apparatusを用いて培養した場合は、TNFαレベルの増幅は見られなかった
（WTCD4+Ｔ細胞106±0.03、SOCS5Tg-CD4+Ｔ細胞1.09±003,9/ml、、=５，
有意差無し)。加えて、マクロファージをＷＴもしくはSOCS5Tg-CD4+Ｔ細胞
のＬＰＳ刺激培養上漬とともにマクロファージを培養した時､両者の間のTNFαレベルに差は無かった（WTCD4+Ｔ細胞099±001、SOCS5Tg-CD4+Ｔ細胞
0.95±0.04,9/m１，，=５，有意差無し)。TNFα増幅の背景にある分子機序を調 べるために、ＷＴマクロフアージをＷＴもしくはSOCS5TgのＣＤ4+Ｔ細胞存 在下でＬＰＳで刺激する際、抗IFNYIgGを加えた結果、SOCS5Tg-CD4+Ｔ細胞 によるTNFαレベルの増幅は完全に打ち消された。このように、SOCS5Tg‐CD4+Ｔ細胞はIFNY産生を通じてTNFα産生に影響するように思われる。
に示すように、CLP２４時間後の血清ＢＵＮ、ＣｒはSOCS5Tgマウスの方が低く、
ＷＴマウスより腎障害が弱かった。SOCS5Tg-CD4+Ｔ細胞を移入したRAG2-/‐
マウスもまたWTCD4+Ｔ細胞移入群に比べCLP２４時間後のＢＵＮ、クレアチ
ニンレベルは減少していた（BUN：42.9±４２対６２５±6.6ｍｇ/dL、クレアチニ
ン：0.21±０．０３対038±0.06mg/dL、各１０匹、ｐ<0.05)。組織学的には、ＷＴ
の近位尿細管上皮細胞は核崩壊し粒状ピンクの細胞質であり、急性尿細管壊死の状態だった。対照的にSOCS5Tgマウスでは組織学的変化はほとんど起
こらなかった（図3.16B)。ＷＴマウスに比べSOCS5Tgマウスでは、好中球浸入のマーカーである腎ＭＰＯもまた減少しており、TNFα、MIP-2、ＫＣレ
ベルも有意に減少していた（図3.17)。このように、SOCS5TgマウスはＣＬＰ による腎障害をうまく逃れ、ＣＬＰ後の生存率が改善したものと思われる。
5５
図3.17
ＭＰＯ(ng/mgprotein）
３００
Ａ
600
ユ戸
ＷＴ
SＯＣＳＳＴｇ
Cytokines(､g/ｍg）
Ｂ １０２０ 3０
ＷＴ
ＳＯＣＳ５Ｔｇ ＴＮＦａ
0.5 1.0 1.ｓ
ＷＴ
ＳＯＣＳ５Ｔｇ ＭＩＰ-２
３ ６
Ｗ丁
SＯＣＳＳＴｇ ＫＣ
SOCS5Tgマウスにおける腎ＭＰＯ、サイトカインレベル
CLP24時間後、マウスを屠殺。腎抽出液中のＭＰＯ（Ａ）、サイトカイン、ケモカイン（B）レベルをELISAで定量［
サイトカイン、ケモカイン（B）レベルをELISAで定量した。
*p<0.05,＊p<0.01。
5６
Ⅳ考察
Ｉｖ－１研究１の考察
研究１で我々は、ＬＰＳもしくはMALP-2刺激によりBALB/ｃマクロファー ジに比べC57BL/６マクロフアージは多くのTNFα、IL-12を産生するが、抗 炎症サイトカインIL-10産生に差は無い事を示した。この結果はこれまでの
報告(26,27)と共に、C57BL/６マクロフアージがBALB/cマクロフアージに比
べ炎症促進に傾きやすい事を示している。より重要な事に、マクロファージ の違いは獲得免疫にも影響を与えているようにも思われる｡すなわちC57BL/６ マクロファージによる高いIL-12産生がＴ細胞のＴｈｌサイトカイン産生を促 進している。IL-1Zは感染や炎症の早期に主に単球、マクロファージで産生
２
毛一■．．ハー■
ユ リ奴
44)。このようにマクロフアージ由来のIL-12は旱
WlH句へ０
期非特異的自然免疫と次に起こる獲得免疫の機能的掛け橋の役割を持つ。
我々のこの研究のデータは、Thl/Th2応答分化におけるマクロファージの重
要｜性に焦点を当てた。Ｂ ３１ 答
の差は､BALB/cマークロフＺ－ジにおいてThl応答を抑制するPGE2産生増加、
