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(1)

性周期ならびに妊娠期におけるウシ乳汁中の黄体ホ ルモン測定について

その他(別言語等)

のタイトル

Measurement of progesterone concentration in milk obtained from cows during the estrous cycle and pregnancy

著者 阿部 知行, 上村 俊一, 佐藤 邦忠, 小野 斉, 三宅

雑誌名 帯広畜産大学学術研究報告. 第I部

巻 12

号 2

ページ 95‑103

発行年 1981‑05‑15

URL http://id.nii.ac.jp/1588/00002202/

(2)

滞大研報,12(1981):95〜103.   95  

性周期ならびに妊娠期におけるウシ乳汁   中の黄体ホルモン測定について   阿部知行界・1二村俊一キ・佐藤邦息キ  

小野 斉≠・三宅 勝♯  

(受理:19帥年8月12日)  

Measurement of Progesterone Concentratior)in Milk Obtained rrom   Cows dllring the Estrous Cycle and Prcgnancy  

TomoyukiABE*,ShunichiKAMIMURA窄,KunitadaSATO*,  

Hitos昆ONO*and Masaru MIYA瓦E睾  

摘   要  

敢広畜産大学附属農場の撃義牛2D原を用い,夕方搾乳時の、海食乳中の黄体かレモyの紬u方法   を検討するとともに,性闇期および妊娠期の判定に利用可健かどうき、を詞べた。  

1)黄体ホルモゾの抽出方法   

A法:乳汁0.1血†をエチルふ一テル2.OmJで抽出し,抽出液を乾尉した乱100%メタノー   ル1.OmJで溶出し.その8.1mJをRIAに用いた。   

B法:10皆希釈乳汁b.1mJをエチルエーテル2.qmメモ救出し,抽出液全島をRIAに用い  

・−し  

た。   

C法:10倍希釈乳汁n.1mJをヘキサソ2.DmJで抽出L,抽出液全量をRIAに用いた¢   

A乱8法では硫安添加後,遠心分離しても月ouTld型とFree塾を分離できない例が多か一)  

たが,C法でほそのようなことほなく,操作は最も簡単であった。   

2〕性周期における萌体ホルモンの変動   

A汝による発情期,黄体期の平拇備ほそれぞれ2.釦n鼠/mJ,9.郎ng/mJ,B法でiま3.80ng/m7,  

7.稚ng如J,、C法では2.99喝/′ぬJ,6.粥ng/mJで,A法とC溝濫よる乳汁中華保水ルそソと血   妓中葉体ホノンモソとの間に相関関係を認めた(P<0.おう。   

3)妊娠期における黄体かレキジの変動   

乳汁中毒体ホルモンほ発情劇に低値を示し.妊娠瓢には高値を僻緩Lたですなわち,A法では発   情胤妊娠珊の平均値はそれぞれ3・琳ng極J.9・51ng/mJ,B法でほ2・㍊噛/mJ,6・24n級厄ヱ・  

C法で†ま豆.32ng/mJ,7,11Ⅱg/mヱであった。A法,B法共に乳汁中黄体鹿ルモソと血猥中黄体ホ   ルモンの問に絹関関係を認めた(A駄B捺それぞれヂく0.醇,P<0.0伐   

儲 帯笹音産大学鱒医学群家畜臨鱒繁殖学鱒基  

揚 力頗畑朝川〃相加海相研輌廟ね紳那加糊如拙q頼擁川初野両川〃吻句碑椚Ⅷ頑嘩ゆ古井α呼   

掴如如如吼(妙舶用」勤舶扇血∴ね如汎β頗 

−1−   

(3)

阿部知行ら  

96  

ソダパーラーで朝夕2回行われている。   

乳汁ほ午複4噂調号からの夕方搾乳時に,よく携絆   した個体毎の混合乳から紛200、mJをポリエチレン製容   器に採取L.その5mJを滅菌ポリェチレy製スピッツ   管に入れ,防腐剤(蒸留水100mヱに垂クPム酸カリウ   ムと鼠化第二水銀をそれぞれt)、臆g潜解した液)D.略   mJを加え,ホルモン卸定まで4pCに保存した。   

