第 ８ 期 プ ロ ・ ナ ト ゥ ー ラ ・ フ ７ ン ド 助 成 成 果 報 告 害 （ ） 999）
イリオモテヤマネコ集団の保護をめざした遺伝子多様度の評価
哺乳類遺伝的多様性研究グループ
増田隆一1) ・押田龍夫1に黒瀬奈緒子2)
Anal y s i s of genet i c di v el s i t y on t he l r i omot e c at Popul at i on f ort hel r c ons er v at i on
Res ear c hGr ouP of Genet i c Di v er s i t yof Mammal s Ry ui c hi Mas uda 口z nl t s uo Os hi da ロ，Naok o Kur os e 2）
本研究の目的は、イリオモテヤマネコならびにツシマヤマネコ集団の遺伝的多様性を明 らかにして、今後の保護対策を検討することである。マイクロサテライトDNAおよび主要 組織適合遺伝子複今体( MHC) の対立遺伝子に着目して多様性を分柝したところ、集団内の 個体変異が低下していることが示唆された。それに対し、遺伝的に近縁な大陸産ベンガル ヤマネコ集団では豊富な多様性がみられた。この結果は、日本の両ヤマネコ集団の遺伝的 多様性が低下し、急激な環境変化への適応性や新しい病原体に対する抵抗性が低下してい る可能性を示唆している。進化の過程で培われてきた西表島および対馬の生態系や自然環 境を十分に保存すると共に新しい病原体の侵人を防ぐことが、両ヤマネコの保護対策に極 めて重姿であると考える。
目 的
昨 年 度 の 継 続 と し て 、 イ リ オ モ テ ヤ マ ネ コ 集 団 の 遺 伝 的 多 様 性 の 現 状 を 把 握 し 、 今 後 の 保 護 対 策 を 検 討 す る こ と が 目 的 で あ る 。 本 年 度 は 、 さ ら に ツ シ マ ヤ マ ネ コ 集 団 を 対 象 と し て 加 え て 調 査 す る 。 現 在 、 両 ヤ マ ネ コ の 個 体 数 は 各 々 100頭 前 後 と 推 定 さ れ て お り 、 適 切 な 保 護 対 策 を 構 築 し て い く こ と は 緊 急 の 課 題 で あ る 。 特 に 、 ツ シ マ ヤ マ ネ コ に つ い て は 、 個 体 数 の 滅 少 や イ エ ネ コ か ら の ウ イ ル ス 感 染 が 疑 わ れ て お り ､ 深 刻 な 問 題 を 抱 え て い る 。
分析方法 1）サンプリング
①環境庁西表ワイルドライフセンターならびに対
馬 ワ イ ル ド ラ イ フ セ ン タ ー の 協 力 の も と に 、 交 通 事 故 お よ び 生 態 調 査 捕 獲 の 際 に 得 ら れ た イ リ オ モ テ ヤ マ ネ コ お よ び ツ シ マ ヤ マ ネ コ の 筋 肉 ・ 血 液 ・ 体 毛 な ど の 組 織 を 用 い た 。 大 陸 産 ベ ン ガ ル ヤ マ ネ コ な ら び に 他 の ヤ マ ネ コ 類 の サ ン プ リ ン グ に つ い て は 、 種 々 の 動 物 園 の 協 力 を 得 た 。
② 筋 肉 祖 織 は 、 1× 1× 1c nl 程 度 を 70％ エ タ ノ ー ル に 保 存 し た 。 血 液 ｌ ∼ ２ ｍ ｌ は 、 冷 蔵 運 搬 後 − 80℃ に て 凍 枯 保 存 し た 。 体 毛 は 、 数 十 本 を 引 き 抜 い た 後 、 常 温 ま た は ４ ℃ に て 保 存 し た 。
③ 筋 肉 組 織 お よ び 血 液 か ら は フ ェ ノ ー ル ／ プ ロ テ ィ ナ ー ゼ K/ SDS法 に よ り DNA抽 出 を 行 っ た ｡ 体 毛 に つ い て は 、 キ レ ッ ク ス 100( Bi o･ Rad) を 用 い て 、
DNA抽 出 液 を 得 た 。
１ り ﾋ 海 道 大 学 理 学 部 附 属 勣 物 染 色 体 研 究 施 設 ( Chr omos ome Res eaf c h uni t , F ac uhy ofSc i enc e, Hok k ai do uni v er s i t y ) 2リ と 海 道 大 学 大 学 院 地 球 環 境 科 学 研 究 科 ( Gr aduat e Sc hoolofEnv i r onment al Eal t h Sc i enc e. Hok k ai douni v er s i t y )
７
④遺伝子増幅法（PCR法）により、高多型的遺伝 子であるマイクロサテライトDNAについて対立遺 伝子を検出した。PCRプライマーには、イエネコ から分離されたマイクロサテライトのプライマー を用いた。
⑤対立遣伝子の遺伝子頓度を算出することにより 遺伝子多様度（ヘテロ接合度）を計算した｡
⑥イリオモテヤマネコ集団、ツシマヤマネコ集団 および他のネコ科集団の間で遺伝子多様度を比較 検討した。
⑦MHC Cl as s H DRB については、その遺伝子の一 部（ベータ１鎖）を増幅するプライマーを用いて PCRを行った。そのPCR産物をプラスミドベク ターによりクローニングし､塩基配列を決定して、 対立遺伝子の検出を試みた。
