医薬品開発における生体試料中 薬物濃度分析法バリデーション （BMV）に関するガイドライン

日本におけるBMVガイドラインの状況

とこれからの動き

第４回JBFシンポジウム 2013.08.02

JBF副代表

国立医薬品食品衛生研究所 香取典子

医薬品開発における生体試料中薬物濃度分析法

のバリデーションに関するガイドライン



H25年3月末

厚生労働省研究班からパブコメ用ガイドライン案が提出



H25年4月5日

パブリックコメント開始



H25年4月15日

英訳版リリース



H25年6月4日

募集期限

22機関（個人を含む）、約150を超すコメントが集まった。



H25年7月11日

発出



「医薬品開発における生体試料中薬物定量濃度分析法のバリデーション

に関するガイドライン」発行（薬食審査発0711第1号、審査管理課長通知）



H25年7月11日「医薬品開発における生体試料中薬物濃度分析法のバリ

デーションに関するガイドライン質疑応答集（Ｑ＆Ａ）」 （事務連絡）



「医薬品開発における生体試料中薬物濃度分析法のバリデーション」に関

する意見募集の回答について（22機関、139件）



H26年4月1日～

施行

3

4

BMV研究班とJBF

BMV研究班

JBF

GL素案作成依頼

JBF素案提出

関連団体

コメント募集

• 製薬協

• ジェネリック製薬協

• 安研協

厚労科研 研究班メンバー

製薬協

酒井 和明（非臨床）帝人ファーマ(株)

片島 正貴（臨床） アステラス製薬(株)

ジェネリック薬協

立木 秀尚

東和薬品（株）

安研協

富樫 一天

（株） 住化分析センター

井上 則子

（株） ＪＣＬバイオアッセイ

JBF

GLタスクフォース

米山 智城

武田薬品工業（株）

中山 聡

味の素製薬株式会社

LBAタスクフォース

谷口 佳隆

(株)東レリサーチセンター

今里 真実

ノバルティスファーマ(株)

久世 洋司

武田薬品工業(株)

中村 隆広

(株)新日本科学

南出 善幸

(株)島津テクノリサーチ

宮 和弘

中外製薬(株)

細木 淳

協和発酵キリン(株)