また乳脂肪測定用として1WmJの乳汁を2脚mJポ   リエチレン製容器に入れ,1(】%ホル寸リシ溶液3虻止竜   添加Lたのち4¢Cに保存した。   

試験牛のうち,妊娠した1()頭巾7頭卵0.1−7)にンつ   いては,人工線柄を実施した日(0日とする)から7日   毎に6臥 その後ほ罰日毎に妊娠210、日まで乳汁およ   び血液を採取L・た。残りの3魂(No.8,9およぴ10)忙   っいてほ.人工授精後42日まで3日毎紅乳汁のみを採   椒した。受胎しなかった10頭のうち,6頭(Ⅳ0.11〜16)  

は義憤が回帰するまで7日掛こ乳汁を採取し,残りの4   劇中3頭(No,17,18およぴ19)は3日ないし7日滋   に,1頭(No.20)は毎日乳il ̄を採取した。なお非妊娠   中のうち,4頭(No.11,12,14および釦)からほ乳汁  

材  料  

1.箱   書   

1973㌧年,HEAPら11〉がRIAによる乳汁中葉体ホルモ   ン測定法を確止してから.諸外国でほすでにウシの妊娠   診断1亭71曇酋18,鯛)や分傍線の黄体段能の判定‡・℡1〉などに応  

用きれてきている。一九わが国忙嚢ける乳汁中ステロ   イドホルモンの定量はまだ実用の域に達しておらず,わ  

ずかに宮沢勘勒が乳汁・いコルチブールにづいて,蘇ち叫  

が黄体ホルモンについて報告している肇こすぎない。   

今臥 著者はウシの性周期の判定および早期妊娠診断  

の目的せ乳汁を採取し,牧野20)の方法によるRIAによ   り黄体ホルモンを測定Lたので,その結果を報告する。  

2.材料と方法    1)紋㌻ 強 材 料   

試験期間ほ昭和52年8月より55年12月までで,帯  

広畜産大学附属農場粧繋嚢中の′ホルスタイン種乳牛加  

頭を試験に用いた(義一1〕。これらは臨床上 生席巻そ  

の他に異常を認めないものである。半群はルーズパーソ   で飼育され 搾乳はロータリー式ヘリソポーン型ミ/レキ  

義一1試  験  

最終分娩   最終綬揺  

(年月日)    (年月日)  

㈱866︒47ユ77︒9775743947  

2  新 聞制禰m郡翻醐61㈱餌錮郎旗棚描郡87︒511柵脚   牛  

0  1 2 3 4 5 6789川 11 は13 14 15 摘17柑 19却 N  

髭ト11−24  

二!ニ芯:1  

52−1ト28   52−11−4   53−1−17  

− T、・■rt  

52−12−28   52−1ト24   53−1−17   53−10−15   53−9−13   53−8−26   53−11−21   52−8−17  

52−8−23   52−9−29   52−7−6  

52−11}−17  

52−6−28  

52一書卜孟D  

53−7−6   53−7−19   52−2⊥28  

5:ヨ8−2:ち  

52−10−7   52−5−25   52−1−15   鮎ト5−27   521n−27   53−2−2   53−4−17   53一ト10   52−7−28  

+ + 十 + + + + + + 十一  

53−1−11  

53−1㌻−9  

53−6−20  

53−3−27  

53−5−23  

53→12−1  

5:竜一11− 7  

53−7−19  

53−9−15   

(4)

性周期ならびに妊娠期におけるウシ乳汁中の讃体れレヰソ測定について  

B 法,e 法   分離後(卸00r.p.m.2〜護分間)エーテル属せ  

他の試験管に移し,これをRIAに供した。   

C・法:エチルエーテルのかわりにヘキサンで   抽出した以外はB法と同様に操作した。   

皿−pと血躾中黄体カルキソ(以下p・p)の測   定ほ,乳汁 Q.01mJのエチルエーテルおよぴ   ヘキサン抽出物について,また㌢pは血環0.1   mJの且チルエ←テ/レ抽出物に〉ういてRIA(牧   野民法叫)で泄定した。回収率はA払B狂お   よぴC法でそわぞれ71%,91%,89%で,pp   は紬%であった。標準曲線!・ま0〜500pgの範   囲で使用した。  

1D佑希釈乳汁0・ユml  

丘/\\  

エチルエーテル抽出 ヘキサン抽出  

(P㌔ 

、 

水 洗   ↓  

J   乳汁D・1凪1   

、1   

エチルエーテル船津   

J  

水 洗   

↓  

乾 旭]   

