従来のプルダウンアッセイとの比較

従来のプルダウンアッセイ

G-LISA^TM

キット

アッセイ時間

10〜12時間 （2日間） 3時間未満

必要な細胞（タンパク質）量

1〜21タンパク質 （100#プレート） 1〜500タンパク質 （12ウェルプレート）

ライセートの沈殿

必要 不要

サンプル処理能

10種類まで 96種類まで （or それ以上）

定量性

準定量性あり 定量性あり

ハイスループット処理

× 〇

プロトコール

低分子量Gタンパク質活性を測定する新しい方法！

背景

 従来Rhoタンパク質の活性を測定するにはプルダウンアッセイを行っていまし た。しかしこの手法は時間がかかり、大量のサンプルを必要とするためハイスル ープットスクリーンには最適とはいえませんでした。これらの問題を解消するた めに、G-LISA^TMアッセイを確立しました。

使用目的

  細 胞 や 組 織 サ ン プ ル のRhoフ ァ ミ リ ー に 属 す る 各 タ ン パ ク 質（Rac1、

Rac1･2･3、RhoA、Cdc42）の活性を測定するELISAキットです。

特長

 従来のプルダウンアッセイと比較して、以下の特長があります（表参照）。

●シンプルな操作で迅速に結果が得られます。

●少量のサンプルで測定が可能です。

●高感度かつ定量的です。

構成内容

●96ウェル Rho-GTPアフィニティプレート（品番：BK121、BK124）

●96ウェル Rac-GTPアフィニティプレート（品番：BK125、BK126）

●96ウェル Cdc42-GTPアフィニティプレート（品番：BK127）

●一次抗体

●二次抗体

●ポジティブコントロール用タンパク質

●バッファー／アッセイ試薬

●細胞溶解液濃度測定用試薬

●発光検出用試薬（品番：BK121、BK126）

●比色検出用試薬（品番：BK124、BK125、BK127）

Gタンパク質活性測定キット  G-LISA ^TM

［メーカー：CYT］

品名 検出 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

G-LISA^TM Rac Activation Kits 比色 BK125 96

アッセイ

￥ 163,000 S

G-LISA^TM Cdc42 Activation Kits 比色 BK127 96

アッセイ

￥ 171,000 QS

G-LISA^TM Rac1 Activation Assay 発光 BK126 1

キット

￥ 168,000 S

G-LISA^TM Rho Activation kits 比色 BK124 96

アッセイ

￥ 163,000 S

G-LISA^TM Rho Activation kits 発光 BK121 96

アッセイ

￥ 163,000 S

ＧＴＰ 結合タンパク質の解析

◆

 

活性測定キット

 

◆

ELISA法を用いて、Gタンパク質とエフェクターの 相互作用を解析！

使用目的

  で、低分子量Gタンパク質とエフェクターの相互作用をアッセイする キットです。細胞ベースのG-LISA^TM  アッセイと同様の便利な96ウェルフォー マットですが、精製タンパク質を用いて実験を行う点が異なります。このキット を用いて、Rhoファミリーメンバーとそれらに特異的な下流のエフェクター間の 相互作用を壊す分子の同定を行うことができます。

特長

●アッセイに必要な試薬は全て含まれています。

●96ウェルプレートを用いてアッセイを行うことができます。

適用

●新規降圧剤のスクリーニングに。

●新規抗がん剤のスクリーニングに。

●新規神経再生剤のスクリーニングに。

●抗血管新生剤のスクリーニングに。

●抗アポトーシス剤のスクリーニングに。

●特異性向上のための二次アッセイに。

参考文献

1. Lee  . 2004, Hypertension, 44, 796-799.

2. Gomez del Pulgar  . 2005, BioEssays, 27, 602-613.

3. Mueller  . 2005, Nat. Rev. Drug Discov., 4, 387-398.

4. van Golen  . 1999, Clin. Cancer Res., 5, 2511-2519.

