Mycoplasma pneumoniae 感染症における特異IgGサブクラス抗体の臨床的検討

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原著〔書女医蕪，鋸62巻平七癖言〕乃4夕6ρφ勉s徽zρη6π〃zoη凌z6感染症における

特異IgGサブクラス抗体の臨床的検討

東京女子医科大学エ江小児科学教室（主任バトケイコ

波戸景子

福山幸夫教授）（受付平成4年3月13日） Specific Human IgG Subclass Antibodies in Sera of Patients with 物￠ψ伽s翅αρ”￠伽03⑦π血￠Infection Using EHSA Keiko EBATO Depa丘ment of Pediatrics（Director：Prof． Yukio FUKUYAMA） Tokyo Women’s Medical College Specific human IgG subclass antibodies againstル砂oqρ伽s初σ勿6％初。％ゴα8 whole cell antigen were measured by enzyme・1inked immunosorbent assay（ELISA）in patients with物。ψ勉s翅α勿θ％翅。痴。θ infection and in healthy controls． Serum levels of IgG2 and IgG3 antibodies in patients were significantly higher than in controls both in acute and convalescent stages（pく0．05）． However， sertlm levels of IgGI and IgG4 antibodies were not significantly higher than those of healthy controls． Serum levels of IgG2 antibody were elevated at l week after the onset of clinical symptoms and remained high for a few months． Serum levels of IgG3 antibody were elevated at 2 w㏄ks after the onset and had d㏄reased by l month． The inhibition test suggested that IgG2 and IgG3 antibodies were spec量fic to物‘ψ伽ε翅σ ρηθκ翅。π勿θwhole cell antigen． IgG2 and IgG3 antibody titers had a tendency to correlate with clinical symptoms． In patients with pneumonia， these antibody levels were higher than in patient with bronchitis and／or pharyngitis（P＜0．05）． Serum levels of IgG3 antibody in pneumonia patients could be divided into high and low level groups． In all pneumonia patients under 6 years of age， IgG3 antibody was low． This results suggests that IgG3 antibody藍evel may rise earlier and higher in cases of reinf㏄tion than in primary cases． Serum titers of the complement−fixation test correlated significantly with serum levels of IgG2 antibody． In addition， serum titers of the passive hemagglutination test correlated significantly with serum levels of IgG2 antibody in the acute stage， and IgG3 antibody in convalescent stage． Our investigation in MyOoplasma inf㏄tion showed a characteristic response of sp㏄ific IgG subclass antibody which is different from those usually observed in patients with bacterial or viral infection．緒言ヒトIgGは，そのheavy chain定常領域のポリペフ．_{`ド鎖の抗原性の相違により，IgG、， IgG2，} IgG3， IgG4の4つのサブクラスに分けられる．各々のサブクラスは，その抗原性に加え，構造，生物学的特性が異なっている1）．正常血清中の構成比率はIgG、が60∼70％， IgG2が15∼20％， IgG3 が4∼8％，IgG4が2∼6％である2）．その感染防御における役割にはまだ不明の点が多いが，感染症や種々の疾患における各サブクラスの動態，サブクラス欠乏症などについて，いくつかの報告がなされている鋤．また，感染症における特異サブ

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クラス抗体の動態についての報告も見られるが5）∼9），紛COρ彪S彿αρ％甜〃20痂αε（以下ル∫．勿と略記）感染では，・我々の知る限り臨床例での報告はない．著者は，躍．勿感染症における特異IgG サブクラス抗体を，単クローン性抗体を用いた enzyme−linked immunosorbent assay（ELISA）により測定し，臨床的検：討を行った．対象および方法 1．対象対象は，1986年1月から1988年12月の期間に，気道感染症状や中枢神経症状を主訴に東京女子医科大学小児科外来を受診し，血清学的検査または細菌学的検査で盟．勿感染症と診断された62例， 100検体である．診断に関しては，1回の検査で補体結合反応（complement丘xaition；CF）64倍以上，または受身赤血球凝集反応（passive hemagg・ 1utination；PHA）640倍以上の抗体価を示した症