1   1DD¢メタ′ルユO mユ  

↓・  

D.11口1   

1  

R 工 Å  

樹  

R  

凍 ■←出 ←工  

A  液  

抽  遠  

3.結   果  

1)m・pおよぴp・p  

m−pは抽出方法のいかんにかかあらずp・pと   同伴に発情期に低く,韮搬軌 妊娠期に高値を   示Lた。  

(1)A法已′こよるm−pおよぴp−p    妊娠牛5頭の発情期のm・pは,表一2のごとく,乱盛   土0,鱒(m±S.鼠)噂/mJでありた。人⊥授精後7日に   はこB.88±0.鎚鴫ノmJと上昇し,以後1狐首あるいほ   210日まで7,闘士0_84〜12.37士2.14竹富ノmJの閉を維持  

した。mやとp−pを比較した錨熟前者注後者の約4   蓑†之 妊娠斗・N仇1〜5のA法忙よる  

m・pとp−やの平均値   同一1乳汁中黄体加レモソの抽出方法   

採取に加えて血液もあわせて採取した。   

血液は窺静脈よりヘパリン加真空採血管を用いて約  

10mJ採取し.血煙分離剤プルートZを入れ違心分離   後,血渠を滅菌ポリエチレジ梨スピッツ管に移L.ホル   モン漸定まで一冴〇Cに保存したコ   

なお.乳脂肪の鱒便はデソマーク袈迅速脂肪測定後ミ   ルコテスタ【MXlIな用いて行い,試験牛の乳房炎の   診断はPIノテスタ】で行うた。また試験牛は人工授精後   40〜60日に廼腱検査法虹より妊娠を確認した。   

Z)黄体ホルモンの測定   

乳汁中義体ホルモン(以下m−p)の抽出方法軋 図−1   に示すごとく,沈め三方法を検討した。   

A法:加湿して充分混和した乳汁0.1mgに抽雄治媒   としてエチルエーテル 2.PmJを加え,30秒間轟く振   盗,静絆後下層を除去し・,再燕留革 0.1mJを加え15  

秒間振塗した。次にエ→テル層を他の試験管に移し乾博   させ,これ粟」00%メタノールを1.QmJ加え測秒間振  

蛍Lた。これより払1mJを別の試験管に移L.RIAの   試料とした。   

B法:青煮留水で10倍希釈した乳汁上り 0.1mJを   とり,エチルエーテルを 2.0.mJ加えて30秒間抽出を   行い.遠心分鮭後(裟頓〕r.p.m.2〜3、分間)下層を除去  

し,再蒸留水().1tnJを加え15秒間水洗L,再度遠心  

m ̄p   p ̄p  

(n鼠′′mJ)   (ngノ′mJ)  

授精後日数  

3.g8士0.26   0.59士0.06   お.88士仇58   2.46士0.18   10.61士1.&1   2.41±0.q9  

8.19土0.79   2.13±0.17  

11).15士1.39  

2.34士0.25  

8.86士1一芸4   2.45士り.21   12.37士2.14  

三ヨ.80士0.39  

8.冗I±0.50   2.33±0.26   7.89士0,S4   2.24士0.23   10.20±札94   2.73±0,56  

8.71±0.61  

2.37±り.3¢  

9.49±1.13   3.09士0.舶   10.n4士0.8S  

3.97士1.頸〕   

0   

7〜 8  

l・トー15  

21′、22   28〜30   35〜37   39へ√44   60〜 63   綿〜 91   118、〜121   148〜150  

1帥   

21ll  

(m士S.E.)  

(5)

阿部知行ら   

98  

妊娠牛3頭の平均 m−p は.表「5のごとく,発情期   2.㌍噂/mJ.3日2.99ng/′mJ,6日には¢.朗Ⅵか血 と   増訓L.以後40日あるいは吸口まで5.斡〜8誹ng/′mJ  

の値を示し 発情期の低まで低下することほなかった。  

(㊤ A法.B法およぴC法によるm−pの比較   

妊娠牛で卜ま,表一6のごとく,A掛こよろ平均m−pは.  

B法のそれより約 3ng′/mJ毒し、レベルで変化した。C   法による平均m・pは,発情期と42日の借がB法より   わずかに低いほかは,A法とB法のほは中間であ示㌦  

表一5 妊娠牛No.軋9およぴ10のC法によるm・p   泰−3 非妊娠牛No.12と♪b.14のA法  

によるm−pとp・pの平均値  

m−p  

p⊥p  

(ng/′mJ)  

(ng/mJ〉  

綬隋後日数  

3.17土0.94   0.85士0.14   川,q9土2.07   2.86±0.22   11,58士1.17  

2.房1土0.51  

3.31士0.69   0,70土払礪  

⁚‖︶ 7 一4 1⊥  

1 2  

(m士S,E )  

