響謡

121

Umschlag aus der Rauhform von OHARA-Ruhrbazillen in die Glattform vermittels Kultivierung in der mit

abgetöteten heterologen Bakterienleibern

versetzten Bouillon (Verfahren

von HABS und SEITZ).

Von

Ohta, Izumi|Fukuda, Massao

(太田, 泉￨福田, 正雄)

Aus dem Bakteriologischen Institut der Nagasaki Medizinischen Fakultät (Leiter: Prof. Dr. T. NAITO und a. o. Prof. Dr. Y. AOKI).

(Eingegangen am 13. Januar 1911.)

Die Frage nach der Rückverwandlung der Rauhform in die Glattform von OHARA-Ruhrbazillen (KRUSE-SONNE Bazillen, E-Ruhrbazillen, Shigella paradysen- teriae var. SONNET) ist von vielen Forschern bearbeitet worden. Wenngleich die Mehrzahl von ihnen sich im Sinne des anscheinenden Kolonieformrückgangs entscheidet, ist doch eine einwandfreie Lösung bezüglich der Antigenität und der Virulenz noch nicht gefunden worden. Wie wäre es klinisch oder epidemio- logisch für uns , bequem und nützlich, wenn es gelänge, alle Eigenschf ten der

R-Kulturen leicht und konstant zu ihren Ausgangsverhältnissen wieder zurück- kehren zu lassen.

Unsere an die Arbeiten von HABS und SEITZ 2) und die nachprüfenden Versuche von S. YASUDA 3) im hiesigen Institut anknüpfenden Untersuchungen brachten einige befriedigende Beiträge, indem wir nach ihnen die Rauh-Stämme

dicht mit sog. Vaccine versetztem Nährboden beimpften.

Bevor wir unsere Resultate erreichten, hat FUKUDA, einer von den Mitarbeitern, schon lange danach gestrebt, diese Frage zu klären. Es ist ihm aber schliesslich nicht möglich gewesen,

die Glattform zu isolieren, indem er:

1) lebende Ruhrbazillen mit der 60°C-30 Min. erhitzten S-förmigen Kultur gemeinsam intraperitoneal auf Mäuse einpflanzte, nach 6 bis 8 Stunden bei gestorbenen Tieren das Herzblut und die Darmkontenta unter Verwendung von Agar- und ENDO-Platten kulturell untersuchte, und

2) S- und R-Kulturen in den das Anti-S-Kaninchenserum oder das normale Kaninchen- serum haltigen Nährböden zusammen beimischte, nach 24 stündiger und weiter nach 4 tägiger Bebrütung auf Agar-Platten verstrich und die dann entwickelten Kolonien beobachtete.

Unsere diesmalige Methodik besteht im folgenden :

1) 48 stündige Kultur von verschiedenen Bakterienarten (Typhus 5, Paratyphus 3, Ruhr 2, Coli, Proteus, Staphylokokken und OHARA-S) wird in Mengenverhältnis von 4 mg: 1 cc in 10 cc Bouillon aufgeschwemmt, bei 60°C-30 Min. lang erhitzt, dann das Absterben genau geprüft, 2) eine geringe Quantität der meist oder vollständig zu R verwandelten OHARA-Bazillen darin ver- 1) Vortrag, gehalten in der 17. Jahresversammlung der Nagasaki Medizinischen Gesell- schaft am 1. Dez. 1940.

2) Z. Hyg., Bd. 116, S. 97, 1935.

3) noch nicht veröffentlicht.

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124  l.̲OHTA und M. FUKUDA : 

der H lfte der entwickelten Kolonien. Das weicht ab von den Ergebnissen  unseier Vorg riger, in welchen die 'Umwandlung erst nach einer Woche, im  allgemeineh noch sp ter fast ･ unabhangig von den Vaccine‑Arten stattfand. 

