実験

9.2.3 TTAおよびTTA-OPの合成法 [TTA合成法]

ニトリルの加水分解によるカルボン酸の合成 [63]を参考に以下の操作で合成を行った．

50 mLのエタノールに1 g の3-Cyanomethyl-2,4,5-trimethylthiopheneを溶解した．20

mLの水に1.4 g の水酸化カリウムを溶解した．両液を100 mLの三口フラスコ内で混合

し，30時間還流した．還流管を外し，エタノールを蒸発させ水を少量足し濃塩酸でpH 2 以下にした．クロロホルムで3回抽出操作を行い目的物をクロロホルム層に移し，クロロ ホルムをエバポレーターで取り除くことで粗誘導体化試薬を得た．この粗誘導体化試薬を 逆相オープンカラム（コスモシール75C18, 20 x 2.8 cm I.D.; eluent, water–acetonitrile

（80:20, v/v））にかけ，二番目の分画を蒸発乾固することで白いパウダー状のTTAを得

た．得られたTTAをさらにデシケーターで乾燥させた．¹HNMR（JNM-GSX400, 400 MHzJEOL），元素分析（CHN CORDER MT-5, Yanaco），および融点測定（MICRO MELTING POINT APPARATUS, Yanaco）により構造確認を行った．

収量 0.46 g．¹H NMR（使用溶媒CDCl₃, 基準物質 TMS）δ2.03（3H, S, -CH₃）， δ2.28（3H, S, -CH₃），δ2.33（3H, S, -CH₃），δ3.49（2H, S, -CH₂-COOH）．元素 分析（Calculated C: 58.67, H: 6.56, O: 17.37，S: 7.40; Found C: 58.58，H: 6.54）．融 点（106 – 107 ℃）．

[標準TTA-OP合成法]

0.5 mmol（100 mg）の4-n-octylphenol（OP），約0.5 mmol（100 mg）のTTA，約0.5 mmol（122 mg）の DMAP，約 2 mmol（400 mg）の WSC を20 mL のアセトニト リルに溶解し室温で一日放置した．この溶液を逆相カラム（コスモシール 75C18, 10 x 3.4 cm I.D.; eluent, water–acetonitrile（20:80, v/v））にかけ夾雑物を溶出したのち

100 %アセトニトリルでTTA-OP を溶出させた．この溶液をエバポレーターで濃縮乾

固し，得られたTTA-OPをデシケーターで乾燥させた．¹H NMR（JNM-GSX400, 400 MHz, JEOL），元素分析（CHN CORDER MT-5, Yanaco），および融点測定（MICRO MELTING POINT APPARATUS, Yanaco）により確認をおこなった．

収量 105 mg．¹H NMR（使用溶媒 CDCl₃, 基準物質 TMS）δ0.86 – 0.89（3H, t, J = 6.8Hz, -CH₃），δ1.28 – 1.55（14H, m），δ2.11（3H, S, -CH₃），δ2.30（3H, S, -CH₃），δ2.24（3H, S, -CH₃），δ2.55 – 2.59（2H, t, J = 8.0 Hz, Phenyl-CH₂），δ 3.68（2H, S, Phenyl-CH₂-CO-），δ 6.94 – 6.96（2H, d, J = 8.0 Hz, Phenyl-H），δ

7.13 – 7.15（2H, d, J = 8.0 Hz, Phenyl-H）．元素分析（Calculated C: 74.15, H: 8.66, O: 8.59，S: 8.61; Found C: 74.20，H: 8.68）．融点（40 – 41 ℃）．

9.2.4 ^{誘導体化法の検討}

誘導体化手順は，Moritaらの報告を参考にした [60]．最初に20 mM TTA，塩基性触

媒として100 mM DMAP，カルボジイミドとして50 mM DCCをそれぞれアセトニトリ

ルで調整し，この条件を基本条件として，TTA濃度，カルボジイミド濃度・種類，塩基性 触媒濃度・種類を決定した．アセトニトリルで調整した50 µLの100 µM OPにTTA， DMAP，DCCをそれぞれ50 µLずつ添加し，2時間誘導体化反応を行った後，反応停止 剤としてメタノールを300 µMを加えた．（誘導体化操作後のOP濃度は約10 µM とな る．）誘導体化試薬と10µM 標準TTA-OP試料を用い，溶離液に10 mMリン酸水溶液– アセトニトリル（2:8, v/v）を用いたHPLC–CL検出（20 µL注入）を行うことで効率よ く誘導体化が進む各試薬の濃度条件を検討した．

最適誘導体化法として，アセトニトリルで調整した250 µLの試料に300 mM DMAP を20 µL，50 mM TTA，50 mM WSCをそれぞれ10 µL加え2時間以上室温で放置し た後，過剰試薬を除去するため20 µLのメタノールを加え10分以上放置し，最後に50 mM リン酸水溶液を300µL加える手順を採用した．得られた試料溶液500µLをHPLC に注入した．