TE-031の 毒 性 研 究(第12報)
抗 原 性 試 験
阿 部 訓 志 ・岩 城 理 進 ・関 根 礼 子 ・中 根 貞 雄
大正製薬株式会社総合研究所
TE-031の 抗 原 性 をモ ル モ ッ ト,ウ サ ギ お よび マ ウ ス を用 い て 検 討 し,以 下 の結 果 を得 た 。 1. TE-031をFreund's complete adjuvant (FCA)と と もに 筋 肉 内 感 作 した モ ル モ ッ トにTE-031と ウ シ血 清 ア ル ブ ミン(BSA)の 混 液 を静 脈 内 投 与 した場 合,全 身 ア ナ フ ィ ラキ シー 反応 は惹 起 さ れ なか った 。
2. TE-031をFCAと と もに皮 内感 作 し,さ らにTE-031を 経 皮感 作 したモ ルモ ッ トにTE-031を 経 皮 投 与 した場 合,遅 延 型 皮 膚 反応 は惹 起 され な か った 。
3. TE-031をFCAと と もに 皮 内 感 作 した ウサ ギ にTE-031あ る い はTE-031とBSAの 混 液 を皮 内 投 与 した場 合,ア ルサ ス 反 応 は 惹起 さ れ なか った 。 また,こ れ らの ウサ ギ 血 清 に よる受 身血 球 凝 集 反 応 お よ びモ ル モ ッ トPCA反 応 は惹 起 され な か つた。 4. TE-031とBSAの 混 液 を水 酸 化 ア ル ミニ ウム ゲ ル と と もに腹 腔 内 感作 した マ ウ ス の血 清 は ラ ッ トの 皮 膚 にPCA反 応 を惹 起 しな か った 。 以 上 よ り,本 試 験 条 件 下 で はTE-031は 抗 原性 を有 さな い もの と考 え られ た。 TE-031は 大 正 製 薬 株 式 会 社 で 開 発 さ れ た 新 規 マ ク ロ ラ イ ド系 抗 生 物 質 で あ る 。 今 回,TE-031の 安 全 性 評 価 の 一 環 と し て,モ ル モ ッ ト,ウ サ ギ お よ び マ ウ ス を用 い て そ の 抗 原 性 を検 討 した の で 報 告 す る 。 I. 実 験 材 料 お よ び 方 法 1. 被 験 物 質 等 TE-031(化 学 名;(-)-(3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R, 12R,13S,14R)-4-[(2,6-dideoxy-3-C-methyl-3-0-me- thyl-a-L-7ibo-hexopyranosyl)oxy]-14-ethyl-12,13-di-hydr0xy-7-meth0xy-3,5,7,9,11,13-hexamethyl-6-[[3, 4,6-tride0xy-3-(dimethylamino)-β-D-xyto-hexopyrano-syl]oxy]oxacyclotetradecane-2,10-dione,分 子 量; 747.96)は 水 に ほ と ん ど 溶 け な い 白 色 無 臭 性 の 苦 味 を 有 す る 結 晶 性 粉 末 で あ り,Fig. 1に 示 す 構 造 を 有 す る 化 合 物 で あ る 。 本 試 験 に はLot No.840730お よ び850722の TE-031を 用 い た 。 TE-031の ほ か,陽 性 対 照 ま た は 担 体 蛋 白 と し て 牛 血 清 ア ル ブ ミ ン(BSA,和 光 純 薬),卵 ア ル ブ ミ ン(EA,和 光 純 薬)お よ び2,4-dinitrochlorobenzene (DNCB,東 京 化 成)を 用 い た 。 ま た,試 薬 と し てFreund's complete ad-juvant (FCA, Difco Laboratories),水 酸 化 ア ル ミ ニ ウ ム (Merck),ア セ ト ン(国 産 化 学),緬 羊 赤 血 球(SRBC,日 本 生 物 材 料 セ ン タ ー),ラ ウ リ ル 硫 酸 ナ ト リ ウ ム(SDS, 花 王 石 鹸),生 理 食 塩 液(山 口 製 薬)お よ び エ バ ン ス ブ ル ー(東 京 化 成)を 使 用 し た 。 2. 被 験 物 質 等 の 調 製 TE-031は 水 に 難 溶 で あ る た め,等 モ ル に 相 当 す る0.1 Nの 塩 酸 を 加 え,生 理 食 塩 水 に よ り必 要 濃 度(5∼10mg/ ml)の 溶 液 に 調 製 し て 用 い た 。 