I. 総括研究報告
植物性自然毒による食中毒対策の 基盤整備のための研究
登田美桜
平成30年度厚生労働科学研究費補助金 食品の安全確保推進研究事業
植物性自然毒による食中毒対策の基盤整備のための研究 総括研究報告書
研究代表者 登田美桜 国立医薬品食品衛生研究所安全情報部 第三室長
研究分担者 近藤一成 国立医薬品食品衛生研究所生化学部 部長
研究分担者 南谷臣昭 岐阜県保健環境研究所 食品安全検査センター
専門研究員
研究概要
厚生労働省に届出された食中毒事件において、全体の発生件数及び患者数に占 める割合は数%と少ないが、重篤化しやすく死亡事例の主な原因とされるのが「自 然毒」である。本厚生労働科学研究では、自然毒のうち「植物性自然毒」による食 中毒に焦点をあて、その発生予防と、発生時の原因究明に役立つ研究成果を出すこ とを目的に、下記3つの研究課題を設定した。
・研究課題1. 植物性自然毒の多成分同時分析法の開発
・研究課題2. 食中毒の病因植物種の遺伝子解析による同定法の開発
・研究課題3. 植物性自然毒による食中毒事件に関する情報研究
研究課題 1 及び 2 は、食中毒の発生時に植物性自然毒が原因として疑われた場 合に、中毒残品に含まれる植物種/毒成分を迅速に同定するための分析法の開発に 関する研究である。研究課題3は、植物性自然毒による食中毒の発生状況や発生要 因、中毒症状の傾向を解析し、今後の食中毒の重点的な予防策の検討に資する情報 研究である。
A. 研 究 目 的
厚 生 労 働 省 に 届 出 さ れ た 食 中 毒 事 件 に お い て 、全 体 の 発 生 件 数 及 び 患 者 数 に 占 め る 割 合 が 数%と 少 な い も の 、 症 状 が 重 篤 化 し や す く 死 亡 者 が 報 告 さ れ て い る の が「 自 然 毒 」を 原 因 と す る 食 中 毒 で あ る 。本 研 究 で は 、自 然 毒
の う ち「 植 物 性 自 然 毒 」に 焦 点 を あ て 、 そ れ を 原 因 と す る 食 中 毒 事 件 の 発 生 予 防 と 原 因 究 明 に 役 立 て る こ と を 目 的 と し て 、次 の よ う な 2つ の ア プ ロ ー チ で 研 究 を 計 画 し た 。
食 中 毒 事 件 の 発 生 時 に 植 物 性 自 然 毒 が 疑 わ れ た 場 合 に は 、当 該 地 域 の 地
3 方 衛 生 研 究 所( 以 下 、地 研 )が 中 毒 残 品 の 化 学 的 分 析 と 遺 伝 子 解 析 に よ り 原 因 と な っ た 植 物 種/毒 成 分 の 同 定 を 行 う 。し か し 現 状 で は 分 析・解 析 法 が 十 分 に 整 備 さ れ て お ら ず 、病 因 植 物 種 /毒 性 分 が 多 様 な こ と も あ り 、同 定 が 困 難 あ る い は 同 定 ま で に 長 時 間 を 要 し た と い う 状 況 が 全 国 の 地 研 か ら 報 告 さ れ て い る 。そ の よ う な こ と か ら 、食 中 毒 の 迅 速 な 原 因 究 明 に つ な げ る た め 、全 国 の 地 研 に 設 置 さ れ て い る 分 析 機 器 を 考 慮 し 、 研 究 課 題 1「 植 物 性 自 然 毒 の 多 成 分 同 時 分 析 法 の 開 発 」に お い て は 化 学 分 析 と し て 液 体 ク ロ マ ト グ ラ フ タ ン デ ム 質 量 分 析 計 (LC- MS/MS)に よ る 有 毒 成 分 の 定 量 分 析 法 を 、 研 究 課 題 2「 食 中 毒 の 病 因 植 物 種 の 遺 伝 子 解 析 に よ る 同 定 法 の 開 発 」で は 遺 伝 子 解 析 リ ア ル タ イ ム ポ リ メ ラ ー ゼ 連 鎖 反 応 (PCR) 法 や Loop- Mediated Isothermal Amplification
(LAMP)法 を 応 用 し た 植 物 種 の 同 定 法 の 開 発 研 究 を 行 う こ と に し た 。