Sm４【1ｺ表示の低下などで説明され得る(26,27)。ＳＴｍ４欠損マクロフアージは－－－
ＷＴマクロファージに比べ、TNFα、IL-12を含む炎症'性サイトカイン産生レ
ベルが低かった(我々の未発表データ)。正確な機序を明らかにするために更
なる研究が必要である。
この研究で我々は、ＢALB/c、C57BL/６の間でマクロフアージのサイトカイ
ン応答に加え自然免疫応答にも違いがある事を証明した。第一にC57BL/６マ クロフアージはLPS､MALP-2刺激により殺菌分子であるライソゾーム酵素、
NO(45)を産生したがBALB/cマクロフアージでは産生されなかった。ＬｍＳら
もまたＢＡＬB/ｃマクロファージはＬＰＳ刺激でＮＯが産生されない事を証明し
5７
ている(23)。第２に、vitroでのマクロフアージの殺菌活性はBALB/ｃに比べ
C57BL/６が秀でていた。最後に、敗血症性腹膜炎モデルにおいてC57BL/６マ ウスはBALB/ｃマウスよりも効率的に菌を除去した。この関連で、ＣＬＰに対 する細菌除去の違いは、好中球の差がある事も一つの要因と考えられたが、
vitroでのＢALB/c、C57BL/6好中球の殺菌活性に差は無かった。加えて、LPS、
－－－－￣￣戸一一一一一
MALP-Z東リ激によるライソゾーム酵素放出、ＮＯ産生も両系統の好中球で差
がなかった(我々の未公表データ)。このように好中球は両系統の細菌除去に
差がある事に直接は関係していないようである。腹腔マクロファージは腹腔 で最初に細菌を迎え撃つ細胞である。我々はＣＬＰにおいて、細菌を除去する
のにマクロファージは必要不可欠な役割を果たしている事を示してきた(28, 29)。C57BL/６マウスが効果的に自然免疫を発揮するＣＬＰにおいて、マクロ
ファージは好中球の殺菌活性に影響を与えるであろうが、今回の我々のデー タではこれらのマウスの自然免疫はマクロファージの殺菌活性の差により運 命づけられている事が示唆された。ＢALB/ｃマクロファージの殺菌活』性が損 なわれる正確な機序はよく分かっていない。この機序を十分解明するために、
更なる研究を続ける必要がある。
ＣＬＰによる敗血症は、腹腔内で菌を除去するために白血球が侵入する事に
より始まる(5)。上に述べたようにBALB/ｃマウスのマクロフアージの殺菌活
性は損なわれているため、ＣＬＰによる腹腔内の細菌負荷が増えた。この研究 と以前の研究のデータで、ＢALB/ｃマクロフアージ自体はLPS、MALP-2刺 激でC57BL/６マクロファージほどサイトカインを産生しなかった。ＢALB/ｃ マウスの腹腔内に細菌が持続して存在した事が炎症`性サイトカイン、ケモカ イン増幅を導き強い局所炎症が引き起こされたのだろう。あるいはC57BL/６ マウスよりもＢALB/Ｃマウスに強く影響を与えるような他の細菌の構成物や 産生物質があったのだろう。細菌を局所から除去できなかったため、サイト カイン、ケモカインの産生が増幅され全身の過剰な炎症反応を来たし、ＳｌＲＳ
の状態に導かれる(14)。ＢALB/ｃマウスのＣＬＰへの感受`性の増加にはこの機
序があったのだろう。ＣＬＰ施行後のＢＡＬB/ｃの血漿、肝において炎症性サイ
5８
トカイン、ケモカインレベルはC57BL/６に比べ増加し、全身炎症の指標であ る急性期蛋白もBALB/ｃはC57BL/６に比べ有意に上昇した。C57BL/６マウス はＣＬＰにおいて正しい局所宿主応答を行い全身の炎症反応を抑えたため生存 率が良くなったのであろうから、感染において局所の自然免疫がいかに重要 かという事が分かる。
このような研究は重要である。強力な抗生剤の進歩やICUにおける患者管 理の進歩にもかかわらず、敗血症の致死率はこの３０年の間、あまり改善し
ていない(１，５１，５２)。敗血症の発症率には人種差がある(53)。この研究で我々