例，あるいはペア血清でCFまたはPHAが4倍

以上の上昇を認めた例，咽頭よりの〃．ρη培養陽性例を，π4．勿感染症とした．年齢は1歳から25 歳，平均年齢は7．9歳で，男性：女性比は25：37であった．張型は，上気道炎11例，気管支炎5例，肺炎42例，脳脊髄炎3例，脊髄根炎1例であった．測定は第3病日から第12病週までの間で行い，42 例は1回の測定で，20例は，5日から11週の間隔で2回から4回，延べ58検体を測定した．非」4．勿感染対照として気道感染症状のない2ヵ月から21 歳までの受診者26例（平均年齢6．7歳）の血清を測定した．また，測定条件の検討には躍．ρηに対す

る血清CF， PHAおよび〃．勿特異IgG抗体高

値の4歳肺炎男児の血清を用いた．有意差検定は Student t検定を用い，危険率p〈0．05を有意とした．

2．E正ISA法

1）試料．（1）ルf．勿抗原当大学微生物学教室より分与をうけたル∫．勿継代培養株（FH株）を， PPLo液体培地（Difco 社命，馬血清を20％，．イーストエキストラクトを 2．5％含む）にて培養した．フラスコ底面に付着増殖し’た対数増殖期の菌を，phosphate buffered saline（PBS）を用いて洗浄後ガラスビーズにより剥離し，1，300rpm，30分間の遠心により集記した． PBSを用いて，3×109CFU／mlの菌浮遊液を作製し，0℃で20KHzl 30分超音波処理後，蛋白濃度を測定し，一70℃で保存，使用時解凍した．（2）単クローン性抗体抗ヒトIgG、， IgG2， igG3抗体はイスラエルBio・ Yeda社製（各clone；SG−16， HP−6014， HP−6050）を用いた．抗ヒトIgG4抗体はヤマサ醤油研究所製（clone；DG・01−DE）を用いた．これらはサブクラス特異性が確認されている10）．（3）酵素標識抗体ペルオキシダーゼ標識抗マウスIgG抗体はデンマークDakopatts社製を用いた．（4）基質 0．5mg／mlとなるように。−phenylendialnine dihydrochloride（関東化学製）をcitrate buffer （0．1M C6HgO7と0．2M Na2HPO4に等量の精製水を加えたもの，pH 5．0）で調製し，使用直前に 30％H202を0．5μ1／ml加えた．そのほかの希釈並びに洗浄には0．05％Tween 20加0．01M PBS（pH 7．2）を用いた． 2）測定法（図1）〃．勿抗原（蛋白濃度80μg／ml）をcoating buffer（Na2CO30．8g， NaHCO31．47g， NaN30 1gを精製品500m1で溶解したもの， pH 9．6）で希釈し，20K：Hz，10分超音波処理後，マイクロタイタープレートの各wellに150μ1ずつ分注し，4℃

一晩静置コーティングした後PBSで3回洗浄し

た．非特異的結合を阻止するために，さらに1％ bovine serum albumin（BSA）加PBSを各well に加え，37℃，1時間静置後同様に洗浄した．ル1。勿特異lgGサブクラス抗体の測定は以下の順序で行い，PBSを用いて同様に洗浄した．（1）マイクロプレートの各we11に希釈患者血清を添加し，37℃1時間静置した．（2）一次抗体として4，000倍希釈の単クローン性抗ヒトIgGサブクラス抗体を50μ1加え，4℃一晩静置した．（3）二次抗体として500倍希釈ペルオキシダーゼ標識ウサギ抗マウスIgG抗体を50μ1加え，室温一520一

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舐卿抗原（全菌体）150μ1／we11（蛋白量12μg） 1・℃一晩 0．05％Tween20加PBSにて3回洗浄 1 1％BSA−PBS

