ng／ml 混合溶液を調製し，さらに測定対象マトリックスで２倍 希釈した標準混合溶液を用いて検量線を作成した。定量 下限値は低濃度標準溶液（１～５０ng／ml）による５回 繰返し測定時の標準偏差の１０倍から求めた。 宮城県保健環境センター年報 第２４号 ２００６ －６３－食肉中の残留動物用医薬品のL
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平成１８年度のポジティブリスト制導入に向けて，平成１６年度までの検査対象動物用医薬品数１８物質（HPLC分析） を４１物質に増やし，LC／MSによる分析法の検討を行なった。前処理法にはアセトニトリル抽出法を採用し，カラム はODSおよびAmideカラムを用いた。一斉分析の評価基準として回収率が６０～１４０％，相対標準偏差が２０％以内であ ることを条件とした場合，本法により鶏肉中３３，豚肉中３６，牛肉中３３物質の動物用医薬品の分析が可能となった。本 分析法を利用して鶏肉・豚肉・牛肉合計１６検体を検査した結果，いずれの検体からも動物用医薬品は検出されなかっ た。 キーワード:動物用医薬品;残留分析;高速液体クロマトグラフィー／質量分析；食肉Keywords：vet
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２．４ 試験溶液の調製および標準添加 メタリン酸・有機溶媒混液法１） は操作が繁雑であるこ とから，操作が簡便で除蛋白効果の高いアセトニトリル 抽出法５） を採用した（図１）。標準添加試料は，試料換 算で０．１ppm，溶液濃度として１００ng／mlとなるように調 製した。 ２．５ 平成１７年度残留動物用医薬品検査 平成１７年度に保健所で買上した食肉３種１６検体につい て，本一斉分析法による残留実態調査を行った。 図１ 試験溶液の調製方法
３
結果および考察
３．１ MS条件の検討 動物用医薬品４１物質それぞれについて，フローイジェ クション分析（FIA）によるスキャン測定により，SIM イオンの決定およびネブライザー圧力，乾燥ガス圧力・ 温度，キャピラリー電圧，フラグメンター電圧の検討を 行った。移動相は水系溶媒としてギ酸，酢酸，ギ酸アン モニウム，酢酸アンモニウムを，有機溶媒としてアセト ニトリル，メタノールを用いて検討し，流速は０．２ml， 水系溶媒：有機溶媒＝１：１とした。移動相として， ０．０２～０．２％ギ酸とアセトニトリルを用いると多くの物 質で最も強いイオン強度が得られた。定量用SIMイオン は，［M＋H］＋でのモニタリングが３３物質，［M＋２H］２＋ が１物質，［M－H］－が７物質となった。このうち，LC の条件として最適であった０．１％ギ酸を用いた場合のMS 条件を表１および表３に示した。 ３．２ ODSカラムを用いたLC条件の検討 ４１物質をODSカラムにより分離検出する条件を検討し た。移動相は０．０２～０．２％ギ酸とアセトニトリルのグラ ジェントを用いて検討した。表１および表２の条件で， 最も良好な分離が認められた。しかし，２０物質が保持時 間３～１６分にまとまって溶出するため（表４），定量下 限値が大きくなる傾向が認められた。 －６４－ ⵝ⟎㧦#IKNGPVࠪ࠭.%/5& ઙ ᧦ 㧯 㧸 ઙ ᧦ 㧿 㧹ࠗࠝࡦൻࡕ࠼ '5+ RQUKVKXG QT PGICVKXG ࠞࡓ ᧲࠰ 65-IGN 1&56U OO ǴO
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表４ SIMのグループ化（ODS） ３．３ Amideカラムを用いたLC条件の検討 次にODSカラムと同様に，ギ酸／アセトニトル系を用 いて分析することが可能な順相分配系Amideカラムを使 用した場合の分析条件を検討した。ODSカラムで保持時 間３～１６分に溶出する７物質をAmideカラムで分析した ところ，４物質で感度の向上が認められた（図２）。特 に現行の残留基準値が０．０１ppm（牛，豚，鶏の筋肉等） であるレバミゾールで，試料換算０．