青森県環境保健センター所報No5

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平成 5 年度の研究報告をお届けいたします。

報文は 1 2 編で、その内訳は微生物・理化学関係各 2 編、公害関係 7 編、放射能関係 1 編となっています。

公害、放射能のフィールド調査、食品残留農薬試験など日常のルーチンワーク及び突 発的に発生する食中毒検査に追われる中、職員がそれぞれの関わりの中から課題として

とらえ、まとめあげたものでありますのでご一読を賜れば幸いに存じます。

当所も発足以来 5 年が経過しようとしていますが、関係各位のご指導のもと、遺伝子 に着目した基盤的、先端的な科学技術への取り組み、また、昨年 9 月には、イタリアで 開催されたエルシニア国際シンポジウムにおいて研究成果を発表するなど、徐々にでは ありますが研究分野における進展が図られつつあります。

保健医療、福祉、生活衛生、環境問題などに対する対応が大きな転換の時期にあるい ま、社会のニーズに即した学術成果の達成に向けて研究施設の整備、人材の導入、産学 官の研究交流の推進など研究環境の充実に取り組んでいく所存でありますのでご指導、

ご鞭提を賜れば幸甚に存じます。

平成 7 年 3 月

青森県環境保健センター

所 長 内 山 日 出 夫

日 次

I 報 文

Epidemiology of 

Y e r s i n i a   e n t e r o c o l i t i c a  

serovar 0: 

8 

infection  in  the  Tsugaru area  YoshimItsu  OHTOMO， Yasunobu TOYOKA W A， Masaaki SAITO， 

Mikako Y AMAGUCHI， Seiji  KANEKO and Tsutomu MARUY AMA ...  1 

エンテロウイルス感染によるアポトーシスの誘導

三 上 稔 之 木 村 淳 子 佐 藤 允 武 畑山一郎...・

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・ . . . . . ・

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・ . . . . . ・

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・..………… 5

マウス肝化学発癌における

GlutathioneS‑transferase 

I I 変異巣発現のグリコーゲンによる抑制 三 浦 啓 徳 木 村 淳 子 高 橋 政 教 高 谷 芳 明 内 沢 秀 光

松 江

戸 秀 隆 畑山 ‑郎…...・

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・ . . . . . ・

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・ . . … . . . ・

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・ . . … … . . . ・

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・ . . . . . ・

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・ . . … 8

青森県の温泉について ( V I )

高 橋 政 教 桶 田 幾 代 野 村 真 美 小 林 英 一 村 上 淳 子

平 出 博 昭

秋山由美子 木 村 淳 子 小 林 繁 樹 石 塚 伸 一 1 2  

農業集落排水の実態調査

WQI

による水質評価一

大久保英樹 三上 石 塚 伸 一 阪 崎 俊 璽 工 藤 真 哉

工 藤 俊 明

早 狩 敏 男

坂 上 素 ‑ 高 柳 和 弘 2 0  

GC/MS

による環境水質・底質中有機化合物の検索

石 塚 伸 一 … ・ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 6  

黒石扇状地における地下水質の地球化学的検討

石 塚 伸 一 工 藤 真 哉 佐藤真理子...・

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・ . . … . . . ・

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・ . . … … … . . . ・

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・..……… 3 6

六ヶ所村における陸水中トリチウム濃度調査( 1  ) 

外 崎 久 美 子 工 藤 英 嗣 安 達 大 介 木村秀樹....・

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・ . . . . ・

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・‑………

45

八戸市における環境大気中有機塩素化合物濃度 拡散型長期暴露サンプラーによる濃度調査一

岡

典子 工 藤 精 一 中村哲夫…...・

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・ . . . . . ・

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・ . . … … . . . ・

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・ . . … . . . ・

H

・ . . …

51

名久井岳における酸性雨と沢水の調査

工 藤 隆 治 野田正志…...・

H

・ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

58 

気象条件による降水中化学成分の特性 一青森県南地域における事例一

工 藤 精 一 野 田 正 志 岡 典子 中村哲夫...・H ・..…...・H ・..………...・H ・..

6 6  

青森県南地域河川の水質汚濁評価(第 1 報) 一馬淵川水系、奥入瀬川水系‑

神 正 志 早狩敏男小山田久美子柴田幸伸工藤精一...・H ・...・H ・...・H ・..…...・H ・.. 73 

I I

ノ ー ト

青森市の海外旅行者に発生したコレラの一事例

大 友 良 光 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

79 

青森県における貝毒調査結果(平成 5 年度)

三 浦 啓 徳 三 上 浩 二 古 川 章 子 高橋政教……...・H ・...・H・..………...・H ・..

8 1  

青森空港騒音調査結果について

今

武純

松尾 章 松山 恒樹・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

8 4  

正月中における八戸市の大気汚染状況

坂 上 素 一 秋田谷礼治 工 藤 隆 治 坂本正昭…...・H ・..…...・H ・...・H・...・H ・..91 

E  他誌投稿抄録

・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・

9 3  

百

学会発表抄録

・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 97 

CONTENTS 

I 

Original  Articles 

Epidemiology of 

Y e r s i n i a   e n t e r o c o l i t i c a  

Serovar 0: 

8 

Infection  in  the  Tsugaru area 

Yoshimitsu OHTOMO， Yasunobu TOYOKAWA， Masaaki SAITO， Mikako YAMAGUCHI，  Seiji  KANEKO. and Tsutomu MARUY AMA...・H ・..…...・H ・..………...・H ・..…...・H ・...・H ・.. 1 

Induction of Apoptosis by Infection  of Enterovirus 

Toshiyuki MIKAMI， Junko KIMURA， Nobutake SATOH and Ichiro  HATA Y AMA ...  5 

Suppression of Glycogen on the  Induction of Glutathione S‑transferase 

I I  

A

1 t

ered Foci during  Chemical Hepatocarcinogenesis  of Mice  Hironori  MIURA， Junko KI恥1URA，孔1asanoriT AKAHASHI，  Yoshiaki TAKAYA， Hidemitsu UCHIZAWA， Hajime MATSUE， 

Hidetaka ICHINOHE and Ichiro  HA T A Y AMA ... ...…・・・・・・・・・・・・ 8 

Hot Springs  in  Aomori Prefecture 

( V I )  