137℃・繭

2回洗浄ト患者血清 10倍希釈 50μ1／wel】 i37℃・時間 2回洗浄 1 単クローン性抗ヒトIgGサブプラス抗体 1 5，000倍希釈 50μ1／well 4℃ 一晩 5回洗浄 i HRP一ウサギ抗マウスIgG抗体 500倍希釈 50μ｝／well 室温 45分 5回洗浄 1 基質 OPD， H202加Citrate buffer l室温・・分 2．5M H2SO4 1 492nmで吸光度測定図1 躍．ρη特異IgGサブクラス抗体測定法（ELISAによる）で45分静置した．（4）基質を加え，室温で30分静置し，発色させた後2．5MH2SO4を加え，反応を停止させた．これを，MTP−32型マイクロプレートリーダー（コロナ電機株式会社製）で，492nmにて吸光度を測定した，検体はそれぞれ2we11ずつ測定し，抗体価は検体の吸光度の平均値から，PBSを用いて同様に測定したbackgroundの吸光度を減じた値とした．結果 1．測定条件の検討ル1．勿抗原液および患者血清の至適濃度を検討するために，ル1．ρπ抗原の，10倍から50倍各希釈液と，標準血清として用いたIgG抗体高値の4歳肺炎男子患者血清の10倍から160倍各希釈液を用いて，前述の方法で抗体価を測定した．〃1ρη抗原は50倍希釈，標準血清は10倍希釈の条件で， backgroundとの差が最も大であったので，以後の測定はこの条件で行った． IgG1からIgG4の各単クローン性抗ヒトIgGサブクラス抗体の至適濃度条件を決定するため，各回クローン性抗ヒトIgGサブクラス抗体の100倍から16，000倍希釈液を用いて標準血清を測定した結果は図2の通りである．抗IgGl抗体は，100倍希釈では患者血清とbackgroundの吸光度は共に高値であり，非特異的反応の存在が考えられた． 4，000倍以上の希釈では，backgroundは反応が認められず，患者血清は高値で，非特異反応は減少した．抗IgG2抗体では，2，000倍から4，000倍希釈で，抗IgG3抗体では1，000倍から10，000倍希釈で

患者血清とbackgroundの差は大であった．抗

IgG、抗体では標準血清では希釈に関係なく非特異および特異反応のどちらもほとんど認められなかった．後に示すようにIgG4抗体は検出例があったが，その場合でも4，000倍以下の希釈によって抗体価の上昇はなかった．この結果より，以下の測定には各サブクラス抗体で非特異反応の少なかった4，000倍希釈を用いた． 2．非感染対照血清の測定気道感染症状のない26例の当科受診者血清中の，各サブクラス抗体価のmean±1SDは， IgG、抗体0．060±0．125，Ig（｝2抗体0．205±0．135， IgG3抗 2，0 駐1・o §

言。

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抗lgG1抗体脚X 50匹X 1㎜X2ひOOXら㎜X 8伽X 16㎜X（希釈）捌gG3抗体 2．0 1、0 o 抗lgG2抗体 0 2，0 1．o 1mx ㎜X 1㎜x 01㎜OX （希釈〉鋤X l㎜x㎜x4㎝x （希釈）抗lgG4抗体 1￠Ox 鋤X l㎜x 図2 測定条件の検討 1㎜x（希釈）抗ヒトIgGサグクラス抗体希釈による抗体価の変化， ●一●：陽性血清，○一〇：対照．

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体0．118±0．149，IgG4抗体0．077±0．119であった（図3）．IgG、， IgG3， IgG4抗体では抗体価0が多く，特に1歳未満では全例低値であった． 3．患者血清の測定 1）各病期における抗体価の変動ル1．勿感染症の生日の決定は，初診時問診により，咳，発熱など臨床症状の発病日から行った．発病後の患者血清の毎．勿特異IgGサブクラス抗体の動態を検討するため，病日を1週ごとに区切って各々の範囲内の症例について平均値と標準偏差値を算出し，対照と比較した（表）．IgGl抗体およびIgG4抗体では，対照に比べ上昇は有意ではなかった．IgG2抗体は1週目で0．31±0．21となり，IgG3抗体は2週目で0．48土0．53となり，対照に比し有意に上昇し（p＜0．05），4週および6週でそれぞれ0．92±0．57，0．91±0．90と最高値となり，IgG2抗体は8週でも0．75±0．42と高値を持続した．