表−4 魅娠牛No.6とNり.7の1㌢法  

をこよるm−p、と pp   横柄後日数  No.8  No.9  Nn.1n 平 均  

(hg/mJ)  

69  2.32   69  2.99   86  6.56   55  8.且3   19   7.75  

∈枢   8.17   84  7.望8   1婚   7.(遇  

−   7.(旭  

18   6.36   17  5.9P  

6.97   7.43  

m−p(n宮ノmJ)   p】p(ng′/mJ)  

ワ︼ A. 7 父U 7 9 9 6  

粥 m附加≠㈹二闇 山肌 儲 74   ワ叫 ︹け 7 ︻﹁ 夏日 9 長Ⅷ一け一八一れ 軋丘  

m2319飢贈1029崩施73柑97  

慮精後日数  

No.6 No.7   No.6 Np.7  

誼  7  

〜 9 ㍑ 15 迅 21 茄 〜 罰 33  

6  2  

公60誠亜嶺別離柑朗一相調  

.   

∧V L 2   2aa L 2 ∩れ   2 1.   

公開蜘31埠004473印書61一一  

バリ ハリ l ワー2 2 り山 l l ウ一︑ウl  

飢 37 03 93 弘光91担血∽ほ一部82  

りんー仁U 7 ﹁〇 6 6 7 nhU EU 6    6 5   

147100珊73髄70Ⅷ鱒乃爾一一   2 5 5 6︑・4 5 6 GV 応V 6 5  

071421讐讐警慧こ忘179鯛  

11.款)  

2  

.4 35 〜.    ︵U    4   41  ♪n   

42  .  

4.49   6,29  

表一6 妊娠牛の抽出方法別m・pの平均値(咽′・′mわ   倍高く,両者の間に相関関係を認めた(r=0.74,♪<  

0.05)。   

発情が回帰した2双では,義一3のごとく,発情軌7   日.14日,21日(発情)のm・pほそれぞれ3.17士¢.94   1n.婚士ヨ.07,11.誠士1.17,3∴11土仇691唱血Jであり   た。これらの慣とp・pとでは相関関係を認めた(r=0.99一  

♪く0.05)。  

(2〉 B故によるm・pおよびp−p   

妊娠牛2頒のm−pは.義一4のごとく,発情期にそれ   ぞれ2.14,2.91nか扉で.人工授精後7日から14S日   あるいは2(I9日までは4.73〜7.91Ilg血J、の催せ示した。  

m・piまp・pの約3.5倍高かったれ性周期中の変化ほ   Ppとほぼ同様で両者の間に相関関係を認めた(r=0・72,  

粛<Q,01)。  

(3)C故によるm・p  

授清後日数 A法  

0  

3.98   

7・〜8  

8.88  

14′−15  10▼61    2ト叫22   8.19    2昌一〜30  10.15  

:渇〜37   8_86    39〜・44  12.39    餅)へノ63   8_711    88〜91  

7.巨柑  

11S〜121 10.20   148〜1以〕  8.71   

1釧   9.41  

210   10.q4  

法欝紛32餌甜993176鮎4393那恕 B 2.5.軋軋 5.5■ 7⁚丘 ︼h一且 5・6・5・  

綬稀後日数 C法  

0  

2.32  

3  

2/99  

〜7  

6,箪  

9  

8.43  

12  

7.ラ5  

15   8.17  

18  

了.2色  

21  

7.()8  

25   7.08  

〜2$    6.36  

38  

5.頸)  

33  

6.9ヲ  

35   7.42  

27  

40〜42   6_29   

(6)

性周期ならびに妊娠期eこおけるウシ乳汁中の東体ホルモソ況蛙について   99   表−7 非妊娠牛Nb.18の抽出方法別m・p(n良/mJ)   温で4時間以上静摩すると,BduT【d塾ほ液耐オ近に喀ま  

り,下層のFree刊を回収することができた。この方凍   は,乾周磯作が2囲で時間がかかる.誤r,てBuupd型   を吸う,度るいは振動により再び白濁してしまうなど問  

題が多いユ   

B汝では媚楷を減らす目的で10倍希釈した乳汁を用   いたが.抗血陪添加後や注牒白眉する例がみらゎた)た   だしA法と異なり,遠心分断こよりB皿nd習い′王上層   に浮き Free哩切回収は容易で,A法匿比較L簡略イヒ   された方法といえる。しかしエチル岱−テルは附肪に雷  

