（ 500* ） 乳児用食品 50
平成 24 年度（集計途中）
食の安全に関する
アンケート調査の結果
設問：「食の安全について関心のあることは何ですか」
（複数回答可）
課題
さらなる“安心”への 取り組みが必要
アンケート調査では依然食品中の
放射性物質への高い関心があることが
推察される
今後の取り組み
“ 安全”の確保：全頭検査の継続
“安心”の確保：
検査結果の公開の継続
関係機関と協力し
牛肉の検査及び安全性の PR 活動
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N o . 2 2 2 5 豚 の 全 身 に み ら れ た 腫 瘤
［ 田 邊 紗 矢 （ 横 浜 市 ）］
症 例 ： 豚 ， 雑 種 ， 雌 ， 大 貫 .
臨 床 的 事 項 ： 著 変 を 認 め な か っ た .
肉 眼 所 見 ： 左 右 卵 巣 に ク ル ミ 大 ～ 乳 児 頭 大 の 腫 瘤 が み ら れ た ． 腫 瘤 表 面 は 暗 赤 色 で ， 血 管 の 走 行 や 出 血 が み ら れ た ． 割 面 は 乳 白 色 充 実 性 で 嚢 胞 や 出 血 を 伴 っ て い た ． 大 き い 腫 瘤 で は 中 心 部 が 壊 死 し て い た ． そ の 他 ， 肝 臓 ， 腎 臓 ， 肺 ， 心 臓 ， 子 宮 ， 盲 腸 ， 甲 状 腺 ， 副 腎 ， 枝 肉 の 左 腹 膜 ， 左 右 肩 部 の 皮 下 織 に 様 々 な 大 き さ の 腫 瘤 が み ら れ た ． 気 管 気 管 支 リ ン パ 節 ， 左 右 腎 リ ン パ 節 ， 腸 間 膜 リ ン パ 節 ， 左 右 内 側 腸 骨 リ ン パ 節 ， 左 右 胸 骨 リ ン パ 節 は 腫 脹 し て い た ． そ れ ぞ れ の 腫 瘤 お よ び リ ン パ 節 の 割 面 は 乳 白 色 充 実 性 で ， そ の 大 半 に 様 々 な 程 度 の 壊 死 が み ら れ ， 一 部 に は 嚢 胞 の 形 成 も み ら れ た ．
組 織 所 見 ： 右 卵 巣 の 最 大 腫 瘤 で は ， 腫 瘍 細 胞 は 充 実 性 に 増 殖 し て い た ． 空 胞 を 中 心 に 腫 瘍 細 胞 が 放 射 状 に 配 列 す る 部 位 も み ら れ た ． ま た ， 右 卵 巣 の ゴ ル フ ボ ー ル 大 腫 瘤 で は ， 腫 瘍 細 胞 が 腺 管 様 構 造 を 形 成 し 増 殖 し て い た ． 腫 瘍 細 胞 の 核 は 類 円 形 で ， 核 小 体 を １ つ 有 し ， 基 底 部 側 に 偏 在 し て い た ． ま た ， 細 胞 質 は 好 酸 性 で あ っ た ． 卵 巣 に み ら れ た い ず れ の 腫 瘤 で も 分 裂 像 が 多 発 し ， 壊 死 が 広 範 に み ら れ ， 卵 巣 の 固 有 組 織 は 消 失 し て い た ． 腫 瘍 細 胞 の 一 部 は ア ル シ ア ン ブ ル ー 染 色 陽 性 で あ っ た ． 肉 眼 的 に 病 変 の み ら れ た そ の 他
の 臓 器 お よ び リ ン パ 節 で は ， 腫 瘍 細 胞 が 様 々 な 形 態 （ 管 状 ， 充 実 性 ， 索 状 ， 島 状 ） で 増 殖 し ， そ の 大 半 は 壊 死 や 石 灰 化 を 伴 っ て い た ．
免 疫 染 色 で は ， 腫 瘍 細 胞 は ケ ラ チ ン ・ サ イ ト ケ ラ チ ン 陽 性 ， ビ メ ン チ ン 陰 性 ， イ ン ヒ ビ ン α 陰 性 ， ク ロ モ グ ラ ニ ン Ａ 一 部 陽 性 ， シ ナ プ ト フ ィ ジ ン 陰 性 で あ っ た ．
診 断 名 ： 神 経 内 分 泌 細 胞 を 伴 う 腺 癌
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N o． 2 2 2 9 牛 の 肺