な お,こ れ ら の 調 製 物 お よ びTE-031は 投 与 条 件 下 で 安 定 で あ る こ と が 確 認 され て い る 。BSAお よ びEAは 生 理 食 塩 水(BSA:0.5∼10 mg/ml, EA: 0.008∼10mg/ml)に,DNCBは ア セ ト ン (0.1∼10mg/ml)あ る い はFCA (2mg/ml)に 溶 解 させ て 用 い た 。 3. モ ル モ ッ トに お け る 全 身 ア ナ フ ィ ラ キ シ ー 反 応 1) 使 用 動 物 お よ び 飼 育 条 件 3∼4週 齢 のHartley系 雄 性 モ ル モ ッ ト(静 岡 県 実 験 動
物農業協 同組 合)40匹 を 昭 和59年9月28日 に 入 手 し,6 日間の検疫 の後 さ ら に馴 化 して30匹 を試 験 に 供 した 。 初 回感作 時の 体重 は281∼331gで あ った 。 モ ル モ ッ トは 温 度22∼25℃,湿 度45∼70%の 動 物 室 で ア ル ミニ ウ ム 製 ケージ(345×550×370mm)に5匹 ず つ 収 容 し,固 形 飼 料 (RC-4,オ リエ ン タ ル酵 母)お よ び 殺 菌 水 を 自 由 に 摂 取 させて飼育 した 。 2) 実験 方 法 Table 1に 示 す3感 作 群 を設 定 し,Fig. 2に 示 す ス ケ ジュールで 検討 した。 i) 感 作抗 原 の調 製 お よ び感 作 TE-031は 前 述 の 方 法 で10mg/ml溶 液 を調 製 した 後, 等量 のFCAと 乳 化 させ,BSAは0.5mg/ml BSA・ 生 理 食塩水 溶液 と等 量 のFCAを 乳 化 させ て そ れ ぞ れ の 感 作 抗原 を調製 した 。 ま た,対 照 群 の 感 作 抗 原 と して は生 理 食塩水 とFCAの 等 量 乳 化 物 を用 い た。 感作 は これ らの 感 作 抗 原4ml/kgを4日 毎 に4回 筋 肉 内投与す る こ とに よ り行 つ た。 ii) 惹起 抗 原 の調 製 お よ び惹 起 前述 の方 法 で10mg/ml TE-031溶 液 を調 製 した 後,10 mg/ml BSA・ 生 理 食 塩 水 溶 液 と等 量 混 和 し,37℃ で30分 間振邊孵 置 した液 を惹起 抗 原 と した。 最終感 作6日 後 あ る い は18日 後 に,各 群 半 数 例(5匹) ずつ のモ ルモ ッ トに惹 起 抗 原1mlを 陰 茎 静 脈 よ り投 与 し,立 毛,脱 糞,チ ア ノー ゼ,呼 吸 困難,け い れ ん,死 亡等の シ ョック症状 の発 現 を投 与2時 間後 まで 観 察 した。 4. モ ル モ ッ トに お け る接 触 ア レ ル ギ ー反 応(遅 延 型 皮膚 反 応) 1) 使用 動 物 お よ び飼 育 条 件 3∼4週 齢 のHartley系 雄 性 モ ル モ ッ ト(静 岡 県 実験 動 物 農業協 同組 合)40匹 を昭 和59年10月5日 に 入 手 し,6 日 間の 検 疫 の後 さ らに馴 化 して30匹 を試験 に供 した。 初 回 感 作 時 の体 重 は340∼393gで あ っ た。 モ ル モ ッ トは温 度22∼25℃,湿 度45∼70%の 動 物 室 で ア ル ミニ ウ ム 製 ケ ー ジ(345×550×370mm)に5匹 ず つ 収 容 し,固 形 飼 料(RC-4,オ リエ ン タ ル酵 母)お よ び 殺 菌 水 を 自由 に摂 取 させ て 飼 育 した。 2) 実 験 方 法 Table 2に 示 す3感 作 群 を 設 定 し,Fig-3に 示 す ス ケ ジ ュ ー ル でmaximizatien法1)に よ り接 触 ア レ ル ギ ー反 応 を検 討 した。 i) 感 作 抗 原 の調 製 お よび感 作 TE-031群 に は5mg/mlTE-031溶 液,10mg/ml TE-031溶 液 とFCAの 等 量 乳 化 物 お よ び 生 理 食 塩 水 と FCAの 等 量 乳 化 物 を,DNCB群 に は1mg/ml DNCB・ ア セ トン溶 液,2mg/ml DNCB・FCA溶 液 と生 理 食 塩 水 の 等 量 乳 化 物 お よ び生 理 食 塩 水 とFCAの 等 量 乳 化 物 を, 対 照 群 に は生 理 食 塩 水 お よ び生 理 食塩 水 とFCAの 等 量 乳 化 物 を調 製 して一 次 感 作 抗 原 と した。 