5. Fryer and Field 2005, Cancer Lett., 229, 13-23.

6. Xu Z.  . 2003, EMBO J., 22, 252-261.

7. Rao and Li 2004, Curr. Cancer Drug Targets, 4, 345-354.

8. Bollag  . 2003, Curr. Opin. Investig. Drugs., 4, 1436-1441.

9. Adjei 2001, J. Natl. Cancer Inst. 93, 1062-1074.

Gタンパク質：エフェクター 相互作用アッセイ G-LISA ^TM

［メーカー：CYT］

品名 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

G-LISA^TM for Rho A::Rhotekin interaction, HTS assays BK122A 1

キット

ご照会 S

G-LISA^TM for Rho B::Rhotekin interaction, HTS assays BK122B 1

キット

ご照会 S

G-LISA^TM for Rho C::Rhotekin interaction, HTS assays BK122C 1

キット

ご照会 S

G-LISA^TM for Rho A::ROCK interaction, HTS assays BK122D 1

キット

ご照会 S

G-LISA^TM for Rho B::ROCK interaction, HTS assays BK122E 1

キット

ご照会 S

G-LISA^TM for Rho C::ROCK interaction, HTS assays BK122F 1

キット

ご照会 S

G-LISA^TM for Rac 1::PAK interaction, HTS assays BK122G 1

キット

ご照会 S

G-LISA^TM for Rac 1::POSH interaction, HTS assays BK122H 1

キット

ご照会 S

G-LISA^TM for Cdc42::PAK interaction, HTS assays BK122I 1

キット

ご照会 S

G-LISA^TM for Cdc42::WASP interaction, HTS assays BK122J 1

キット

ご照会 S

G-LISA^TM for H-Ras::Raf kinase interaction, HTS assays BK122K 1

キット

ご照会 S

G-LISA^TM for K-Ras::Raf kinase interaction, HTS assays BK122L 1

キット

ご照会 S

G-LISA^TM for Other small G-protein::Effector combo, HTS assays BK122X 1

キット

ご照会 S

商品は、受注生産品です。詳細はお問い合わせください。

検出方法

固定化されたエフェクタータンパク質が、活性型の低分子量Gタンパク質と結合すると、一般的なELISA法によ り検出できる。インヒビター（i）が活性型の低分子量Gタンパク質の結合を抑制することにより、シグナルは減少 する。シグナル-ノイズ比は通常、8:1から12:1。

低分子量Gタンパク質：エフェクター阻害アッセイ

Rhoファミリータンパク質に対するエフェクターは、96ウェルプレートの各ウェルに共有結合されている。

化合物を各ウェルに加えた後、10/の低分子量Gタンパク質を添加した。洗浄後、一次抗体と二次抗体を用い て、通常のELISA法により解析した。Cdc42、Rac1、RhoAに対するエフェクターはそれぞれ、WASP（品番 BK122J）、POSH（品番BK122H）、ROCK（品番BK122D）。インヒビターにはそれぞれ、50!のPAK、

PAK、Rhotekinを使用した。

ＧＴＰ 結合タンパク質の解析

◆

 

活性測定キット

 

◆

低分子量Gタンパク質活性化を、プルダウンアッセイで 簡単に測定！

使用目的

 低分子量GタンパクのRhoタンパクファミリーはRac1、RhoA、Cdc42に代 表される14の因子で構成され、GTPが結合した活性型とGDPが結合した不活 性型があります。Cdc42/Racエフェクタータンパク（p21活性化キナーゼ1：

PAK）のCdc42/Rac相互作用領域CRIB（p21結合ドメイン：PBD）はGTP結 合型のRacもしくはCdc42タンパクと特異的に結合します。

 RhoタンパクはGTPが結合した活性型とGDPが結合した不活性型がありま す。RhoエフェクタータンパクのRhotekinはGTP結合型Rhoに特異的に結合し ます。

 Rasスイッチは、GTP結合状態の活性型とGDP結合状態の不活性型の互換性 を用いて作用します。Ras様GTPase活性化/不活性化制御のメカニズムの理解 は、生物学上非常に重要で、研究対象として注目を集めています。