〔 内 田 裕 美 （ 横 浜 市 ）〕
症 例 ： 牛 ， 交 雑 種 ， 2 0 ヶ 月 齢 ．
臨 床 的 事 項 ： 著 変 は 認 め ら れ な か っ た ．
肉 眼 所 見 ： 左 肺 後 葉 背 側 に や や 硬 結 感 を 有 す る 部 位 を 認 め た ． 割 す る と 胸 膜 直 下 か ら ５ ×７ ×５ c m の 領 域 に わ た り 不 規 則 に 区 画 さ れ た 空 洞 を 形 成 す る 病 変 を 認 め た ． 中 心 部 で は よ り 粗 な 空 洞 を 形 成 し ， 辺 縁 部 は 乳 白 色 ～ 淡 桃 色 の 海 綿 状 構 造 を 呈 し て い た ． 病 変 部 と 肺 固 有 組 織 と の 境 界 は 明 瞭 だ っ た ． な お ， 病 変 部 は 気 管 支 に 隣 接 し て い た ．
組 織 所 見 ： 病 変 部 で は ヘ マ ト キ シ リ ン 好 性 な 気 管 支 上 皮 に 類 似 し た 細 胞 が ， 不 規 則 な 管 腔 を 形 成 し な が ら 樹 枝 状 に 増 殖 し て い た ． こ の 細 胞 は 単 層 ～ 偽 重 層 配 列 を 呈 し ， 一 部 は 線 毛 を 有 し て い た ． 空 洞 を 形 成 し て い た 部 位 で は 広 い 管 腔 状 増 殖 を 示 し ， 肥 厚 し た 間 質 は 主 に 膠 原 線 維 で 満 た さ れ ， 表 層 に は 弾 性 線 維 を 認 め た ． ま た ， 血 管 や 軟 骨 ， 筋 線 維 も 認 め た ． 海 綿 状 部 分 で は 樹 枝 状 増 殖 を 示 し ， 一 部 の 管 腔 内 に は 脱 落 し た 細 胞 や マ ク ロ フ ァ ー ジ な ど が 認 め ら れ た ． 病 変 部 と 肺 固 有 組 織 の 境 界 は 明 瞭 だ っ た ．
診 断 名 ： 類 腺 腫 過 誤 腫
討 議 ： 増 殖 し て い る 細 胞 は 気 管 支 の ど の 部 分 に 類 似 し て い る か を 確 認 す べ き と の 意 見 が 出 さ れ た ．
（ ）Multiplex qPCRに よ る 食 鳥 肉 カ ン ピ ロ バ ク タ ー の 迅 速 検 出 法 の 検 討
横 浜 市 食 肉 衛 生 検 査 所 ○ 武 藤 由 紀 子 、 横 溝 力 男 、 酒 井 敬 介 、 徳 田 晴 美 笹 崎 圭 子 、 梅 田 て る み 、 後 藤 千 恵 子 、 池 田 和 規
は じ め に
カ ン ピ ロ バ ク タ ー は 食 中 毒 菌 と し て 重 要 で あ る 一 方 、 他 の 病 原 菌 と 比 較 し て 人 工 培 地 上 で の 発 育 が 遅 く 、 診 断 す る ま で に 3 日 か ら 7 日 以 上 を 必 要 と す る 。 さ ら に 生 化 学 的 性 状 だ け で は カ ン ピ ロ バ ク タ ー 属 菌 種 間 の 鑑 別 が 難 し い た め 、 菌 種 の 鑑 別 同 定 に は 遺 伝 子 検 査 が 不 可 欠 と な っ て い る[1、2]。
そ こ で 当 所 で は 、 よ り 迅 速 か つ 低 コ ス ト に 同 定 す る た め に 、 増 菌 培 地 で あ る プ レ ス ト ン か ら 抽 出 し たDNAと 、TaqMan○R の 約 半 分 の コ ス ト で 同 等 の 検 出 感 度 と 特 異 性 を 持 つ と さ れ るLUX蛍 光 プ ラ イ マ ー を 用 い たMultiplex qPCR法 を 応 用 し て 、Campylo bacter jejuni（C.J） お よ び Campylobacter coli（C.C） の 迅 速 同 定 法 を 検 討 し 、 若 干 の 知 見 を 得 た の で 報 告 す る 。
材 料 お よ び 方 法
１ 材 料