こ れ らの感 作 抗 原 を,被 毛 を刈 っ た モ ル モ ッ トの 肩 甲骨 上 部 に1感 作 抗 原 につ き0.05mlず つ2箇 所,計6箇 所 に 皮 内投 与 した。 一 次 感 作6日 後 に,10%SDS・ 生 理 食 塩 水 溶 液0.1ml を浸 透 させ た2×4cmの ろ 紙 をモ ルモ ッ ト肩 甲骨 上 部 の 2箇 所 に24時 間 閉 塞貼 布 し,感 作 増 強 処 置 を行 った 。 二 次 感 作 は 一 次 感 作7日 後 に行 つた 。TE-031群 に は 10mg/mlTE-O31溶 液 を,DNCB群 に は10mg/ml DNCB・ ア セ トン溶 液 を,対 照 群 に は 生 理 食 塩 水 を そ れ ぞ れ 調 製 あ る い は用 意 して,対 応 す る 感 作 抗 原0.3mI を浸 透 させ た2×4cmの ろ 紙 をモ ルモ ッ ト肩 甲骨 上 部 の 2箇 所 に48時 間 閉塞 貼 布 した 。 ii) 惹 起 抗 原 の調 製 お よび 惹 起 二 次 感 作14日 後 に,被 毛 を刈 つた モ ル モ ッ トの腹 側 部
Table 1 Experimental groups for active systemic anaphylaxis in guinea pigs
* : Single dosage
Fig. 2 Schedule for active systemic anaphylaxis in guinea pigs
に10mg/mlTE-031溶 液 あ る い は0.1mg/ml DNCB・ ア セ ト ン 溶 液0.2mlを 浸 透 さ せ た2×2cmの ろ 紙 を24時 間 閉 塞 貼 布 し た 。 貼 布 開 始24,48お よ び72時 間 後 に 以 下 に 示 す 基 準 に 従 い,皮 膚 反 応 を 評 価 した 。 0:肉 眼 的 に 変 化 な し 1:軽 度 ま た は 散 在 性 の 紅 斑 2:中 等 度 の 紅 斑 3:強 い 紅 斑 に 浮 腫 5. ウ サ ギ に お け る 抗 原 性 の 検 討 1) 使 用 動 物 お よ び 飼 育 条 件
4箇 月 齢 のNew Zealand White種 雄 性 ウ サ ギ(新 日 本 動 物)36匹 を 昭 和59年10月19日 に 入 手 し,6日 間 の 検 疫 の 後 さ ら に 馴 化 し て24匹 を 試 験 に 供 し た 。 初 回 感 作 時 の 体 重 は2.6∼3.1kgで あ っ た 。 ウ サ ギ は 温 度22∼25℃, 湿 度45∼75%の 動 物 室 で ア ル ミ ニ ウ ム 製 ケ ー ジ(315× 550×315mm)に1匹 ず つ 収 容 し,固 形 飼 料(RC-4,オ リ エ ン タ ル 酵 母)お よ び 殺 菌 水 を 自 由 に 摂 取 さ せ て 飼 育 し た 。 ま た,PCA反 応 用 の 動 物 と し て,3∼4週 齢 のHartley 系 雄性 モ ル モ ッ ト(静岡県 実 験 動 物 農 業 協 同組 合)60匹 を 昭 和59年11月16日 お よ び21日 に入 手 し,6日 間の検 疫の 後 さ らに 馴 化 して 試 験 に供 した 。 検 疫 終 了 時 の体 重 は 303∼383gで あ つ た。 モ ルモ ッ トは 温度22∼25℃,湿 度 45∼70%の 動 物 室 で ア ル ミニ ウ ム 製 ケ ー ジ(345×550× 370mm)に5匹 ず つ 収 容 し,固 形 飼 料(RC-4,オ リエ ン タル酵 母)お よ び殺 菌 水 を 自由 に摂 取 させ て 飼育 した。 2) 実 験 方 法 Table 3に 示 す3感 作 群 を 設 定 し,Fig. 4に 示 す スケ ジ ュ ー ル で 受 身 血 球 凝 集 反 応,モ ル モ ッ トPCA反 応 お よ び アル サ ス 反応 を検 討 した。 i) 感作 抗 原 の調 製 お よ び感 作 TE-031は 前 述 の 方 法 で10mg/ml溶 液 を調 製 した後, 等 量 のFCAと 乳 化 させ,BSAは10mg/ml BSA・ 生理 食 塩 水 溶 液 と等 量 のFCAを 乳 化 させ て それ ぞ れ の感 作抗 原 を調 製 した。 また,対 照 群 の感 作 抗 原 と して は生理食 塩 水 とFCAの 等 量 乳化 物 を用 い た。