一 方 、食 中 毒 の 予 防 策 を 講 じ る に は 、 過 去 に 発 生 し た 植 物 性 自 然 毒 に よ る 食 中 毒 事 件 を 調 査 し 、病 因 植 物 の 摂 取 に 至 っ た 経 緯 な ど の 詳 し い 情 報 を 入 手 し 傾 向 を 知 る こ と が 有 用 で あ る 。厚 生 労 働 省 の 食 中 毒 統 計 資 料 で 公 開 さ れ て い る の は 簡 単 な 概 要 デ ー タ の み で あ り 、発 生 要 因 な ど は 別 途 調 査 す る 必 要 が あ る 。食 中 毒 発 生 時 の 地 方 自 治
体 の 報 道 発 表 資 料 や 学 術 的 に 個 々 の 事 件 報 告 も 発 表 さ れ て い る が 、そ れ ら は 散 在 し て い て 整 理 さ れ て い な い の が 現 状 で あ る 。 そ の た め 、 研 究 課 題 3
「 植 物 性 自 然 毒 に よ る 食 中 毒 事 件 に 関 す る 情 報 研 究 」で は 、植 物 性 自 然 毒 を 原 因 と す る 食 中 毒 事 件 に 関 す る 既 存 情 報 を 調 査・集 約 し て 解 析 し 、重 点 的 に 予 防 す べ き こ と を 助 言 す る と と も に 、今 後 の 食 中 毒 事 件 の 調 査 方 法 及 び 情 報 の 蓄 積 、消 費 者 へ の 注 意 喚 起 の や り 方 に つ い て 検 討 す る こ と に し た 。
B. 研 究 方 法 / 結果 及 び 考 察
各 研 究 課 題 の 分 担 報 告 書 か ら 研 究 要 旨 を 以 下 に 抜 粋 す る 。詳 し い 研 究 方 法 及 び 結 果 、 並 び に 考 察 に つ い て は 、 そ れ ぞ れ の 分 担 報 告 書 を 必 ず 確 認 し て い た だ き た い 。
研 究 課 題 1 「 植 物 性 自 然 毒 の 多 成 分 同 時 分 析 法 の 開 発 」 要 旨 よ り
食 中 毒 事 件 の 発 生 時 に 、 植 物 性 自 然 毒 が 原 因 と 疑 わ れ る 場 合 は 、 地 方 衛 生 研 究 所 ( 地 研 ) が 中 毒 残 品 ( 患 者 が 喫 食 し た も の の 残 品 ) の 化 学 的 分 析 や 遺 伝 子 解 析 を 行 い 、 病 因 植 物 種 や 毒 成 分 の 同 定 を 行 っ て い る 。 中 毒 事 例 の 対 応 を 通 し て 開 発 さ れ た 種 々 の 試 験 法 は 、 こ れ ま で 地 研 の ネ ッ ト ワ ー ク に よ り 情 報 共 有 さ れ て き た 。 そ の 中 で 試 験 法 の 改 良 や 分 析 精 度 の 向 上 が 図 ら れ て き た
が 、 植 物 種 や 調 理 形 態 が 多 様 な 植 物 性 自 然 毒 中 毒 全 般 に 対 応 す る 上 で 未 だ 課 題 が 残 さ れ て い る 。
本 研 究 で は 、 植 物 性 自 然 毒 の 中 毒 に お け る 病 因 植 物 種 を 網 羅 的 に 同 定 す る た め 、 わ が 国 に お い て 過 去 に 発 生 し た 中 毒 事 例 の 傾 向 を も と に 、 中 毒 事 例 の 発 生 頻 度 や 症 状 の 重 篤 度 な ど か ら 、 分 析 対 象 化 合 物 と す べ き 毒 成 分 を 選 定 し 、 地 研 が 広 く 利 用 で き 、 調 理 済 み 中 毒 残 品 に も 適 用 可 能 な 標 準 的 化 学 分 析 手 法 の 確 立 を 目 指 し た 。
