（別紙）栽培実験計画書
栽 培 実 験 名
ス ギ 花 粉 ポ リ ペ プ チ ド 含 有 イ ネ（GluA2-F1、 GluB1-F2、GluC-F3、SH-Cry j 2、改 変ALS, Oryza sativa L.） (OsCr11） の 栽 培 実 施 法 人 ・ 研 究 所 名 国 立 研 究 開 発 法 人 農 業・食 品 産 業 技 術 総 合 研 究 機 構 生 物 機 能 利 用 研 究 部 門 公 表 年 月 日 平 成 28年 4月 19日 １．栽培実験の目的、概要 （１）目的 国 立 研 究 開 発 法 人 農 業・食 品 産 業 技 術 総 合 研 究 機 構（ 以 下「 農 研 機 構 」と い う 。）生 物 機 能 利 用 研 究 部 門 は、遺伝子組換え技術を用いて、スギ花粉症を治療する 治療薬の候補であるスギ花粉ポリペプチド含有イネ（GluA2-F1、GluB1-F2、GluC-F3 、SH-Cry j 2、改変ALS, Oryza sativa L.）(OsCr11）（以下、「遺伝子組換えイネ 」という。）を開発しました。 今回の栽培実験は、本遺伝子組換えイネの野外栽培における生物多様性影響評価等 のデータを収集するために行います。収穫物は、種 子 の 特 性 調 査 や 加 工 プ ロ セ ス の 開 発 、 有 効 性 ・ 安 全 性 の 調 査 等 に 使 用 し ま す 。 （２）概要 本栽培実験では、平成28年5月から平成29年3月まで、本遺伝子組換えイネの栽培試 験を行います。 ２．栽培実験に使用する第１種使用規程承認作物 （１）作物の名称
スギ花粉ポリペプチド含有イネ（GluA2-F1、GluB1-F2、GluC-F3、SH-Cry j 2、改 変ALS, Oryza sativa L.）(OsCr11）
（２）第１種使用規程の承認取得年月日等 平成28年3月31日に第１種使用規程（隔離ほ場における栽培、保管、運搬及び廃棄 並びにこれらに付随する行為）の承認を取得しています。 （３）食品安全性承認又は飼料安全性承認作物の該当性 食 品 安 全 性 承 認 作 物 及 び 飼 料 安 全 性 承 認 作 物 に 該 当 し ま せ ん 。 ３．栽培実験の全体実施予定期間、年度毎の栽培開始予定期間及び栽培終了予定期間 （１）全体実施予定期間 平 成 28年 5月 ～ 平 成 29年 3月 （２）年度毎の栽培開始予定時期及び栽培終了予定時期等 平 成 28年 5月 中 旬 ～ 播 種 ・ 育 苗 平 成 28年 6月 上 旬 隔 離 ほ 場 内 の 水 田 に 移 植 平 成 28年 8月 中 旬 ～ 出 穂 期 ・ 登 熟 期 平 成 28年 9月 下 旬 ～ 収 穫 ・ 脱 穀
平 成 29年 3月 ま で 越 冬 性 の 調 査 ・ 残 渣 等 の 処 理 （ 栽 培 終 了 ） ４．栽培実験を実施する区画の面積及び位置（研究所内等の区画配置関係） （１）第１種使用規程承認作物の栽培規模：隔 離 ほ 場 内 の 水 田 2,078㎡ （ 水 田 区 画 6ヵ 所 ： 隔 離 水 田 1 333㎡ 、 隔 離 水 田 2 329㎡ 、 隔 離 水 田 3 388㎡ 、 隔 離 水 田 4 381㎡ 、 隔 離 水 田 5 386㎡ 、 隔 離 水 田 6 261㎡ ） な お 、 水 田 近 傍 で 、 若 干 数 の ポ ッ ト を 用 い た 栽 培 も 行 い ま す 。 （２）栽培実験区画の位置：茨城県つくば市観音台２-１-２ 農研機構観音台第3事業場（以下、「観音台第3事業場」という。）（図１～３参照） 過去のデータ等から、本栽培実験区画では、イネの開花期の平均風速が毎秒3ｍを 超えないことを確認しています。 ５．同種栽培作物等との交雑防止措置に関する事項 （１）交雑防止措置及びモニタリング措置の内容 本遺伝子組換えイネの栽培実験区画は、観音台第3事業場外の最も近いほ場から約2 00ｍ離れています。また、「第１種使用規程承認組換え作物栽培実験指針」に従って、 観音台第3事業場内で試験栽培により開花させる同種栽培作物から30ｍ以上の隔離距 離をとります。 開花前の低温により交雑の可能性が想定される場合及び開花期に台風等による強風 が想定される場合には、防風ネットで抑風する等交雑防止措置をとります。 