2.6.2 薬理試験の概要文
2.6.3.2 効力を裏付ける試験
2.6.3.2.1 オピオイド受容体への結合親和性
資料番号 4.2.1.1.1 報告年 1995 試験の概要
ウシの脳・尾状核を用い，放射性リガンドと競合させ，l-メサドン（R-メサドン），
d-メサドン（S-メサドン），dl-メサドン及びモルヒネのオピオイド受容体への結合親 和性を検討した。
生物学的物質 ウシの脳・尾状核を摘出し，試験に用いるホモジネートを調製 試験方法の
概要
ホモジネートを用いて，オピオイド受容体のそれぞれの放射性リガンド｛[3H]DADL
（μ1），[3H]DAGO（μ2），[3H]DPDPE（δ）及び[3H]U69593（κ）}に対する，l-メサド ン，d-メサドン，dl-メサドン及びモルヒネの50%阻害濃度（IC50）を求めた。
被験物質 それぞれ10の異なる濃度のl-メサドン，d-メサドン，dl-メサドン及びモルヒネを，
放射性リガンドを添加したホモジネートとインキュベーションした。
結果
dl-，d-及びl-メサドンのうち l-メサドンが μ1オピオイド受容体に対する親和性が一 番高く，IC50 = 3.01 ± 0.18 nMを示した。l-メサドンのμ1，μ2オピオイド受容体に対 する親和性はd-メサドンの約10倍，dl-メサドンの2倍高く，モルヒネと同程度であ った。
資料番号 4.2.1.1.2 報告年 2006
試験の概要 オピオイド受容体の形質移入細胞を用いて，メサドンと他のオピオイドの結合力価を 評価した。またμオピオイド受容体へのGTP結合作用をDAMGOと比較した。
生物学的物質 C6μ, C6δ及びCHOκ形質移入細胞，ラット（Sprague-Dawley）脳視床スライス標本
試験方法の 概要
C6細胞にμ又はδ，CHO細胞にκを形質移入し，調製した細胞膜に対するメサドン を含むオピオイド作動薬と0.2 nM [3H]diprenorphineとの拮抗試験から結合親和性を 評価した。また，作動薬を C6μ 細胞に 60 分間作用させ，[35S]GTPγS 結合活性を
DAMGOと比較した。脳スライスについては，20 μm厚の切片に40 pM [35S]GTPγS
と作動薬を2時間作用させた後，放射活性を調べた。
被験物質
C6μ，C6δ，CHOκ細胞由来細胞膜 拮抗試験：0.3 nM～1 μM
C6μ細胞 [35S] GTPγS 活性試験：0.001～10 μM
脳スライス[35S] GTPγS オートラジオグラフィー：10 μM
結果
細胞膜での結合試験においてメサドンは μオピオイド受容体に対し高い選択性を示 し，フェンタニル，モルヒネ及びオキシコドンと比べても高かった。μ オピオイド 受容体へのGTP結合試験として，C6μ細胞でのDAMGOと[35S]GTPγSの結合比を算 出したとき，メサドンはDAMGOに対し，100 ± 7.0%の活性を示した。これは，モ ルヒネ，フェンタニル及びオキシコドンよりも高く，更にラット視床スライス標本
での[35S]GTPγS の結合も，対 DAMGO 比で，フェンタニル（♂），モルヒネ（♂・
♀）及びオキシコドン（♂・♀）より高い値を示した。
メサドン塩酸塩 2.6.3 薬理試験概要表 Page 6
資料番号 4.2.1.1.3
報告年 2000
試験の概要
ラット髄腔内にd-メサドン，dl-メサドンを投与し，電気的刺激による脊髄後角ニュー ロンの侵害神経活動に対する抑制作用を検討し，ナロキソンによる拮抗作用につい ても検討した。
生物学的物質 ラット（Sprague-Dawley）
試験方法の 概要
ラットの脊髄（L4 - L5）をハロセン麻酔下で露出させ，脊髄後角に細胞外記録電極 を挿入し，後肢電気刺激後に得られるC-及びA-線維を経由した脊髄後角ニューロン の単一細胞活動を記録した。刺激は，C-線維閾値の3倍の電気刺激（2 ms幅，0.5 Hz，