む乳汁の黄体ホルモツ抽出をこほ不適当であるとノ患われ  

た。このように脂肪が測定自体に窓影響な与・える例とし   て牧腰頻ほ,血紫中に油状物質が多いと隠安を添加して  

も蛋白の耽陛が不発労であると述べでいるが,同じこと  

が乳汁についても証明きれたおけである。   

これに対しC放ではヘキサンな用いたため遠心分離   により 鮎血d型は沈毅し.Free塾の回収カミ容易であ  

ノタた。赤法は巌も推奨しらろガ法と考える。   

乳汁中の脂肪を除く升法として,SC‡丁Ⅰ烏VOら幼,  

T欄11iIERらふ1〉,凍ら已l〉ほ凍結法を用いているが,これ   枯燥作が煩雑なうえ,測定に長時間を要するb硯私広  

く用いられている測定法はGAI〕SBYら7シの方法である。  

この方法はカラムiこよる純化と抽出操作そめものを省   き,デキストラソ被容顔兼によりB;ぎ分能を行う極め   て簡便な直接R工Aである。m−p測定に関する報蕉ほす   べてBこF分離にデキストラソ被覆炭束を用いでお針   硫安を用いた仇は蘇らと著濱だけであるb   

2)乳汁の脂肪率とm・p   

血液採取と異なり,乳汁では採取時間が極めて重要で   あることはHOpFMA村村とHAMl∃URGERlヰ),ScHIAVO  

ら呵をほじめ届くの研究者の一致するところである。こ   れほ採取する材斜によって脂肪率が異なり,脂肪率が  

m・p、に影誓するためであるが,たとえばⅠ】8沌ら剖)ほ   co11ectingjarから、の採取の仕カによっては脂肪率が1  

%以下から6%前後忙変刻し,脂肪率と m−p との間に   相関関係を認めている。騒乱LLとPopl宣1),HoFFMÅNN  

ら15,丁6),GINTH耳疲 ら叫も脂肪率と mやに和銅関係が   あるとしているが,今回の実験で,1側でほあるがこの   頃向を認めた。享たHEAPら18)寸もm・pが低い時ほ蘭   肪率と楯開園稀があると述べているが,今乱発惜期の   m−pと脂肪率ヤそのような傾向を認めたのキ蔓,あずか3   側で、あった。著者の結果でm−p と膳妨率との間に相関   関係を認める例が少なかったのほ,ぐ011ectiIlgjarめ撹   

授精後日数   法甜 11 00鮎 川 41 師  

即恨 那鮒 3493 03  

りJ 

07 14封瑚萌朝   52 肌 00 11 11 誕82  

3 7  1 〇 八u HHU g 6 ワ︼  

」瞞娠牛でほ,覇−7のごとく,A法,B法およぴC   放とも同様の変化をホLた。すなわち,発情期ほ1.69〜  

3.57ng/mJで,以後2弓日までは6.掴〜1軋11ng/mJと   高値せ示したが,35日からミ′£低値となり.40口には   2.58〜4.03mg/mJとなった。   

2)脂肪率.Ptテストとm・p   

No.6 では哨肪率と m・p との間に相関関係を認め  

(′=0.5S,タく0.防).せたNo.12.No.14おょびNo.i7   の廃憤激においてほ.脂肪率が高い時にはm・pも剛、  

檀向を認めたれ他の多くの例でほ膳肪率と m・pめ牒   らかな関係は認められなかった。   

乳房炎硬患牛の乳汁と血−pの関係を知るため,試験   牛全頭にPLテストを実施したところ,即0.18とND.  

1旨が隠匿の陽性をホLた。これらのm・pをA法に上   狛榔藩Lたが,榔定日休に影響な与えることなく.m−p   ほ測定可能であった。  

4.考   棄  

A払B法およびC法によって測定されたm⊥pの   変動によ′,て,試験牛瑚生周期ならびに妊娠期の判定が  

可能であった。またA法,撃沈.C法iざよるそれぞれ   の m・pの変動は廿p のそれとよく一致していた。以   下,測定方法,姓周期および妊娠潮とホルモン値の関係  

ならびにウシの繁絶分野における鳥丘、用についで着禁を述  

▲ち.  