平 成30年 度 は 、わ が 国 に お け る 中 毒 事 例 の 傾 向 及 び 市 販 の 標 準 品 の 入 手 可 能 性 を も と に 分 析 対 象 化 合 物 と し て 高 等 植 物 の44成 分 と 毒 キ ノ コ の12成 分 を 選 定 し た 。 さ ら に こ れ ら 成 分 の 定 量 分 析 法 と し て 、 逆 相 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー(RPLC)と 親 水 性 相 互 作 用 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー(HILIC)の2モ ー ド の コ ア シ ェ ル カ ラ ム を 用 い て4種 の 分 離 条 件 を 設 定 し 、液 体 ク ロ マ ト グ ラ フ-タ ン デ ム 質 量 分 析 計 (LC-MS/MS) に よ り 対 象 化 合 物 を 系 統 的 に 多 成 分 同 時 分 析 す る 方 法 を 開 発 し た 。 い ず れ の 条 件 も 分 析 時 間 は20分 /1検 体 で あ り 、 全 て の 対 象 化 合 物 で 定 量 限 界 が10 ng/mL以 下 と な っ た 。 本 法 は 、 迅 速 か つ 正 確 な 分 析 結 果 が 求 め ら れ る 中 毒 の 原 因 究 明 の 現 場 に と っ て 有 効 で あ る と 考 え ら れ る 。
研 究 課 題 2 「 食 中 毒 の 病 因 植 物 種 の 遺 伝 子 解 析 に よ る 同 定 法 の 開 発 - 有 毒 植 物 の リ ア ル タ イ ムPCR法 を 用 い た 検 出 法 開 発 と 妥 当 性 確 認 - 」 要 旨 よ り
植 物 性 自 然 毒 に お い て は 、簡 便 な 分 析 法 で の 喫 食 前 検 査 に よ る 中 毒 防 止 、お よ び 、中 毒 発 生 時 の 原 因 特 定 が 重 要 で あ る 。 原 因 植 物 種 同 定 の た め の 、微 量 食 品 残 渣 か ら 分 析 可 能 な 鑑 別 法 が 検 査 現 場 か ら 強 く 求 め ら れ て い る 。 平 成 29 年 度 ま で に 食 中 毒 時 に お け る 原 因 植 物 の 迅 速 な 特 定 を 目 的 と し て 、ス イ セ ン 、バ イ ケ イ ソ ウ 、イ ヌ サ フ ラ ン 、チ ョ ウ セ ン ア サ ガ オ 、ト リ カ ブ ト に 対 し て 、植 物 バ ー コ ー デ ィ ン グ 領 域 rbcL、matK、psbA-trnH 内 の 特 異 的 配 列 を 用 い た 特 異 性 の 高 い リ ア ル タ イ ム PCR 法 開 発 を 行 い 、 本 検 知 法 の 妥 当 性 確 認 が 必 要 に な っ て い た 。 そ こ で 、本 研 究 で は 、次 の 2つ の 研 究 項 目 に つ い て 検 討 を 行 っ た 。
( 1 ) 有 毒 植 物 リ ア ル タ イ ム PCR 法 の 外 部 機 関 に よ る 妥 当 性 確 認 試 験
有 毒 植 物 リ ア ル タ イ ム PCR 法 の 妥 当 性 確 認 は 、外 部 機 関 と し て 東 京 都 健 康 安 全 研 究 セ ン タ ー 、 北 海 道 立 衛 生 研 究 所 、 大 阪 健 康 安 全 基 盤 研 究 所 、兵 庫 県 立 健 康 科 学 研 究 所 の 4機 関 で 、通 常 使 用 し て い る 方 法・分 析 装 置 を 用 い て 行 っ た 。そ の 結 果 、予 め 求 め た 検 出 限 界 付 近 濃 度 の 標 準 プ ラ ス ミ ド お よ び 抽 出DNA試 料 に お い て す べ て の 機 関 で 検 出 さ れ た 。 ま た 、
5 食 中 毒 事 例 か ら 回 収 さ れ た 食 品 残 渣( 茹 で も の - バ イ ケ イ ソ ウ 、卵 と じ - ス イ セ ン )は 抽 出 操 作 か ら 行 い 、い ず れ も 全 機 関 検 出 で き 、良 好 な 結 果 が 得 ら れ た こ と か ら 、本 法 は 有 毒 植 物 同 定 に 優 れ た 方 法 と し て 活 用 可 能 と 考 え ら れ た 。
( 2 )簡 便 法 と し て の 、有 毒 植 物LAMP 法 の 開 発
LAMP法 開 発 で は 、各 有 毒 植 物 か ら ゲ ノ ム 配 列 解 析 用 にDNAを 抽 出 し て 植 物 バ ー コ ー デ ィ ン グ 領 域 周 辺 の 塩 基 配 列 解 析 を 検 討 し た 。今 後 は 、各 有 毒 植 物 特 異 的 な LAMP 法 用 の プ ラ イ マ ー を 設 計 し て い く 。