Masanori TAKAHASHI， Ikuyo OKETA， Masami NOMURA， Eiichi  KOBA Y ASHI  Atsuko恥1URAKA島11，Hiroaki HIRAIDE， Yumiko AKIYA孔1A，Junko KI恥1URA

Sigeki KOBA Y ASHI and Shin‑ichi  ISHIZUKA  ...  12 

Field  Study on Agricu

1 t

ure  Village Waste Water 

‑Evalaution of Water Quality by WQI‑

Hideki OHKUBO， H吋imeMIKAMI， Shin‑ichi  ISHIZUKA， Shunji  SAKAZAKI，  Shinya KUDO， Toshiaki  KUDO， Toshio HA Y AKARI， Motoichi SAKAGAMI 

and Kazuhiro T AKA Y ANAGI...  20 

GC/MS Survey on Organic Substances  in  Environmental Water and Sediment 

Shin‑ichi  ISHIZUKA ...  26 

Geochemical Study on Groundwater in  Kuroishi Alluvial  Fan 

Shin‑ichi  ISHIZUKA， Shinya KUDO and Mariko SATO ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 36 

Tritium Concentrations  of Surface Water in  Rokkasho Village  (1) 

Kumiko TONOSAKI

， 

Hideshi KUDOH

， 

Daisuke ADACHI and Hideki KIMURA ...  45 

Concentration of Chlorinated Hydrocarbons in  Environmental Atmosphere in  Hachinohe City  Investigation  of Pollutant  with Passive  Sampler for  Long‑term 

Noriko OKA， Seiichi  KUDO and Tetsuo NAKAMURA  ...  51 

S t u d y  on Acid R a i n  and S t r e a m  Water i n   Mount Nakui 

R y u j i  KUDO a n d  M a s a s h i  NODA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .   5 8  

C h a r a c t e r i s t i c s   o f  Chemical Components i n   P r e c i p i t a t i o n   d e p e n d i n g  on Weather C o n d i t i o n s  

一

CaseS t u d y  i n   t h e   Southem D i s t r i c t   o f  Aomori P r e f e c t u r e ‑

S e i i c h i   KUDO

， 

M a s a s h i  NODA

， 

N o r i k o  OKA

， 

R y u j i  KUDO a n d  T e t s u o  NAKAMURA . . . . . .   6 6  

E v a l u a t i o n  o f  Water P o l l u t i o n  i n   Southem R i v e r  i n   Aomori P r e f e c t u r e   ( 1 )   Mabechi R i v e r  and O i r a s e  R i v e r  Systems‑

M a s a s h i  J I N

， 

T o s h i o  HA  Y  AKARI

， 

K u r n i k o  OY  AMADA

， 

Y u k i n o b u  SHIBATA a n d  S e i i c h i   KUDO … . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .   7 3  

I I   Notes 

R e p o r t  on C h o l e r a  Broken o u t  i n   O v e r s e a s  T r a v e l l e r  L i v i n g  i n   Aomori C i t y  

Y  o s h i r n i t s u   OHTOMO 

・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・…・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・F・・・・・・・・・・・・・・・・・

7 9  

F i n d i n g  on S h e l l f i s h   P o i s o n  i n   Aomori P r e f e c t u r e   ( 1 9 9 3 )  

H i r o n o r i   MIURA

， 

K o h j i  MIKAMI

， 

A k i k o  KOGAWA a n d  M a s a n o r i  T A K A H A S H I . . . . . . . . . . . .  

81 

R e s e a r c h  o f  J e t p l a n e   N o i s e  i n   Aomori A i r p o r t  

T a k e z u r n i  KON

， 

A k i r a  MATSUO a n d  K o h k i  M A T U Y A M A . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .   8 4  

A i r  P o l l u t i o n  d u r i n g  t h e   New Year i n   H a c h i n i h e  C i t y  

M o t o i c h i  SAKAGAMI ，  R e i j i   AKITA  Y  A ，  R y u j i  KUDO a n d  M a s a a k i  SAKAMOTO  . . . . . . . . .  

91 

m  Summaries o f  Other P u b l i c a t i o n s .

一一............... ...…ー・……・・・ー・…一...…ー・……一・…一......… 

9 3  

N  A b s t r a c t s  o f  P r e s e n t a t i o n  i n   S o c i e t y  Meetings  .  .  .  .  . 

.…一...…・・・ー・…・・・ー・…・・・・・・…ー・…一....

9 7  

I 報 文

青森県環境保健センター研究報告 5， 1 ‑ 4， 1994 

E p i d e m i o l o g y  o f   Y e r s i n i a  e n t e r o c o l i t i c a   S e r o v a r  0 :   8  I n f e c t i o n   i n  t h e  T s u g a r u  Area 

Yoshimitsu OHTOMO 1 ，Yasunobu TOYOKA W A  1 ，Masaaki SAIT0² ，Mikako YAMAGUCHI² ，  Seiji KANEK0³ and Tsutomu MARUYAMA 1 

From January 1987 to January 1994， Yersinia^目enterocoliticaserovar 0: 8 organisms  were isolated from 31 patients exhibiting symptoms of  mainly fever， diarrhea， and abdominal pain in 30 sporadic cases in the Tsugaru area of Aomori prefecture， Japan.  Of all isolates， twenty‑eight  were from stool， two from appendix， and one from a hip ulcer.  These strains belonged to  biovar(Wauters) 1B，  harboring 42 megadalton  virulence plasmid， positive for autoagglutination and calcium dependency. Twenty cases occurred in  summer. Twenty‑nine were simple case  and one(two patients) was intrafamiliare. Seventeen patients were male， 28 were under 15 years of age and three were over a 45 years. One  patient handled raw pork and four ate cooked pork. Most of the patients were living in mountainous areas and kept dogs. Infectious sources were  unknown， but it  would be supposed that raw pork， dogs， wildlife animals， and stream water might be contaminatsd by pathogenic Y  enterocolitica serovar 0: 8. 

Key words : Yersinia enterocolitica， 

Yerdinia enterocolitica serovar  0: 8，  epidemiology， virulence plasmid 

1. Introduction 

Until now， Yerusinia enterocoliticαserovar  0: 8 strain  from human infection has been found only in limited areas in  North America. Isolates were recently reported， houever， in  J apan 1 . 2 i and Europe 3 i . In addition， it  was demonstrated that  the Y.  enterocoliticαserovar 0: 8 strain found in the Tsugaru  area of Japan was harboring the same virulence plasmid as the  American strain"  . In the present study， we describe the  characterization of Y. enterocolitica serovar  0: 8 strain from  humans， which was detected in  the Tsugaru area between  January 1987 to  January 1994(Fig.l). Further， we discuss  about the cause of infection on the base of the clinical aspects  and life‑styles of the patients. 

