使用薬物

2.2.2.1 薬物

本実験では、 薬物として silodosin を使用した。Silodosin の 2 臭化水素酸塩

（Silodosin·2HBr） は キ ッ セ イ 薬 品 工 業 株 式 会 社 に て 合 成 し た （ 自 社 合 成 ）。

Silodosin·2HBrの溶解、希釈および投薬は第1章1.2.2.1と同様に行った。

2.2.2.2 試薬およびキット

試薬名 製品コード 販売元 クエン酸一水和物 035-03495 和光純薬工業株式会社 クエン酸三ナトリウム二水和物 191-01785 和光純薬工業株式会社 過酸化水素水 1841215 ナカライテスク

Albumin from bovine serum (BSA) A9647 Sigma

Anti-protein gene product 9.5 (PGP9.5) antibody RA-95101 UltraClone Ltd.

Anti-nerve growth factor antibody AB927 Merck Millipore Anti-muscarinic M2 receptor antibody AMR-002 Alomone Labs.

Anti-muscarinic M3 receptor antibody AMR-006 Alomone Labs.

VECTASTAIN Elite ABC Rabbit IgG Kit PK-6101 フナコシ マウントクイック DM-01 コスモバイオ

四塩酸3,3'-ジアミノベンジジン（DAB） 347-00904 和光純薬工業株式会社

アジ化ナトリウム 195-11092 和光純薬工業株式会社 塩化ナトリウム 191-01665 和光純薬工業株式会社 塩化カリウム 163-03545 和光純薬工業株式会社 塩化カルシウム 039-00475 和光純薬工業株式会社 硫酸マグネシウム七水和物 131-00405 和光純薬工業株式会社 りん酸二水素カリウム 169-04245 和光純薬工業株式会社

D(+)-グルコース 049-31165 和光純薬工業株式会社

炭酸水素ナトリウム 191-01305 和光純薬工業株式会社

Carbachol C2409 Sigma

Isoproterenol hydrochloride I6504 Sigma

Forskolin F3917 Sigma

RNAlater 76106 QIAGEN

RNeasy Mini Kit RNEZ 4U QIAGEN

PrimeScript RT reagent Kit RR037A タカラバイオ

SYBR Premix Ex Taq RR041A タカラバイオ

上記以外の試薬およびキットは、第1章1.2.2.2に記載のものを使用した。

2.2.2.3 Primers

β-actin

Forward: GGAGATTACTGCCCTGGCTCCTA, Reverse: GACTCATCGTACTCCTGCTTGCTG muscarinic M2 receptor

Forward: TCGTGAAGATGCCCAAGCAG Reverse: CCACGTTATGATGAAAGCCAACAG

muscarinic M3 receptor

Forward: GCAAAGCTGACACCACTTGTCC Reverse: TGTGAAACTTGAACAGCACGAAAC

全てのプライマーはTakara Perfect Real Timeサポートシステムより購入した。

2.2.2.4 試薬の調製

0.1 Mクエン酸溶液

クエン酸一水和物 21 g

滅菌水 100 mL

0.1 Mクエン酸ナトリウム溶液

クエン酸一水和物 21 g

滅菌水 100 mL

0.01 Mクエン酸バッファー（pH6.0）

0.1 Mクエン酸溶液 9 mL

0.1 Mクエン酸ナトリウム溶液 41 mL

滅菌水 450 mL

混合後、pH6.0に調整した。

ブロッキング液

BSA 10 g

PBS 200 mL

抗体希釈液

BSA 2 g

PBS 200 mL

DAB発色液

DAB 40 mg

アジ化ナトリウム 130 mg

PBS 200 mL

用時、過酸化水素水を30 μL加えて使用した。

KCl溶液

塩化カリウムを 4 M となるように蒸留水に溶解させた。用時、順次希釈して使 用した。

Carbachol溶液

Carbachol を 3×10^-3 mol/L となるように蒸留水に溶解させ,た。順次希釈して使用

した。用時調製とした。

Isoproterenol溶液

Isoproterenol hydrochlorideを1×10^-2 mol/Lとなるように蒸留水に溶解させ,た。順 次希釈して使用した。用時調製とした。

Krebs液

塩化ナトリウム 69 g

塩化カリウム 3.5 g

塩化カルシウム 2.8 g

硫酸マグネシウム七水和物 3 g りん酸二水素カリウム 1.6 g

D(+)-グルコース 20 g

炭酸水素ナトリウム 21 g

蒸留水 10 l

上記以外の各試薬の調製は、第1章1.2.2.4に記載の方法で行った。