研 究 課 題 3 「 植 物 性 自 然 毒 に よ る 食 中 毒 事 件 に 関 す る 情 報 研 究 」 要 旨 よ り
本 研 究 課 題 で は 有 毒 植 物 に 着 目 し 、そ の 摂 取 を 原 因 と す る 食 中 毒 の 発 生 予 防 と 原 因 究 明 に 役 立 て る た め 、国 内 で 発 生 し た 関 連 の 食 中 毒 事 件 に 関 す る 情 報 を 調 査 し た 。対 象 は 、厚 生 労 働 省 監 修( 平 成 10 年 以 前 は 厚 生 省 監 修 ) の 「 全 国 食 中 毒 事 件 録( 昭 和 30 年 ~ 平 成 11 年 版 )」
及 び 厚 生 労 働 省 ホ ー ム ペ ー ジ の 食 中 毒 統 計 資 料 で 公 表 さ れ た 食 中 毒 事 件 の う ち 、「 有 毒 植 物 ( 注 : 公 式 に は 高 等 植 物 で あ る が 、一 般 的 に 理 解 し や す い よ う 本 分 担 報 告 で は 有 毒 植 物 と 呼 ぶ こ と に し た )」を 原 因 と す る 事 件 と し た 。昭 和 34 年 ~63 年 、 平 成 元 年 ~30 年 の 各 30 年
間 、並 び に 直 近 と し て 平 成 26 年 ~30年 の 5 年 間 に 報 告 さ れ た 食 中 毒 事 件 を ま と め 、傾 向 を 比 較 し た 。過 去 に 比 べ る と 直 近 5 年 間 で は ス イ セ ン を 原 因 と す る 食 中 毒 事 件 が 急 増 し 、イ ヌ サ フ ラ ン が 上 位 に 浮 上 し て い る 。イ ヌ サ フ ラ ン の 誤 食 に よ る 食 中 毒 は 摂 取 量 に よ っ て は 致 死 的 に な る ほ ど 重 篤 な 症 状 を 呈 し 、こ こ 数 年 は 毎 年 発 生 が 報 告 さ れ て い る こ と か ら 今 後 特 に 注 意 を 向 け る べ き で あ る 。さ ら に 、食 中 毒 事 件 の 発 生 要 因 を 原 因 植 物 ご と に ま と め る と と も に 、ス イ セ ン の 葉 、 バ イ ケ イ ソ ウ 類( バ イ ケ イ ソ ウ 又 は コ バ イ ケ イ ソ ウ )及 び ハ シ リ ド コ ロ の 摂 取 が 原 因 と な っ た 食 中 毒 事 件 に つ い て は 、報 告 さ れ た 症 状 及 び 患 者 数 に 関 す る 情 報 を 調 査 し 、植 物 ご と に 各 症 状 の 患 者 数 及 び 発 症 率 を ま と め た 。
有 毒 植 物 に よ る 食 中 毒 の 発 生 予 防 に は 消 費 者 へ の 知 識 普 及 や 注 意 喚 起 に 効 果 が あ る が 、他 の 食 品 安 全 の 課 題 と 同 じ よ う に 広 く 周 知 す る こ と が 難 し い 。本 研 究 課 題 で は 、過 去 に 発 生 し た 食 中 毒 事 件 に 関 す る 情 報 の 研 究 を 継 続 的 に 行 う と と も に 、消 費 者 へ の 情 報 提 供 の あ り 方 に つ い て も 検 討 し て い く 。
D. 結 論
植 物 性 自 然 毒 に よ る 食 中 毒 に つ い て 、 発 生 時 の 迅 速 な 原 因 究 明 に 役 立 つ 病 因 植 物 種/毒 成 分 の 同 定 法 の 開 発 研 究 ( 研 究 課 題 1、2) 及 び 発 生 の 予 防 策 の 検 討 に 資 す る 情 報 研 究( 研 究 課 題 3)を 計 画