1〕測 定 方 法   

A沃,B法およびC法の3法ともm−pの測定ほ可   能であるが,それぞれ次のような長所と短所があった。  

すなわも,A法では抗血清を添加後,白濁を生ずる例が   Åられたことである。牧野叫ほ,硫酸7ソモニウム液  

(硫棄〕の添加により,標鼓抗原一統体結合物(BDund   型)と遊離頗識坑凍(Free塑)を分離できると報告Lて   いるが,八紘では分離できない例が多かった。LかL室…  

・− 5  

(7)

阿部知行ら  

100   

RIAで測定し,発情斯こ1_餌g/mJ,発情後5日より   増加し10〜11日に10.1ng/′mJと最轟楢に達し,17日   から減少すると報告Lている。著者の結果をこれと比較   すると発情期には若干高いが,黄体期ほ睦ぼ同様の成層   であった。たお非妊娠牛No.18におけるm,pが3法  

ともほぼ同様な変動を示したのほ同じウシについて測定  

方法を比較したためであり,妊娠期でA法がB法お   よびC法上り高値を示したのほ測定方法の用達という   より,むしろ個体が逮烏ていたためと考えられた。   

従来の報捌こよれば,m・pほp−p よりノ高値を示すと   言われているが,著者の髄質もほぼこれに一致してい   た。この理由ほ当初」Hl;APら1りによっで乳汁中の未知   の代謝産物が交叉反妃、を起こすためであろうと言われ,  

ついでDARuNG ら5)は,IiEAT■の言う代瀞産物とい   うのは5α一往ndrosはndlOne と 5 トpregnandio11くさであ   るとしたじSLOTIN ら8㊥)ほ川羊では乳腺でP合成カ;可   能であると報告Lているが,HOFぎMAN討 と HAMBU,  

RGERll〉,HEAPら−已〉は,乳牛の乳腺でのP合成はない   とし,HEAPら1望〉はm−pがp・pより高いのトも交叉反  

応を起こす物質の存在よりも単に脂質がステロイドを蕃  

かすという作剛こよるのではないかと結論づけている。   

5)ウシの繁殖分野における応用   

人二1二授輪衡 妊娠したウシのm・pは発情親の値まで  

低卜することなく高低を持続する。このことから人工授   精後18〜23ロに乳汁を採取しm・pを郵定することによ  

りy妊娠したか否かを診断することが可能である。湘定   の材料としてほ,すでに述べたようた午後搾乳時の混合   乳がよく,搾乳同前の乳汁は使用しないほうがよい。ド   イツ,イギリスでほ,すでにmやトニよるウシの妊娠診   断が実用の段階に人っている。すなわち,HoFFMA阿  

ら川)は333頭の人工授構複別日の儀搾り乳を用いた薦   果,11叩/mJ比ヒを妊晩211g血J以下を非妊線とし,  

それぞれ∨適中率は78%.100%であった。P盆N桝INGTDN   ら25〉は370動こついて人工綬滞後19〜汐日の問に採取   Lた混合乳を直接 RIA で測定し 8ngノmJ以上を妊   娠,それ以Fを非妊娠と区分したところ,非妊娠牛め適   中率ほ鮮%,妊娠牛のそれは加日の乳汁で76%.2三相   と合わせると85%であ上たという.また 瓢S王iOp ら勾   ほ早期妊娠診断を行い,95%以上の適中率を報告Lてい   る。肉牛で狂〕初めての報告はMACI〜ARLAyEら1さ)のもの   で,交配後22日の手搾り乳を用い,4噸/mJ以上を妊   娠.3ng/一mJ以Fを非妊娠とし.捷界を 3.2ng/mJと  

した。その結果,適中率はそれぞれ94.6%,1叩%であ   絆の程度,乳脂肪渕韮用乳汁の駄布状澱,乳類防潮定格  

の信顔性などに開展があったためと考える。   

郷党に用いる乳汁ほ研究者により異なり,午後搾乳晦   の況合乳18・1†,25,2り,後搾り乳18),嘲搾乳後2時間の乳   汁g,lO),一乳区から待た後搾り乳のクリーム叫などであ  

る.が,一柳こは午後搾乳時の合乳が用いられているの   で,今回もこのような乳汁を材料とした。   

過去降乳房炎確息牛の m−pについてほ報告されてい   ない。キ吼乳汁のPl.テストの結果がm・pにどのよ  

うな影響があるかを調べたが,擬匿のpLテスト陽性乳   ほm■Pに対しでほとんど影響を与えないという結果で   あった。また乾乳漱の m−pの報告もないた軌 著者は   妊娠148日で掛様搾乳中止後29日目のウシより手搾り   で乳汁を採取し,乳区別にA法によって測発した¢そ   の結果,7.04〜8.59ng/mJと乳区Fこよる養はなく,乾   乳期の乳汁でも m・pの測定ほ可能であることがわかっ   た。乳房の乳尾別のm−pには煮がないという点は一泊一   BSOがとFlでZPATRICXO〉の報告と・致していた。   