16回）の入力を行った。d-メサドン（5, 25, 50, 250 及び500 μg/50 μL）及びdl-メサ ドン（5, 25, 50 及び250 μg/50 μL）を露出させた脊髄に投与し，神経活動の変化を測 定した。また，dl-メサドン（250 μg/50 μL）及びd-メサドン（500 μg/50 μL）投与状 態におけるナロキソンの拮抗作用を評価した。
被験物質 d-メサドン（5, 25, 50, 250 及び500 μg）又は dl-メサドン（5, 25, 50 及び 250 μg）は
50 μLの生理食塩水に溶解し，髄腔内投与した。
結果
dl-メサドンは後肢への電気的な侵害刺激に対して，25 μg/50 μL以上の濃度でC-線維 誘発による反応（90～300 ms），Aβ-線維誘発による反応（0～20 ms），Aδ-線維誘発に よる反応（20～90 ms），50 μg/50 μL以上ではinput（初回刺激の反応）を，250 μg/50 μLでは後発射（300～800 ms）を有意に抑制した。また，C-線維誘発による反応及び 後発射の16回の累積回数とinputの比較から算出されたワインドアップは，25 μg/50 μLの投与により有意に減少した。dl-メサドン（250 μg/50 μL）によるC-線維誘発に よる反応，Aβ-線維誘発による反応及びAδ-線維誘発による反応の抑制作用は1 μgの ナロキソンで，input，後発射及びワインドアップの抑制作用は5 μg のナロキソンで 打ち消された。また，d-メサドンは250 μg/50 μL以上の濃度でC-線維誘発による反 応を抑制し，500 μg/50 μLでinput，後発射，ワインドアップ及びAδ-線維誘発による 反応を有意に抑制したが，これらの効力は dl-メサドンに比べて弱く Aβ-線維誘発に よる反応については抑制しなかった。d-及び dl-メサドンの阻害作用は，ナロキソン により可逆的に拮抗されたことから，この抗侵害受容作用は主にオピオイド受容体 を介したものであると考えられた。
2.6.3.2.2 鎮痛作用
資料番号 4.2.1.1.4
報告年 2006
試験の概要 モルヒネ，オキシコドン，dl-メサドン，l-メサドン，d-メサドンの疼痛反応抑制作用 を複数の疼痛モデルにて評価した。
生物学的物質 ラット（Sprague-Dawley） 試験方法の
概要
Tail flickテスト，Hot plateテスト，Paw pressureテストを実施した。SNLモデルにつ いて，抗アロディニア作用（機械刺激誘発性及び冷感刺激性アロディニア）を評価し た。
被験物質 それぞれの塩酸塩を生理食塩水に溶解し，皮下投与した。
結果
モルヒネ，オキシコドン，dl-メサドン，l-メサドンはTail flickテスト，Hot plateテス
ト，Paw pressureテストで用量依存性の疼痛反応抑制作用を示した。100%MPEを示し
た遊離塩基換算での最小用量は，l-メサドンは，2.24 mg/kg（Tail flickテスト及びHot
plateテスト），4.47 mg/kg（Paw pressureテスト）であった。d-メサドンはどのテスト
においても抗侵害受容作用を示さなかった。機械刺激誘発性又は冷感刺激性アロディ ニアに対してモルヒネ，オキシコドン，dl-メサドン及びl-メサドンは用量依存性の抗 アロディニア作用を示し，いずれもl-メサドンの効果が最も強かった。d-メサドンは 抗アロディニア作用を示さなかった。
メサドン塩酸塩 2.6.3 薬理試験概要表 Page 7
資料番号 4.2.1.1.2
報告年 2006
試験の概要 雌雄ラットを用いて，メサドンと他のオピオイドの皮下投与による鎮痛力価を評価し た。
生物学的物質 ラット（Sprague-Dawley）
試験方法の 概要
薬物を皮下投与し，30分後に50℃の温水に尾部を浸漬し，そこからの回避時間を計 測した。脳のスライス標本を用いてオピオイド存在下での[35S]GTPγS結合活性を雌雄 で比較した。
被験物質 滅菌水に溶解し，皮下投与。
[35S]GTPγSオートラジオグラフィーは10 μMの濃度で作用させた。