15 

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1987  1988  1989  1990  1991  1992  1993  1994  (Year)  (Jan.)  Fig.l  Annual number of patients infected with 

Y. enterocolitica 0: 8 infection 

2.  Materials and Methods 

Thirty‑one isolates of Y.  enterocolitica serovar  0: 8 strain  were examined. Twenty‑eight were from stool， two from  appendix， and one from a hip ulcer (Table 1).  Biochemical  characterization was determined with API20E(bioおfとrieux‑ Vitek Japan). Biotyping and pyrazinamidase activity(Pyz) 

Table 1 Source of Y. enterocolitica 0: 8 isolates  Source  Number 

28  2  1  31  Feces 

Contents in appendix  Hip ulcer 

Total 

were carried out as described previously 4， 5 i • All strains were  serogrouped by slide agglutination with  0:7， 0:8， 0:19  antisera  prepared  by us.  Calcium  dependency  and  autoagglutination were determined as reported previously 6，7) 

The detection of virulence plasmid and digestion with  restriction enzyme Bam H1 were carried out according to  Kaneko 8 I • PCR method was performed to amplify ai 1‑ chromosomal gene 9 i . 

1 : Aomori Prefectural Institute of Public Health and Environment  2 : Adult Diseases Examination Center， Hirosaki Medical Association  3 : The Tokyo孔1etropolitanResearch Laboratory of Public Health  4 : The Institute of Public Health 

‑1‑

Clinical Symptom and Clinical Exα，mmatlOn 

The main clinical symptom of the 31 patients was severe  pain around naval or under the right abdominal region.  Twenty‑nine had a prolonged fever ranging around 39⁰C 

Degree of fever between 31 patients  Body temperature 

(OC)  Normal temperature 

38.0‑38.4  38.5‑38.9  39.0‑39.4  39.5‑39.9  40.0‑40.4  40.5‑40.9 

No. of patients  つω Q u q J

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Table 4  3.  Results 

Phenotypic and Virulence Characterization 

All isolates were Y. enterocolitica serovar  0: 8 biovar 1B  with negative esculin and inactive pyrazinamidase(Pyz‑).  Except for two isolates from feces and hip u1cer， 29 of 31  isolates exhibited ca1cium dependency and autoagglutination  at  37⁰C， and harbored 42 MDa of virulence plasmid， which  shows an identical pattern in Bam H1 digestion. The ail‑gene  was detected in all isolates(Table 2). 

Virulence marker tests of Y. enterocoliticα0:8  strains isolated 

Table 2 

日 ル

RmpL 

J b p  

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fl・‑A

Vd u 

nra Virulence  plasmid  No. of  Autoagglu‑Ca1cium 

strains  tination  dependency 

(Table 4). Diarrhea， dehydration and nausea were recorded in  27， 10， and 10 patients， respectively (Table 5 ).  Some patients  Circumstance olOccurrence 

Of 31 patients， 29 were sporadic， while one case involving  two patients occurred in  the same family(Table 3).  In 28 of 

+  +  + 

+  + 

29  2 

The main clinical symptoms of 31 patients  Table 5 

No. of patient  ハU Q U

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Symptoms  Mode of Y. enterocolitica 0:8 infection 

Table 3 

No. of cases  Mode 

29  Sporadic 

l( 2 patients)  Familial 

30(31 patients) 

the patients outbreaks occurred between April and October，  and the peak was July(Fig.2). Seventeen patients were male， 

Total 

who changed from their primary hospital to another could not  be followed their progress.  Blood incubation was not  performed， although septicemia suspected in some patients.  Of 24 patients， the number of white blood cell in  19 patients  was increased to more than 10，000/mm 3 (Table 6). Erythrocyte 

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n=31 

Increase of number of white blood cell  (WBC)  Table 6 

No. of patients  WBC (No./mm³⁾ 

28 patients were under 15 years old and three were over 45 

7，000‑く10，000 10，000く15，000 15，000‑く20，000 20，000く25，000 25，000‑く30，000

Total  n=31 

/ 円

10‑15  40<  (Age)  years old(Fig. 3 ). 

FhdハU

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⁵ 

sedimentation rate (mm/hr) varied among patients (11 were  21・38，4 were 73・76)，as shown in Fig. 4 . C‑reactive protein 

(Normal range 4，000‑9，000) 

‑2 

5‑9 

Fig. 3 Age‑dependent incidence of  Y. enterocolotica 0: 8 infection 

<1  1‑4 

Epidemiological aspect on the infectious route  of Y. enterocolitica 0: 8 

Table 9 

No. of patients having the  habitat/  No. of patients in each area 

6/14  1/13  Residential 

area  Mountain area  Urban area  Habitat 

oflife  Drinking  mountam stream  water 

n=20 

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Normal  (5‑7)  19 

9(Dog)/14  2(Dog)/3  l(vetenarian's child)/13  Mountain area 

Plain area  Ulban area  Keeping pets 

60  69 

Fig. 4 Erythrocyte sedimentation rate (ESR) in patients  50 

59 

4.  Discussion  was detected in all  20 patients examined(Table  7). All 

patients were treated with combinations of antibiotics such as 

fosfomycin， aspoxici1lin and cefac1or(Table  8).  Of 31 isolates of Y.  enterocolitica sevrovar 0: 8 strain  from human， two did not harbor virulence plasmid. However，  the two isolates (feces and hip ulcer) were both Pyz ‑and ait  Suggesting that the virulence plasmid was lost during the  isolation of the bacteria at  37⁰C， as this condition is  inadequate for maintaining the plasmid. Furthermore， in the  case of hip ulcer， the loss may be ascribed to the exposure to  body temperature for a long time. The infection source is  not  c1arified， except in  the case of raw porkい

isolated the strain from the intestinal contents of healthy  swine slaughtered in Aomori prefecture (unpublished data)，  pork may be one of foods contaminated with viru1ent  0: 8  stram. 

