〈原著〉洗浄回収処理血への各種血液保存液添加の効果

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(1)近畿大医誌（MedJKi nkiUni v）第36巻１号. 2 5∼32 2 011. 2 5. 洗浄回収処理血への各種血液保存液添加の効果上原圭司近畿大学医学部麻酔科学教室. 抄. 録. 洗浄回収式自己血輸血装置を用いて洗浄回収処理血を作成し，これに各種の血液保存液を添加して，経時的な変化を赤血球脆弱試験，血清電解質濃度測定，2 , 3 DPG測定，ATP測定，および光学顕微鏡像により評価した．ATP 維持の観点から赤血球若返り液である AI S液の添加が最も効果的であったが，作成の煩雑さや，投与量に伴うイノシンの腎毒性を. 慮すると，解糖系の基質であるグルコースの添加が，より簡. で効率的である可能性が示唆され. た． Ke ywor ds:自己血輸血，洗浄回収式自己血輸血，AI S液，ATP，2 , 3 DPG. 緒. 血球の機能低下が生じる可能性もあるが詳細は明ら. 言. かでない．また，術後に回収血を返血するときの保. 同種血輸血は輸血後症候群，輸血後感染症，移植. 存時間が赤血球機能に及ぼす影響についても知られ. 片対宿主反応といった副作用がある．現行のスクリ. ていない．本研究の目的は，これまで行われている. ーニング検査の限界，未知の感染症ウィルスの存在. 生理食塩水による洗浄式自己血回収処理と保存過程. の可能性を. において生じる赤血球機能の低下を形態学的観察，. えれば，完全に安全な同種血輸血はあ. り得ず，当該患者に補わざるを得ない血液成を与える成. のみ. 輸血を推進すること，そして可能な限. 赤血球脆弱試験，血清電解質濃度，pH，グルコース，. り手術時の輸血において自己血輸血を実践すること. ラクテート，2 , 3DPGおよび ATP濃度の測定によって検討し，さらに各種血液保存液の添加による効. が大切である．. 果を評価することである．. 近年，大量出血の予測される手術症例において，. 対象および方法. 同種血輸血によるこれらの副作用を回避する目的で希釈式自己血輸血法，貯血式自己血輸血法，回収式. 本研究は，近畿大学医学部倫理委員会の承認を得，. 自己血輸血法による自己血輸血が用いられている．. 近畿大学臨床治験規定に基づいて記述によるインフ. その中でも回収式自己血輸血法は，術中の大量出血. ォームドコンセントを得た. 症例や術前貯血のできない緊急手術患者にも対応で. 名から採血した血液を用いて行った．. きるため，開心術や大血管手術，脊椎や股関節手術. ・血液採取. などの比較的大量の出血が予測される手術あるいは. 対象は次の基準を満たした. 康成人ボランティア2 0. 常成人から採取した. 人工膝関節置換術などの手術後に出血が予想される. 30 0mlの血液を用いた．. 手術に有効とされている. １)全身に重篤な影響を及ぼす基礎疾患を有しな. ．. 輸血に用いられる赤血球製剤に必要な要素には，輸血された赤血球が十. い．. な生存期間を維持できるこ. ２)事前検査において，日本赤十字社の4 0 0ml献血. と，赤血球の変形能が保たれていること，赤血球の. 採血基準（1 8 ∼6 9 歳，男女とも体重5 0kg以上，. 酸素運搬能が十. 最高血圧90mmHg以上，Hb12 . 5g/dl以上）を満. に保持されていることが挙げられ. る．回収式自己血輸血法で洗浄式自己血回収装置によって得られる回収血は細菌繁殖などの危険性や赤血球が損傷されやすいことが指摘されており，赤大阪府大阪狭山市大野東3 77 2 （〒5 8 98 5 11 ) 受付平成2 2 年1 0 月2 7 日，受理平成2 2 年1 1 月2 6日. たす．３)複数回の採血を行うときの間隔は，男性４ケ月，女性６ケ月とする．.