構成内容

［共通］

●Cell lysis Buffer  ●Wash Buffer

●Loading Buffer  ●Stop Buffer

●GTPγS:（non hydrolysable GTP analog）

●GDP  ●Protease inhibitor cocktail

●Protocol

［品番ごとに異なる構成品］

品番BK034

●GST tagged PAK PBD protein Beads

●Cdc42 polyclonal antibody

●Cdc42 His tagged protein 品番BK035

●GST tagged PAK PBD protein Beads

●Rac1 polyclonal antibody

●Rac1 His tagged protein 品番BK036

●GST tagged Rhotekin PBD protein Beads

●Rho polyclonal antibody  ●RhoA His tagged protein 品番BK008

● GST  tagged  Raf1-RBD  protein  bound  to  colored  glutathione  agarose beads

●p21 Ras monoclonal antibody

低分子量タンパク質活性アッ セイ Biochem Kits ^TM

特長

●迅速なアフィニティ精製により、各Gタンパク質活性化をモニターします。

●アッセイに必要なアフィニティ試薬とバッファーが含まれています。

色のついたグルタチオンアガロースビーズで、操作が簡単です。

図．Rho活性アッセイキットの原理

［メーカー：CYT］

品名 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

Cdc42活性アッセイキット Cdc42 Activation Assay Kit

BK034 1

キット

￥119,000 Sa

Rac1活性化アッセイキット Rac1 Activation Assay Kit

BK035 1

キット

￥119,000 Sa

Rho活性化アッセイキット Rho Activation Assay Kit

BK036 1

キット

￥119,000 Sa

Ras活性化アッセイキット Ras activation Assay Biochem Kit

BK008 1

キット

￥119,000 Sa

エフェクタータンパク質／アフィニティビーズ 

［メーカー：CYT］

品名 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

Raf-RBD domain protein agarose beads RF02-A

RF02-B

1

×

21

4

×

21 ￥78,000

￥199,000 a a

PAK-PBD protein, GST-tagged PAK01-A

PAK01-B

1

×

2500

4

×

2500 ￥57,000

￥157,000 a a

PAK-PBD protein agarose beads PAK02-A

PAK02-B

1

×

5000

4

×

5000 ￥75,000

￥199,000

aa

Rhotekin-RBD domain protein, GST-tagged RT01-A

RT01-B

1

×

5000

3

×

5000 ￥78,000

￥194,000 a a

Rhotekin-RBD protein agarose beads RT02-A

RT02-B

2

×

21

6

×

21 ￥78,000

￥194,000 a a ＧＴＰ

結合タンパク質の解析

◆

 

活性測定キット

 

◆

RhoGAP assay kit

GAP活性制御の研究に！

背景

 small  GTPase（Ras，Rho，Rab，ArfおよびRan）のRasスーパーファミ リーは、シグナルのダウンストリームを介するGDP結合 OFFの状態 とGTP 結合 ONの状態 の間をサイクルするスイッチとして機能します。細胞におい て、この2つの状態のサイクルは主に2つのタイプの制御タンパク質によりコ ントロールされています。その制御タンパク質の1つはactivating  Guanine  nucleotide  Exchange  Factors（GEFs）、もう1つはinactivating  GTPase  Activating Proteins（GAPs）です。

使用目的

 このGAP  assay  kitは、GDP＋PiへのGTPのGタンパク質依存性加水分解の 結果として生じる無機リン酸塩（Pi）の量を測定し、GTPase特異性や活性を解 析できます。キットにはアッセイに必要とされる試薬がすべて入っています。

構成内容

●Reaction Buffer（2×）

●His-tagged Cdc42 protein（品番CD01）

●His-tagged Rac1 protein（品番RC01）

●His-tagged RhoA protein（品番RH01）

●His-tagged Ras protein（品番RS01）

●GST-tagged p50RhoGAP，catalytic domain（品番GAS01）

●100mM GTP stock（品番BST006）

●CytoPhos reagent

●96well clear half area flat bottom plate

●Detailed instructions and troubleshooting manual

品名 構成内容 メーカー 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

Gタンパク質サブユニット抗体セット G Protein Subunit Antibody Set

・Anti-Giα-1（別売り品番371720）

・Anti-Giα-1 and Giα-2（別売り品番371723）

・Anti-Giα-3 and Goα（別売り品番371726）

・Anti-Giα-3（別売り品番371729）

・Anti-Gsα（別売り品番371732）

・Anti-Gβ-Subunit（別売り品番371738）

CBC 371770 1

セット

￥ 101,200 a

G Protein antibody set ・Gβ-subunit internal（別売り品番SA-125）

・Gαi1（別売り品番SA-127）

・Gαi1 and Gαi2 subunits（別売り品番SA-128）

・Gαi3（別売り品番SA-129）

・Gαi3 and Gα0（別売り品番SA-130）

・Gαs（別売り品番SA-131）

・Gαq/11（別売り品番SA-232）

BMO SA182-0001 1

セット

￥ 120,000 a

Gタンパク質サブユニット 抗体セット

低コストの抗体セット！

［メーカー：CYT］

品名 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

RhoGAPアッセイキット（非放射性）

Rho GAP Assay Kit

（non-radioactive）

BK105 1

キット

￥ 120,000 Sa

RhoGEF exchange assay

GEFインヒビターの同定に！

使用目的

 RhoGEF交換反応アッセイキットにおける蛍光プローブに基づくアッセイ系 は、96ウェルまたは384ウェルのフォーマットを用いてGTPaseにおけるヌク レオチドの交換を測定するのに最適です。このキットは蛍光ヌクレオチド類似体 であるN-methylanthraniloyl-GTP（mant-GTP）のGTPaseへの取り込みを測 定します。この取り込みは、フリーなmant-GTPとGTPaseに結合したmant-GTP間の分光学的差異によって測定します。

図．Dbs exchange activity for Cdc42，RhoA and Rac1

構成内容

●Exchange Buffer（2×）

●His-tagged Cdc42 protein（品番CD01）

●His-tagged Rac1 protein（品番RC01）

●His-tagged RhoA protein（品番RH01）

●His-tagged hDbs protein（品番GE01）

●384-well black half area round bottom plate

●96-well black half area flat bottom plate

●Detailed instructions and troubleshooting manual

［メーカー：CYT］

品名 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

RhoGEF交換反応アッセイキット Biochem^TM RhoGEF Exchange Assay Biochem Kit^TM

BK100 1

キット

￥ 125,000 a

ＧＴＰ 結合タンパク質の解析

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活性測定キット

 

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