Since we have  Level of C‑reactlve protein (CRP) in patients 

No. of patients  2  1  4  1  12  20  CRP 

2+ 

3十

4+ 

5+ 

6+ 

Total  Table 7 

It has been reported that viru1ent 

0  : 

8 strains were isolated  from free‑living rodents in Japan 10 i • Accordingly， it  is  supposed that the infection to humans may be attributable to  drinking water in mountain streams or springs， contaminated  with feces of wild animals carrying the virulent 0: 8 strain.  In addition， it  is  likely that pets may be one of the reservoirs  of virulent 0: 8 strain， because a veterinarian' s daughter was  infected. We are now attempting to c1arify the pathway of  infection by the  strain  in  the  Tsugaru area through  epidemiological research. 

Antibiotics used for treatment  Antibiotics 

Fosfomycim  Penicillin  Cefem  Am ynogl ycosid  Piridoncarbonic asid 

恥1acroride Tetracyc1ine  Oxacefem 

pat1ents  16 

8  7  4  4  3  3  1  Table 8 

5.  Acknowledgments  We thank Dr. 1 

Public Health and Environment， for reading the manuscript.  This work was supported in part by a grant from the Daido  Life Welfare Foundation， Osaka. 

6.  References 

Ichinohe， H. et  al.  First  isolation  of Yersinia  enterocolitica serotype 

0  : 

8 in Japan. 1. Clin.Microbiol.， 

29， 846‑847， 1991. 

2)  Saito，M.et al  : Yersinia enterocolitica serotype 0: 8  infections in the Hirosaki district in Aomori prefecture 

‑3‑

Ecological Aspect 

patients were diffusely distributed in the Tsugaru area， but  were in the vicinity of Hirosaki city， Aomori prefecture.  Fourteen patients were living in mountain areas， 13 were  urban， three resided in plains， and one was near the seashore.  Usually， patients had utilized tap water as drinking water.  However， six patients living in  mountain areas often drunk  mountain stream water. Further ， it  should be noted that one  patient in the urban area was a four year old daughter of a  veterinarian(Tab1e 9). 

from 1984 to 1991. J.Japn.Assoc.Infect.Dis.， 68，960  965， 1994. 

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5) Kandolo，K. et  al  : Ryrazinamidaze activity in Yersinia  enterocolitica and related organisms. J.Clin.  Microbiol.， 

21， 980‑982， 1985. 

6) Higuchi，K. et al : Studies on the untrition and physiology  of Pasteurella pestis.  VI.  A differential plating medium  for the estimation of the mutation rate of avirulence. 

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7)  Laird，W.J.et al  : Corelation of autoaggulutination and  virulence of Yersiniae. J.Clin.Microbiol.， 11，430‑

432，1980. 

8)  Kaneko，S.et al  : Relationship between the presence of 44  megadalton plasmid and calcium dependency or  autoagglutination to serotype 03 strains of Yersinia  enterocolitica. Jpn.J.Vet.Sci.， 48， 205‑210， 1986.  9) Wre孔B.W.etal  : Detection of pathogenic Yersinia 

pseudotuberculosis by the polymerase chain reaction.  Lancet， 336， 693， 1990. 

10)  Iinuma，Y.et al  : Isolation of Yersinia enterocolitica  serovar 0: 8 from free‑living small rodents in Japan.  J.Clin.Microbiol.， 30，240‑242.，1992. 

津軽地区における Y e r s i n i ae n t e r o c o l i t i c a   血清型 0:8 菌感染症の疫学

大 友 良 光 豊 川 安 延

I

粛藤雅明

2

山口美佳子

2

金子誠二

3

丸山務

4

1987年1月から1994年l月にかけて、青森県津軽地区で発熱、下痢、腹痛等の症状を呈する30例の患者31名からY.enterocolitica  血清型0:8菌が分離された.分離材料は糞便が28検体、虫垂内容物が2検体、腎部皮膚漬傷がl検体であった.分離菌は生物型 がWautersのlB型，自己凝集性とカルシウム依存性が陽性，そして42メガダルトンの病原性プラスミドを保有していた.20例は 夏期に発生した.29例は単独発生例で I例(患者2名)は家庭内感染例であった.患者の性別は17名は男であり，年齢は15才以 下が28名、 45才以上が3名であった.感染原因はすべて不明であったが， 4名が発病前に生のブタ肉に接触したり，その調理品を 摂食していた.また，患者の多くは山間部あるいは山地近接地に居住し，それらはペットとしてイヌを飼育している者が多かった.

本菌の感染源としてブタ肉、イヌ，野生動物 そして沢水の関与が推測された.

青森県環境保健センター

2 :弘前市医師会立成人病検診センター 3 :東京都立衛生研究所

4 国立公衆衛生院

4‑

青森県環境保健センター研究報告

5

， 

5  ‑7

， 

1 9 9 4  

工ンテロウイルス感染によるアポ卜ーシスの誘導

三 上 稔 之 木 村 淳 子 佐 藤 允 武 畑 山 一 郎

6

種のエンテロウイルスによるアボートシス誘導能を感染細胞

DNA

の断片化を指標として検討した。エコー

9

，ポリオウイルス III，エンテロウイルス71，コクサツキー

B 5

，コクサツキー

A l 0

，コクサツキー

A 1 6

は，いぜれも

GMK

細胞にアポトーシスを誘導

した。この結果は，エンテロウイ♂ルス属に共通したアポトーシス誘導機構の存在を示唆する。

K e y  w o r d s  :  e n t e r o v i r u s

， 

a p o p t o s i s

， 

c y t o p a t h i c  e f f e c t  

1 

. は じ め に

細 胞 死 に は ネ ク ロ ー シ ス ( 壊 死 ) と ア ポ ト ー シ ス

( A p o p t o s i s  

:自滅死)の2種類の様式が知られている1)。 ネクローシスは細胞群が外的要因である火傷や毒物によ る損傷により死滅するのに対し，アポトーシスの場合は 基本的には単一細胞の死であり，ネクローシスとは異な り蛋白合成を伴うO また 細胞内外の刺激によるシグナ ル伝達機構を介したエンドヌクレアーゼの活性化につづ く核の断片化を特徴とする九発生学的には，アポトー シスは細胞に内在するプログラムが作動することによる 死，