(2) 2 6. 上. 原. 被採血者をベッド上に仰臥位で安静とし，血圧，. 圭. 司. 中尾らの文献. 酸素飽和度に異常のないことを確認した後，肘静脈. に従い6 43 l添加した．各種血液保存液の組成を表１に示す．. に2 0G静脈留置針を用いて静脈路を確保し，生理食. ・. 析方法. 塩水5 00mlを静脈投与した．生理食塩水を投与した. 血液試料を全血群（対照群），洗浄回収処理群（未. 後，静脈路から落差脱血によって3 00mlの血液を空の目的で20 0 0 単位のへパリンナトリウムを混和し. 添加群），ブドウ糖液添加群，ACD-A 液添加群，CPD 液添加群，MAP液添加群，AI S液添加群にけた．血液試料は，回収処理後に室温（2 5 ℃）で保存し，. た．. 血液採取直後，６，24 時間後に以下の. ・洗浄回収処理. 赤血球浸透圧抵抗性試験：赤血球の脆弱化を Par -. になった生理食塩水パックに採取し，血液凝固防止. 採血パックから対照群として約1 0mlの血液をス. 析を行った．. ピッツに取りわけ，残りの血液に対して洗浄式回収. par t法による赤血球浸透圧抵抗性試験を用いて評価した．1 3 本の試験管に入れた0 . 1 から1. 2 ％まで. 処理を行った．. 0. 0 5∼0 .1 ％間隔で調整した10 ％リン酸緩衝食塩水. 洗浄式自己血回収処理には，自己血回収装置（New El e c t a，Di de c o社. Mi r andol apar tI t al y）を用い，12 5mlの遠心ボウルを用した．輸液バッグに貯血した血液を術中吸引圧と同程度の15 0. 5mlに対して検体0 . 05mlを加えて遠沈し，その上清を光光度計（Model6 ， 8 0Mi c r oPl at e Reader Mi c r oPl at e Manager 5，2 PC，日本バイオ・ラッドラボラトリーズ株式会社 TokyoJapan）により光学. mmHgの低吸引圧でリザーバー内に吸引貯血し，可変流量モードによって自己血回収装置に充塡された. 密度（OD）54 0nm の吸光度を測定して溶血曲線を描. 生理食塩水および濾過用フィルタによって洗浄回収. pH，K，グルコース，ラクテート濃度測定：血液ガス析装置（ABL80 0FLEX，Radi omet e rMedi cal. 処理を行い，遠心処理により Ht6 0∼70 ％の赤血球浮遊液として輸血パックに貯血した．洗浄回収処理によってヘパリンナトリウムの約9 9 ％が除去されるため，以下の実験に供する血液試料をヘパリンナトリウム加スピッツ（ニプロネオチューブ PET RC 管 4ml用. NI PRO Os akaJ apan）に注した．・血液添加液血液保存液による効果を検討する実験には，ブド. いた．. 社，De を用いて血液試料のカリウムイオン， nmar k）グルコース，ラクテート濃度および pH を測定した． 2, 3-DPG濃度測定：2 , 3-DPG濃度測定には 2 , 3-Di （2 phos phogl ycer at e , 3-DPG）（Roc he Di agnos t i c s GmbH,Mannhe i m, Ger many）を用い，マルチラベルカウンター（Wal l ac1 42 0ARVOs x-1f l uor os c an, Per ki nEl me rLi f eSc i e nc es ,Tokyo,J apan）によって光学密度（OD）3 4 0nm における吸光度を測定し. ウ糖液，aci dc i t r at e de xt r os e-A（ACD-A）液，（CPD）液，manni c i t r at e phos phat e dext r os e t ol -. た．. adeni ne phos phat e（MAP）液，adeni nei nos i ne（AI s ucr os e S）液を用いた．血液保存液は回収処理. ATP 濃度測定： ATP 濃度測定には ATP （ Bi ol umi ne s c e nc eAs s ayKi tHSI IRocheDi agnos -. 直後の血液試料 1mlに対してそれぞれの日本赤十字血液センターの定める規定量である ACD-A 液. t i csGmbH,Mannhei m, Ger many）を用いた．マルチラベルカウンター（Wal l ac 1 4 2 0 ARVOs x-1. 1 5 0l ，CPD液1 4 0l ，MAP液2 30 l ，AI S液は，. f l uor os can,Per ki n El me rLi f eSci e nce s ,Tokyo,. 表. 各種血液保存液の組成. Ci t r at e( w/v%) Sodi um c i t r at e(w/v%) Gl uc os e( w/ v%) Dgl uc os emonohydr at e( w/ v%) Sodi um di hydr oge nphos phat e(w/ v%) Sodi um Chl or i de( w/ v%) Manni t ol( w/ v%) Ade ni ne( w/v%) I nos i ne( w/v%) Suc r os e( w/ v%). ACDA. CPDA. MAP. AI S. 0. 80 2 . 20 2. 20. 0 . 32 2 . 63 2 . 32. 0 . 02 0 .1 5 0 .7 2. 0 .2 9 0 .2 7. 0. 25. 0 . 09 0 .4 9 1 . 45 0 . 01. 0 .0 6 0 .1 7 0 .1 0 1 .0 7 6 .1 6. ACDA:aci dc i t r at edext r os e-A me di um,CPDA:c i t r at ephos phat edext r os e adeni neme di um,MAP:manni t ol ade ni nephos phat eme di um,AI S:adeni nei nos i ne s uc r os eme di um..