結果と考察
( Λ ) マイクロサテライトDNA分柝:
10遺伝子座について分析した桔果、１つの遺伝 子座における遣伝子増幅は成功しなかった、その 他の９つの遺伝子座における対立遺伝子頻度と遣 伝子多様度( h＝1−Σ P､2､P: 各対立遺伝子の頻度) を算出した。選択なしに選んだ11蜃の大陸産ベン ガルヤマネコでは、平均ヘテロ接合度は約0. 6で あったのに対し､25頭のイリオモテヤマネコでは 多様性が全くみられなかった。さらに、５頭のツ
シマヤマネコの多様度も約0. 2と低い値となった。 既報( Menot t i - Ray mond and O' Br i en､1995) のネコ 科の平均ヘテロ接合度は0. 6前後である。私たち の桔果は、イリオモテヤマネコならびにツシマヤ マネコ集団の遺伝的多様性が極度に低下している ことを示唆している。現在、イリオモテヤマネコ の個体数は100頭前後と推定されているので、今 回のデータはイリオモテヤマネコ集団の実態を十 分反映しているものと考えてよいだろう。 ( B) MHC分析：
イエネコのMHC Cl as sI I DRB において、少なく とも５つの対立遺伝子グループ( F ec a DRBI - 5) が 知られている( Yuhk i and O' Br i en、1997) 。イリオ モテヤマネコ、ツシマヤマネコ、大陸産ベンガル
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ヤ マ ネ コ の DRBに お い て 見 い だ さ れ た 対 立 遺 伝 子 は 、 ２ つ の グ ル ー プ ( F ec a DRBI 、 2) に 属 す る こ
と が わ か っ て き た 。 さ ら に 、 ツ シ マ ヤ マ ネ コ に お い て 、 上 記 ５ つ の グ ル ー プ に は 属 さ な い と 思 わ れ る 対 立 遺 伝 了 ･ が 検 出 さ れ た 。 こ れ ら の 分 析 は 現 在 継 続 中 で あ る が 、 日 本 産 の 両 ヤ マ ネ コ は MHC遺 伝 子 に つ い て も 特 徴 を も っ て い る こ と が 示 唆 さ れ た 。
以 上 の 調 査 成 果 は 、 イ リ オ モ テ ヤ マ ネ コ お よ び ツ シ マ ヤ マ ネ コ が 遺 伝 的 に 単 一 化 さ れ 、 か つ 、 顕 著 な 遺 伝 的 特 徴 を も っ て い る こ と を 示 し て い る 。 こ れ ら 両 ヤ マ ネ コ の 遺 伝 的 多 様 性 の 低 下 は 、 西 表 島 な ら び に 対 馬 に 地 理 的 に 隔 離 さ れ て き た 桔 果 、 遺 伝 的 浮 動 ま た は 近 交 化 に よ り も た ら さ れ た も の と 考 え ら れ る 。 私 た ち は 、 こ れ ま で の 分 子 進 化 学 的 研 究 に 基 づ き 、 イ リ オ モ テ ヤ マ ネ コ お よ び ツ シ マ ヤ マ ネ コ は 各 々 今 か ら お よ そ 20万 年 前 ･ 10万 年 前 に ア ジ ア 大 陸 か ら や っ て き た も の と 推 定 し て い る （ Mas uda efal . ､ 1994） 。 両 ヤ マ ネ コ 集 団 が 西 表 島 や 対 馬 の 自 然 眼 境 に ゆ っ く り と 適 応 し な が ら 、 不 利 な 遺 伝 子 を 排 除 し て き た な ら ば 、 遺 伝 的 多 様 性 の 低 下 が 即 、 絶 滅 に 向 か っ て い る こ と を 意 昧 す る も の で は な い だ ろ う 。 し か し 、 両 ヤ マ ネ コ 集 団 に お い て 、 「 急 激 な 自 然 環 境 の 変 化 に 順 応 す る 能 力 」 や 「 新 し い 病 原 体 の 侵 人 に 対 す る 抵 抗 力 」 が 低 下 し て い る 可 能 性 が 予 測 さ れ る 。 こ の よ う な 考 察 に 基 づ く と 、 西 表 島 お よ び 対 馬 の 生 態 系 ・ 自 然 環 境 を 十 分 に 保 全 す る と と も に 新 し い 病 原 体 の 侵 人 を 防 ぐ こ と が 、 両 ヤ マ ネ コ の 保 護 対 策 に は 極 め て 重 要 で あ る と 考 え ら れ る 。
特 に 、 吋 馬 は 西 表 島 に 比 べ る と 面 積 は 広 い も の の 、 昔 か ら ヒ ト が 居 住 し て い る た め 、 生 息 域 の 破 壊 や 交 通 事 故 な ど に よ り ツ シ マ ヤ マ ネ コ の 個 体 数 は 急 激 に 滅 少 し て い る と 考 え ら れ る 。 さ ら に 、 最 近 １ 例 で は あ る が 、 ネ コ 免 疫 不 仝 ウ イ ル ス （ F I V） お よ び ネ コ 伝 染 性 腹 膜 炎 ウ イ ル ス （ F I PV） を も っ て い る 個 体 が 確 認 さ れ た 。 そ の F I Vが イ エ ネ コ 型 に 近 い こ と が わ か り 、 こ の ウ イ ル ス が イ エ ネ コ 集 団 か ら ツ シ マ ヤ マ ネ コ 集 団 に 伝 播 し つ つ あ る 可 能