次に発病後1から2週を急性期，3から4週を

回復期，5から6週を回復後期として，各サブクラス抗体について平均値および標準偏差を算出した（図4）．IgG、抗体およびIgG4抗体は，回復期，回復後期に軽度の上昇を認めたが，対照に比し有

意のものではなかった．IgG2抗体は急性期に

0，40±0．38（n＝46）で対照に比し有意の上昇を認め（p＜0．01），回復期には0．72±0。54（n＝34）と蒼1・・霧藷遷 80．5 1．o O，5

懸＝。

IgG1 0．205±0．135 1．0 0．5 ODDつ一〇 IgG2 0．118±0．149 1．O 0．5 …

」二，

IgG3 0．077±0．119 … 一＿＿＿＿＿＿8 馨鵬 IgG4 図3 健康対照における肱．勿特異IgGサブクラス抗体価（n＝26） ●：1歳以上，○：1歳未満．引跡病週毎の屈ρη特異サブクラス抗体価

週日 _記数 _IgG1抗体 _IgG2抗体 _IgG3抗体 _{’IgG4抗体}

1 _1∼7 19 0．10±0．27 0．31±0．21ホ 0．18±0．40 0．14±0，35 2 _8∼14 27 0．21±0．55 0．65±0。51轄 0．48±0．53＊ 0．06±0．14 3 _15∼21 18 0．21±0．46 0．53±0．46零 0．49±0．47串 0．17±0．37 4 _22∼28 16 0，33±0．59 0．92±0．57串ホ 0．70±0．403 0．20±0，34 5 _29∼35 4 0．46±0．81 0．46±024寧 0．49±0．59寧 0．39±0．73 6 _36∼42 』6 _{0．25±0．46} _{0．83±0．71串} _{0．91±0，90亭} _{0．34±0．63} 8 _43∼56 4 0．01±0．03 0．75±0．42＊ 023±0．06 0．014±0．013 対照 26 0．060±0，125 0．205±0．135 0．118±0．149 0．077±0．119 ホp〈0．05 串串p＜0．01 一522一

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2，0 1．o ぞ § 言忌函2．o 吾 1．0 1gG霊” lgG 3 対照 1．2週 ● 3，4週 5，6週 2．0 対照 1，2週 ● ● 3，4週 @零＊ 5，6週 ● ＊＊ 8 ● o ● ● ● ．：： ● 1．0 ■ ● ● ● ● o ・ o ● o o ■ ● ● o ● ● ● o ● ● 哩。 oo ・o 8 o ● OlgG 2 10 20 30 _40（日） lgG 4 0 10 20 30 40（日対照 1．2週＊＊ 3，4週 5，6週 2．0 対照 1，2週 3，4週 15，6週 ● ● ●● 、 o ● ● ● ● ● ・’ ●● o o 1．0 ● o o 8 o _o o ● ● ● ● 壬憶’ @08 O o 怩? も軸 ● ● ● ● o 客． @ o e ● o o 潤@● ● ● 0 10 20 30 _40（日） 0 10 20 30 _40（日図4 患者血清における各病期の皿勿特異IgGサブクラス抗体価 ●：肺炎例，○：上気道炎・気管支炎例，“＊：p＜0．01．最高値となり，回復後期も持続した．IgG3抗体は，急性期には対照と有意差はなかったが，回復期に 0．59±0．63と有意に高値となり，回復後期で 0．70±0．90と最高値となった（p〈0．01）． 2）特異性の証明各サブクラス抗体の上昇が〃．ρη抗原に特異的であることを証明するために，躍．勿抗原による抑制試験を行った．各サブクラス抗体上昇患者血清をそれぞれ2例ずつ選び，0．75から12（× 10−1）μg／mlの濃度のルf．勿抗原液と予め4℃3 時間で反応させ，各IgGサブクラス抗体価を測定し，ル1．勿抗原非添加例と比較して抑制率を算出した（図5）．IgG3抗体はル1．勿抗原濃度の上昇で70％以上の強い抑制が認められ，IgG2抗体は 40％の抑制が認められ，IgG2およびIgG3抗体の上昇はM。勿抗原に特異的と考えられた．IgG、抗体はわずかに抑制されたが，IgG4抗体の抑制は認められなかった． 3）経時的変化複数回検体を採取し経過を追った20例（肺炎15 例，上気道炎・気管支炎5例）に？いて，各IgGサブクラス抗体価の経時的な推移を検討した．図6 のごとく，IgG五抗体およびIgG4抗体は，第1週か鍔， § 崖，。塁韮 0 G3 G2 G1 G4