こ れ らの 感 作 抗 原0.2ml/kgを ウサ ギ 四 肢 の指 間の皮 内 に一 次 感作 し,そ の21日 後 に同 一 の 感作 抗 原 を同一部
Table 2 Experimental groups for delayed-type skin reaction in guinea pigs
Fig. 3 Schedule for delayed-type skin reaction in guinea pigs
I : Immunization C : Challenge
Table 3 Experimental groups for antigenicity tests in rabbits
*
: Single dosage
Fig. 4 Schedule for antigenicity tests in rabbits
所 に二 次感 作 した 。 ii) 採 血 一次感作14日 後 お よび 二次 感作7日 後 に ,ウ サギの耳 介静脈 よ り採 血 し,遠 心 分 離 して 得 られ た血 清 を56℃, 3o分 間の 条 件 で 非 働 化 させ た 。 こ の 血 清 をモ ル モ ッ ト PCA反 応 用 お よび受 身血 球 凝 集 反 応 用 被 検 血 清 と した 。 iii) 受 身 血球 凝 集 反応 BOYDENの 方 法2)に よ り,ホ ル マ リ ン ・タ ンニ ン酸 処 理赤 血球(T-SRBC)を 作 製 した 。T-SRBC沈 査1容 に対 し,1/15M燐 酸 食 塩 緩 衝 液(PBS)2容 お よ び10mg/ml TE-031溶 液3容 を加 え て 混 和 し,37℃ で3時 間振 盤 孵 置 した。 こ れ を,1%ウ サ ギ正 常 血 清 を含 有 す るPBS (NRS-PBS)で 遠 心 洗 浄(1,500rpm,5minで3回)後, NRS-PBSで1%TE-031感 作 赤 血 球 浮 遊 液 を調 製 した 。 同様 に,T-SRBC沈 査1容 に対 しPBS2容 お よ び1mg/ mlBSA溶 液3容 の 割 合 で処 理 して,1%BSA感 作 赤 血 球浮遊 液 を調製 した。 血球 凝 集 反 応 はmicretiter法3)に よ り行 つた 。 す な わ ち,マ イ ク ロ プ レ ー トの 各 ウ ェ ル にNRS-PBS0 .025ml を入れ,第1列 目の ウ ェル に 生 理 食 塩 水 で10倍 希釈 した 被 検血 清0.025mlを 加 え,ダ イ リ ュ ー タ-で2倍 列 希 釈 を行 った 。 さ らに,各 ウ ェ ル にNRS-PBS 0.05mlを 加 えた後,先 に調 製 した 感 作 赤 血 球 浮 遊 液0.025mlを 加 え,振 盈 したの ち37℃ で60分 間孵 置 した。 室 温 で一 晩 放 置後,凝 集 の有 無 を判 定 した。 抗 体 価 は凝 集 を示 す 最 高 希釈倍 率で 表 した 。 iv) モ ルモ ッ トPCA反 応 1被 検血 清 につ い て2匹 の モ ル モ ッ トを用 い,OVARY の方法4)に準 じて 行 った 。 被 検 血 清 を,対 照 群 で は そ の ま ま,TE-031群 で は 生 理 食塩 水 で倍 量 希 釈 を繰 り返 し1∼8倍 の 希 釈 血 清 を, BSA群 で は生 理 食 塩 水 で 倍 量 希 釈 を繰 り返 し1∼128倍 の希 釈血 清 をモ ルモ ッ トPCA反 応 用 被検 血 清 と した。 惹 起抗 原 は,10mg/mlTE-031溶 液 を10mg/mlBSA・ 生理 食塩 水溶 液 と等 量 混 合 し,37℃ で30分 間振 盈艀 置 し た後,艀 置 した 液 と等 量 の10mg/m1エ バ ン ス ブ ル ー ・ 生理食塩 水 溶 液 を混 合 して 調 製 した。 被 毛 を刈 っ た モ ル モ ッ トの 背 部 お よ び背 側 部 にPCA 反 応 用被 検 血 清0.1mlを 皮 内 投 与 し,そ の5時 間 後 に 陰茎 静脈 よ り惹起 抗 原1mlを 注 入 した 。 