本遺伝子組換えイネは、食品安全性承認作物・飼料安全性承認作物に該当しないた め、図２に示す観音台第3事業場と外部との境界近くの10カ所で、本遺 伝 子 組 換 え イ ネ の開発に用いた「コシヒカリ変異系統a123」と茨城県における開花期が同時期で あるモチ系統「関東糯236号」を栽培して、観音台第3事業場外に本遺 伝 子 組 換 え イ ネ の花粉が飛散していないことを確認します。 交雑の確認は、キセニア現象（モチ品種にウルチ品種の花粉が受粉して玄米が半透 明になること）を利用して行います。キセニアが見られた場合には、本遺 伝 子 組 換 え イ ネ に導入した遺伝子の有無を検知できるPCR法による解析により、花粉源が本遺 伝 子 組 換 え イ ネ かどうかを判別します。交雑の確認に用いる種子数は合計１ 万 粒 以 上 です。 ６．研究所等の内での収穫物、実験材料の混入防止措置
④ 収 穫 、 脱 穀 作 業 は 全 て 隔 離 ほ 場 内 で 行 い 、 作 業 に は 専 用 の 機 械 を 使 用 す る か 、 あ る い は 、 使 用 後 に 機 械 等 を 隔 離 ほ 場 内 で 入 念 に 洗 浄 し ま す 。 ⑤ 収 穫 物 は こ ぼ れ 落 ち な い よ う 密 閉 容 器 等 に 入 れ 、分 析 を 行 う 実 験 室 や 隔 離 ほ 場 内 の 保 冷 庫 等 に て 保 管 し ま す 。 ７．栽培実験終了後の第１種使用規程承認作物の処理方法 ① 収 穫 し た 種 子 は 密 閉 容 器 等 に 保 管 し 、 種 子 の 特 性 調 査 や 加 工 プ ロ セ ス の 開 発 、 有 効 性・安 全 性 の 調 査 等 に 使 用 し ま す 。調 査 終 了 後 の 種 子 は オ ー ト ク レ ー ブ 等 に よ り 不 活 化 し た 後 、 廃 棄 し ま す 。 ② 栽 培 を 終 了 し た 植 物 体 の 地 上 部 は 刈 り 取 り 焼 却 処 分 す る か 、残 り の イ ネ の 残 渣 及 び 残 っ た 株 と と も に 隔 離 ほ 場 内 に 鋤 き 込 む 等 に よ り 、 確 実 に 不 活 化 し ま す 。 ８．栽培実験に係る情報提供に関する事項 ① 栽 培 実 験 を 開 始 す る 前 の 情 報 提 供 等 茨 城 県 、つ く ば 市 、Ｊ Ａ つ く ば 市 谷 田 部 及 び Ｊ Ａ つ く ば 市 へ 情 報 提 供 を 行 い ま す 。 今 後 も 栽 培 実 験 の 詳 細 に つ い て 情 報 提 供 を 行 い ま す 。 ② 説 明 会 等 の 計 画 平 成 28年 4月 19日 計 画 書 の 公 表 平 成 28年 5月 12日 栽 培 実 験 に 係 る 説 明 会 場 所 ： 農 研 機 構 ③ 近 隣 住 民 へ の 情 報 提 供 近 隣 自 治 会 の 自 治 会 長 宅 へ 出 向 き 栽 培 実 験 に 関 し て 情 報 提 供 を 行 い 、各 戸 に は 回 覧 で 栽 培 実 験 の 概 要 と 説 明 会 等 に つ い て の 情 報 提 供 を 行 い ま す 。 ④ そ の 他 の 情 報 提 供 栽 培 実 験 の 実 施 状 況 に つ い て は 、 農 研 機 構 ホ ー ム ペ ー ジ （ http://www.naro.affrc.go.jp/） で 情 報 提 供 を 行 い ま す 。 ⑤ 本 栽 培 実 験 に 係 る 連 絡 先 農 研 機 構 生 物 機 能 利 用 研 究 部 門 企 画 管 理 部 遺 伝 子 組 換 え 研 究 推 進 室 電 話 番 号 029-838-7138 ９．その他の必要な事項 特 に な し
（参考） 本遺伝子組換えイネは、スギ花粉症の主要なアレルゲンであるCry j 1（ペクテート リアーゼ）及びCry j 2（ポリメチルガラクツロナーゼ）の立体構造を改変したタンパ ク質をコードする遺伝子群を「コシヒカリ変異系統a123」に導入したものです。具体的 には、Cry j 1を3つの断片に分割し、個別にイネ種子貯蔵タンパク質と融合した改変C ry j 1-F1、-F2、-F3融合貯蔵タンパク質及び、Cry j 2を3つの断片に分割し、各断片 の順序を入れ替えて再結合したシャッフルCry j 2タンパク質（図４：これらをあわせ て「改変Cry j」といいます）を、それぞれイネ種子貯蔵タンパク質遺伝子プロモーター によって種子胚乳中に特異的に発現させています。