P r o g r a m m e d  c e l l  d e a t h

で、あることが明らかにされて いる21 アポトーシスは電子顕微鏡で核の断片化として 形態的に観察されるほか，電気泳動により

DNA

の規則 的なラダーとして確認できるO

アポトーシスについてはここ数年，発生学，免疫学，

血液学，内分泌学，腫傷学，神経学など広範囲の分野で 急速な研究の進展がみられ，例えば，抗癌剤および熱や 放 射 線 な ど に よ る 刺 激 で も ア ポ ト ー シ ス が 生 ず る こ と や，

A l z h e i m e r

病とアポトーシスとの関連性などが指摘 されているO 微生物分野においてはウイルスの感染増殖 に伴う細胞死は，細胞にとって生理的な変化というより 病理的な変化による壊死であると考えられていたが，い くつかのウイルスによる細胞死がアポトーシスの様式を とること，そして個体レベルでの発症病理にかかわって いることが指

t

高されるようになった。アデノウイルス，

ヘルベスウイルス，エイズウイルスなどの感染増殖によ ってアポトーシスの生ずる3‑ 5)ことが証明されている が ， 我 々 も ま た ， エ ン テ ロ ウ イ ル ス 属 で あ る エ コ ー9

(E 9)の感染によりアポトーシスが誘導されることを明 らかにした6)。しかし，このアポトーシスは，エンテロ ウイルス属全般にわたってみられる現象であるかどうか は不明であるO そこで今回 無菌性髄膜炎や手足口病等 の病因ウイルスである6種のエンテロウイルスおよびl

‑5‑

種 の ヘ ル ペ ス ウ イ ル ス の ア ポ ト ー シ ス 誘 導 能 を 特 異 的

DNA

ラダーの出現にもとづいて検討した。

2 .

材料と方法

2 . 1

試 薬

イーグルの

MEM

は日水製薬，午胎児血清

( F B S )

は大 日本製薬から入手した。セパジーンは三光純薬，バイオ マーカーはフナコシ，アガロースはナカライテスクから 購入した。フェニルアルシンオキサイドは和光純薬から 入手した。

2 . 2  

ウイルス感染

培 養 面 積

2 4

C/1)のガラスカルチャーボトルにlO

%FBS

を 含むイーグル

MEM

で

3 7

⁰

C .

2~4 日間培養したアフリカ

ミドリザル腎細胞

(GMK)

を宿主細胞として用いたO ウ イルスはエンテロウイルスのE9，ポリオウイルスIII， エンテロウイルス71，コクサツキー

B5  ( C o x B  5 )

，コク サツキー

A10

及 び

1 6( C o x A 1 0

， 

A 1 6 )

と単純ヘルベスウ イルス‑l(

H S V ‑ 1 )

の計7種を使用した。感染

1

日から 3日後に細胞を回収し，

DNA

の抽出に用いた。

1%FBS 

を含むイーグルの

MEM

をウイルス感染後の維持液とし た。

2 . 3   DNA

の 抽 出 お よ び 電 気 泳 動

ウイルス感染細胞および未感染細胞を

PBS

で2回洗浄 後七パジーン試薬を用いて

DNA

を抽出したO 泳動液と してい

TAE

バッファーを用い，

1μg

の

DNA

をエチジウ ムブロミド

( 5 μ

g/mf2)を含む

2%

アガロースゲルで電気泳 動した7)。泳動終了後， トランスイルミネータで

DNA

ラ ダーを確認したo

DNA

サイズマーカーとしてバイオマ ーカー(フナコシ)を用いた。

未感染細胞 E9  HSV‑1  図l.ウイルス感染増殖によるGMKの細胞形態

3 .

結 果

ウ イ ル ス の 感 染 増 殖 に と も な い ， 細 胞 変 性 効 果 (Cytopathic effect : CPE)と称される感染細胞の形態変 化が生じ，最終的には細胞の死が観察された。図lにE

9お よ びHSV‑1によるCPEの パ タ ー ン を 示 すO 正常 GMK細胞は紡錘形をとるが E9の感染で頼粒状の細胞 崩壊パターンを示す一方 HSV‑1の場合は細胞融合を 伴う変性であった。 E9以外のエンテロウイルスは，い ずれもE9同様の変性パターンを示した。アポトーシス の出現時期を調べるため E9感染後経時的に細胞を集 め， DNAのパターンをアガロース電気泳動法で検討し たO 図2に示すように 感染4時間までは未感染GMK 同様のDNAパタ ンを示し変化は認められなかったが，

CPEが未だ顕著ではない24時間で、180bpの倍数のラダー が観察された。これはアポトーシスに特徴的なヌクレオ ゾーム単位のDNAの切断を意味し，アポトーシスはCPE

o 

1  4  24  (hr) 

¥ ︑ ︐ ︐ ノ

p 

' h u

r '  

I F町

︑ ︑

1000  500  300  200  100 

図

2

E9の感染によるアポトーシス出現の経時変化

6‑

より早期に生ずることを示唆しているO また，図3に 示すように，強い細胞毒性をもっフェニルアルシンオ キサイド (PO)によるネクローシスの場合には， DNA  の断片化は観察されなかった。 E9に加えてエンテロ ウイルス属のポリオウイルス匝，エンテロウイルス71，

CoxB 5， CoxAlOおよび、CoxA16，さらにHSV‑1の感 染増殖に伴うアポトーシスの出現を検討した。結果は，

図4の よ う に 強 弱 の 差 は あ る が いずれの場合にも DNAの特異的ラダーが検出され，これらのウイルス感 染 に よ り ア ポ ト ー シ ス が 誘 導 さ れ る こ と が 確 認 さ れ た。これらの結果は，少なくともエンテロウイルス属 に共通したアポトーシス誘導機構が存在することを示 唆するO

1  2 3 4  

¥lFノP LU ( 

1000  500  300  200  100 

図3 ネクローシスとアポトーシスの DNAi永動パターンによる比較 l.マーカー 2.未感染細胞 3.PO 4.E9 

1  2 3 4  5  6  7 8 9  

¥11ノ

p s  

hu ( 

1000  500  300  200  100 

図4 エンテロウイルス群及びHSV‑1 によるアポトーシス誘導 l.マーカー 2.未感染細胞 3.E 9 

4 .

ポリオウイルス

I I I 5 .

エンテロウイルス71 6.  CoxB 5  7.  CoxAlO  8.  CoxA16  9.  HSV‑1 

4.