x一一

0，ア5 1．5 3 6 12 （X10−1μg／吊2） M．pn抗原図5 抑制試験：添加瓶ρ％抗原濃度による抑制率の変化ら5週に上昇例が3例あり，他は低値であった． IgG2抗体は，第1週から2週に高値を示す肺炎例であり，他は上気道炎・気管支炎例を含め中等度の上昇を認め，第5週から6週まで持続した例が多かった．IgG3抗体は，肺炎例4例で第2週から 3週に1．5から2．0の著明高値を示した他は，上気道炎・気管支炎例全例を含み低値であった，いずれの抗体でも高値例は肺炎例で，上気道炎例は1．0 以下であった． 4）臨床像との関連

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ぞ占豊倉鐙呂蓉宣。 2，0 1．0 1gG肇 ★★ ： 0‘

12含45678

2．0 1，0 0 lgG3 2，0 1gG2

9101112 123456789101112

（週）（週） 2，0 lgG4

一〇 1「

★★∵’

123456789101112 123456789101112

（週〉（週）図6 M．卸特異IgGサブクラス抗体の経時的変化 ●一●：肺炎例，○一〇：上気道炎・気管支炎例，★★：対照mean＋1SD．ぞ縄2．o 豊盆岩 91．o 雪且

o

lgG2 1．2週 3，4週 0．36士0，26 0，51±0，44 0，77±0．25 0．80±O．57 n富15 n＝31 n＝10 n罵23 ● ● ｛｝1

耐

’ i 2．0 1．0 1gG3 】2週 0，06±0．14 0．45±O．71 n＝15 n＝31 8 … 8 3，4週 O．42±0．51 0．63±0．65 n＝10 n＝23

！：1

● U→；B P U十B P U十B P U十B P 図7 急性期および回復期における臨床像とIgG2， IgG3抗体価の関連 P：肺炎例，U＋B：上気道炎・気管支炎例．臨床像と各サプクラス抗体との相関について検討した．IgG2およびIgG3抗体について，急性期，回復期の抗体価を肺炎例と上気道炎・気管支炎例で比較した（図7）．IgG2抗体では，急性期，回復．期とも両者間に有意差はなかった．IgG3抗体では，急性期の平均値は肺炎例において上気道炎・気管支炎例より有意に高値であった（p〈0．05）が，回復期では有意差はなかった．肺炎例におけるIgG2およびIgG3抗体価には個体差があり，特に急性期IgG3抗体では7例が1．2 以上の高値を示したのに対し，他の24例はすべて 0．46以下の低値であった．そこで，抗体価の個体差に寄与する因子を検討するため，肺炎例と上気道炎・気管支炎例の両者について，年齢を3歳毎に区切って急性期，回復期のIgG2およびIgG3抗体価を比較した（図8）．肺炎例で1．0以上を示した症例のうちIgG2抗体では12例中9例， IgG3抗体では10例全例が7歳以上の年長児であった．これ一一T24一

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2．，0 LO 駐翌琶呂 2，。奮

9

1gG2 上気道炎・気管支炎例 ≡．’ o 0∼3 4∼6 7∼910∼1213∼1516∼年令 2．0 1．0 0 IgG2 肺炎例．0

G・：iii’