惹 起注 射 の30分 後 に動 物 を断 頭 に よ り屠 殺 し,被 検血 清の 注射 部位 を含 む皮 膚 を剥 離 して皮 膚 の内 面 よ り青 色 斑の 直径 を測 定 した。 判 定 は5mm以 上 の 青 色 斑 を示 す 被検血 清 をPCA反 応 陽 性 と し,PCA反 応 陽性 を示 す 最 高希釈 倍率 をPCA反 応 力価 と した 。 v) ア レルギ ー性 皮 膚 反 応(ア ル サ ス 反 応) 5mg/mlTE-031溶 液,1mg/mlBSA・ 生 理 食 塩 水 溶 液,10mg/mlTE-031溶 液 と2mg/mlBSA・ 生 理 食 塩 水 溶 液 を等 量 混 合 し,37℃ で30分 間振 盤艀 置 した 液 の3種 を惹 起 抗 原 と した 。 二 次 感 作14日 後 に,被 毛 を刈 つ た ウサ ギ の 背部 に3種 の 惹 起 抗 原0.1mlず つ を そ れ ぞ れ3箇 所 に皮 内 投 与 し た 。 投 与24お よ び48時 間 後 に投 与 部 位 を観 察 し,直 径5 mm以 上 の 発 赤 お よ び浮 腫 の み られ る もの を陽 性 と判 定 した。 な お,BSA感 作 群 で は8例 で 試 験 を 開 始 した が,二 次 感 作7日 後 の 採 血 後 に1例 が 死 亡 した た め,ア ルサ ス 反 応 は7例 で 検 討 した。 6. マ ウ ス に お け る抗 原性 の 検 討 1) 使 用 動 物 お よび飼 育 条件 4週 齢 のBDF1系 雄 性 マ ウ ス(静 岡 県 実 験 動 物 農 業 協 同組 合)52匹 を昭 和61年1月10日 に 入 手 し,6日 間 の検 疫 の後 さ らに馴 化 して36匹 を試験 に 供 した。 初 回感 作 時 の体 重 は17.6∼21.3gで あ った 。 マ ウ ス は温 度22∼27℃, 湿 度37∼70%の 動 物 室 で ア ル ミニ ウ ム 製 ケ ー ジ(175× 230×160mm)に6匹 ず つ 収 容 し,固 形 飼 料(MF,オ リ エ ン タ ル酵 母)お よ び殺 菌 水 を 自 由 に摂 取 させ て 飼 育 し た。 ま た,PCA反 応 用 の 動 物 と して,7週 齢 のWistar系 雄 性 ラ ッ ト(静岡県 実 験 動 物 農業 協 同組 合)53匹 を昭 和61 年1月24日 お よ び2月14日 に入 手 し,5∼6日 間 の検 疫 の 後 さ ら に馴 化 して 試 験 に供 し た。 検 疫 終 了 時 の体 重 は 175∼205gで あ った 。 ラ ッ トは 温 度21∼25℃,湿 度45∼ 60%の 動 物 室 で ア ル ミニ ウ ム 製 ケ ー ジ(225×325×200 mm)に3匹 ず つ 収 容 し,固 形 飼 料(MF,オ リエ ンタ ル酵 母)お よ び殺 菌 水 を 自 由 に摂 取 させ て飼 育 した。 2 )実 験 方 法 Table 4に 示 す3感 作 群 を設 定 し,Fig.5に 示 す ス ケ ジ ュ ール で ラ ッ トPCA反 応 に よ り検 討 した 。 i) 感 作 抗 原 の 調 製 お よ び感 作 前 述 の 方 法 で 調 製 した10mg/mlTE-031溶 液 と6mg/ mlBSA・ 生 理 食 塩 水 溶 液 を等 量 混 和 し,37℃ で30分 間 振 盈 孵 置 した 後,孵 置 し た液 と等 量 の16mg/ml水 酸 化 ア ル ミニ ウ ム.生 理 食 塩 水 ゲ ル と よ く混 和 し,感 作 抗 原 と した。EA群 の 感 作 抗 原 と して は,8μg/mlEA・ 生 理 食 塩 水 溶 液 と16mg/ml水 酸 化 ア ル ミニ ウ ム ・生 理 食 塩 水 ゲ ル を よ く混 和 して 用 い た 。 また,対 照 群 に は,8 mg/ml水 酸 化 アル ミニ ウ ム ・生 理 食 塩 水 ゲ ル を用 い た。 これ ら感 作 抗 原20m1/kgを 腹 腔 内 感 作 し,そ の33日 後 に 同 一 感 作抗 原 を同 様 に二 次 感 作 した 。 ii) 採 血 一 次 感 作14日 後 お よび 二 次 感 作7日 後 に眼 窩 静 脈 叢 よ