考 察

本研究により， 6種のエンテロウイルスの感染はいず れもアポトーシスを誘導することが証明された。

ウ イ ル ス の 種 類 に よ り ア ポ ト ー シ ス の 誘 導 機 構 は 異 な り，アデノウイルス，ヘルペスウイルスによるアポトー シス誘導は，感染後細胞内でのウイルス遺伝子の複製を 必要とし， DNA合 成 阻 害 剤 に よ り ア ポ ト ー シ ス は 抑 制 される8)一方，エイズウイルスでは感染に伴いアポトー シスが見られるが，未感染細胞においても生ずることが 報告されているO エンテロウイルスにおいてはウイルス のCPEをj:Jp制することによりアポトーシスもj:JPilJリされる が ぺ 感 染 の み で ア ポ ト ー シ ス は 成 立 す る の か あ る い は 細胞内でのウイルスの遺伝子複製を要するのかは不明で あるoRNAウ イ ル ス で あ る エ ン テ ロ ウ イ ル ス の 遺 伝 子 複製は， RNA依 存 性RNAポリメラ ゼ (Replicase)に よる9 川ことから，現在Replicaseのアンチセンスオリ ゴヌクレオチドによるウイスル増

F

直の事

P

制とアポトーシ スの関係を

f

食言す中であるO また ア ポ ト ー シ ス はCPE に先行して生ずると考えられるが，細胞レベルでのアポ

トーシスの出現を確認する必要がある^O

一般的には現在， CPEを指標としてウイルス検査を行 っているが， CPEの著明でないものにおいては，指標と してアポトーシスを確認することでウイルスの存在を示 唆でき，アポトーシスの検出は今後のウイルス検査に有 効な方法であると考えられるC さらにアポトーシスの発 生機序解明は今後のウイルス感染予防や治療に大きな期 待をもたらすものと思われるO

Abstract 

文

献

1)  Wyllie， A. H. et  al.  : Cell death‑the significance of  apoptosis. Int.  Rev. Cytol.， 68， 251‑306， 1980.  2 )長田重一，他:アポトーシスー細胞死の機構.実験

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1 2

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4) Griebel， P. 1. et  al.  : The interaction between bovine  herpesvirus type‑1 and activated bovine lymphocyte‑T.  J. Gen. Virol，.  71， 369‑377， 1990. 

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6 ) 三 上 稔 之 ， 他 :Buthionine sulfoximineによるエンテ ロウイルスの増殖抑制，臨床とウイルス， 22， S38，  1994. 

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Seminars Virol.， 4， 339‑347， 1993. 

Induction o f  Apoptosis  by  I n f e c t i o n  o f  Enterovirus 

T o s h i y u k i   MIKAMI

¹， 

Junko  KIMURA 

1， 

Nobutake  SATOH

¹ 

and 

Ic

h i r o  HA  T  A  Y  AMA 

1 

Inducibility  of  apoptosis  by six  species  of enterovirus (echo 9， poliovirus  III， enterovirus 7 ，1coxsackievirus  B5， coxsackievirus A10 and  A16) was investigated  using GMK cell  as  host  cell. The occurrence of apoptosis was estimated with  distinctive DNA fragmentation  on  agarose  gel  electerophoresis.  All enterovirus  species produced a characteristic 180 bp nucleosomal  ladder from the first  to third  days  after  viral  infection.  The result  indicates  that infection  of enterovirus  induces  apoptosis， and suggests  that there  is  a common mechanism in  apoptosis  induction by the enterovirus  family. 

Key words : enterovirus， apoptosis， cytopathic effect  1 : Aomori Prefectural InstItute of Public Health and Environm巴nt

‑7‑

青 森 県 環 境 保 健 セ ン タ ー 研 究 報 告 5， 8 ‑11， 1994 

マウス肝化学発癌における G l u t a t h i o n eS ‑ t r a n s f e r a s e   1 1  

変異巣発現のグリコーゲンによる抑制

三 浦 啓 徳 木 村 淳 子

高 橋 政 教 高 谷 芳 明

l

内 沢 秀 光

l 松 江 ー l

一 戸 秀 隆

2

畑 山 一 郎

DEAE Sephadex  A‑25で精製したホタテ貝グリコーゲンのマウス肝化学発癌に対する抑制効果を， glutathione  S‑transferase II  (GST‑II)変異巣の出現を指標として免疫組織化学的に検討した。雄B6C3Flマウスの肝前癌病巣はGST‑II陰性巣として，また雌 肝では陽性巣として検出された。 GST‑II変異巣の数および面積はグリコーゲン投与により有意に減少したことから，本法で調製

したグリコーゲンはマウス肝化学発癌を著明に抑制することが判明した。

Key words : glycogen， glutathione  S‑transferase， chemical carcinogenesis， mouse liver. 

1 

. は じ め に

抗 腫 蕩 活 性 を も っ 植 物 性 多 糖 は レ ン チ ナ ン ， シ ゾ フ イ ラ ン ， ク レ ス チ ン な ど 数 多 く 報 告 さ れ て い るO 一方，

1978年 にSasaki1)は 動 物 性 多 糖 と し て ， ホ タ テ 員 由 来 の 多 糖 が 強 い 抗 腫 蕩 活 性 を 持 つ こ と を 示 し た 。 最 近 ， 高 谷

2)はActinaseE処理後， DEAE Sephadex A‑25陰 イ オ ン 交 換クロマトグラフイーによりホタテ貝から精製した多キ唐 が ， 移 植 性 癌 細 胞Meth‑Aに 対 す る 抗 腫 蕩 活 性 を 示 し ， そ の 本 体 は グ リ コ ー ゲ ン で あ る 事 を 明 ら か に し た 。 し か し，ヒトに対する効果を考える場合には移植性ではなく 原 発 性 腫 蕩 で ， ま た ， 発 癌 予 防 と い う 点 か ら は 実 験 発 癌 モ デ ル で 検 討 す る こ と が 重 要 で あ るO そ こ で ， 今 回 diethylnitrosamine  (DEN)の マ ウ ス 肝 化 学 発 癌 に 対 す る 当 該 グ リ コ ー ゲ ン の 抑 制 効 果 に つ い て ， 肝 前 癌 病 巣 の マ

ー カ ー と し てglutathioneS‑transferaseII  (GST‑II)を用 いて検討した。

2 .