し 、開 始 し た 。最 終 的 に 、地 研 で 広 く 利 用 可 能 な 病 因 植 物 種/毒 成 分 を マ ル チ に 同 定 で き る 標 準 法 が 確 立 さ れ れ ば 、 散 発 的 に 発 生 す る た め 対 応 に 混 乱 を 生 じ や す い 植 物 性 自 然 毒 に よ る 食 中 毒 に 対 し て 、 地 研 の 検 査 技 術 を 一 定 の 水 準 に 保 つ こ と が で き 、 発 生 時 の 迅 速 な 原 因 究 明 に つ な が る こ と が 期 待 さ れ る 。 さ ら に 食 中 毒 事 件 の 情 報 研 究 は 、 今 後 の 予 防 策 の 検 討 に 有 用 な 科 学 的 根 拠 を 提 供 で き 、 予 防 策 の 内 容 を 焦 点 が 絞 ら れ た 効 果 的 な も の に で き る と 期 待 さ れ る 。 本 年 度 は 3 年 計 画 の 1 年 目 で あ る た め 本 研 究 報 告 は 途 中 段 階 で の 報 告 で あ る が 、 各 課 題 が 目 指 す 目 的 に 向 か っ て 着 実 に 結 果 を 出 し つ つ あ る 。 次 年 度 も 同 じ 方 向 性 で 研 究 を 継 続 す る 予 定 で あ る 。
E. 研 究 発 表 1. 論 文 発 表
1) Takabatake, R., Kagiya, Y., Minegishi, Y., Futo, S., Soga, K., Nakamura, K., Kondo, K., Mano, J., Kitta, K. Rapid screening detection of genetically modified crops by loop-mediated isothermal amplification with a lateral flow dipstick. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 66, 7839- 7845, 2018.
2) Soga, K., Nakamura, K., Kishine, M., Takashima, Y., Miyahara, T., Kimata, S., Mano, J., Takabatake, R., Ozeki, Y., Kitta, K., Kondo, K.
Studies on the detection of maize genomic DNAs in cornflakes using real-time PCR. Bulletin of
National Institute of Health Sciences, 136, 31-39, 2018
邦 文 ( リ ア ル タ イ ム PCR を 用 い た コ ー ン フ レ ー ク 中 の ト ウ モ ロ コ シ ゲ ノ ム DNA検 出 に つ い て : 曽 我 慶 介 、 中 村 公 亮 、 岸 根 雅 宏 、 高 嶋 康 晴 、 宮 原 平 、 木 俣 真 弥 、 真 野 潤 一 、 高 畠 令 王 奈 、 小 関 良 宏 、 橘 田 和 美 、 近 藤 一 成 )
3) 南 谷 臣 昭 、 登 田 美 桜 、 大 城 直 雅 : 質 量 分 析 に よ る 自 然 毒 食 中 毒 の 理 解 課 題 と 展 望 ,質 量 分 析, 67, 71-77, 2019
2. 学 会 発 表
1) Kondo, K., Kato, R., Sakata, K., Nakamura, K. Mitochondria- resident non-releasable AIF mutant may regulate gene expressions related to cell
differentiation and proliferation, 2018 ASCB EMBO Meeting, San Diego, CA, USA, 2018年 12 月 2) Nakamura, K., Kimata, S., Soga,
K., Ohmori, K., Kishine, M., Mano, J., Takabatake, R., Kitta, K., Kondo, K. Effect of food additives in processed foods on endogenous gene detection, 132nd AOAC Annual Meeting &
Exposition, Toronto, Canada, 2018 年 8月