りマ イ クロ ・キ ャ ピラ リーチ ュ ー ブ(シ ノテ ス ト商事)を 用 い て 採 血 し,常 法 に従 っ て10,000rpm,5分 の 条 件 で 遠 心 分 離 して得 られ た 血 清 をPCA反 応 用 被 検 血 清 と し た 。 iii) ラ ッ トPCA反 応 1血 清 に つ き2匹 の ラ ッ トを用 い,MOTAら の 方 法5) に準 じて行 っ た。 対 照 群 の血 清 は生 理 食 塩 水 で10倍 に,TE-031群 の 血 清 は10倍 か ら生 理 食 塩 水 で2倍 希釈 を繰 り返 し10,20, 40お よ び80倍 に,EA群 の 血 清 は10倍 か ら生 理 食塩 水 で 2倍 希 釈 を繰 り返 し10,20,40,80,160,320,640お よ び1,280倍 に 希 釈 してPCA反 応 用血 清 と した。 惹 起 抗 原 は,10mg/ml TE-031溶 液 と10mg/mlEA・ 生 理 食塩 水溶 液 を等 量 混 合 し,37℃ で30分 間振 盛艀 置 し た 後,艀 置 した 液 と10mg/mlエ バ ンス ブ ル ー ・生 理 食 塩 水 溶 液 を等 量 混 合 して 調 製 した。 予 め 刈 り毛 した ラ ッ トの 背 部 皮 内 に0.1mlを 投 与 し, そ の5時 間後 に惹 起 抗 原1m1を 尾 静脈 に投 与 した 。 惹 起 注 射 の30分 後 に動 物 を断頭 に よ り屠 殺 し,被 検 血 清 の注 射 部 位 を含 む皮 膚 を剥離 して皮 膚 の 内 面 よ り青 色 斑 の 直 径 を測 定 した。 判 定 は5mm以 上 の青 色 斑 を示 す 被 検 血 清 をPCA反 応 陽 性 と し,PCA反 応 陽性 を示 す 最 高 希釈 倍 率 をPCA反 応 力 価 と した 。 な お,TE-031感 作 群 で は一 次 感 作14日 後 の 採 血 終 了 時 に1匹 が 保 定 ミス に よ り圧 死 した た め,二 次感 作7日 後 の血 清 に よ るPCA反 応 は11匹 で 検 討 した。 II. 結 果 お よ び 考 察 1. モ ル モ ッ トに お け る全 身 アナ フ ィラ キ シー反応 結 果 をTable5に 示 した 。 陽 性 対 照 のBSA感 作 群 の モ ル モ ッ トにTE-031と BSAの 混 液 を投 与 した場 合,最 終 感 作6日 後 お よび18 日後 の いず れ の時 点 にお い て も,立 毛,激 しい呼 吸 困難 等 の ア ナ フ ィラ キ シ ー ・シ ョ ック症状 を呈 し,全 例が6 分 以 内 に死 亡 した。 一 方,TE-031感 作 群 お よび対 照群 で は,同 様 の 処 置 に よ り,前 述 の ア ナ フ ィラキ シ ー ・シ ョ ック症 状 お よ び死 亡 例 は全 く認 め られ なか った。 従 っ て,本 試 験 条 件 下 で は,全 身 ア ナ フ ィ ラキ シー反 応 に 関 与 す る と され るIgEあ る い はIgG抗 体 の 産生6)は な い もの と考 え られ た 。 2. モ ル モ ッ トに お け る接 触 ア レル ギ ー反 応(遅 延型 皮 膚 反 応) 結 果 をTable 6に 示 した。 陽 性 対 照 のDNCB感 作 群 の モ ル モ ッ トに0.1mg/ml DNCB・ ア セ トン溶 液 を塗 布 した場 合,顕 著 な紅斑 が全 例 に認 め られ た。 一 方,対 照 群 お よ びTE-031感 作 群 の モ ル モ ッ トに10mg/mlTE-031溶 液 を塗 布 して も紅 斑等 の 皮 膚 反 応 は1例 も認 め られ な か っ た。
Table 4 Experimental groups for antigenicity test in mice
* : Single dosage
Fig. 5 Schedule for antigenicity test in mice
I : Immunization B : Bleeding