００５ppm（基準値の １／２）の定量下限値が得られるようになった。両カラ ムで分析したレバミゾールのSIMクロマトグラムを図３ に示した。ピーク形状が改善されたため，マトリックス との分離が可能となり，感度が大幅に増加した。定量下 限値などを考慮し，７物質についてAmideカラムで分析 することとした。測定条件は表１～３に示した。 表５ 添加回収試験結果 ３．４ 添加回収試験 鶏肉・豚肉・牛肉を試料とした場合の添加回収試験の 結果を表５に示した。測定にあたり，絶対検量線法では 一定の真度が得られなかったので，測定対象マトリック スで２倍希釈した標準溶液を用いて検量線を作成し，回 収率を求めた。セフチオフル，デコキネート，２－キノ キサリンカルボン酸の３物質については，いずれの品目 でも回収率が６０％未満であった。 ３．５ 試料マトリックスの影響 生産地・部位等の異なる鶏肉・豚肉・牛肉について， それぞれ５～６検体を本一斉分析法により分析した。本 分析条件のみで判定不能な疑似ピークが表６に示す頻度 で出現したため，１～２種の確認用SIMイオンを追加し て再測定し，同定を試みた。その結果，全ての試料にお いて定量限界値を超える動物用医薬品は検出されなかっ た。鶏肉ではスルファジアジンが，豚肉ではダノフロキ サシンおよびオルメトプリムがすべての検体で疑似ピー クを出現させた。動物試料はマトリックスの影響が大き く，LC／MS分析であってもその影響を完全に排除する ことはできなかったが，確認用SIMイオンで再分析して， SIMイオンの強度比を標準品と比較することで同定が可 能であった。 宮城県保健環境センター年報 第２４号 ２００６ －６５－ ࡕ࠾࠲ ᤨ㑆OKP 0') ࡕ࠼ ࡕ࠾࠲ ࠗࠝࡦᢙ 215
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表６ 試料測定時における疑似ピークの出現頻度
４
まとめ
茨 ポジティブリスト制度導入に向け，平成１６年度ま での検査対象動物用医薬品数１８物質を４１物質に増や し，LC／MSによる分析法の検討を行なった。前処 理法にはアセトニトリル抽出法を採用した。 芋 一般的に使用される逆相系ODSカラムの他に，順 相系のカラムを併用して分析することで，感度が大 幅に改善される物質があった。 鰯 MS分析では試料マトリックスの影響によりイオ ン化が促進／妨害され，絶対検量線法では一定の真 度が得られないため，標準添加法が有効であった。 允 スクリーニング分析の評価基準として回収率が６０ ～１４０％，相対標準偏差が２０％以内であることを条 件とした場合，本法により鶏肉中３３，豚肉中３６，牛 肉中３３物質の動物用医薬品の一斉分析が可能となっ た。 印 検出された場合の確認方法として１～２種の確認 用SIMイオンを分析することで，同定が可能であっ た。参考文献
１）堀江正一，吉田栄充，斉藤貢一，中澤裕之：食品衛 生学雑誌，３９，３８３（１９９８）． ２）石川潔，高橋紀世子，赤間仁，大江浩：宮城県保健 環境センター年報，１９，１７１（２００１）． ３）赤間仁，高橋紀世子，石川潔，大江浩：宮城県保健 環境センター年報，２０，８４（２００２）．４）S.Bogialli，R.Curini，A.D.Corcoa，M.Nazzari，M.L.Polci： J.Agric．FoodChem.，５１，４２２５（２００３）． ５）村山三徳，内山貞夫，斎藤行生：食品衛生学雑誌， ３２，１５５（１９９１）． －６６－ ක⮎ຠ 㢚⡺ ⽋⡺ ‐⡺ QHNQZCEKP EKRTQHNQZCEKP FCPQHNQZCEKP UWNHCFKOKFKPG HWTC\QNKFQPG 㧙 㧙 UWNHCFKOGVJQZKPG PCNKFKZKE CEKF HNWDGPFC\QNG RKTQOKFKE CEKF VJKCORJGPKEQN UWNHCFKC\KPG 㧙 NGXCOKUQNG QTOGVJQRTKO VTKOGVJQRTKO