材料と方法 2・1 試薬および動物

DENは 和 光 純 薬 か ら ， ベ ク タ ス テ イ ンABCキ ッ ト は フ ナ コ シ か ら 購 入 し た 。 そ の 他 の 試 薬 は す べ て 特 級 を 使 用 し たO 雄C3H/Heマ ウ ス と 雌C57BL/6マ ウ ス は チ ヤ ー ル ズ リ パ ー ジ ャ パ ン よ り 入 手 し それぞれの交配により B6C3Flマウスを得た。

2.2  グリコーゲンの調製

ホ タ テ 貝 グ リ コ ー ゲ ン は 高 谷2)の 方 法 に よ っ て 精 製 さ れ， DEAE Sephadex A・25カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー の 非吸着画分を以下の実験に使用した。

DEN (10mg/kg，ip)  Glycogen  (0，200，400μg/mouse，ip， week) 

L~lW\

2 W  old mice 

1 :青森県産業技術開発センター

2 

:株式会社青森ともや

ム

♂  sacrificed  at 

6 

months  図1 マ ウ ス 肝 化 学 発 癌 プ ロ ト コ ー ル

‑8 

ム

宇 sacrificed  at 10 months 

a  b 

control  control 

200}lg 

•

^200flg 

4

∞

μg  4加μg

図2 マウス肝アデノーマ誘発に対するグリコーゲンの抑制作用.(a)  DEN投 与6ヵ月 の雄マウス肝.(b)  DEN投 与10ヵ月の雌マウス肝.

2 . 3  

肝 化 学 発 癌 お よ び グ リ コ ー ゲ ン の 投 与

生 後15日 目 の 雌 雄B6C3Flマ ウ ス に 発 癌 剤DEN (10mg/kg)を一回腹腔内投与した3)。その一週後より生 理食塩水に溶解したグリコーゲン (200，400μg/マウス) を実験終了時まで週一回腹腔内投与し，図1に示すよう なステージで屠殺して肝前癌の発生をグリコーゲン非投 与群と比較した。給餌，給水はαdlibitumであった。

2 . 4  

免疫組織化学

摘出した肝の中葉および左葉の厚さ3mmのスライス を3日間冷アセトンで固定し，ベンゼン置換後パラフイ ンに包埋した。 6μmのパラフイン切片をABC (avidin‑ biotin‑peroxidase complex)法4)による免疫組織化学に用 いた。 1次 抗 体 と し て ， 既 報51のように作成したGST‑

II抗体を4，000倍 希 釈 し て 使 用 し たO 顕 微 鏡 下 で50ヶ以 上の細胞集団をGST‑II変 異 巣 と し て 計 測 し たO 変 異 巣 の肝に占める面積はイメージアナライズシステムにより 測定した。

有意差検定は， Student's  t‑testによった。

3 . 結 果

DEN投 与 後6ヵ 月 の 雄 マ ウ ス お よ び10ヵ月の雌マウ スの体重は，グリコーゲン投与により変化を受けなかっ たが，グリコーゲン投与群の肝重量は非投与群に比較し て減少傾向を示した。その時点における前癌(アデノー マ)の発生は，雄マウス当たりの肝アデノーマ数として グリコーゲン非投与群の24.8に対し， 200μgグリコーゲ ン投与群で9.8 (40%)， 400μg投与群で13.8(56%)と 有意の減少を示した。また 雌マウスにおいても非投与 群の11.5に対し200μg投与群の4.5(40%)， 400μg投 与 群 の5.0(43%)と半減した(未発表)。アデノーマの径

‑9 

図3 DENによるマウス肝GST‑II変異巣の誘発.(a)雄マウス 肝のGST‑II陰性巣.(b)雌マウス肝のGST‑II陽性巣.

もグリコーゲン投与により減少傾向を示した。アデノー マの典型的な発生状態を図2に示す。

次に酵素変異巣 (enzymealtered foci : EAF)の発生に 対するグリコーゲンの影響を検討した。 EAFはGST‑II の免疫組織化学により検出された。図3に示すように，

雄マウス肝の正常部には多量のGST‑IIが発現する一方，

EAFで は 発 現 の 低 下 が み ら れ る た めGST‑II陰性巣とし て，雌マウスでは逆に正常部における低い発現量とEAF における発現の上昇からGST‑II陽 性 巣 と し て の 検 出 す る こ と が で き る ヘ EAFの数および肝に占める面積に対

表I 雄マウス肝GST‑II陰性巣発現に対する グリコーゲンの影響

Glycogen  (μg‑) 

C一価白一川町

巴一mv一a一

pb

一

巳一

n一一/O

II 一O一

Y E ‑

N  O  α  G一 U3一 T一 ‑

% 

o 

5  23.7::1::6.4"  100  16.4::1::6.2  100  200  4  10.7土4.4^b) 45  3.5::1::1.7^b)  21  400  6  14.3::1:: 5. 1')  60  4. 7 ::1::  1. 9^b)  29 

a) Mean::1:: SD. 

b) different  from value without glycogen  (pく0.01)

C) different from value  without glycogen  (pく0.05)

表2 雌マウス肝GST‑II陽性巣発現に対する グリコーゲンの影響

Glvcogen 

fμg~) n  GST ‑II  positive foci  No/cnl  %  mm²/cnl  % 

o 

6  10.5::1::3.2')  10015.1::1::6.9  100  200  8  10.4::1::3.6  99  5.1::1::2.9^b)  34  400  5  11.8::1::3.9  11213.9::1::3.3  92 

a) Mean::1:: SD. 

b) different  from value without glycogen  (pく0.01)

するグリコーゲンの効果を表l及び表2に示した。表1 のように，雄マウスにおいてはグリコーゲン投与でEAF の数は半減する一方，その面積も非投与群の20‑30%に 激減した。また，雌マウスにおいては，グリコーゲンは EAFの数には影響を与えなかったが，肝に占めるEAFの 面積は200μg投与群で34%に減少した。これらのことは，

ホタテ貝由来のグリコーゲンはマウス肝化学発癌を顕著 に抑制することを示す。

4.

