再 現 性 が 高 い 口 腔 カ ン ジ ダ 症 マ ウ ス モ デ ル
奥 羽 大 学 大 学 院 歯 学 研 究 科 口 腔 感 染 症 学 専 攻
菊 池 直 宏
(指 導 教 員:清 浦 有 祐)
Highly Reproducible Mouse Model of oral Candidiasis
Department of Oral Infectious Diseases,
Ohu University, Graduate School of Dentistry
Naohiro KIKUCHI
(Director Yusuke KIYOURA)
Abstract
Many attempts have been made to reproduce lesions
observed in human oral candidiasis in experimental animals.
The present study aimed to determine reproducible
experimental conditions which would elicit oral candidiasis
in mice. To evaluate oral candidiasis, we measured Candida
albiCans (C. albicans) counts on tongues and the production
of proinflammatory cytokines strongly associated with
inflammation resulting from infection.
ICR mice were subcutaneously injected with O.2 mg of
prednisolone, and provided with drinking water containing 4
mg/ml tetracycline. Chlorpromazine(0.1 mg)was injected
intramuscularly 24 hours later. Twenty minutes later, C.
albicans was inoculated onto the tongues of mice.
By three days after infection, a substantial amount of C.
albicans was detected on mouse tongue tissue, with multiple
white patches observed on the tongue surface. The tongue
tissue of infected mice expressed significantly higher levels
of the proinflammatory cytokines MIP‑1α and IL‑1α
compared to non‑infected mice. In contrast, MCP‑1 and
TNF‑α were not detected. Moreover, compared to
non‑infected mice, there was no significant increase in
IL‑17 production.
MIP‑1α is a chemokine that plays an important role in the
acute inflammation resulting from C. albicans infection.
Thus, excessive production of MIP‑lα can potentially
damage host tissue, and IL‑1α strongly induces an
inflammatory response.Accordingly, these two cytokines are
thought to be highly involved in the development of
inflammation in tongue tissue. We did not observe increased
production ofIL‑17, which plays the most important role in
preventing C. albicans infection, in infected mice. This is
likely one of the reasons that, even three days after
infection, there was significant proliferation of C. albicans
コ
in tongue tissue.
Based on our experimental conditions, we easily
reproduced oral candidiasis in mice, as well as the
associated increase in proinfiammatory cytokines. This
mouse model will likely be useful for elucidating the
mechanisms of oral candidiasis development, as well as for
the development of new therapies against this disease.
抄 録
口 腔 カ ン ジ ダ 症 の 研 究 で は,実 験 動 物 を 用 い て ヒ ト の 口 腔 カ ン ジ ダ 症 に 類 似 し た 病 変 を 起 こ さ せ る 試 み が 行 わ れ て い る 。 本 研 究 で は,マ ウ ス に 口 腔 カ ン ジ ダ 症 を 起 こ さ せ る 実 験 条 件 の 設 定 に 取 り 組 み,再 現 性 の あ る 条 件 を 確 立 す る こ と を 試 み た 。 す な わ ち,Candida albicans(C.