(3) 洗浄回収処理血の評価. 62nm で測定間隔 J apan）を用いて光学密度（OD）5 0 . 1s e cにおけるルシフェノール生物発光を測定した．. 27. １）． ② pH，K，グルコース，ラクテート濃度測定回収処理群ではグルコース濃度，およびラクテー. 赤血球の形態変化：血液試料を各々10 lずつ（Bur Hae mac yt ome t er ker Tur k,EKDS,Tokyo, J apan）に滴下し，デジカルカメラ付顕微鏡（DP7 1 , 00 ，I 00 で Ol ympus ,J apan）を用いて倍率4 SO感度4. ト濃度は低値のまま不変であり，カリウムイオン濃度の著増が認められた．pH は全血群に比べて直後より高値を示しており，経時的に低下して2 4 時間値で正常範囲になった（表２）．. 撮影し，各群の回収洗浄処理による赤血球形態変化. ③2 , 3 DPG測定，ATP測定. を観察した．赤血球形態を正常像である di s c oc yt e から変形していく過程の順に e ，s chi noc yt e pher -. 回収処理群では 2, 3-DPG値および ATP値は全血群に比して直後より低値を示しており，経時的に. 0 倍率における１視野の血球数を oc yt eに類し，40 ランダムに４箇所でカウントし，その平値を％表. 有意に低下した（表３）．. 示した．. ④光学顕微鏡撮像回収処理群では６時間値以降で有意に Echi noc yt eおよび Sphe r oc yt eのカウント数が増加した（図２）．. ・統計析すべてのデータは平. 値±標準偏差で示した．各. 群の比較については Kr us kal Wal l i sTe s tを行った. 回収処理群と各種血液保存液添加群の比較. 後，DunnsMul t i pl eCompar i s onTe s tを行った．. ① pH，K，グルコース，ラクテート濃度測定. 群内の経時的変化については繰り返しのある一元配置. 各種血液保存液添加群では回収処理群に比してカ. 散析を行った後，Tuke ysMul t i pl eCompar i s on Te s tを行った．析には Pr i s m 5 Wi ndows 4 .0 2 （Gr Ve r . aphPadSof t war eI nc . , USA）を用い，. リウムイオン濃度の上昇は抑制された．また，血液. 有意水準を５％とした．. 下し，ラクテート濃度が上昇した．pH は６時間値ま. 実験結果全血群と回収処理群の比較 ①赤血球浸透圧抵抗性試験回収処理群では溶血曲線は全血群と比較して右方に偏移している傾向はあるものの，有意差は認められず，各測定時間において正常範囲内にあった（図. 図. 保存液に含まれるグルコースによりグルコース濃度は添加量に応じてそれぞれ上昇したが，経時的に低ではどの群も pH 7 . 0 を下回ることはなく，2 4 時間値で ACDA 液添加群および CPD液添加群，AI S液添加群で pH 6 . 8∼7 . 0 と pH 7. 0 を下回った（表２）． ②2 測定，測定 , 3DPG ATP 各種血液保存液添加群では 2 , 3-DPG値や ATP 値は回収処理群に比して経時的な低下が抑制された（表３）．. Par par t法による回収処理群とブドウ糖液添加群の溶血曲線（全血群）と Sal （回収処理群）における溶血曲線，および Re Re f er e nc ebl ood vage dbl ood f e r e nc e （ブドウ糖液添加群）における溶血曲線． bl ood（全血群）と Sal vage dbl ood（Gl u＋）黒色が全血群を，青色が回収処理群を，赤色がブドウ糖液添加群を示している．縦軸に溶血度（％）を横軸に NaCl濃度（％）を示している．各濃度における溶血度をプロットしており，直後および６時間後の正常な溶血曲線の範囲を緑色の波線で，2 4時間後の正常な溶血曲線の範囲を赤色の波線で示す． (n＝8，mean±SD).