LO lgG3 o o 2．9 1．0 0 0∼3 4∼6 7∼9 10∼1213∼1516∼ 年令 IgG3 0∼3 4∼6 7∼9 10∼12 13∼1516∼ 年令 0∼3 4∼6 7∼9 10∼1213∼1516∼ 年令図8 急性期および回復期肺炎例におけるIgG2およびIgG3抗体価と年齢との関連 ●：第1，2病週，○：第3，4隔週． 2．0 1．0 ぞ＆專 o 二甥毎 2．O

o

肩 ε Ω O i．0 1gG2 ● ● ・ 8 ■ ● ● 3 ● 8 8 1，2週： ■ ： ● ● 8 ● ● ● r；0．45 n＝45 16x 32x 64× 128x 256x 512x IO24x 2056x

CF

2．0 1．0 0 4く 4× 8X lgG2 1gG3 8 ● 1，2週 0 ● ● ● … ● 8

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r＝0．29 n富45 3，4週・ 3 0 ● ■ ● ● ● ● r＝0．50 n＝33 2，0 1．0 0 4く 4× 8X lgG3 ： ● ● 16x 37x 64x 128x CF ● ● ● ● 256x 512x 1024x 2056x 3，4週 ● 8

…霧．．

● … 3 r＝0．26 n＝33 4＜ 4x 8 x 16x 呂2x 54× 123x 256x 512x 102墨x 2D56x 4＜ 4 x 8 x 16x 32x 64x 128x CF CF 図9 急性期および回復期におけるCFとIgG、， IgG3抗体の関連 25εX ．512x IO2曝x 205εx に対し，IgG3抗体の4歳未満では，急性期，回復期とも全例0．5以下の低値にとどまっていた． 5）CF値， PHA値．との比較各サブクラス抗体とCF値， PHA値との関連について検討した．図9に示すように，CFとIgG2 抗体価は，急性期，回復期とも有意の相関を示したが，CFとIgG3抗体とは，両病期で相関を示さなかった．図10に示すようにPHAとIgG2抗体は急性期に，PHAとIgG3抗体は回復期に各々有意の相関を示した．IgG、およびIgG4抗体とCF， PHA との問には有意の相関を認めなかった．考案ル1．勿感染は，本邦では，ほぼ4年毎に全国的な流行があり，流行期間は1年から1年半続く。症状は肺炎，肝障害，脳炎など多様である1η．感染症の病態における液性および細胞性免疫の役割に

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ぞ占豊省望呂丁字 2．0 1．0 0 1gG2 ● ●

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朝く 40x 80x 1εOX 420× 6畔Ox 1280x Z550x 5120x 10240x 20480x PHA 2，0 1．0 0 1gG3 ● 1，2週． ●

．．：…i：i3…

2．0 1．0 0 IgG2 ● 3，4週 ● ● ：：細く 40X BOx 160x 320x 640x I280x 256“X 5120X io2如x 2肘30x PHA ■ r謡0．32 n＝45 ● ● ● ● 3 3 ● 3 ： ● ● ■ ● ● ● ● r＝一〇．05 ． n＝33 2．0 1．0 0 1gG3 ● ● 3，4週 3 ●

ll・：：

● ● r冨0．61 n＝33

40く 40x BO× 160x 320x 640x 123⑰X 2560x 5120x IO240x 20490x 40〈 40x 60x IEO× 320X E尊臼X 126Dx 2560x 51∼Ox 10240x 2餌80X