albicans)を 接 種 し た マ ウ ス の 舌 に 定 着 し た 菌 数 を 評 価 し た 。 さ ら に,炎 症 の 発 現 に 強 く 関 与 す る サ イ ト カ イ ン の 産 生 も 検 討 し た 。
ICRマ ウ ス に0.2mgの プ レ ド ニ ゾ ロ ン を 皮 下 注 射 し, 飲 料 水 は4mg/mlの テ ト ラ サ イ ク リ ン を 含 有 し た 水 道 水 と し た 。 そ し て,24時 間 後 に0.lmgの ク ロ ル プ ロ マ ジ ン を 筋 肉 注 射 し た 。 そ れ か ら20分 後,マ ウ ス の 舌 にC.albicans
を 接 種 し た 。
感 染3日 後 に は,マ ウ ス の 舌 組 織 中 か ら 多 数 の C.albicansが 検 出 さ れ,舌 表 面 にwhite patchが 生 じ た 。 ま た,感 染 マ ウ ス の 舌 組 織 で は 炎 症 性 サ イ ト カ イ ン の MIP‑1α や IL‑1α が,非 感 染 マ ウ ス に 比 較 し て 有 意 に 高 く 産 生 さ れ た 。 一 方,MCP‑1とTNF‑α の 産 生 は み ら れ な か っ た 。 さ ら にIL‑17は 非 感 染 マ ウ ス に 比 較 し て,有 意 な 産 生 亢 進 が 認 め ら れ な か っ た 。
MIP‑1α はC.albicansの 感 染 に 対 し て 起 こ る 急 性 炎 症 で 重 要 な 役 割 を 担 う ケ モ カ イ ン で あ る 。 そ の た め, 過 剰 な MIP‑1α の 産 生 は 宿 主 に 傷 害 を も た ら す 可 能 性 が あ る 。 IL‑1α も 炎 症 反 応 を 強 く 誘 導 す る 。 し た が っ て,こ の2つ
の サ イ ト カ イ ン が 舌 組 織 の 炎 症 形 成 に 大 き く 関 与 し て い る と 考 え ら れ る 。 し か し,C.albicansの 感 染 防 御 に 最 も 重 要 な 役 割 を 果 た す サ イ ト カ イ ン で あ るIL‑17の 産 生 亢 進 が 感 染 マ ウ ス で 認 め ら れ な か っ た 。 こ の こ と が 感 染 後3日 経
過 し て も 多 数 のC.albicansが 舌 組 織 中 で 増 殖 し て い る 理 由 と 考 え ら れ る 。 今 回 の 実 験 方 法 を 用 い る こ と で マ ウ ス の 口 腔 カ ン ジ ダ 症 が 容 易 に 再 現 さ れ,炎 症 性 サ イ ト カ イ ン の 特 異 的 な 産 生 が 認 め ら れ た 。 口 腔 カ ン ジ ダ 症 の 起 こ る メ カ ニ ズ ム の 解 明 や 新 規 の 治 療 法 の 開 発 に,こ の マ ウ ス モ デ ル は 有 用 で あ る と 考 え ら れ る 。
緒 言
ヒ ト ロ 腔 内 に は,様 々 な 微 生 物 が 常 在 し て 口 腔 微 生 物 層 を 形 成 し て い る 。 そ の 中 に は 真 菌 で あ るCandida
albicans(C.albicans)も 含 ま れ る 1,2)。
通 常,そ れ ら の 微 生 物 が 病 原 性 を 発 揮 し て 感 染 症 を 生 ず る こ と は な い 。 し か し,高 齢 者,免 疫 不 全 患 者,担 癌 患 者,重 度 の 糖 尿 病 患 者 の よ う な 易 感 染 性 宿 主 で は,日 和 見 感 染 症 の 原 因 と な る こ と が 多 い 1,3〜6)。
特 に 口 腔 常 在 真 菌 の 代 表 で あ るC.albicansが 起 こ す 口 腔 カ ン ジ ダ 症 は,高 齢 者 で 多 く 認 め ら れ る 。 超 高 齢 社 会 で あ る 我 が 国 で は,今 後,こ の 疾 患 が さ ら に 増 加 す る こ と が 予 想 さ れ る 1,7)。
口 腔 カ ン ジ ダ 症 の 研 究 で は,実 験 動 物 を 用 い て ヒ ト の 口 腔 カ ン ジ ダ 症 に 類 似 し た 病 変 を 起 こ さ せ る 試 み が 行 わ れ て い る 。 使 用 さ れ る 動 物 と し て は,類 人 猿,ウ サ ギ,ラ