(4) 2 8. 表. 上. 原. 圭. 司. 各種血液保存液の添加による pH，K，ブドウ糖，乳酸値の経時的変化 pr es er vat i onmedi um. pH Ref e r e nc ebl ood Sal vagedbl ood ACDA CPDA MAP AI S ) K( mEq/l Re f e r e ncebl ood Sal vagedbl ood ACDA CPDA MAP AI S ) Gl uc os e( mg/dl Ref e r e nc ebl ood Sal vagedbl ood ACDA CPDA MAP AI S ) Lact at e( mg/dl Re f e r e ncebl ood Sal vagedbl ood ACDA CPDA MAP AI S. Bas e l i ne. 6h. 2 4h. 7.3 8 3 ±0 . 0 2 5 7 . 6 2 2 ±0 . 0 90 7 . 2 5 0 ±0 . 0 44 7 . 26 2 ±0 . 0 8 1 7 . 5 0 1 ±0 . 0 90 7 . 4 21 ±0 . 0 8 3. 7 . 3 6 0 ±0 . 0 3 8 7 . 5 6 0 ±0 . 0 8 3 7 . 1 4 7 ±0 . 0 4 2# 7 . 1 9 1 ±0 . 0 6 6 7 . 3 9 4 ±0 . 0 7 2 7 . 3 2 8 ±0 . 0 8 0. 7 . 2 1 1 ±0 . 0 3 0# 7 . 3 5 9 ±0 . 1 3 6# 6 . 8 5 2 ±0 . 0 3 3# 6 . 8 9 4 ±0 . 0 4 5# 7 . 0 5 6 ±0 . 0 3 9# 6 . 8 8 7 ±0 . 0 7 1#. 3. 9 2 ±0 . 4 0 2 . 1 8 ±0 . 8 4 1 . 8 3 ±0 . 4 6 1 . 70 ±0 .6 9 1 . 7 1 ±0 . 6 1 1 . 3 5±0 . 5 0. 3 . 5 7 ±0 . 3 4 4 . 2 5 ±0 . 9 5 2 . 1 6 ±0 . 4 9 2 . 4 0 ±0 . 6 8 # 2 . 7 7 ±0 . 7 0 3 . 4 7 ±0 . 8 9. # 3 . 9 1 ±0 . 3 9 1 3 . 1 ±2 . 5 8# 4 . 3 3 ±0 . 7 1# 4 . 4 2 ±0 . 8 2# 3 . 5 5 ±0 . 6 4# 5 . 6 2 ±0 . 6 7#. 9 3 .7 5 ±1 2 . 7 5 2 . 3 7 ±0 . 9 1 3 4 5 . 7 5±1 2 .6 0 3 4 6. 5 0 ±1 9 . 7 9 1 3 8 . 6 3±1 0 .7 7 9 2 . 62 ±5 . 9 2. 6 6 . 7 5 ±1 4 . 3 6 1 . 6 2 ±0 . 7 4 3 1 3 . 2 5 ±5 . 2 5 3 1 4 . 8 8 ±1 2 . 5 9 1 0 3 . 0 0 ±1 0 . 1 5 6 6 . 2 5 ±9 . 3 0. 1 2 . 7 5 ±7 . 4 4# 1 . 0 0 ±0 . 5 7 2 2 6 . 1 3 ±9 . 2 1# 2 2 2 . 1 3 ±1 7 . 8 7# 1 6 . 0 0 ±1 0 . 1 2# 2 9 . 2 5 ±1 8 . 3 7#. 2. 1 3 ±0 . 4 3 1 . 8 2 ±0 . 5 1 1 . 7 8 ±0 . 2 5 1 . 65 ±0 .4 9 1 . 5 8 ±0 . 3 9 1 . 3 5±0 . 5 0. 4 . 88 ±0 .8 5 3 . 5 6 ±0 . 9 3 4 . 4 7 5 ±0 . 4 5 4 . 8 7 ±1 . 3 0 4 . 9 1 ±1 . 1 0 3 . 4 7 ±0 . 8 9. 1 1 . 0 0 ±0 . 7 1# 3 . 8 5 ±0 . 9 4 1 4 . 9 7 ±1 . 1 3# 1 3 . 8 8 ±2 . 1 9# 1 4 . 2 8 ±2 . 0 1# 5 . 6 2 ±0 . 6 7#. Bas e l i ne:i mme di at el yaf t e rbl oods al vagepr oc e s s ,6 h:6 houraf t e rbl oods al vagepr oc e s s ,2 4 h:2 4 houraf t e r bl ood s al vage pr oces s ,ACDA:ac i dc i t r at e de xt r os e A me di um,CPDA:ci t r at e phos phat e de xt r os e ade ni ne me di um,MAP:manni t ol adeni nephos phat eme di um,AI S:ade ni ne i nos i ne s uc r os eme di um.( n＝8 ,me an±SD) . 05ve P＜0 r s usBas el i ne # . 05ve P＜0 r s us6h . 05ve P＜0 r s usSal vagedbl ood . 05ve P＜0 r s usGl uc os e . 05ve P＜0 r s usAI S. ③光学顕微鏡撮像回収処理群と同様に各種血液保存液添加群におい. ③2 , 3 DPG測定，ATP測定. ても，経時的に Echi noc yt eや Spher ocyt eが増加し. 2 , 3DPG値，ATP値ともに，全血群ほどではないものの，他の血液保存液添加群と同様に回収処理群. たが，回収処理群に比してこれらの増加は抑制され. と比較して経時的に高値を維持できた（図４）．. た（図２）．. ④光学顕微鏡撮像. 回収処理群とブドウ糖液添加群の比較 ①赤血球浸透圧抵抗性試験回収処理群とブドウ糖液添加群を比較したところ経時的に有意な差は認められなかった（図１）． ② pH，K，グルコース，ラクテート濃度測定カリウムイオン濃度は全血群ほどではないものの，回収処理群と比較して有意に上昇を抑えること. 他の血液保存液添加群と同様に，経時的な Echi noc yt eや Spher oc yt eの増加を抑制できた（図２）．察解糖系の代謝産物であるラクテートは pH を低下. ができた（図３）．その他のグルコース濃度の低下や. させるが，pH に依存性が高い糖代謝酵素は pH 7 .0 以下では著しく抑制されるため，保存により pH が. ラクテート濃度の上昇は全血群と同程度であった．. 低下すると赤血球の障害が進む．しかし，一方で許.