平 成 23 年 5 月 か ら 24年 8 月 ま で に 当 検 査 所 で 収 去 し た 食 鳥 肉 110 検 体 、 当 検 査 所 で 分 離 さ れ た カ ン ピ ロ バ ク タ ー4 検 体（C.J 2 株 、C.C 2 株 ）、お よ び 横 浜 市 衛 生 研 究 所 よ り 分 与 さ れ たC.lari抽 出DNA1検 体 を 用 い た 。食 鳥 肉 は 従 来 の 収 去 検 査 法 に 準 じ た 処 理 を し て プ レ ス ト ン 培 地 と 混 和 し 、 未 培 養 お よ び 42℃ 、48時 間 培 養 後 の 試 料 を そ れ ぞ れ PrepMan○R UltraDNA（Applied Biosystems） を 用 い てDNA抽 出 を し た 。
２ プ レ ス ト ン 抽 出 検 体 の qPCRと 培 養 法 に お け る 検 出 状 況 の 比 較
① Multiplex ｑPCR法
作 成 し た テ ン プ レ ー ト は 、樋 脇 ら[3]が 報 告 し た プ ラ イ マ ー とTaqman○R Fast Adva- nced Master Mix（Applied Biosystems）を 用 い て 、C.J お よ び C.C の Multiplex qPCR を 実 施 し た 。な お 、死 菌 に よ る 偽 陽 性 反 応 を 識 別 す る た め に 、同 検 体 の 未 培 養 お よ び 48 時 間 培 養 の 検 体 の Ct 値 を 比 較 し 、 有 意 な 差 が 認 め ら れ た も の を 陽 性 と し た 。
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② 培 養 法 と の 比 較
① で 実 施 し た す べ て の 食 鳥 肉 検 体 に つ い て 、 従 来 の 培 養 法 に よ る 検 査 を 実 施 し 、 Multiplex ｑPCR 法 の 結 果 と 比 較 し た 。
③ よ り 高 速 化 し た Multiplex ｑPCR法 の 検 討
樋 脇 ら の 方 法 は ３ ス テ ッ プ サ イ ク ル に よ る PCRを 報 告 し て い る が 、 よ り 高 速 化 し た Multiplex ｑPCR法 を 行 う た め 、① で 用 い た 代 表 的 な 検 体 に つ い て 、初 期 熱 変 性 を 95℃ 20秒 、サ イ ク リ ン グ を 熱 変 性 95℃3 秒 、ア ニ ー リ ン グ/伸 長 反 応 60℃30秒 と し た ２ ス テ ッ プ PCR を 実 施 し 、 所 要 時 間 と 検 出 感 度 を 比 較 し た 。
成 績
1 培 養 法 と の 比 較
食 鳥 肉 110検 体 の う ち 、培 養 法 で 陽 性 と な っ た の は C.Jが 83検 体 、C.C が 0 検 体 だ っ た 。培 養 法 で C.J 陽 性 と な っ た 検 体 の 48時 間 培 養 プ レ ス ト ン か ら 抽 出 し た 検 体 は Mult- iplex ｑPCR法 で も す べ て 陽 性 、
陰 性 検 体 は す べ て 陰 性 と な り 、 両 者 の 結 果 は 完 全 に 一 致 し た 。 一 方 、C.C陰 性 だ っ た 110検 体 の う ち 、1 検 体 の み
Multiplex ｑPCRで 陽 性 を 示 し た(表 1)。 当 該 検 体 は 培 養 法 で は C.J 陽 性 、C.C 陰 性 を 示 し 、 Multiplex ｑPCRで は C.C の Ct値 は C.Jよ り 9程 度 大 き か っ た(図 １)。な お 、未 培 養 プ レ ス ト ン か ら の 抽 出 検 体 は 全 て PCR陰 性 で あ っ た 。
2 よ り 高 速 化 し た Multiplex ｑPCR 法 と の 比 較