PMDA

佐藤 玲子 PMDA 新薬審査第二部審査役

岩田 大祐 PMDA 新薬審査第四部専門員

国立衛研

奥田 晴宏 薬品部長

川崎 ナナ 生物薬品部長

石井 明子 生物薬品部 第２室長

香取 典子 薬品部 第３室長

オブザーバー

光岡 俊成 医薬食品局審査管理課

医薬品医療機器総合機構

5

BMVガイドライン・発出版（2013.07.11）

6

1. はじめに

2. 適用

3. 標準物質 （標準品）

4. 分析法バリデーション

4.1. フルバリデーション

4.1.1. 選択性

4.1.2. 定量下限

4.1.3. 検量線

4.1.4. 真度及び精度

4.1.5. マトリックス効果

4.1.6. キャリーオーバー

4.1.7. 希釈妥当性

4.1.8. 安定性

4.2. パーシャルバリデーション

4.3. クロスバリデーション

5. 実試料分析

5.1. 検量線

5.2. QC試料

5.3. ISR

5.4. キャリーオーバー

6. 注意事項

6.1. 定量範囲

6.2. 再分析

6.3.クロマトグラムの波形処理

6.4.システム適合性

6.5..回収率

7.報告書の作成と記録等の保存

関連ガイドライン一覧

用語解説

附録 段階的アプローチの利用

質疑応答集（Q&A）

Q1. 標準物質の有効期間が明らかでない場合には、どのように対応したらよいか？

Q2. 分析法バリデーションで取得する項目として選択性が挙げられているが、特異性とは異なる

か？

Q3. 安定性の評価に平均真度以外の指標を用いることは可能か？

Q4. 凍結融解安定性はどのように評価したらよいか？

Q5. 異なる試験間で使用された分析法を比較する場合とは、どのような場合か？

Q6. 判断基準が「各濃度における平均真度が原則として理論値の±20％以内」となっている理由は

あるか？

Q7. 尿試料のISRは必要か？

Q8. トキシコキネティクス試験のISRはどのように実施したらよいか？

Q9. 臨床試験において、ISRはどのように実施したらよいか？

Q10. 臨床試験において、分析法バリデーションを行う際に既に臨床試験から取得した実 試料が存在

する場合には、それをISRの試料として利用できるか？

Q11. ISR全体として判断基準を満たしている場合に、乖離度が±20％以内との判断基準を逸脱した

個別の実試料について、再分析は必要か？

Q12. ISRの結果は報告書のどこに記載すべきか？

Q13. 分析法バリデーションでキャリーオーバーを検証しているのに、実試料分析でも評価を繰り返す

必要はあるか？

Q14. 薬物動態学的な理由での再分析ではどのようなことに注意すべきか？

Q15. 内因性物質の分析法バリデーションはどのように行えば良いか？

7

ISR

パブコメ案 → 発出版

8

1. はじめに

2. 適用

3. 標準物質 （標準品）

4. 分析法バリデーション

4.1. フルバリデーション

4.1.1. 選択性

（特異性）

4.1.2. 定量下限

4.1.3. 検量線

4.1.4. 真度及び精度

4.1.5. マトリックス効果

4.1.6. 回収率

4.1.7. キャリーオーバー

4.1.8. 希釈妥当性

4.1.9. 安定性

4.2. パーシャルバリデーション

4.3. クロスバリデーション

5. 実試料分析

5.1.実試料分析における分析法の妥当

性と再現性

5.1.1. 検量線

5.1.2. QC試料

5.1.3. ISR

5.1.4. キャリーオーバー

6.

5.2

注意事項

6.1. 定量範囲

6.2. 再分析

6.3.クロマトグラムの波形処理

6.4.システム適合性

7. 報告書の作成と記録等の保存

関連ガイドライン一覧

用語解説

附録 段階的アプローチの利用

パブコメへの反応

3. 標準物質（標準品）

2013.08.02 第４回JBFシンポジウム NIHS 香取典子

10

3. 標準物質（標準品）（Q&A）



Q1.

標準物質の有効期間が明らかでな

い場合には、どのように対応したらよい

か？



A1.

有効期間が設定できない場合には、

リテスト日を設定するなどして品質管理

を行う。

11

有効期限が設定できない場合。

4.1 フルバリデーション



分析法を新たに確立、応用する時



種、マトリックス（血漿，血清，尿等）を変更した時



新たな分析対象物質（代謝物など）を追加した時



評価項目

◦

選択性

◦

定量下限

◦

検量線

◦

真度，精度

◦

マトリックス効果

◦

キャリーオーバー

◦

希釈の妥当性

◦

安定性

12

4.1.3. 検量線

2013.08.02 第４回JBFシンポジウム NIHS 香取典子

13

バイオアナリシスでは検量線のレンジが広いので、相関係数は

常にほぼ１となる。

4.1.5 マトリックス効果



MS

を用いる分析法で実施される．



マトリックス効果とは，分析対象物質のレスポンス

が試料中のマトリックス由来成分によって影響を

受けることである．マトリックス効果の評価は，

◦

MF = (マトリックス存在下での分析対象物質のレスポンス)/

(マトリックス

非

存在下での分析対象物質のレスポンス)



少なくとも

6個体

のマトリックスを用いる．



MFの精度は，個体間で

15%以下

．



QC試料でMFを求めてもよい．

14

4.1.5 マトリックス効果（パブコメより）



コメント：

◦

マトリックス効果の検討を行なう濃度数及び濃度につい

て、具体的に記載していただきたい。 EMA-BMV-GLで

は、マトリクス効果の検討は

2濃度

（LLOQの3倍以内と

ULOQ付近）と明記されているため。(類似意見11件)



回答：

◦

マトリックスの影響は、一般に濃度が低いほうが強く出る

ことが多いですが、イオン化状態の変化等により高濃度

で影響がでることもあり得る等、様々な場合が想定され

るので、回収率や直線性とあわせて、

複数濃度での評価

を行うことが必要です。

15

4.1.8. 安定性

2013.08.02 第４回JBFシンポジウム NIHS 香取典子

16

4.1.8. 安定性（Q&A）



Q3.

安定性の評価に平均真度以外の指標を用いるこ

とは可能か？



A3.