ッ ト,マ ウ ス 等 が あ る 1,8〜13)。 ヒ ト に 近 い 類 人 猿 を 使 用 す る こ と は,ヒ ト ロ 腔 カ ン ジ ダ 症 の モ デ ル と し て は 最 も 理 想 的 と 考 え ら れ る 11)。 し か し,実 際 の 実 験 で は 多 数 の 個 体 が 必 要 に な る こ と に 伴 う 経 済 的 な 問 題,あ る い は 宿 主 の 遺 伝 的 な 解 析 の 容 易 さ な ど を 総 合 的 に 考 え る と マ ウ ス が 最 も 適 し た 実 験 動 物 と な る 1,10,11)。
申 請 者 の 属 す る 専 攻 科 に お い て も マ ウ ス を 用 い た 実 験 的 口 腔 カ ン ジ ダ 症 の 研 究 を 進 め て き た が,安 定 的 な 再 現 性 の あ る 実 験 結 果 を 得 る こ と は 困 難 な こ と が 多 い 14,15)。
ま た,今 ま で に 報 告 さ れ た マ ウ ス の 実 験 的 口 腔 カ ン ジ ダ 症 に お い て も,そ の 実験 方 法 は 報 告 者 に よ っ て 様 々 で あ り,使 用 す る マ ウ ス の 系 統,薬 剤 の 種 類 や 投 与 量 も 異 な る 1,11〜13)
。 そ の た め,再 現 性 の あ る 結 果 を 得 る た め に は 実 験 条 件 の 再 検 討 が 必 要 と な っ て い る 。
本 研 究 で は,マ ウ ス の 実 験 的 口 腔 カ ン ジ ダ 症 の 条 件 設 定 に 新 た に 取 り 組 み,再 現 性 の あ る 条 件 を 確 立 す る こ と を 試 み た 。 ヒ ト に お け る 口 腔 カ ン ジ ダ 症 は,抗 菌 薬 の 長 期 服 用 に 伴 う 菌 交 代 症 と し て 起 こ る 場 合 と 感 染 防 御 シ ス テ ム の 低 下 に 伴 う 日 和 見 感 染 症 と し て 起 こ る 場 合 が あ る1
,10,15)
。 効 率 的 に 安 定 し た 再 現 性 の あ る 口 腔 カ ン ジ ダ 症 を 起 こ す に は,こ の 二 つ の 実 験 条 件 を 満 た す よ う に す れ ば 良 い と 考 え ら れ る 。
具 体 的 に は 以 下 の こ と を 行 う こ と に な る 。 第 一 に 広 域 ス ペ ク ト ル を 持 つ 抗 菌 薬 の 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン 溶 液 を 飲 用 さ せ る こ と で,マ ウ ス の 口 腔 内 の 細 菌 の 総 数 を 減 少 さ せ る 。 そ し て,後 か ら 接 種 し たC.albicansが カ ン ジ ダ 症 を 起 こ し や す く さ せ る 1,10,15)。 次 に 副 腎 皮 質 ホ ル モ ン の プ レ ド ニ ゾ ロ ン を マ ウ ス に 投 与 す る こ と で,マ ウ ス の 感 染 防 御 シ ス テ ム を 低 下 さ せ る 。 こ れ ら の 処 置 に よ っ て,接 種 し たC.albicansが 日 和 見 感 染 症 と し て の 口 腔 カ ン ジ ダ 症 を 起 こ し や す く さ せ る 1,10,15)。 上 記 二 つ の 実 験 手 順 に よ っ て 口 腔 カ ン ジ ダ 症 を 起 こ す こ と が 可 能 に な る と 考 え る 。
し か し,そ の 場 合 に 安 定 し た 再 現 性 の あ る マ ウ ス ロ 腔 カ ン ジ ダ 症 を 発 症 さ せ る た め の 実 験 条 件 を 設 定 す る た め に は,ま ず は 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン の 濃 度 ・ 飲 用 期 間 の 設 定 及 び プ レ ド ニ ゾ ロ ン 投 与 量 の 決 定 が 必 要 と な る 。 そ れ ら の 条 件 設 定 の 有 効 性 を 確 認 す る た め に,従 来 は 定 着 し たC.albicansの 菌 数,口 腔 内 の 炎 症 症 状 を 指 標 と
し て き た 1,10,11,14,15)。
し か し,そ れ ら の み で 口 腔 カ ン ジ ダ 症 を 捉 え る こ と は 不 十 分 と 考 え ら れ る 。 真 菌 を 含 む 微 生 物 感 染 に 対 し て,宿 主 は ま ず 自 然 免 疫 と 呼 ば れ る 免 疫 シ ス テ ム に よ っ て 防 御