(5) 洗浄回収処理血の評価. 表. 29. 各種血液保存液の添加による ATP，2, 3 DPG値の経時的変化 pr es er vat i onmedi um. / 0) ATP (c ount HCT×1 Ref e r e nc ebl ood Sal vagedbl ood ACDA CPD MAP AI S -DPG（ mol / 2 , 3 L) Re f e r encebl ood Sal vagedbl ood ACDA CPDA MAP AI S. Bas e l i ne. 6h. 2 4h. 227 ±5 5 1 0 2 ±9 1 1 2 ±5 1 1 6±1 2 1 5 7 ±2 0 2 1 5 ±2 2. 1 1 8 ±2 3 4 5 ±5 5 5 ±2 5 6 ±1 7 7 2 ±1 7 1 1 3 ±1 5. 8 7 ±1 5 2 7 ±6# 4 2 ±2# 4 1 ±1 1 4 2 ±1 3# 8 0 ±1 9#. 2 . 3 9 ±0 . 3 8 2 . 3 9 ±0 . 3 8 2 . 4 5 ±0 . 3 5 2 . 46 ±0 .2 2 2 . 5 5 ±0 . 2 6 2 . 6 0±0 . 5 8. 2 . 19 ±0 .3 9 1 . 8 1 ±0 . 3 9 1 . 9 4 ±0 . 1 4 2 . 2 7 ±0 . 2 0 2 . 1 9 ±0 . 2 5 2 . 4 1 ±0 . 3 6. 1 . 3 4 ±0 . 6 1# 0 . 3 7 ±0 . 2 4# 1 . 2 8 ±0 . 1 5# 1 . 3 8 ±0 . 2 9# 1 . 5 4 ±0 . 3 3# 1 . 8 9 ±0 . 3 2. Bas e l i ne:i mme di at el yaf t e rbl oods al vagepr oc e s s ,6 h:6 houraf t e rbl oods al vagepr oc e s s ,2 4 h:2 4 houraf t e r bl ood s al vage pr oces s ,ACDA:ac i dc i t r at e de xt r os e A me di um,CPDA:ci t r at e phos phat e de xt r os e ade ni ne me di um,MAP:manni t ol adeni nephos phat eme di um,AI S:ade ni ne i nos i ne s uc r os eme di um.( n＝1 2 ,me an±SD) 0 5ver P＜0. s usBas e l i ne # . 05ve P＜0 r s us6h . 05ve P＜0 r s usSal vagedbl ood . 05ve P＜0 r s usGl uc os e . 05ve P＜0 r s usAI S. 図. 容できる pH の範囲では低い pH の方が代謝が進ま. 各種血液保存液の添加による赤血球形態の経時的変化上段より下に直後，６時間後，2 4 時間後の赤血球形態の変化を％表示している．左から順に Di scocyte，，Sphe Echi noc yt e r ocyt eの各群における割合を示している． ( ，me n＝7 an±SD) .0 5ver P＜0 s usc ont r ol # . 0 5ve P＜0 r s uss al vage d . 0 5ve P＜0 r s usGl uc os e . 0 5ve P＜0 r s usAI S. ず，エネルギーが枯渇しないことも知られている．. ため，ATPが早期に枯渇するとえられている．しかし、今回の実験では回収処理後の血液は６時間. なぜならば高い pH ではヘキソキナーゼ（グルコキ. 値でも pH 7 . 0以下になることはなかった．また，血. ナーゼ）の活性が高まり，この反応で ATPが消費さ. 液保存液を添加した際の pH も7 .6 を超えることは. れるからである．逆に pH 7. 9 を超えるような高す. なかった．つまり，回収処理血に血液保存液を添加. ぎる pH では解糖系下流の ATP合成に入る前のグ. することで伴う pH の上昇が赤血球内代謝酵素に与. リセルアルデヒド3 リン酸脱水素酵素が抑制される. える影響はほとんどないうえに，返血に至るまでの.