狛 妊娠期lこおけるm・p   

A法による平均m−pは発情期に3.g呂±0.がng/mJ,  

底板期紅ほ7.甜士0、糾〜12.37士2.14ng./ねJであった。  

DARuyGらさ)ほ妊娠斗4頒の午後混合乳をgas−Chr8ma・  

togr8pもyで測定した結乱 発情期は5.Ong血′以F,  

妊娠期は6−4〜1且Ong′・′mJであったと報告し,DoBSOγ   とFITZPATRICK8)は9カ月にわたり221威から混合乳   2由検体を採取し 直桜RIAにより酬定したところ.  

妊娠牛ほ5〜2¢ng血J平均富Ong/mJ,非妊娠牛は1,0  

〔牒.〔hg/mJ平均3.5ng′′ mJであったと述べている。A   法による mやは,ニれらの報告とほぼ一致するもので   貴.・rJ∴   

B灘濫よる平均m−pは発情期を除いて,C法による   m・pの範薗に入るため,府者の掛まほぼ渾似するもめと  

.愚ぬ九たりC法による平均m・pほ,発情期と発情後3   臥でほをれぞれ竃.32,2.99ng/m′で,妊娠期では5.舗  

〜8.亜草g/mヱを示した。これらのm−pほHEAPら11)  

が発情争および妊娠/、卜の前搾り乳を直接RIAで測定し   た値と似た催せあった。   

4)性周期におけるm・p   

A法にエる平均m・pほ発情期に乙紬ng/mJ,華体期   にほ 9.68ng/mJ,方法■でほ,それぞれ3.御ngノmJ.  

7.76ng舟J,C法では2.鋪、ng/′mJ,6.粥血融m上であっ   た。各法とも6〜7【Jから上昇し,9〜16日に衆人とな  

り,以後減少した。GARTl.ANDら8)は1与頭の混合乳を  

− 6 −   

(8)

性周期ならびに妊娠朋匿ぶけるウシ乳㌢l■中の黄体ホルモン測定について   101   ったが.40日後と90日後に直腸検査を行ったところ受  

胎率は弧4%〜75・0%と低下L・でいた〔彼らはその原因  

を阻 巧台妃の死亡に上るものとしたっ   

ウシで早期妊娠診断を行う場合.為る程度の誤診ほ免   れない。その原田とLて最も竜要なものは早期帆 胎児   の死である}ROBERでSe7)によると,早動こ妊娠と診断  

されたウシの平均8%がた壬娠願口までに流産している  

といわれ妊娠診断の時期が早いほど翠診率ほ高くなる。  

m−pによる妊娠診断の誤りについて,Ho押MANⅣら18)  

ほ,性周期の長い偶軋早期胚の私生殖器の病的変   化,材料採取の誤りなどが原田となると述べているし   

署名の結果から,人t授精榛21日のm−pが高値せ弄   したものは14頭くNo.1「、ノ10。15,16j18および謝)であ   ったが,重陽検査により妊娠と診断されたものは11頭  

(pb.l〜1nおよぴ】6),約79%であったp LかL.11頭   頭中1頭(Nn.16):・土その後発情が剛昂し 流産か疑わ   れる例であった。残りの3重責(No.15,1占およぴ20)に   ついては次のことが考えられた。すなわち,No.15 ほ   人⊥授精後21日に12.6ng′・(mJ(A法)と∫封直を示した   が,お口発情が回帰し(d,83n軌危プ),早期胚の死が賂オブ  

れた。No.18ほ人工授精後21日に8.碑ng/mg(C法)  

と高値を示Lながら,40日には2_58喝/mJと減少し,  

直腸換金からも非妊娠と診断され,早期胚の死が考えら   れる例であった。NQ.20ほm・p(C演)およぴp−pの   変動からは,流産,胚の死,Silentheatなどは汲めず,  

黄体遺残症の疑いのある例であ′Jた。結局 m−pの高い   14頭巾No.20を除く13頗(約93%)は受胎と考えら  

わる例であっ〃た亡   

このほか▲ MAmRら21)はクリーム小のPにより分   娩彼の性周期を視べ,BULMAtqとLAMMIⅣG会!▲)は同   じく分娩後のnl−pを測定し廉売情牛の発見に動果を   あげている。   