考 察

本研究において，ホタテ貝由来のグリコーゲンはマウ スの肝化学発癌を著明に抑制することを明らかにしたO

従来のトリクロロ酢酸 (TCA)によって調整したグリコ ーゲンはMeth‑Aに対する抗腫場活性をもたないこと，

また本法で調整したグリコーゲンをTCAあるいは

s‑

ア ミ ラ ー ゼ 処 理 す る こ と で 活 性 が 消 失 す る こ と か ら ， Actinase E， DEAE Sephadex A‑25で精製したintactな分岐 鎖を有するグリコーゲンが抗腫蕩活性を示すものと考え られるO 一方，同様にして精製したカキ，アワビのグリ コーゲンはホタテに比較して活性が弱いか，あるいは活 性が認められないことから^p それぞれのグリコーゲンは もともと生体中に分岐鎖の少ない状態で存在しているも のと思われる。

発癌抑制の分子機構に関しては，グリコーゲンによる 肝臓全体にわたる解毒酵素GSTの誘導が認められない (未発表)ことからWattenberg7 )のchemopreventionには 相当せず，培養系においてグリコーゲンの抗腫傷活性は 観察されないことから，インターロイキンなどサイトカ

インの誘導による免疫系活性化を通した間接的作用によ るものと考えられるO このことを明らかにするため現在，

グリコーゲンによる血中サイトカイン濃度の定量を検討 中であるO

これまで， adenosine triphosphataseやγ‑glutamyltr anspeptidaseはラットの場合と異なりマウス肝前癌病巣 のマーカーとはならず マウスの免疫組織化学的マーカ ーの開発が望まれてきた。我々は GST‑IIが優れたマ ウス肝前癌マーカーとなることを見いだし6)今回の実験 に用いたが，さらに精度の高いマーカー癌遺伝子産物c‑ Jun による解析8)も進行中である。

今回は，腹腔内投与によってグリコーゲンの肝発癌の 抑制効果を明らかにしたが，経口，静注，皮下投与など異 なった投与法での検討も要するO また，原発性肝癌に対 する抗腫蕩効果や他種での効果，例えば， Solt‑Farbar⁹) 

モデルを用いたラットの肝化学発癌に対する影響も検討 する必要があるO

謝 辞

弘前大学医学部生化学第二講座.土田成紀教授並びに 研究室の諸先生の本研究への御協力，御助言に対し深く 感謝致します。

文 献

1)  Sasaki， T.  et  al.  : Antitumor  activity  of  a boiled  scallop  extract. 

J. Natl.  Cancer. Inst. ，印， 1499‑1500， 1978.  2 )高谷芳明，他:ホタテ煮汁の多糖体の構造と生理作

用.生化学， 64， 974， 1992. 

3) Vesselinovitch， S.  D.  et  al.  Histochemical  characterization  of  focal  hepatic  lesions  induced  by  single  diethylnitrosamine  treatment  in  infant mice.  Cancer Res.， 45， 2774 ‑2780， 1985. 

4) Hsu， S.  et al.  : Use  of  avidin‑biotin‑peroxidase  complex  (ABC)  in immunoperoxidase techniques. A  comparison  between  ABC and  unlabeled  antibody 

(PAP)  procedures. J. Histochem.  Cytochem.， 

2 9

，  577 ‑580， 1981. 

5)  Hatayama， 1.  et al.  : Developmental  and  hormonal  regulation  of  the  major  from  of  hepatic  glutathione  S‑transferase  in  male mice. Biochem.  Biophys.  Res.  Commun.， 140， 581 ‑588， 1986. 

6) Hatayama， 1.  et al.  : Sex‑dependent  expression  of  class  pi  glutathione  S‑transferase  during  chemical  hepatocarcinogenesis in  B6C3F1 mice. Carcinogenesis，  14， 537 ‑538， 1993. 

7)  Wattenberg， L. W. : Inhibitors  of chemical carcinogens. 

ハU

寸Bよ

Adv. Cancer Res.， 

2 6

， 197‑226， 1978. 

8) Nakano， H. et  al.  : c‑Jun  expression  in  single  cells  and  preneoplastic  foci  induced  by diethylnitrosamine  in B6C3F1 mice : Comparison  with  the  expression of 

pi‑c1ass  glutathione S‑transferase. Carcinogenesis， 

1 5

，  1853 ‑1857， 1994. 

9)  Solt， D. et al.  : New principle  for  analysis  of chemical  carcinogenesis. Nature， 2臼， 701 ‑703， 1976. 

Abstract 

S u p p r e s s i o n  o f  G l y c o g e n  on t h e  l n d u c t i o n  o f  G l u t a t h i o n e  S ‑ t r a n s f e r a s e   1 1  

A l t e r e d  F o c i  d u r i n g  C h e m i c a l  H e p a t o c a r c i n o g e n e s i s  o f  Mice 

H i r o n o r i   MIURA 

1， 

J u n k o   KIMURA 

1， 

M a s a n o r i   T  AKAHASHI 

1 ， 

Y  o s h i a k i   TAKA  Y  A 

2， 

H i d e m i t s u   UCHIZA  W  A 

2， 

Hajime  MATSUE 

2 ， 

H i d e t a k a   ICHINOHE

³

，  a n d   I c h i r o   HATAYAMA 

1 

Effect  of  scallop  glycogen  purified  by  DEAE Sephadex  A‑25  column chromatography  on chemical  hepatocarcinogenesis  of  mice  was immunohistochemically  investigated.  The  effect  of  glycogen  was  evaluated  as  the  alteration  of  induction  of  glutathione  S‑ transferaseII  (GST‑II)  altered  foci.  Diethylnitrosamine‑induced  preneoplastic  hepatic  lesions  of male B6C3Fl  mice  were detected  as  GST‑II  positive  foci， while  those  of female  were detected as  GST‑II  negative  foci.  The number and area  of GST‑II  negative  foci  in  male mice were  significantly  decreased  by administration  of glycogen  (200μg  and 400μg jmouse， ip).  In  females， the  decrease  of  area  was found  in  the group treated  with 200μg  of glycogen.  The result  indicates  that  glycogen prepared  from scallop suppress  the  chemical hepatocarcinogenesis  of mice. 

Key words : glycogen， glutathione S‑transferase， chemical carcinogenesis， mouse liver 

1 : Aomori Prefectural  Institute  of Public Health and Environment  2 : Aomori Advanced Industrial  Technology Center 

3 : Aomori Tomoya Co.， Ltd. 

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