3) 曽 我 慶 介 、 中 村 公 亮 、 岸 根 雅 宏 、 高 嶋 康 晴 、 宮 原 平 、 木 俣 真 弥 、 真 野 潤 一 、 高 畠 令 王 奈 、 小 関 良 宏 、 橘 田 和 美 、 近 藤 一 成 : リ ア ル タ イ ム PCR を 用 い た コ ー ン フ レ ー ク 中 の ト ウ モ ロ コ シ ゲ ノ ム DNA 検 出 法 の 検 討 、 第 54回 全 国 衛 生 化 学 技 術 協 議 会 年 会 、 神 奈 川 、2018年 11月
4) 菅 野 陽 平 、 青 塚 圭 二 、 坂 田 こ ず え 、 中 村 公 亮 、 鈴 木 智 宏 、 近 藤 一 成 :
7 LAMP法 を 用 い た 有 毒 キ ノ コ 迅 速 判 別 法 の 構 築-ツ キ ヨ タ ケ と ク サ ウ ラ ベ ニ タ ケ の 同 時 検 出 に 関 す る 検 討 -、 日 本 食 品 化 学 学 会 第 24 回 総 会 ・ 学 術 大 会 、 東 京 、2018年 5月 5) 木 俣 真 弥 、 中 村 公 亮 、 石 垣 拓 実 、 曽
我 慶 介 、 岸 根 雅 宏 、 高 畠 令 王 奈 、 橘 田 和 美 、 近 藤 一 成 : ダ イ ズ に お け る ゲ ノ ム DNAの 位 置 に 依 存 し た DNA分 解 度 の 違 い 、 日 本 食 品 化 学 学 会 第 24 回 総 会 ・ 学 術 大 会 、 東 京 、2018年 5月
6) 坂 田 こ ず え 、 木 村 圭 介 、 後 藤 操 、 菅 野 陽 平 、 野 村 千 枝 、 加 藤 怜 子 、 近 藤 一 成 : リ ア ル タ イ ム PCRを 用 い た 有 毒 植 物 検 査 法 の 妥 当 性 確 認 、 日 本 食 品 衛 生 学 会 第 114 回 学 術 講 演 会 、 広 島 、2018年 11 月
7) 加 藤 怜 子 、 坂 田 こ ず え 、 近 藤 一 成 : Apoptosis-inducing factorの
L101/103G変 異 体 は 細 胞 増 殖 と 神 経 突 起 形 成 を 阻 害 す る 、 第 41回 日 本 分 子 生 物 学 会 年 会 、 横 浜 、2018年 11月
8) 南 谷 臣 昭 、 谷 口 賢 、 登 田 美 桜 : 高 等 植 物 に よ る 食 中 毒 事 例 に 対 応 す る た め の 一 斉 試 験 法 の 検 討 、 平 成 30年 度 地 方 衛 生 研 究 所 全 国 協 議 会 東 海 ・ 北 陸 支 部 衛 生 化 学 部 会 、 岐 阜 、2019 年 1月
9) 登 田 美 桜 : 自 然 毒 食 中 毒 に 関 す る 最 近 の 話 題 、 平 成 30年 度 地 方 衛 生 研 究 所 全 国 協 議 会 近 畿 支 部 自 然 毒 部 会 、 神 戸 、2018年 11 月
3. 市 民 向 け 発 表 会
1) 登 田 美 桜 :「 有 毒 植 物 に よ る 食 中 毒 に つ い て 」、 平 成 30年 度 長 崎 県 食 品 の 安 全 ・ 安 心 リ ス ク コ ミ ュ ニ ケ ー シ ョ ン 、2018年 10 月 、 長 崎 県 食 品 安 全 ・ 消 費 生 活 課
2) 登 田 美 桜 :「 有 毒 植 物 に よ る 食 中 毒 に つ い て 」、 平 成 30 年 度 長 崎 県 食 品 の 安 全 ・ 安 心 リ ス ク コ ミ ュ ニ ケ ー シ ョ ン 、2018年 11 月 、 長 崎 県 食 品 安 全 ・ 消 費 生 活 課
3) 南 谷 臣 昭 、 登 田 美 桜 :「 野 草 や 山 菜 な ど の 自 然 毒 に つ い て 」、 平 成 31 年 3月 食 品 安 全 セ ミ ナ ー 、2019年 3月 東 海 農 政 局 消 費 ・ 安 全 部 消 費 生 活 課
4. 行 政 関 係 者 向 け 説 明 会
1) 登 田 美 桜 :「 有 毒 植 物 に よ る 食 中 毒 の 最 近 の 傾 向 」、 平 成 30 年 度 食 品 安 全 に か か る 科 学 セ ミ ナ ー 、2018 年 10月 、 農 林 水 産 省 消 費 ・ 安 全 局
F. 知 的 財 産 権 の 出 願 ・ 登 録 状 況 特 に な し