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Fig.5・1.Effecぉofiodoaceta血ide(IOA) on colony fonnation企om protoplasts並Japanesebunching onion CV.K話ryo・h武 田hu 5 Gou'組 dHayadori‑hak:ushu'. Colonies in 6 cm dish were scored a:fter 45 days of culture. The data were expressedぉ
percentages over the control (100 % at IOA 0 mM); each point reprsents relative mean va1ue of colony numbers金om
也reereplicates.
88
∞
c.oTable 5‑1. Colony fonnation from protoplast fusion between Japanese bunching onion and bulb onion Host cultivar and its protoplast t仕re伺a加1悶en凶tZ Ka剖itηγou怯1‑ト.幽幽羽幽‑ COI凶ltrolprot旬opla部st抱S IOA treat怠dprotoplasts Fusion treated Hayadori‑Hakushu No. of experiments 11 14 42
Colonies/experiment Y 69.2士64.1 0.0士0.0 6.1土6.9 Control protoplasts 9 500 < IOA treated protoplasts 10 0.1土0.3 Fusion treat怠d36 4.7土3.1
Total colonies obtained 761 0 249 4500< 168 Z Cont位rolprotωop
が
laωst旬sindicate host cultiva町r乍protωopμla邸st胞s.IOA was used for control protoplasts at the concentration of 10 and 20 mM in Kairyou‑Hakushu 5 gou' andHayadori圃Hakushu'，respectively. Onion protoplasts were isolated from calli of onion cv.Sekihoku¥Protoplast fusion was conducted between IOA treated protoplasts and bulb onion protoplasts. Y Colonies developed from 5 x 105 protoplasts or 1.2 x 105 fused proωpl郎臼in6 cm dish were counted after 45 days culture. For protoplast culture ofbulb onion， no colony was detected.Fig. 5‑2. Photographs of colony development丘omprotoplast
白sionbetween Japanese bunching onion cv. 'Kairyou‑hakushu 5 Gou' and bulb nion cv. 'Sekihoku'. (A) Colony development from fusion profucts after a month culture， scale bar expresses 200μm. (B) Colony formation after 45 days culture; (a) in the figure shows control protoplast culture of Japanese bunching onion， (b) IOA‑treated protoplast culture of Japanese bunching onion， (c) culture ofprotoplast fusion between IOA‑treated Japanese bunching onion and bulb onion. (d) control protoplast culture of bulb onion.
‑90‑
5‑2・3. カノレス形成および植物体の再生
改良伯州、15号 ' と せ き ほ く ' の プ ロ ト プ ラ ス ト 融 合 で は 249個 の コ ロ ニ ー が ， 他 方 の 早 ど り 伯 州 ' と せ き ほ く ' で は 168個 の コ ロ ニ ー が そ れ ぞ れ 得 ら れ た . こ れ ら は 引 続 く 2週 間 の 培 養 で ， そ れ ぞ れ 196個と 129個の 2mm大以上のカルスへと発達した.カノレスを再 分化培地に移植した結果， 改良イ白州 5号'の場合では 19儒 体 (9.7%) の カ ル ス か ら ， 一 方 ， 早 ど り 伯 州 ' で は 14個 (10.9%)のカノレスか ら 植 物 体 が 再 生 し た (Table5・2.，Fig.5・3.).
以 上 の よ う に ， プ ロ ト プ ラ ス ト 融 合 試 験 で 合 計 33個 体 の 植 物 が 4 ヶ 月 間 の 再 分 化 試 験 中 に 獲 得 さ れ た が ， 約 半 数 の 個 体 は 約 1年 の 培 養 期 間 で 維 持 増 殖 が 不 可 能 で あ っ た . す な わ ち ， 発 根 不 良 ， 葉 身 の ね じ れ ， お よ び 生 育 遅 延 な ど の 種 々 の 奇 形 が 観 察 さ れ た . そ の 中 で 旺 盛 な 生 育 を 示 し ， か っ ， 充 分 な 発 根 が 認 め ら れ た HS‑8 と KS‑1の 2個 体 は ， ガ ラ ス 温 室 内 に 設 置 し た ポ ッ ト で の 栽 培 が 可 能 で あ っ た .
HS‑8は 形 態 的 に は ネ ギ の そ れ と 類 似 す る が ， そ の 葉 を 水 平 に 切 除 し た 断 面 は 半 円 型 で あ り ， ネ ギ の 円 型 あ る い は タ マ ネ ギ の 三 角 型 と は 異 な っ た (Fig.5・4.).一方の KS‑1は，ネギ裂の円型の葉身を有するが，
地 下 部 に は 約 4cm径 の 球 根 の 形 成 が 観 察 さ れ た .
5・2・4. 細 胞 遺 伝 学 的 解 析
融 合 親 と 再 分 化 植 物 体 12個 体 に つ い て ， フ ロ ー サ イ ト メ タ ー に よ り 核 DNA量 の 分 析 を 行 っ た . そ の 分 析 結 果 を Fig.5・5.お よ び Fig.5‑6. に 示 し た . ネ ギ の 最 初 に 出 現 す る ピ ー ク を 横 軸 の 50の 値 に 設 定 す る
と ， タ マ ネ ギ は 50‑60の 値 で 最 初 の ピ ー ク ( 第 1ピ ー ク ) が 検 出 さ れた.ネギ 改良イ白州 5号 ' と タ マ ネ ギ せ き ほ く ' と の 組 合 わ せ を み る と (Fig. 5・5)，KS‑6お よ び KS‑7は 50前 後 に 第 1ピ ー ク が 検 出 された.ただし， KS‑7は第 2番 目 の ピ ー ク ( 第 2ピ ー ク ) は 第 1ピ
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ー∞ Ml Table 5‑2. Callus devel'Opment and plant regenerati'On仕'Omprotoplast fusi'Ons between Japanese bunching oni'On and bulb '0凶on. N'O. 'Of calli N'O. 'Of calli developed Z regenerated Y (A) (B)
Cultivars NO.'Of A/B col'Onies (%) Ka討lrηy'Ou怯1ト‑Ha紘kus品hu5Go叩u 1 Ha勾yadori.羽'
249 168 196 129 19 14
9.7 10.9 Z C'Olonies出atdevel'Oped仕'Omfused protopl部twere cultured f'Or 23 weeks on the callus induction medium. Ca1li m'Ore th如2mm in diameter were counted. Y Ca1li with shoots were recorded after a f'Our‑month cul加re.
Fig. 5‑3. Photographs of plant regeneration企om白santcalli between Japanese bunching onion cv. 'Kairyou‑hakushu 5 Gou' and bulb onion cv. 'Sekihoku'. (A) Development of shoots from
白santcalli
，
(B) Whole plant regeneration.つU Qd
A
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CB
Fig. 5‑4. Morphology of regenerated plants from protoplast fusion between Japanese bunching onion and bulb onion. (A) Acclima‑ tised plants in a greenhouse
，
(B) Leafblade ofregenarated plant and itsfusion parents; (a) indicates bulb onion cv. 'Sekihoku'， (b) regenarated plant HS・8，
(c) Japanese bunching onion cv.'Hayadori・hakushu'.
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cv. 'Kai ryou四hakushu5 Gou' cv. 'Sekihoku' 開
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Relα七iveDNA content Relative DNA content Fig. 5‑5. Flow‑cytome凶canalysis of nuclear DNA content in
regenerant plants derived企omprotoplぉt白sionbetween Japanese bunching onion cv.'Kairyou‑hakushu 5 Gou' and bulb onion
cv. 'Sekihoku'. KSl， 4， 5， 6， and 7 indicate regenerant plant lines.
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