(6) 3 0. 上. 原. 圭. 司. 図. 図. ブドウ糖液添加による K，pH，ブドウ糖，乳酸値の経時的変化上段左から右に K，pH，下段左から右にブドウ糖，乳酸値の直後，６時間後，2 4時間後の値をプロットした．黒色が Re f er enc ebl ood （全血群）を，青色が Sal vage d bl ood（回収処理群）を，赤色が（ブドウ糖液添加群）を示 Gl ucos e している． . 05ve P＜0 r s usBas el i ne(0 h) # . 0 5ve P＜0 r s us6 h . 0 5ve P＜0 r s usc ont r ol . 0 5ve P＜0 r s uss al vage d. ブドウ糖液添加による K，pH，ブドウ糖，乳酸値の経時的変化左から右に ATP，2, 4 時間後の値をプロットした． 3-DPG値の直後，６時間後，2 黒色が Ref （全血群）を，青色が Sal （回収処理群）を，赤色が Gl e r e ncebl ood vage dbl ood uc os e （ブドウ糖液添加群）を示している． 05ver P＜0. s usBas el i ne(0-h) # 5ver P＜0.0 s us6 h 5ver P＜0.0 s usc ont r ol 5ver P＜0.0 s uss al vage d. 過程で，解糖系の代謝産物であるラクテートによる. から長期の血液保存に対して外部環境が酸性の方が. pH の低下が，ATPの枯渇，しいては赤血球に与える影響は小さいとえられた．. 良いのかアルカリ性の方が良いのかは判断が難し. 経時的に見ると，ブドウ糖液添加群，MAP液添加. 群でより赤血球の Echi noc yt e化が抑制されている. 群および AI S液添加群で直後から６時間後までの. ので，pH の低い方が長期保存には適している可能性を否定できない．回収処理群においては，基質と. -DPGが他の群より有意に維持されており，この 2 , 3 理由は 2, 3-DPGを脱リン酸化して 3-PGに変えるフォスファターゼが低 pH で活性は高く，pH 7 .2 以上では活性が低いことによると. えられる．ブド. い．しかし，光学顕微鏡撮像では ATPが維持された. なるグルコースが存在しないため，解糖系が進まず， ATP産生が困難となり，赤血球形態が変化して浸透圧抵抗性も低下する．Par par t法では有意な浸透. ウ糖液添加群，MAP液添加群および AI S液添加群で直後の pH 値を比較すると，それぞれ，pH 7 .4 以. 圧抵抗性は認めなかったものの，赤血球形態を光学. 上であり，さらに６時間値でもそれぞれ pH 7. 3 以上. oc yt eの増加を認めることから，微小な赤血球形態の変化は確実に来していることが確認できた．. と，６時間値までを比較すると pH 7 .2 以上に維持されており，フォスファターゼ活性が抑制されている. 顕微鏡像で確認すると有意な Ec hi noc yt eや Sphe r -. ことで 2 , 3-DPG値が維持される一因になっている. ATP濃度は pH，アデニン，リン酸塩の濃度に大きく左右される．赤血球内はヌクレオチドの代. と. えられる．経時的に解糖系が進むことでラクテ. 謝が盛んであり，アデニンを加えると ATPの合成. ート産生が促進され，pH 値が低下し，フォスファターゼ活性は活発になり，2 -PGに解さ , 3 DPGは 3. が促進され，赤血球膜は生理的な形態を保持し，赤. れ，2 , 3-DPG値の低下を招くというサイクルになる．つまり，高い pH で維持することは 2 , 3DPGを維持する観点では良いが，ATPはヘキソキナーゼの活性が高いと消費されてしまう．このような観点. 血球の生存率を高く維持できる．ATP自体は赤血球膜を通過しないのでこれを直接加えることには意味がない．AI S液はまさにこれら赤血球内のヌクレオシド合成を促す保存液であると言える．AI S液はアデニン，イノシン，リン酸ナトリウムを含むもの.