以上の結熟mヤの況け定は早期妊娠診帆繁殖障賓′卜   早恥発見に役立ち.ウシの繁華に大きく貢献するものと   思われる。   

腐を終わる忙あたり試験材料の採取に御協力し、ただい   た泰学附属農場の各位,ならびに胡血清を授供さj■Lた帝  

国臓器製薬株式会払 乳瀬防潮足にあたり御指導をいた  

だいた帯広商産大学抑rl金次郎教動こ深凱、たl/ます。  

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(10)

吐周期ならびに妊娠期†こおけるウシ乳汁中の黄体ホルモン測定について   1(13  

the bound progesterone readilyヨettledle且Ving a   cIcar solutionのffTee prOgeSterO†1e.Therefore,it   seems that me【hod Cis the mostl・eCOmmendable   technique.   

2.Variation of milkprogesterorlelevels during   the estr叩S CyClelnlO cows,   

Tlle meanprOgeSterOnelevelsdurirlgtheestrous   ム11dlutモalpllaSe uSing meth{〉ds A.B and C were   2.紺 and 9.68ng′/lnJ,3.80 and7,76ng′・√mJ,2・99   a血d6.朝れ軋/mlrespectively.Th如e Wasap8Sitiv色  

co汀elatit−n betweenplasmaprogeste紬nea−1d milk   progeBterOne LeveLsin m声thods Aand C(夕<0.05).   

3.Variatipn of m川こprOgeSterOnelevels dtlrin官   pregll且nCyinlO c(】WS.   

Progesteronelevelsinmilkwere】owduringthe  

estT{)uS pha服S.b止t maintaitled tli嘗hl即els dしIrirlg  

pTegnanCy.The meanpT叩eSteTOnelevelsinmilk   during the estfOuS period &nd pregnaney using  

me血ods A,Band Cwere3.98and9.51ngノmJ,2.53   and6.24tlg/mJ,2.32and7,11ng/mJ,reSp以tive】y.   

Pr{)酢SterOneleYelsw公一e higherinmilkthamin   p】asnlalhro里れ叫t pr巳gnanCy・There was払Isく}a  

cIose eorrelation between plasma progesterone and   milkpro離SterOnelevelsusing methods A且nd B  

(♪<0.05且nd♪く().01r亡SpeCtively).   

Fr()m Lhese resultsi[SeemStllatnOtO山yde【e一皿i−  

natj, of the diffeient ghnses of the estroua cycle  but a】soearlypregnancy di哨nOSisOf cuws can be   mad巳 by measlirlng thc progestcTr)nelevels   milk.  

Summary   

「1、hc銭TSt purpわSe Of tllis study w註雲tO develop a   加tl10d for the比t一礼Ction olmilk progesterDne;  

the scc(md was to deternline whetheritispossible   to know the different phasesl)f thヒeStrOuSじyCle  

and t一)predict pregnancy ffOm theinvestig且tionof   milk pr明eSterOne Tevels.   

ru11milk♭amples werピ COllccted fTOm tWent)′  

HoIstejn−FriesianじOWSduringtheafternoonmilkirlg   jn(沌illiro Ulliversity DairyIニaTl11.  

1・王xtraction of free progesteronein milk.   

Method A:Using O_1mlof milkβample,2mZ   8f吏thylether was added alldwasmixedIhoroughly.  

The ethylヒther extrat.twat,eVap()ratゼd to dryness   且n(1tllenlmJof100% methanoIwas added alld   mixedintenselv. An aLiquot of O.1mlof thEI   TeSultingmixtureⅥraS uSed forRIÅby MAKINO s   Illethod.   

Method Bこ0.1mlofI11ilk sample waさ〔1iluted   withlOmJwate一弘nd O,1mJく)f the mixture was   extracted.and2mlof ethylethcr was added.The   whole volume ofethyletheY eT(traCt WaS uSe〔1for   RIAl)y MAKINO slnethod.   

Mcthodじ:An equと11volume()f hexane wasused   for extrat:tioninstead of ethylether followirlg the   stepsof血ethodI).  

1twasverydi8icultto sepafate t)nund all〔1free   pTOgeSterOne after adding amJlll)niし1m 凱汗ねtein   Ine【11Dし1s A and B,011the cont一礼ry,in metho(lC.  

〟紺.A扉L C廟撤加ク打雨丸い〃(J夕β7).・夕方〜ノクエ   

参照

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