Beil ufig angegen wird dabei noch eine Erscheinung, n mlich dass die umge‑

wandelteQ Kolonien nach 10 Tagen die S‑Eigenschaften besonders in Hinsicht  des Antigenit tsumschlages etwas schwerer gewinnen (vgl. Tabelle IV). Die  weiteren Versuche mit den bei 100'C‑gekochten Vaccinen ergeben fbr die  Frage prinzipiell die gleichen Ergebnisse wie oben. Es hat also den Anschein,  als ob die Warmewirkung bei der Vaccine‑Bouillon‑Herstellung ftir die Um‑

wandlung keine Bedeutung hat. 

Die in denl Versuch der Tabelle I gewonnenen Glattst mme verhielten  sich kulturell unter einauder identisch u,nd gleichzeitig ebenso wie die Aus‑

gangsstdinm,e NAKASHIMA‑Ane und Ditto‑Imoto (Tabe]le II), dazu entspricht  solches Verhalten det Kultureigenschaften den Erg̲ebnissen unserer Verg nger. 

Es wurde ferner eine Prtifun  der Thermoflockung vorgenommen. Die  NaCl‑L6s.‑Aufschwemmun*"en der 26 Rtickkehr‑St mme wurden 60'C‑30 Min.,  80'C‑30 Min. und 100"C‑2 Std. erhitzt. Nach tibern chtlich m Aufenthalt  in Zimmertemperatur fand sich in zwei Examplaren (Tohoku 681 und 68 )  bei der Erhitzu'ng auf 100'C eine  ‑elbstflockung, a]le tibrigen zeigten dagegen  keine Agglutination (s. Tabelle IV). Es scheint ferner, dass die um ewan‑

delten St mme bei der Senkungsgeschwindigkeit ebenso wie die urspriiin8lichen  Stdinme sich auch stabil verhalten. Wie aus der Tabelle 111 hervorgeht,  konnte eine parallellaufende Senkung von lebender Kultur TSURUMAKI und  NAKASHIMA‑Ane in den Kochsalzlosungen mit verschiedenem Salzgehalt unter  Verwendurig von WEsTERGREEN‑Apparat konstatiert werden. Die Farbenreak‑

tion mit MoLrscH‑ und MILLON'Reagenz hat den Anschein, a]s ob die umge‑

wandelten St mme sich nicht immer dadurch auszeichnen ; der umgewandelte 

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TSURUMAKI  (der umgewandelte) 

TABELLE  ^III. 

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1 Std. 2 Std. 6 Std. 24 Std. 

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4mm  4mm  4mm  5mm 

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TSURUMAKI 

(der R‑variierte)  1 Std. 2 Std. 6 Std. 24 Std. 

Imm  Imm  Imm 

1 mm 

Imm  Imm  Imm 

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NAkAs iMA‑Ane  (der ursprungliche S‑)  1 Std. 2 Std. 6 Std. 24 Std. 

4mm 

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Umschlag aus des Rauhform von OHARA Ruhrbazillen m die Glattform usw  1 25 

Stamm TSURUMAKI verh lt sich negativ mit der MILLON‑Reagenz ebenso wie  der Original NAKASHIMA‑Ane, doch der umgewandelte ODABE und NoDA 

positiv. 

Es dtirfte wohl mehr die Antigenitat in Frage kommen als die kultureli‑

biologischen Eigenschaften. . Gltick]icherweise konnten wir den Stamm Koma‑

gome‑Original ganz ohne Ver nderung seiner Beschaffenheit fortztichten. Auch  war das Antiserum desselben als Stammagglutininl6sung im hiesigen Institut  vorratig, das, bald nach der Uberlassung des Stammes aus Komagome‑Hospital  zu Tokyo an uns von FUKUDA hergestellt wurde. Bekanntlich hat die Litera‑

tur in bezug auf die serologische Einheitlichkeit der OHARA‑Bazillen Ermtrti‑

gendes begracht, sd dass wir glaubten die Ansicht vertreten zu konnen, dass  die Antigenit t der Versuchsst mme reversibel ist, wenn die Agglutination mit  Serum Komagome‑Originai sowohl am Stamm Komagome‑Original, Ditto‑

Reversibel als auch an den tibrigen umgewandelten St mmen zum gleichen  Resultat ftihren konnten. 