(7) 洗浄回収処理血の評価. 31. であり，198 7 年に中尾らが赤血球内のヌクレオシド. することから，カリウムイオン濃度に与える影響は. 回路における ATP産生の基質としてアデニンやイ. 少ない．また，本来，血液製剤にグルコースを添加. ノシンを添加した AI 0 2 S液を開発した．さらには20. すると浸透圧差による溶血が懸念されているが，グ. 年に岡山県赤十字血液センターの宮原らが Rh（−）. ルコース濃度100mg/ ∼5 00mg/ dl dlの範囲で溶血. の凍結血液を解凍する際に血液検体に AI S液（赤血. 試験を行ったところ，今回のブドウ糖液添加量では. 球若返り液）を添加することで赤血球の 2 , 3DPGや. 有意な溶血現象を来すことはなかった．. ATPの維持に成功した．今回の結果でも AI S液添加群において他の群より有意な ATP低下の抑制. 展が回収処理後の赤血球のエネルギー産生に大きく. これらの結果より，グルコースによる解糖系の進. を認めており，ATP産生におけるヌクレオシド代謝の重要性が再認識された．添加された血液保存液. 寄与していることが. の中でも AI 4 時 S液添加群は，どの群と比較しても2. るため，本来ならば過度の pH の低下を来すはずで. 間後の ATP，2 , 3DPGの値が高く，赤血球形態も維. あるが，本実験では2 4 時間以内であればほとんど影. 持されていた．しかし，AI S液にはイノシンが含まれており，大量のイノシンの投与は腎障害を引き起. 響を受けないことが. こすことが報告されている．治験によるとマウスに. 存液添加群と比較して. かった．赤血球は長時間の室. 温保存で解糖系が進展し，ラクテート産生が進行す. かった．また，グルコース添. 加群において ATP，2 , 3-DPGの低下が他の血液保色がないこと，かつ，６時. 対して静注3 0 00mg以上の投与量で急性腎障害の症. 間後および2 4 時間後の Di s cocyt eの維持が他の血液. 状を呈しており，今回，我々が. 添加群と. 用したイノシンの. 色なく，むしろ2 4時間値では Di s c ocyt e. 添加量で，仮に10 0 0mlの自己血が回収された場合，そこに添加されるイノシンは約6 8 8 0mgとなる．こ. の維持に良好な傾向であることから，煩雑な各種血. れは成人に対する通常投与量（１日1 00mg∼4 00mg. 加が最も効率的であると. 液保存液の添加よりも，より簡. 静脈内投与）の1 8∼7 0倍となり，イノシンの毒性が. 謝. 影響する可能性を否定できず，保存液として今後さ回収処理血に添加する保存液を. えられた．辞. 本稿を終えるにあたり，ご指導，ご. らに研究が必要である．えた場合，解糖. 大学医学部麻酔科学教室. なグルコースの添. 閲を賜わりました近畿. 中尾慎一教授に深甚な謝意を捧げ. ます．また、終始直接ご指導賜りました梶川竜治講師，ご指導，. 系の基質であるグルコースが非常に重要であること. ご協力を賜りました近畿大学医学部生理学教室. が. 授，岡田清孝講師，自己血回収処理装置の運用にご協力を賜り. かった．そこでブドウ糖液のみを血液保存液と. 尾理教. して回収処理血に添加してみた．今回，我々が作成. ました近畿大学医学部附属病院臨床工学部. したブドウ糖液添加群は回収処理群にグルコース濃. 生理機能検査等にご協力を賜りました近畿大学医学部附属病. 度を1 00mg/dlとなるようにブドウ糖液を添加，調整したものであり，その他の電解質や 2 , 3-DPG，. 院臨床検査部. 菅真生子先生，. 増田詩織先生に深くお礼申しあげます．. 本文の一部は，日本麻酔科学会第57 回学術集会（2 010 年６月，福岡市）で発表した．. ATPの調整はされていない．これを全血群とグルコース濃度の低下率で比較すると，直後から2 4 時間. 文. 献. までのグルコース濃度低下率の経時的変化は全血群. 1.Tas akiT,Oht o H,Has hi mot o C,AbeR,Sai t oh A,. 3 . 37 5mg/ . 0 62mg/h hに対してブドウ糖液添加群4. ) Re Ki kuc hiS (19 92 combi nanthuman e r yt hr opoi et i n. と有意差を認めた．つまり，回収処理群は全血群に比較してエネルギー効率が悪いことになる．これは蛋白質や脂質，カルシウムイオンなど赤血球の膜形態の維持に必要な要素が存在しないことや. ，回. 収処理血が単なる赤血球浮遊液であることから，必要なエネルギー産生に全血群より負担がかかったことが. えられる．このことは MAP液添加群や AI S. 液添加群のように赤血球内のヌクレオシド回路に対. f oraut ol ogousbl ood t r ans f us i on:e f f ec t son per i oper at i ve r e dbl oodce l land s e r um e r yt hr opoi et i n pr oduc t i on.Lanc et3 39:773775 2.冨士武. ，加藤泰司，宮本隆司，恵島之彦，小泉寿章，三. 岡智規，三橋. 浩，増原. 作，廣田茂明（1 993 ）人工膝関節. 全置換術における自己血輸血．臨整外28：1 001 -10 07 3.冨士武. ，竹本勝一，白崎信己，山下和夫，中井. 毅，濱. 田秀樹（1 990 ）脊椎外科手術における回収式自己血輸血．臨整外25 ：1232 -12 37 4.冨士武（20 00）整形外科領域の自己血輸血-貯血式，希. してエネルギー供給が存在する場合に，エネルギー. 釈式，回収式自己血輸血の組み合わせ．Pr 0：23 4 ogMed2. 産生の手段として解糖系のみに依存せざるをえない. 23 7. 状況よりも有意にグルコース濃度の低下率を抑制していることからも証明されている．電解質測定で認められる数値の差は添加液の組成や添加量によるところが大きい．ブドウ糖液添加群は浸透圧のみ変化. 5.長谷川伸之，加藤盛人，三澤吉雄，上沢. 修，小西宏明，. 大木伸一，布施勝生（199 9）心臓大血管手術における術中回収血の細菌混入．自己血輸血12 ：28-3 5 6.福井. 明（199 7）回収式自己血輸血の臨床. 用限界ならび.