実 験 に 使 用 し た 検 体 の う ち 、 ３ ス テ ッ プ PCR 法 で 陽 性 と な っ た 全 て の 検 体 に つ い て 、 ２ ス テ ッ プ 法 で も 良 好 な 増 幅 曲 線 お よ び 融 解 曲 線 が 得 ら れ た 。 同 一 検 体 で 比 較 す る と 、 ２ ス テ ッ プ PCRで は ３ ス テ ッ プ PCR法 に 対 し 、Ct値 が 平 均 0.6232 程 度 高 く な っ た 。ま た 、 ３ ス テ ッ プ 法 で 陰 性 と な っ た 検 体 は ２ ス テ ッ プ 法 で も 陰 性 で あ っ た 。
PCRの 反 応 時 間 は 、 融 解 曲 線 分 析 も 含 め 、 ３ ス テ ッ プ 法 で は 150 分 程 度 、2ス テ ッ プ 法 で は 75 分 程 度 で あ っ た 。
C.jejuni
Ｍｐ－qＰＣＲ
48時 間 培 養 未 培 養
陽 性 陰 性 陽 性 陰 性
培 養 法
陽 性 83 0 0 83
陰 性 0 27 0 27
C.coli
Ｍｐ－qＰＣＲ 48時 間 培 養 未 培 養
陽 性 陰 性 陽 性 陰 性
培 養 法
陽 性 0 0 0 0
陰 性 1 109 0 110
表 １ 培 養 法 と Mp-qPCR法 の結 果 比 較
考 察
今 回 の 調 査 で は 1検 体 の み 、C.C が 培 養 法 陰 性 、Multiplex qPCR陽 性 と い う 不 一 致 が み ら れ た 。 当 該 検 体 で は C.C の Ct値 が C.J と 比 較 し て 9 程 度 大 き く 、 こ れ は 単 純 計 算 す る と C.C の 標 的 遺 伝 子 量 が C.Jの 1/512 程 度 で あ る こ と を 示 し て い る 。こ の 事 か ら 、培 養 法 で は C.C が 発 育 し て い た も の の 、平 板 上 か ら 釣 菌 す る 際 に C.C コ ロ ニ ー を 選 択 で き な か っ た 可 能 性 が あ り 、 今 回 の 検 査 法 が 従 来 の 培 養 法 よ り 高 感 度 で あ る 可 能 性 も 示 唆 さ れ た 。 ま た ２ ス テ ッ プ 法 は 3 ス テ ッ プ 法 よ り 増 幅 効 率 は 落 ち る が 、そ の 幅 は 平 均 1サ イ ク ル 分 以 下 で あ り 、 検 出 に 充 分 な 感 度 を 持 つ と 考 え ら れ た 。
一 方 、 検 査 の 所 要 時 間 に つ い て 、 当 所 の 従 来 の 培 養 法 で は 菌 種 の 診 断 に 最 低 4、5日 を 要 し た が 、 今 回 の Multiplex qPCR法 で は 増 菌 培 地 か ら DNA 抽 出 を 行 う こ と に よ り 2日 間 で 診 断 が 可 能 と な っ た 。更 に 2ス テ ッ プ の 高 速 PCR導 入 に よ り 時 間 的 負 担 も 減 少 し た 。 ま た 、1検 体 あ た り に か か る 検 査 費 用 に つ い て も 、培 養 法 で は 増 菌 培 地 と 選 択 培 地 で 約 800 円 、菌 が 分 離 さ れ た 場 合 の 同 定 に 必 要 な 追 加 費 用 と し て 最 大3000円 以 上 か か る の に 対 し 、 Multiplex qPCR 法 で は 1検 体 あ た り 合 計 1300円 程 度 と あ ま り 大 き く な い 。
以 上 の 事 か ら 本 検 査 法 は 、 食 鳥 肉 カ ン ピ ロ バ ク タ ー の 迅 速 検 査 法 と し て 有 用 で あ る と 考 え ら れ た 。今 後 は 、今 回 の 調 査 で 見 ら れ な か っ た C.C 陽 性 の 食 鳥 肉 検 体 の 検 索 も 含 め 、更 な る 検 討 を 進 め た い 。
参 考 文 献
[1] 病 原 微 生 物 検 出 情 報 Vol.27 p.173-175（2006）