従 って,本 試 験 条 件 下 で は,遅 延 型 皮 膚 反 応 に関 与 す るとされ る細 胞 性 抗 体 の 産 生7)は な い もの と考 え られ た。 3.ウ サ ギ にお け る抗 原 性 の 検 討 1) 受 身血 球 凝 集 反 応 結果 をTable 7に 示 した。 BSA感 作 群 の ウサ ギ 血 清 は,一 次 感 作14日 後 で は10 ∼320倍で ,二 次 感 作7日 後 で は320∼1280倍 で処 理 赤血 球 を凝 集 させ た。 一 方,非 感 作 群 お よ びTE-031感 作 群 の ウサギ血 清 は,一 次 感 作14日 後 お よび 二次 感作7日 後 いずれの もので も,処 理 赤血 球 を凝 集 させ な か っ た 。 2) モ ル モ ッ トPCA反 応 結 果 をTable 8に 示 した。 BSA感 作 群 の ウ サ ギ 血 清 は,一 次 感 作14日 後 お よ び 二次感 作7日 後 の い ず れ の もの で も最 高 希 釈 倍 率 の128 倍で モル モ ッ トの 皮 膚 にPCA反 応 を 惹 起 した。 一 方, 対照群 お よびTE-031感 作 群 の ウサ ギ 血 清 は,一 次 感 作 14日後お よび二 次 感 作7日 後 の い ず れ の もの で もモ ル モ ッ トの皮 膚 にPCA反 応 を惹 起 しな か つ た。 3) ア レル ギ ー性 皮 膚 反 応(ア ル サ ス 反応) 結 果 をTable9に 示 した。
陽 性 対 照 のBSA感 作 群 の ウ サ ギ にBSAあ るい はTE-031とBSAの 混 液 を投 与 した場 合,浮 腫 を伴 つ た 発赤 が 全 例 に認 め ら れ,さ らに,24時 間後 に は ほ ぼ全 例 に発 赤 の 中 心 部 に 壊 死 が 認 め られ た。 一 方,TE-031感 作 群 お よ び対 照 群 の ウサ ギ にTE-031あ る い はTE-031とBSA の混 液 を投 与 した場 合 に は 浮腫 を伴 わ な い軽 度 の 発赤 が 散 見 さ れ た。 TE-031感 作 群 に認 め ら れ た 発 赤 は,対 照 群 に も同 程 度 に認 め ら れ た こ と よ り,TE-031に 特 異 的 な 免 疫 的 反 応 に よ る もの で は な い と考 え られ た。 従 つ て,本 試 験 条 件 下 の ウサ ギ で は,TE-031に 対 し て 受 身 血 球 凝 集 反 応 お よ び アル サ ス反 応 に関 与 す る と さ れ るIgM抗 体,上 記3つ の 反 応 に関 与 す る と され るIgG 抗 体 の 産生8,9)はな い もの と考 え られ た 。 4. マ ウ ス に お け る抗 原性 の検 討 結 果 をTable 10に 示 した 。 EA感 作 群 の マ ウ ス血 清 は,一 次 感 作14日 後 の もの で は12例 中11例 が,二 次 感 作7日 後 の もので は12例 全 例 が
Table 6 Results of delayed-type skin reaction in guinea pigs
*
: Mean score= Sum of scores/ No. of animals
ラ ッ トPCA反 応 を惹 起 した。 一 方,対 照 群 お よびTE-031感 作 群 の マ ウ ス血 清 は,一 次 感作14日 後 お よ び二 次 感 作7日 後 の い ず れ の もの で も ラ ッ トの 皮 膚 にPCA反 応 を惹起 しな か っ た。 従 って,本 試 験 条 件 下 で は,ラ ッ トPCA反 応 に 関 与 す る と され るIgE抗 体 の 産生5)は な い もの と考 え られ た 。 以 上 の よ うに,TE-031の 抗 原 性 を モ ル モ ッ ト全 身 ア ナ フ ィラ キ シ ー反 応,ウ サ ギ に お け る ア ルサ ス反 応,ウ サ ギ 血 清 を用 い た 受 身血 球 凝 集 反 応 お よ び モ ル モ ッ ト PCA反 応,マ ウ ス に お け る ラ ッ トPCA反 応,モ ル モ ッ トを用 い たmaximization法 に よ り,抗 体 産 生 お よ び細 胞 性 免 疫 の 成 立 の 両面 よ り検 討 した結 果,い ず れの 試 験 に お い て もTE-031の 抗 原 性 を示 唆 す る結 果 は得 られ な か つた 。 薬 剤 ア レル ギ ー症 例 で は,抗 生物 質 お よ びサ ル フ ァ剤 に よ る ものが 多 く10),さ ら に,抗 生 物 質 の 中 で もペ ニ シ リン系 お よ びセ フ ァ ロス ポ リ ン系 に多 い こ とが報 告 され て い るmが マ ク ロ ラ イ ド系 で は 稀 で あ る と され て い る12,13)。ま た,本 試 験 条 件 下 で はTE-031は いず れ の検 討 に おい て も抗 原性 を示 唆 す る変 化 は認 め られ なか った。 以 上 よ り,TE-031が 抗 原 性 を発 現 す る 可 能性 は少 ない もの と推 察 され た 。 (試験 期 間:昭 和59年9月 ∼ 昭和61年4月) 文 献