し て い る 16〜18)。
こ の 自 然 免 疫 に お い て 宿 主 組 織 が 産 生 す る 炎 症 性 サ イ ト カ イ ン は,感 染 防 御 に お い て 大 き な 役 割 を 果 た す と 共 に 宿 主 を 傷 害 さ せ る 作 用 を も た ら す 19〜24)。 そ の た め,口 腔 カ ン ジ ダ 症 の レ ベ ル を 把 握 す る 因 子 の 一 つ と し て 炎 症 性 サ イ ト カ イ ン の 産 生 量 を 測 定 す る こ と も 必 要 と な る 。 本 研 究 で は,c.albrcansを 接 種 し た マ ウ ス の 舌 組 織 中 の 炎 症 性 サ イ ト カ イ ン 量 も 測 定 し,定 着 し た 菌 数 お よ び 炎 症 症 状 と 同 様 に 評 価 し た 。
材 料 及 び 方 法
1.使 用 し たC.albicansの 菌 株 と そ の 調 整
高 齢 者 の 口 腔 内 か ら 分 離 し たC.albicans OH‑1株 を 使 用 し た 。 こ の 菌 株 は,マ ウ ス の 舌 に 接 種 す る こ と で 白 苔 が 形 成 さ れ る こ と を 認 め て い る 14)。
OH‑1株 を1枚 の カ ン ジ ダGS培 地(栄 研,東 京)に 接 種 し て,37℃ 好 気 条 件 下 で24時 間 培 養 し た 。増 殖 し た コ ロ ニ ー を 回 収 し て,1%ウ シ 胎 児 血 清(GIBCO, Carlsbad, CA, USA) 含 有RPMI1640培 養 液(Sigma, St. Louis, MO,USA)5ml中 に 浮 遊 さ せ,菌 数 を1013個/mlに 調 整 し た も の を 使 用 菌 液 と
し た 。
2.マ ウ ス の 感 染 実 験
感 染 実 験 は 奥 羽 大 学 動 物 実 験 委 員 会 の 承 認 を 得 て,動 物 実 験 規 程 に 従 っ て 行 っ た 。 マ ウ ス は,4週 齢 か ら5週 齢 の 雌 性ICRマ ウ ス(日 本 ク レ ア,東 京)を 使 用 し た 。 飼 育 は 奥 羽 大 学 実 験 動 物 研 究 施 設 内 の 安 全 キ ャ ビ ネ ッ ト を 使 用 し て,飲 用 水 と マ ウ ス 用 飼 料 を 自 由 に 摂 取 さ せ た 。 飲 用 水 は,水 道 水 も し く は 所 定 の 濃 度 の 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン(武 田 シ ェ リ ン グ ・ ブ ラ ウ ア ニ マ ル ヘ ル ス,大 阪)含 有 水 道 水 を,飼 料 は す べ て マ ウ ス 用 飼 料(オ リ エ ン タ ル 酵
母,東 京)を 使 用 し た 14・15)。 な お,実 験 は す べ て1実 験 群 に 付 き5匹 を 使 用 し た 。
3.マ ウ ス へ のC.albicansの 接 種
マ ウ ス に0.2mgの プ レ ド ニ ゾ ロ ン(共 立 製 薬,東 京)を 皮 下 注 射 し た 。 同 時 に マ ウ ス の 飲 料 水 を 水 道 水 か ら 塩 酸 ク
ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン 含 有 水 道 水 に 変 更 し た 。 そ の24時 間 後 に 鎮 静 を 目 的 と し て0.1mgの ク ロ ル プ ロ マ ジ ン 塩 酸 塩(和 光 純 薬,大 阪)を 後 肢 大 腿 部 に 筋 肉 注 射 し,そ の20分 後 に 鎮 静 し た マ ウ ス の 舌 に 調 整 し た 菌 液 を 接 種 し た ° 具 体 的 に は 綿 棒 を 菌 液 に 浸 し,そ の 綿 棒 を10秒 間 マ ウ ス の 口 腔 内 に 挿 入 し てC.albicansを 感 染 さ せ た 14,15)。 綿 棒 に 含 ま れ る 菌 液 量 は0.1mlで あ る た め,そ れ に 含 ま れ る 菌 数 は 1012個 で あ っ た 。
4.マ ウ ス 舌 組 織 中 のc.albicans菌 数 と サ イ ト カ イ ン 産 生 量 の 測 定