In Tabelle IV ist das Verha]ten der Bakterienaufschwemmungen*) ein‑

getragen. Die Erwartungen wurden in den meisten F l!en erfiillt, aber in  einigen entt uscht. Wir halten es fdr berechtigt, die Reaktionen einer Reihe  van umgewandelten Stdinmen (Denken, Komagome, WATANABE, KASIJGA, ODA‑

BE, NoDA, SAITO, Tohoku‑582 u. a.) als wesensgleich zu betrachten, obwohl  dazwischen mehr oder weniger graduelle Verschiedenheiten auftreten. Die  tibrigen St mme zeigten dagegen nur schwa.che Agglutiwotion, besonders die  vergleichend lang in der Vaccine‑Bouillon gehaltenen und gleichzeitig etwas  met,a]lisch gl nzend umgewande]ten St mme. Nennenswert ist dabei einerseits,  dass die hoch reagierenden St mme nach 6 t giger Bebrtitung gewonnen,  und danach auf Agar‑N hrboden 2 oder 3 Mal generalisiert wurden, und  anderseits, dass die metallisch glanzenden nach dem 14. Bebrtitungstag isoliert  wurden. Die Stamme Tohoku‑681 und ‑682, die beide nicht die Agglutina‑

tion sondern die Thermofiockung zeigten, stehen wohl ausser Frage ; es wurden  bei diesen St mmen reversible Leistungen der Vaccine‑Bouillon nicht vollbracht. 

Es ist eine schon bekannte und allt glich zu beobachtende Erscheinung, dass  bei Rauhvarianten ein Verschwinden des eigentlichen Antigens stattfindet. 

Im ganzen ist unser Agg]utinationstersuch mehr orientierender Art und  macht auf Vollst ndigkeit keinen Anspruch, doch konnten wir ,mindestens  festste]len, dass das antigen des Stammes Komagome, reversibel ist, und hatten  den Eindruck, dass die iibrigen deutlich agglutinierenden St mme auch vielleicht  eversibel sind. Beztiglich der schwach reagierenden St mme konnen wir keine  Schltisse ziehen, da in solchen a priori ein selbst ndiges Antigen vorhanden  ist. Jedenfa]Is sind noch mancherlei Fragen auf diesem Gebiet strittig und  ungekl rt. ' Darbber hofft OHTA in absehbarer Zeit auf Grund weiterer Un‑

tersuchungen berichten zu konnen. 

) Bei der Aggiutination‑Ausithrung werden die Aufschwemmungen immer vierartig vor‑

bereitet, n mhch die lebenden, die 60'C‑30 Min. erhitzten, die 80'C‑30 Min. und die loo'C‑2  Std. gekochten. Das bezweckt nichts anderes als die Erzielung einer m6glichst ausi hrlichen  Antigenanalyse. 

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128  I. OHTA und M. FUKUDA: 

wie das der ursprtinglichen. Auch Thermo‑ und Salz‑Ausflockung wird ab‑

gelehnt. I)ie Reaktion mit MorlscH‑Reagenz ist aber inkonstant. 

4) Die Agglutination der Umgewandelten mit dem mit ursprtinglicher S‑

Kolonie hergestellten Serum tritt positiv auf, aber graduelle Verschiedenheiten  nach de,n Stammarten treten dabei zutage. 

5) Die M usepathogenitat der umgewandelten St mme kehrt wieder zu  ihrer Ausgangshohe zurtick. 

6) Es hat im allgemeinen den Anschein, dass die vergleichend frtihzeitig  isolierten und unter stabiler Koloniebeschaffenheit einige Male fortgepflanzten  St mme den ursprtinglichen Eigenschaften am n chsten sich verhalten.