1) MAGNUSSON,
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2)
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Table 8 Results of passive cutaneous anaphylaxis (PCA) in guinea pigs
Table 9 Results of Arthus reaction in rabbits
*
No. of animals with positive reaction
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3) 木 村 義 民: Microtitrationとhemagglutination。 免 疫 実 験 操 作 法, 294∼297頁, 日 本 免 疫 学 会. 1971
4) OVARY,
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5) MOTA, I. & D. WONG : Homologous and
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6) 石 坂 公 成: ア レ ル ギー 。 免 疫 学4細 胞 性 免 疫 ・ ア レ ル ギ ー(山 村 雄 一 監 修), 113∼118頁, 中 山 書 店. 1981
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F-W. SHEN,
E.A. BOYSE,
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phe-notypes of T cells involved in delayed-type
hypersensitivity and in suppression. J. Exp. Med.
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8) 松 橋 直, 成 内 秀 雄, 臼井 美 津 子: 生 体 を利 用 す る免 疫 反 応 。 免 疫 学 実 験 入 門, 219∼223頁 , 学 会 出 版 セ ン タ ー. 1983
9)
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10) 大 久 保 滉: 薬 物 ア レ ル ギ ー の 臨 床 統 計 。 第18回 日 本 医 学 会 総 会 会 誌, 1363∼1367, 1971
11)
HOIGNE,
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and Tetracyclines.
In Meyler's
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12)
KELLER,
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: Miscellaneous antibiotics .
In Meyler's side effects of drugs, Ninth Edition ,
edited by DUKES,
M. N. G., Excerpta Medica pp.
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13) 副 島 林 造, 二 木 芳 人: マ ク ロ ラ イ ド系 薬 剤 お よ び リ ン コ マ イ シ ン 系 薬 剤IV副 作 用 。 臨 床 医7: 95, 1981