c.albicansを 感 染 さ せ,3日 間 経 過 し た マ ウ ス を 頸 椎 脱 臼 に よ っ て 屠 殺 し た 。 そ れ ら の マ ウ ス の 舌 を 先 端 か ら5mm の 位 置 で 切 断 し, 5mlの 生 理 食 塩 水 を 入 れ た プ ラ ス チ ッ ク シ ャuレ 内 で 舌 組 織 を ピ ン セ ッ ト で ほ ぐ し て 細 か い 断 片 と し た 。 舌 組 織 断 片 の 入 っ た 溶 液 を15m1の プ ラ ス チ ッ
ク チ ュ ー ブ に 移 し た 。 チ ュ ー ブ を よ く 撹 搾 し て か ら,℃.1ml を 採 取 し て カ ン ジ ダGS培 地 に 接 種 後 に37℃ で 好 気 培 養 を 行 っ た 。 出 現 し た コ ロ ニ ー 数 か ら,マ ウ ス 舌 組 織 中 のC.
albicans菌 数 を 測 定 し た14・15・25)。
ま た,こ の 舌 組 織 断 片 の 入 っ た 溶 液 中 の サ イ ト カ イ ン を 定 量 す る こ と で,舌 組 織 の サ イ ト カ イ ン 産 生 量 を 求 め た 。 サ イ ト カ イ ン は マ ウ スEHSAキ ッ ト(eBiosciences , Franklin Lakes, NJ, USA)を 使 用 し て,マ イ ク ロ プ レ ー ト リ
ー ダ,̲̲̲̲(モ デ ル680:Bio ‑Rad Laboratories lnc ., Hercules, CA,
USA)で 測 定 し た 。 測 定 し た サ イ ト カ イ ン はmacrophage
inflammatory protein‑1α(MIP‑1α), monocyte
chemoattractant protein‑1(MCP‑1), interleukin‑lα(IL‑lα),
tumor necrosis factor‑α(TNIF‑α), interleukin‑17(IL‑17)で
あ る 23〜25)。
5.統 計 処 理
統 計 処 理 はone‑way analysis of varianceを 用 い た 分 散 分
析 の 後,Bonferroni or Dunn methodに よ る 多 重 比 較 検 定 を
行 っ た 。P<0.05を 有 意 と し た 。
結 果
1.飲 用 水 に 含 む 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン 量 の 決 定 マ ウ ス ロ 腔 内 の 細 菌 数 を 減 少 さ せ る た め に,飲 用 水 に 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン を 含 有 さ せ る 。 そ の 含 有 量 を 決 定 す る た め の 実 験 を 行 っ た 。 図1に 示 す よ う に,8mg/ml の 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン を 含 有 し た 水 道 水 を5日 間 飲 用 し た 場 合 に は, 水 道 水 を 飲 用 し た 場 合 と 比 較 し て 有 意 な 体 重 の 減 少 が 認 め ら れ た 。 し た が っ て,塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン の 含 有 量 は4mg/mlと す る こ と と し た 。 2.塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン 含 有 水 道 水 の 飲 用 に よ る マ ウ ス ロ 腔 内 細 菌 の 減 少
前 述 の 結 果 か ら, 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン4mg/ml
含 有 水 道 水 を マ ウ ス に4日 間 飲 用 さ せ て か ら,舌 を 切 断 し て 組 織 中 の 細 菌 数 を 調 べ た 。 そ の 結 果,舌 組 織 中 の 総 細 菌 数 は 水 道 水 を 飲 用 さ せ た 場 合 と 比 較 し て,有 意 な 減 少 が 認 め ら れ た(図2)。 こ の こ と か ら,広 域 抗 菌 ス ペ ク ト ル を 有 す る 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン の 使 用 は マ ウ ス の 口 腔 内 で 細 菌 数 の 減 少 を 安 全 か つ 有 意 に 導 い た 。