(8) 3 2. 上. 原. にその拡大．日本臨床55：240 6-2 41 0 7.『採血及び供血あっせん業取締法施行規則』1 952 年厚生省令22，1 99 9年４月１日改定から改定された『安全な血液の安定供給の確保等に関する法律』200 2年７月制定，20 03年７月施行に準じた日本赤十字社の規定する献血基準. 圭. 司 t her edbl oodcel l .Bul lScr i ppsMet abolCl i n2:1 13.Mazor D,Dvi l ans ky A,Me ye r s t ei nN ( 199 4) Pr ol ongeds t or ageofr ed cel l s:t hee f f ec tofpH,adeni ne -26 andphos phat e .VoxSang66:264 9 14.HogmanCF,Er )Hal i ks s onL,GongJ(1 993 f s t r engt h. 8.NakaoM,NakaoT,NakayamaT,NagaiF,Doge n. c i t r at eCPD and new addi t i ves ol ut i onsf ori mpr oved. M( 198 1)Fur t heri nve s t i gat i onofATPmet abol i s m and. bl oodpr es er vat i on.I .St udi e sofs i xexper i ment als ol u-5 t i ons .Tr ans f usMed3:43 0. r edc el lme mbr anei nt egr i t y.Ac t aBi olMe dGe r m 40: 10 0310 08 9.Sas akawa S,Nakano H,Shi ba M ( 198 2) Suc r os e ef f ect sonpr es e r ve dr e dcel l s:Meas ur ement sofe r yt hr ocyt e me mbr ane r es i s t ance by c ont i nuous meas ur ement sofce l lvol umechangesandcoi lpl anetc e nt r i f uge -42 met hod.JpnJCl i nChe m 11s uppl1:3 6. 15.佐竹正博：『抗凝固薬』血液製剤の種類と製法・保存法．輸血学改訂第３版，遠山. 博，柴田洋一，前田平生，大戸. 斉．東京：中外医学社：PP6 4 16.宮原正行，大熊重則，直木恭子，山村. 一，内藤俊二，佐. 藤泰司，土岐博信（20 02 ）赤血球膜の脆弱な Rh（nul ）血 l. 1 0.Par par tAK,Lor enzPB,Par par tER,Gr e ggJ R,Chas e. 液の冷凍保存法．Tr 5472 ans f us i onMedc i ne48：46 17.Cooper RA:Li pi ds of human r ed ce l l me mbr ane. AM ( 194 7):Theos mot i cr es i s t anceofhumanr e dc el l s . JCl i nI nves t26:63 6-6 40. ( 19 70):Nor malcompos i t i onandvar i abi l i t yi ndi s e as e . I n TheRedBl oodCel lMembr ane (We edRI ,Jaf f eER,. 1 1.佐竹正博：『抗凝固薬』血液製剤の種類と製法・保存法．輸血学改訂第３版，遠山. 博，柴田洋一，前田平生，大戸. 斉．東京：中外医学社：PP66 1 2.Bar t l et tGR,Mar l ow AA ( 195 1):Enz ymes ys t emsi n. ) -7 Mi es che rPA,e ds ,Gr uneandSt r t t on,New Yor k,48 4 18.VanDeene nLLM,deGi e rJ( 19 74)Li pi dsoft her ed c el lme mbr ane. I n TheRed Bl ood Ce l l,(Sur genor -21 DM,ed) ,VolI ,Ac ademi cPr es s ,New Yor k,147 1.

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