安定性の評価には、保存前試料の定量値に与え

る分析法のばらつきを考慮して、原則として平均真度

を用いる。ただし、分析法の精度を考慮してより適切に

評価できると考えられる場合には、

残存率等の他の指

標

を用いて安定性を評価しても良い。安定性の評価に

残存率等を用いる場合にも、評価方法及び判断基準

を

事前に

当該分析実施に関する計画書又は手順書に

設定する。

17

平均真度以外の評価基準（残存率など）も使えるようにした。

5. 実試料分析

項目

◦

5.1. 検量線

◦

5.2. QC試料

◦

5.3. ISR

◦

5.4. キャリーオーバー

実施にあたって



安定性が確認

された条件下で実試料を取り扱う．



分析法の妥当性は，

分析単位ごと

に検量線，QC試料で評価する．

◦

検量線：ブランク試料，ゼロ試料及び6濃度以上の検量線用標準試料

◦

QC試料：検量線の濃度範囲内で，少なくとも

3濃度

（低濃度，中濃度及び高濃度）



薬物動態を主要な評価項目とする試験では

ISR

を実施する．



キャリーオーバーが懸念される実試料分析では，妥当性の評価項

目に

キャリーオーバー

を加える．

18

5.3 実試料分析 ー ISR 1

ISR（Incurred samples reanalysis）とは



定量値の再現性確認のため，

異なる日に

別の分析単位

で投与後試料を

再分析

すること



また，ISRで再現性が確認できない分析法がある場合に，

その

原因を調査し，改善策を講じる

契機となる．



なお，ISRは，乖離度のばらつきを評価するために実施し

ているものであり，個別の実試料においてISRの結果が

±20％を超えても，その

初回の定量値を， 再分析値へ

置き換える又は棄却してはならない

．

主な原因：

◦

実試料の不均一

◦

コンタミネーションのような誤操作

◦

生体由来成分の影響

◦

未知代謝物の影響、他

19

5.3 実試料分析 ー ISR 2

実施範囲：



ISRは薬物動態を

主要なエンドポイント

とする試験で

異なるマトリック

スごと

に代表的な試験を選択して実施される．

◦

非臨床試験ではトキシコキネティクス試験の異なる

動物種ごと

に，

◦

臨床試験においては，

健康被験者，腎機能又は肝機能低下のある被験者

を対象

とするそれぞれの薬物動態試験のうち代表的な試験，

生物学的同等性試験

で実

施．



通常

最高血中濃度及び消失相付近の試料

を含むよう選択し，安定性が保

証された期間内にISRを実施する．



1000を超えない試料数→ その

約10%

，1000を超えた試料数→ 1000の

超

過数に対して約5%

に相当する試料数を加えた数．

評価法：



ISRの評価には，

乖離度

を用いる．

◦

乖離度(%) = {(比較する分析の定量値)－(基準となる分析の定量値)}/(両者の平均

値)×100



少なくとも

3分の2以上

の試料において，乖離度が

±20%以内

でなけ

ればならない．

20

5.3 実試料分析 ー ISR（Q&A）

Q9.

臨床試験において、ISRはどのように実施した

らよいか？

A9.

ISRは薬物動態を主要なエンドポイントする代

表的な試験で実施される。



分析法の妥当性を早期に評価するために、なる

べく

医薬品開発の早い段階

で実施する。



マトリックスの組成に差があると考えられる被験

者群（腎機能、肝機能障害等）の臨床試験にお

いては

再度ISRを実施

する。



生物学的同等性試験では，

試験ごとにISR

を実

施する。．

21

6 注意事項



必須ではないが、必要に応じて参考にす

る。

6.1. 定量範囲

6.2. 再分析

6.3. クロマトグラムの波形処理

6.4. システム適合性

6.5. 回収率

22

6.2 注意事項 ー 再分析

どんな場合に行うか:



検量線

又は

QC試料

が基準を満たさなかった場合



定量値が検量線の

最高濃度以上

であった場合



投与前試料

又は

実薬非投与群

の試料中に分析対象

物質が認められた場合



前処理操作又は分析機器の

不具合



クロマトグラムの

異常等

が発生した場合



異常値の

原因追求

、等

23

6.2 注意事項 ー 再分析（Q&Aから）

Q14

薬物動態学的な理由での再分析ではどのようなことに注意

すべきか？

A14.

薬物動態学的な理由等、取得した分析結果を理由とした再

分析は、客観性を維持することが難しいため、

可能な限り実施し

ないことが望ましい

。

このような再分析を実施する場合には、再分析を行う実試料の

選定についても、必要に応じて前後の採血時点の実試料を含め

るなど、慎重に行うべきである。加えて、再分析における繰り返し

分析の回数や採用値の選択方法等の手順をあらかじめ計画書

又は手順書等で定めておく必要がある。

生物学的同等性試験

等、生体試料中の濃度が重要なエンドポイ

ントとなる試験においては、原則、

取得した分析結果を理由とし

た再分析は認められない

。ただし、定量値の入れ替えを想定しな

い、原因追及や検証を目的とした再分析の実施を妨げるもので

はない。

24

BMV研究班のスケジュール

•

H25第１回班会議（5月16日（木） PMDA ）

•

LBAガイドライン素案に対するの関連団体のコメント収集開始（6月前半〜7月

中旬）

•

低分子・LCガイドラインコメント締切（

6月4日

）

•

低分子・LCガイドライン、Q&A発出（

7月11日

）



低分子・LCガイドライン、Q&Aの英訳版発出（

7月末〜8月予定

）



H25第2回班会議（

9月27日

）

•

高分子LC/MS

のためのガイドライン作成ワーキング立ち上げ（

10月頃

）



低分子・LCのQ&A（追加分・製薬協から？）（

未定

）

•

LBAガイドラインパブコメ開始

（

2014年3月頃？

）

25

今後の課題

 高分子LC/MS

_{、バイオマーカー、マイクロドージング等への対応}

ご清聴ありがとうございました