3.非 感 染 マ ウ ス ロ 腔 内 か ら のC.albicans検 出 の 有 無
マ ウ ス の 感 染 実 験 を 行 う 前 に,非 感 染 マ ウ ス の 口 腔 内 に はC.albicansが 常 在 し て い な い こ と を 確 認 す る 必 要 が あ る 。 ま た,今 回 の 実 験 に お け る 飼 育 環 境 で はC.albicans
が 感 染 処 置 を し な い 場 合 に は 感 染 し な い こ と も 確 認 し な く て は な ら な い 。
そ の た め,感 染 実 験 に 使 用 し た マ ウ ス と 同 じ 条 件 の マ ウ ス20匹 を 同 一 条 件 下 で3日 間 飼 育 し て か ら, 舌 を 切 断 し て 組 織 中 のC.albicansを 調 べ た 。 そ の 結 果,C.albicans
が 検 出 さ れ た マ ウ ス は 皆 無 で あ っ た 。 同 様 な 実 験 を 再 度 繰 り 返 し た が,同 じ 結 果 で あ っ た(表1)。 こ れ ら の 結 果 か ら, 非 感 染 マ ウ ス の 口 腔 内 にC.albicansは 常 在 し な い こ と が 明 ら か に な っ た 。
4.塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン 及 び プ レ ド ニ ゾ ロ ン が C.albicansの 口 腔 内 定 着 に 及 ぼ す 影 響
次 の4群(1群 に 付 き5匹)の マ ウ ス の 舌 にC.albicansを
接 種 し て3日 後 のC.albicansの 舌 組 織 中 の 菌 数 を 調 べ た 。 1群:コ ン ト ロ ー ル 群 と し て 何 ら の 処 置 を 行 わ な か っ た 。 2群:感 染24時 間 前 か ら 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン 4mg/ml含 有 水 道 水 を 飲 用 水 と し た 。3群:プ レ ド ニ ゾ ロ ン 2mgを 投 与 し た 。4群:感 染24時 間 前 か ら 塩 酸 ク ロ ル テ ト
ラ サ イ ク リ ン4mg/ml含 有 水 道 水 を 飲 用 水 と し,プ レ ド ニ ゾ ロ ン2mgを 投 与 し た 。
結 果 は 図3に 示 し た よ う に,塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン 含 有 水 道 水 を 飲 用 さ せ,プ レ ド ニ ゾ ロ ン を 投 与 し た 場 合 に の み 多 数 のC.albicansが 舌 組 織 中 か ら 検 出 さ れ た 。 マ ウ ス ロ 腔 カ ン ジ ダ 症 の 発 現 に は,塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン 含 有 水 道 水 を 飲 用 さ せ る こ と と プ レ ド ニ ゾ ロ ン を 投 与 す る こ と が 必 要 で あ る こ と が 示 さ れ た 。
5.マ ウ ス 舌 に お け る 白 苔 の 形 成
塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン4mg/ml含 有 水 道 水 を 飲 用 水 と し,プ レ ド ニ ゾ ロ ン2mgを 投 与24時 間 後 にC．
albieansを 舌 に 接 種 し た 。 感 染3日 後 の 舌 を 切 断 し た も の を 図4に 示 す 。 感 染 マ ウ ス の 舌 表 面 に は,ヒ ト ロ 腔 カ ン ジ ダ 症 で 認 め ら れ る も の と 極 め て 類 似 し た 白 苔 が 形 成 さ れ て い た 。 一 方,非 感 染 マ ウ ス の コ ン ト ロ ー ル 群 で は そ の よ
う な 症 状 は,全 く 認 め ら れ な か っ た 。 6.感 染 マ ウ ス 舌 組 織 中 の ケ モ カ イ ン 産 生
塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン4mg/ml含 有 水 道 水 を 飲 用 水 と し,プ レ ド ニ ゾ ロ ン2mgを 投 与24時 間 後 にC.