性 が 高 い 。 今 後 は 、 ウ イ ル ス に 対 す る ヤ マ ネ コ の 感 受 性 な ら び に 個 休 へ の 影 Ｗ に も 注 ｎ Ｌ な が ら 遺 伝 的 調 査 を 進 め る 必 要 が あ る 。 さ ら に 、 感 染 を 防 ぐ た め に 、 野 生 化 し た イ エ ネ ニ j が ヤ マ ネ コ の 生 息 地 へ 進 入 し な い よ う な 対 策 を 早 急 に 立 て る べ き で あ る 。
辞
謝
木研究調査に 助成していただきましたPRO
NATURAフ ァ ン ド に 深 く 感 謝 い た し ま す 。 ま た 、 資 重 な 試 料 の ご 提 供 と ご 助 言 を い た だ き ま し た 、 環 境 庁 西 表 ワ イ ル ド ラ イ フ セ ン タ ー ･ 阪 目 法 明 氏 、 環 境 庁 対 馬 ワ イ ル ド ラ イ ソ セ ン タ ー ・ 池 雅 哉 氏 、 琉 球 大 学 ・ 伊 渾 雅 子 氏 、 鹿 児 島 大
氏 、 対 馬 支 庁 ・ 丈 ｀ ﾄ ﾞ 剛 司 氏 、 上 野 義 氏 、 1大 田 i l i 大 森 山 動 物 園 ・ 小 松 上 げ ま す 。
学・阿久沢正夫 動物園・伊東員 守氏に御札申し
Summar y
The obμt i v e of t hi ss t udy i st o c l ar i f y genet i c di v er s i t y on l r i omot e ( j t sand l i us hi ma c at sf ort hei r c ons er v at i on. Us i ng POl y mer as e( hai n r eac t i on ( I ｀ CR) and nudeot i des guc n( i ng t e( hni ques ･ we anal y z ed Pol y mor Phi c s t at us of nl i c r os at el l i t es and maj or hi s t oc omPat i bi l i t y ( oPml ex ( MHC) 山 s s Hgenes on t het wo POPul at i ons . Λs ar es ul t . weobs er v c d l ow genet i c
v ar i at i on on t hes e POPul at i ons ･ whi l e l he c ont i nent al POPul at i on of t hel eoPar d c at s howed ahet c r oz y gos i t y s i mi l ar t o t hos e Pr ev i ous l y r ePor l c d i n non' i s ol at c d POPul at i ons of ot her wi l dc at s Pc c i es . 111el ow genel i c v ar i at i on obs er v ed i n l r i omot e c at sand Ｒ us hi ma c at sc oul d hav e br ought t hr ough gc net i c dr i f tand/ or i nbr eedi ng dur i ng gc ogr aPhi c al l y i s ol at ed agc . Si nc e s uc hl os sof genet i c v ar i al i on mi ght hav e l ed t o a l ow nex i bi l i t yt o env i r onment al c hange and a l ow i mmunol ogi c al abi l i t yagai ns t newl y i nv aded Pat hogc ns i ndudi ng v i r us es j t i s v er y needed t o( ons er v et hePr es ent env i r onment andec os y s t emi nt hei s l ands andt oPn2v ent
i nt r odudi on of new Pat hogc ns i nt o t hei r habi t at s . A( t ual l y , s ome ｀ ' i r us c s Pos s i bl y c omi ng f r om domes t i c c at s hav e been r ePor t ed i n t he l i us hi ma c ahmt H now･
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