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A novel adherent culture method of glioblastoma stemlike cells using type 1 Collagen

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Academic year: 2018

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学 位 論 文 審 査 の 概 要

博士の専攻分野の名称 博士(医 学) 氏 名 茂木 洋晃

主査 教授 田中 伸哉

審査担当者 副査 教授 近藤 亨

副査 教授 松野 吉宏

副査 教授 寳金 清博

学 位 論 文 題 名

A novel adherent culture method of glioblastoma stem-like cells

using type 1 Collagen

(コラーゲン1を用いた膠芽腫幹細胞の接着培養法の新規開発に関する研究)

発表内容はグリオブラストーマにおける癌幹細胞接着培養法の確立に関する研究である。

今回、発表者は特にコラーゲン 1を用いた培養法の検討を行っている。これまで癌幹細胞の培

養に関しては、 無血清培地にいくつかの増殖因子を加え球体(sphere)を形成させることで幹細胞

を濃縮させる方法が一般的であった。 しかしsphere 形成法では幹細胞を未分化状態に維持でき

ず、 また内部が壊死することがあり、問題であった。 これらの現象は幹細胞の未分化維持に働

く各種因子や幹細胞機能を維持する各種栄養因子が sphere 内部に浸透できないために生じると

考えられる。 これはin vitroにおける抗腫瘍実験に際しても均等な薬剤への暴露が困難である

点などから大きな障壁になり、接着培養系における癌幹細胞増殖法の確立が重要と考えられてお

り、その培養法に関して検討している。

U87MG、グリオブラストーマの primary culture を検討したが、CD133 陽性細胞は壊死組織周囲

と腫瘍血管周囲に存在する type 1 collagen に接するように局在することがわかった。Col/SFM

で培養した U87MG と膠芽腫細胞において CD133 や Nestin の発現増強が認められた。また、Col/SFM

で10 回以上継代した膠芽腫細胞はNon-coat/SFM で培養することにより高率にSphere 形成を認

め、幹細胞性を維持していることが示唆された。免疫不全マウスへの移植でCol/SFM にて培養し

た膠芽腫細胞は1万個の移植でも腫瘍形成を認め、癌幹細胞培養にコラーゲン1が有用であると

の報告であった。

主査・副査よりコラーゲン 1がどのように幹細胞性の維持に関与しているかなど複数の質問・

指摘があった。その一部は今回の研究では確認できておらず、今後の課題となると考えられた。

この論文の基礎論文は Neuro-oncology に投稿中であるが、癌幹細胞をターゲットとした drug

screening の実験系を確立するうえで布石となるデータを提供しうると考えられ、審査員一同は

これらの成果を評価し、大学院課程における研鑽や取得単位なども併せ、申請者が博士(医学)の

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