[2] 徳 島 智 子 他 ： 第 32回 日 本 食 品 微 生 物 学 会 学 術 総 会 抄 録 p77（2011） [3] 樋 脇 弘 他 ：Jpn.J.Food Microbiol.,26(2),120-126 （2009）
３ステップ法 ２ステップ法
図 １ ３ ステ ップ法 と2ステップ 法 の増 幅 曲 線 の 比 較
検 体 はプ レストン４ ８時 間 培 養 液 抽 出 Ｄ ＮＡで、Ｃ ．ＪおよびＣ ．Ｃ陽 性 を示 したもの 同 検 体 は 培 養 法 ではＣ ．Ｊのみ陽 性 、Ｃ ．Ｃは陰 性 となった。
Ct 値 C .J:2 0.27 69 C .C: 29 .3 268
Ct 値 C .J:2 1.18 95 C .C: 30 .0 131
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神 経 内 分 泌 細 胞 へ の 分 化 を 示 す 豚 の 腺 癌
横 浜 市 食 肉 衛 生 検 査 所 ○ 田 邊 紗 矢 、 四 反 田 聡 、 森 田 由 紀 子 内 田 裕 美 、 西 條 純 枝 、 海 野 耕 一
川 端 奈 津 子 、 楠 哲 也
は じ め に
人 で は 、 神 経 内 分 泌 癌 の 発 生 母 地 の 一 つ と し て 、 腺 癌 細 胞 か ら 分 化 す る と い う 説 が 提 唱 さ れ て い る(1)。 ま た 、 分 化 の 過 程 に お け る 神 経 内 分 泌 細 胞 を 伴 う 腺 癌 の 発 生 が 報 告 さ れ て い る 。
平 成 23 年 9 月 8 日 に 、 繁 殖 用 豚 の 全 身 性 腫 瘍 症 例 に お い て 、 神 経 内 分 泌 細 胞 へ の 分 化 を 示 す 腺 癌 を 認 め た の で 、 そ の 概 要 を 報 告 す る 。
材 料 及 び 方 法
（ １ ） 症 例 の 概 要
当 該 症 例 は 、繁 殖 用 豚（ 品 種 不 明 ）、雌 、と 畜 年 月 日 は 平 成 23年 9月 8日 、約 3歳 齢 で あ っ た 。
（ ２ ） 病 理 組 織 学 的 検 査
肉 眼 的 に 観 察 後 、 主 要 臓 器 、 リ ン パ 節 及 び 病 変 部 を 採 材 し 、10％ 中 性 緩 衝 ホ ル マ リ ン 液 に て 固 定 、定 法 に 則 り パ ラ フ ィ ン 切 片 を 作 製 し 、ヘ マ ト キ シ リ ン エ オ ジ ン（HE）染 色 を 実 施 し た 。 ま た 、 特 殊 染 色 と し て 、 ア ル シ ア ン ブ ル ー 染 色 を 実 施 し た 。
（ ３ ） 免 疫 組 織 化 学 的 検 査
ニ チ レ イ 社 の 抗 ケ ラ チ ン ／ サ イ ト ケ ラ チ ン ポ リ ク ロ ー ナ ル 抗 体 及 び 抗 ビ メ ン チ ン モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 、大 日 本 住 友 製 薬 社 の 抗 イ ン ヒ ビ ン α モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 、DAKO社 の 抗 ク ロ モ グ ラ ニ ンAポ リ ク ロ ー ナ ル 抗 体 及 び 抗 シ ナ プ ト フ ィ ジ ン ポ リ ク ロ ー ナ ル 抗 体 を 一 次 抗 体 と し 、二 次 抗 体 に は ニ チ レ イ 社 の シ ン プ ル ス テ イ ン ラ ッ ト MAX‐PO（MULTI）、DAKO 社 の ビ オ チ ン 標 識 抗 マ ウ ス 免 疫 グ ロ ブ リ ン 抗 体 及 び ビ オ チ ン 標 識 抗 ウ サ ギ 免 疫 グ ロ ブ リ ン 抗 体 、酵 素 試 薬 に は ニ チ レ イ 社 の シ ン プ ル ス テ イ ン DAB 溶 液 、同 仁 化 学 社 の DAB 溶 液 を 使 用 し た 。
成 績