はBALB/ｃとC57BL/６のマクロフアージの自然免疫の能力に違いがある事を 証明した。ＢALB/ｃマクロフアージの殺菌活性はC57BL/６マクロフアージに 比べ障害されているため、ＢALB/ｃの敗血症性腹膜炎に対する致死率は増加 した。その上、これらのマウスのマクロフアージのIL-12応答の違いがＴ細 胞応答に影響し、下流の獲得免疫に影響を与えている。違う系統のマウスの 自然免疫の機能的な差を理解する事は敗血症の潜在的な見識を明らかにする だろう。
ＩＶ－２研究２の考察
研究２において、我々は敗血症中の宿主防御におけるＴ細胞中のSOCS5 の役割を探求しようと試みた。SOCS5はＴｈ２分化を阻害するＴｈｌ特異的タ
ンパクであり(40)、ヒトのリンパ組織で高く発現されている(54)。Ｔｈ２に偏っ た炎症のモデルであるアレルギー性結膜炎は、SOCS5Tgマウスで弱められた
(55)。このように、SOCS5はＴｈｌ応答を優先して、獲得免疫を歪める。最近
の我々のデータでは、敗血症中の宿主防御において、ＳＴ(Ｔに制御されたThl/Th2応答のバランスが重要である事を示した(15)(34)(35)。そこで、我々
は敗血症においてSOCS5が有益な役割を果たしていると仮定した。期待し た通り、Ｔ細胞特異的にSOCS5が過表示されたマウスはＣＬＰによる致死に
抵抗した。5９
自然免疫応答は感染に対し最初に働く宿主防御線であり、好中球、マクロ
ファージがその責任を背負い、浸入してきた細菌を効果的に除去している(5, 6)。一方、エピデンスが示すようにＴ細胞もまた感染に対する宿主防御に関
わっている。リンパ球欠損マウス（ヌードマウス、ＲＡＧＫＯマウス）は様々
な細菌感染に対し死にやすい(56）（57）（58)。HotchkissらはRAG-1KOマウス がＣＬＰに対し、血中細菌数の増加を伴って死にやすい事を証明した(59)。Ｔ 細胞機能が障害された免疫不全宿主の日和見感染のリスクは高い(60）（61)。
このように、Ｔ細胞は感染中の自然免疫において保護的に働いている。今回 の我々のデータは、Ｔ細胞、特にＣＤ4+Ｔ細胞が、細胞内でＳＯＣＳ５が強く発 現された場合、自然免疫を増幅させ、宿主の細菌負荷を軽減させ、続いて起 こる敗血症の主な死因である腎障害を緩和させる、という新たな側面を照ら
し出した。
この事はＴ細胞の免疫応答が歪められThl応答を優先させたせいであった。
Ｔ細胞におけるSOCS5の過表示により、ＩＬ－４によるＳＭＴ６活性化の経路が
抑制され、IL-12を介したＳｍ｡【Ｔ４の活`性化は阻害されず、IFNYは多く産生さ
れる(40)。INFYはマクロファージを刺激し、ＴＬＲ４表示を増幅させたり抗菌メデイエータであるＮＯやIL-12、TNFα産生を導いたりする事により、マクロ
フアージのＬＰＳなどの微生物産生物への応答力を高めている(62-64)。この研
究で我々は､SOCS5Tgマウスから得た食細胞は､殺菌活性が強くIL-12､TNFα
産生が増加している事を示した。ＷＴの食細胞はSOCS5Tg-CD4+Ｔ細胞とともに培養すると殺菌活`性が強くなった。Ｔ細胞は生理的条件下で腹腔内に存
在している（我々のデータではＴｈｙｌ２陽性細胞は11-16％）事を考えると、
これらの所見はSOCS5Tgマウスの腹腔在住Ｔ細胞が自然免疫応答に影響を
与えているであろうという事を示唆している。この研究で我々は、マクロフ アージをSOCS5Tg-CD4+Ｔ細胞とともに培養した時の方がWTCD4+Ｔ細胞と ともに培養した時よりも、ＬＰＳ刺激でのTNFα産生が増加する事を示した。しかしtranswellapparatusを用いてマクロフアージとＣＤ4+Ｔ細胞を別々に培
養した場合、そのような産生増幅は見られず、またＣＤ4+Ｔ細胞の培養上清に
6０