これまでに、閉鎖系温室及び特定網 室において栽培実験を行い、生物多様性への影響を調査してきました｡その結果、イネ の形態や生育特性、有害物質の産生性、花粉稔性や種子特性 (発芽性や休眠性等) につ いて、本遺伝子組換えイネと「コシヒカリ変異系統a123」との間に統計的な有意差は認 められないことから、生物多様性影響が生ずるおそれはないと判断し、平成23年3月に 隔離ほ場における栽培の承認を申請し、平成23年6月に承認を受け、平成23年～平成25 年に隔離ほ場での栽培実験を行いました。また、隔離ほ場の拡張に伴い平成25年12月に 隔離ほ場における栽培の承認を再申請し、平成26年4月に承認を受け、平成26年～平成2 7年に隔離ほ場での栽培実験を行いました。 農 研 機 構 ホ ー ム ペ ー ジ で 、 研 究 の 概 要 を 紹 介 し て い る の で 参 照 く だ さ い 。 （ http://www.naro.affrc.go.jp/）
図１ 観音台第3 事業場周辺の地形図（国土地理院のウェブサービスより） 隔離ほ場は赤丸印の場所に位置します。
図２ 観音台第3 事業場内の配置図
（ 参 考 ） [こ れ ま で の 開 発 ・ 安 全 性 評 価 の 経 緯 ] 平 成 19 年 アグ ロ バク テリ ウ ム法 に よる 遺 伝 子導 入 実験 、 系統 選 抜 を開 始 平 成 21 年 閉鎖 系 温室 にお け る安 全 性評 価 を 開始 平 成 23 年 7 月 農 業生 物資 源 研究 所 の隔 離 ほ 場に お いて 栽 培開 始 、 同 年 11 月 に収 穫 平 成 24 年 5 月 農 業生 物資 源 研究 所 の隔 離 ほ 場に お いて 栽 培開 始 、 同 年 9 月に 収 穫 平 成 25 年 5 月 農 業生 物資 源 研究 所 の隔 離 ほ 場に お いて 栽 培開 始 、 同 年 9 月に 収 穫 平 成 26 年 6 月 農 業生 物資 源 研究 所 の隔 離 ほ 場に お いて 栽 培開 始 、 同 年 10 月 に収 穫 平 成 27 年 5 月 農 業生 物資 源 研究 所 の隔 離 ほ 場に お いて 栽 培開 始 、 同 年 10 月 に収 穫 [導 入 遺 伝 子 の 効 果 ] ス ギ 花 粉 症 で は 、 ス ギ 花 粉 に 含 ま れ る Cry j 1（ ペ ク テ ー ト リ ア ー ゼ ） 及 び Cry j 2 （ ポ リ メ チ ル ガ ラ ク ツ ロ ナ ー ゼ ） と 呼 ば れ る 二 種 類 の 酵 素 タ ン パ ク 質 が 主 要 な 抗 原 （ ア レ ル ゲ ン ） と し て 同 定 さ れ て い ま す 。 本 遺 伝 子 組 換 え イ ネ で は 、 ア ナ フ ィ ラ キ シ ー の リ ス ク 低 減 を 目 的 と し て 、 ア レ ル ゲ ン の 立 体 構 造 を 認 識 す る ス ギ 花 粉 症 患 者 の ア レ ル ゲ ン 特 異 的 IgE 抗 体 と の 結 合 性 を 低 下 さ せ る た め 、 こ れ ら 二 種 類 の ア レ ル ゲ ン の 立 体 構 造 を 改 変 し た タ ン パ ク 質 を 発 現 さ せ て い ま す 。 こ の こ と か ら 、 経 口 減 感 作 療 法 に 用 い る ア ナ フ ィ ラ キ シ ー の リ ス ク が 低 減 し た 免 疫 寛 容 誘 発 剤 と し て 導 入 遺 伝 子 産 物 を 利 用 で き る と 考 え ら れ て い ま す 。 [参 考 文 献 ] 1)斉 藤 洋 三 、 村 山 貢 司 、 井 手 武 (2006) 花 粉 症 の 科 学 化 学 同 人 2)石 井 保 之 (2009) ア レ ル ギ ー 疾 患 の 予 防・治 療 の 展 望 生 化 学 81 巻 3 号 209-217. 3)高 岩 文 雄 、 清 野 宏 (2010) 医 療 に 役 立 つ 経 口 ワ ク チ ン 米 の 開 発 農 業 及 び 園 芸 85 巻 1169-1172. 4)高 岩 文 雄 (2009) ス ギ 花 粉 症 緩 和 組 換 え 米 の 開 発 種 子 の 科 学 と バ イ オ テ ク ノ ロ ジ ー 学 会 出 版 セ ン タ ー 153-159.