albicansを 舌 に 接 種 し た 。 そ の3日 後 に 舌 を 切 断 し て,サ イ ト カ イ ン の 中 で ケ モ カ イ ン と し て の 作 用 を 示 すMIP‑1α
とMCP‑1の 産 生 量 を 調 べ た 。 な お,ケ モ カ イ ン 以 外 の サ イ ト カ イ ン の 測 定 も 同 様 に 行 っ た 。 そ の 結 果,図5に 示 す よ う にMIP‑1α は 非 感 染 マ ウ ス と 比 較 し て 有 意 に 高 い 産 生 が 認 め ら れ た 。 一 方,MCP‑1は 非 感 染 マ ウ ス と 同 様 に 全 く 産 生 が 認 め ら れ な か っ た 。
7.感 染 マ ウ ス 舌 組 織 中 の 炎 症 性 サ イ ト カ イ ン 産 生
次 に 炎 症 性 サ イ ト カ イ ン と し て 作 用 す るIL‑1α とTNF‑
α に つ い て も 同 様 に 調 べ た 。 そ の 結 果,IL‑1α は 非 感 染 マ ウ ス と 比 較 し て 有 意 に 高 い 産 生 が 認 め ら れ た が,TNF‑α
はMCP‑1の 場 合 と 同 様 に 全 く 産 生 が 認 め ら な か っ た (図6)。
8.感 染 マ ウ ス 舌 組 織 中 のIL‑17産 生
サ イ ト カ イ ン の 中 で もIL‑17は 真 菌 感 染 に 対 す る 宿 主 の 防 御 反 応 に お い て 重 要 な 働 き を す る 感 染 防 御 の キ ー と な る サ イ ト カ イ ン と 考 え ら れ て い る 。 そ の た め,こ の サ イ ト カ イ ン に つ い て も 調 べ た 。 図7に 示 す よ う に 産 生 は 認 め ら れ た が,非 感 染 マ ウ ス と 比 較 し て 有 意 差 は 認 め ら れ な か
っ た 。
考 察
口 腔 カ ン ジ ダ 症 の 動 物 モ デ ル は,口 腔 カ ン ジ ダ 症 の 治 療 法 の 開 発 に 必 要 な も の で あ る 。 動 物 の 中 で も 通 常 は マ ウ ス が 選 択 さ れ,ヒ ト の 口 腔 カ ン ジ ダ 症 の 誘 因 と な る 条 件 を マ ウ ス に 設 定 す る 1,1O〜13)。
そ の た め,本 実 験 で は 初 め にC.albicansの 口 腔 内 へ の 定 着 を 容 易 に す る た め に,感 染1日 前 か ら 実 験 終 了 ま で テ ト ラ サ イ ク リ ン 含 有 水 道 水 を マ ウ ス に 飲 用 さ せ た 10,14,15)。
そ の こ と に よ っ て,マ ウ ス の ロ 腔 内 の 細 菌 数 を 大 き く 低 下 さ せ,C.albicansの 定 着 と 組 織 へ の 侵 入 を 容 易 に す る こ と が で き る と 考 え た 。 抗 菌 薬 の 中 で も 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン を 選 択 し た 理 由 は 広 範 囲 の 抗 菌 ス ペ ク ト ル を 示 す こ と で あ る 。 ヒ ト の 口 腔 内 に は 約900種 類 の 細 菌 が 存 在 す る と 報 告 さ れ て い る 。 マ ウ ス で も 同 様 に 多 く の 種 類 の 細 菌 が 存 在 す る と 考 え ら れ る た め,広 域 ス ペ ク ト ル の も の を 使 用 し た 10,14,15)。