結果
メサドンのED50は雄で1.49 ± 0.20 mg/kg，雌では1.81 ± 0.37 mg/kgであり，オキシコ ドンと同程度で，モルヒネ，ハイドロコドンよりも強いことが示唆された。また，メ サドンのED50において性差は確認されなかった。[35S]GTPγS結合活性でもメサドン を含む被験物質で性差は見られず，メサドンは DAMGO に対する比活性が最も大き かった。
資料番号 4.2.1.1.5
報告年 1971
試験の概要 ラットを用いて，EDDP及びEMDPについて皮下あるいは経口投与による鎮痛効果を評 価した。
生物学的物質 ラット（系統・週齢不明）
試験方法の 概要
薬物を皮下あるいは経口投与し，30及び60分後に尾部熱刺激に対する回避時間を計 測した（tail-jerk assay）。EDDPはモルヒネに対する拮抗作用，EMDPはdl-メサドン に対する拮抗作用を評価した。
被験物質
皮下あるいは経口投与。
それぞれ単独の効果の評価には，皮下（100 mg/kg）あるいは経口（200 mg/kg）投与 を用いた。
結果
EDDP及びEMDPのいずれも，投与経路によらず投与30及び60分後の評価において 鎮痛作用を示さなかった。
EDDP（100 mg/kg皮下あるいは200 mg/kg経口投与）は，モルヒネ（1.0 mg/kg皮下投 与）による鎮痛効果に拮抗せず，EMDP（100 mg/kg 皮下あるいは経口投与）は， dl-メサドン（0.05 mg/kg皮下投与）による鎮痛作用に対し拮抗しなかった。
2.6.3.2.3 モルヒネ耐性に対する作用
資料番号 4.2.1.1.6 報告年 2002
試験の概要 坐骨神経を傷害したラット神経障害性疼痛モデルを用いて，モルヒネとメサドンの交 差耐性について検討を行った。
生物学的物質 ラット（Sprague-Dawley）
試験方法の 概要
機械刺激誘発性の痛覚過敏反応を測定し，耐性形成を評価した。更に，それぞれの最 終投与翌日に薬物を交差投与し交差耐性の評価を行った。
被験物質 1日2回，メサドン塩酸塩（5 mg/kg，21日間）もしくはモルヒネ塩酸塩（10 mg/kg， 14日間）を皮下投与した。
結果
メサドンにより，完全な鎮痛作用の発現は9日間継続したが，その後，鎮痛作用は減 弱しラットに耐性形成が認められた。モルヒネでは，3日目から完全な鎮痛作用が見 られなくなり，メサドンよりも早期から耐性形成が認められた。耐性形成後に交差投 与を行った結果，モルヒネ耐性形成を示したラットに対し，メサドンは鎮痛効果を示 したが，メサドン耐性形成を示したラットに対し，モルヒネは無効であった。
メサドン塩酸塩 2.6.3 薬理試験概要表 Page 8
資料番号 4.2.1.1.7
報告年 1992
試験の概要 モルヒネ，フェンタニル及びメペリジンを1週間持続投与し，その前後における各オ ピオイドの疼痛反応抑制作用を評価した。
生物学的物質 ラット（Sprague-Dawley）
試験方法の 概要
疼痛反応の測定には Tail flick テストを用いた。浸透圧ポンプを用いてモルヒネ等を
（1/4 ED50）/時間で1週間皮下投与し，これらの処理前及びポンプ摘出24時間後に 各オピオイドのED50を算出し，ED50を比較したRelative Potency （RP）を求めた。
被験物質 それぞれのオピオイドを塩形態で生理食塩水に溶解し，皮下投与した。
結果
モルヒネ処理に対するRPは，モルヒネ及びフェンタニルが0.54及び 0.70となり，
ED50が有意に増加した。一方，メサドンはRP 0.78と用量の有意な増加を示さなかっ た。フェンタニル処理に対しては，モルヒネ，フェンタニル及びメサドンのRPが，
0.99，1.27及び0.98 を示し，いずれの薬剤もED50の有意な増加を認めなかった。メ
ペリジン処理に対しては，モルヒネ，フェンタニル及びメサドンのRPが，0.40，0.49 及び0.51を示し，いずれの薬剤もED50が有意に増加した。