ま た,水 道 水 中 の 含 有 濃 度 は 抗 菌 力 を 高 め る に は 可 能 な 限 り 高 濃 度 で あ る こ と が 望 ま れ る 。 一 方,多 量 の 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン が マ ウ ス に 強 い 毒 性 を 発 揮 す る 危 険 性 も あ る 。 こ の こ と か ら,塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン の 含 有 濃 度 は,顕 著 な 外 観 及 び 体 重 の 変 化 が 認 め ら れ な い 範 囲 で 最 も 高 濃 度 の4mg/mlを 用 い た 。 実 際,マ ウ ス に 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン4mg/ml含 有 水 道 水 を 飲 用 さ せ た 場 合 に,マ ウ ス ロ 腔 内 の 総 菌 数 は 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン 非 含 有 の 水 道 水 を 飲 用 さ せ た 場 合 と 比 較 し て 大 き く 低 下 し て い た 。 こ の 濃 度 の 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン の 飲 用 に よ っ て,マ ウ ス ロ 腔 内 の 細 菌 の 多 く は 死 滅
し た こ と か ら,C.albicansが 定 着 し や す い 口 腔 環 境 に な っ て い る と 考 え ら れ た 。
し か し,マ ウ ス 舌 組 織 内 に 多 数 のC.albicansが 定 着 す る に は,図3に 示 す よ う に プ レ ド ニ ゾ ロ ン の 投 与 が 必 要 で あ っ た 。 こ の 理 由 と し て は,長 期 間 の 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン 投 与 に よ る 口 腔 細 菌 の 減 少 で は な く,短 期 間 (4日 間)の 投 与 に よ る 一 過 性 の 減 少 で あ る た め にC.
albicansの 充 分 な 定 着 が 誘 導 さ れ な い た め と 考 え る 。
次 にC.albicansを 感 染 さ せ た 舌 組 織 中 か ら は,非 感 染 マ ウ ス と 比 較 し てMIP‑1α とIL‑1α の 有 意 に 高 い 産 生 が 認 め ら れ た 。 し か し,MCP‑1,TNF‑α,さ ら にIL‑17は 差 が 認 め ら れ な か っ た 。 こ れ ら の こ と か ら,C.albicansに よ っ て 誘 導 さ れ る サ イ ト カ イ ン 産 生 で は,選 択 性 が あ る 可 能 性 が 示 さ れ た 。
IL‑17は,ヘ ル パ ーT細 胞17型(T helper 17cell,Thl7細
胞)が 産 生 す る サ イ ト カ イ ン で 真 菌 感 染 防 御 の 要 と な る 。 IL‑17は 宿 主 の 細 胞 か ら,好 中 球 や 単 球 を 感 染 の 場 に 集 め
る た め の ケ モ カ イ ン 産 生 を 誘 導 す る 26〜28)。 加 え てTh17 細 胞 は,マ ク ロ フ ァ ー ジ に よ るC.albicans貪 食 を 促 進 す
る こ と が 報 告 さ れ て い る 26〜28)。Th17細 胞 の 機 能 低 下 は, 真 菌 感 染 症 の 重 篤 化 を 招 く と 考 え ら れ る 。
し か し,感 染1日 前 か ら 塩 酸 ク ロ ル テ ト ラ サ イ ク リ ン を 飲 用 さ せ,プ レ ド ニ ゾ ロ ン を 投 与 し た マ ウ ス にC.
albicansを 感 染 さ せ た 今 回 の 実 験 で は,IL‑17の 産 生 量 が 非 感 染 マ ウ ス と 変 わ ら な か っ た 。 こ の こ と が 感 染3日 後 の 舌 表 面 に 著 名 な 白 苔 の 形 成 と 舌 組 織 中 でC.albicansの 増 殖 が 認 め ら れ た 原 因 の 一 つ と も 考 え ら れ る 。
プ レ ド ニ ゾ ロ ン は,抗 炎 症 作 用 と 免 疫 抑 制 作 用 を 示 す ス テ ロ イ ド 剤 で あ る 10,14,15)。 ま た,テ ト ラ サ イ ク リ ン 系 抗 菌 薬 の ミ ノ サ イ ク リ ン と ド キ シ サ イ ク リ ン が 炎 症 性 サ