PHA PHA 図10 急性期および回復期におけるPHAとIgG2， IgG3抗体の関連ついては，防御因子としての働きと増悪因子としての働きが考えられているエ2）．再感染症例も認められ，初感染に比し重症化する傾向があり，乳児より年長児に重症例が多いのもこのためといわれている13）．著者は，ELISA法により盟．ρη特異 IgGサブクラス抗体を測定し，三日，臨床症状などとの関連を各サブクラスごとに検討し，種々の知見を得た．非感染対照26例においては，各サブクラス抗体で軽度上昇例を認めたが，1歳未満はいずれも低値であった．健康者におけるルf．勿特異IgGサブクラス抗体の報告は我々の知る限り見あたらないが，ル1．ρη特異総：IgG抗体価は，中尾らの報告によると，生後4ヵ月未満では母体からの抗体の移行により，一方1歳以上では感染の既往により抗体価の上昇例があり，加齢により抗体保有率は増加することが認められている14）．今回の検討で，対照におけるサブクラス抗体上昇例は，感染の既往の可能性を示すと考えられる．患者血清では，IgG、およびIgG3抗体が急性期から有意の上昇を認め，回復後期にも高値であった． IgGl， IgG4抗体も4から6週頃に軽度の上昇を認めたが，健康対照に比し有意のものではなかった．〃．勿抗原を用いた抑制試験により，IgG2および IgG3抗体の上昇は躍．勿抗原に特異的であることが証明された．IgG、抗体では，軽度の抑制が見られるのみで，IgG4抗体については抑制は認められず抗原に対する特異性は証明されなかった．このことから，人のル1．勿感染における主要な特異サブクラス抗体はIgG2およびIgG3抗体であることが証明された．感染症における特異IgGサブクラス抗体の動態については，水痘5），単純ヘルペス6），サイトメガロウイルス7）などのウイルス感染ではIgG1およびIgG3抗体が上昇し，肺炎球菌や連鎖球菌などの polysaccharide抗原8）ではIgG2抗体が上昇すると報告されている．マイコプラズマ属では，ヒト躍．伽感染での報告は我々の知る限りまだ見あたらないが，Taylorらは他のマイコプラズマ属のうち，ル1．ρ％1〃zoη露についてマウスにi接種後， radioimmunoassay法で特異サブクラス抗体を測定し，IgM抗体についで， IgG2抗体， IgGl抗体， IgA抗体の順に産生され，このうちIgG2抗体が主要な抗体であったと報告している15）．各クラス抗体の応答の状態は，抗原量，接種経路，菌の状態（生菌か死菌か）によって異なり，砿勿伽。廊で一526一

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は，生菌多量静脈接種で最も早期に高値であった．ヒトにおけるル色ρη感染は，飛沫による気道感染が主であり，家族内感染の検討によりその潜伏期は約3週間と考えられている16）17）．しかし，実際には，感染の時期の特定は困難な場合があり，動物実験の報告が感染の時期から病日を算定しているのに対して，ヒトにおいては発症の時期からの算定になる．この場合の発症の時期は患者の申告によるため，ここでも若干の誤差が生じることは避けられない．また，抗原菌量も症例によって異なることが考えられる．これらが本研究において，測定日を各病週毎に区切り，抗体側の平均値と標準偏差を求めた検討（表1）で，経時的変動と，標準偏差値に幅が出現した原因と考えられる．病期を2週毎に区切って，もう少し広い範囲で，変化を検討すると，図4に示したように，IgG2抗体およびIgG3抗体は，やはり急性期に高値となり，回復期で最高値となり，回復後期でもまだ高値を保っていた．症例毎に条件の差はあってもこれらの傾向は有意に認められた．経時的変化の検討および臨床像との検討において，図6，7に示すように，特にIgG3抗体では抗体価の上昇の時期および程度に個体差が認められ，肺炎例で急性期の抗体価が急激に上昇した例があった．この個体差に影響する因子として年齢を検討した．図8に示すように，肺炎例ではIgG3抗体の高値例は，すべて7歳以上で，7歳未満では急性期，回復期のいずれにも高値例はなく，年齢による違いが認められた．

財．勿感染では，再感染例も認められてお

り18）19），また特異IgG抗体は加齢により健康者の抗体保有率が上昇することが報告されている．乳幼児で特異IgG3サブクラス抗体価が低く，学童例でIgG3抗体高値例と低値例があるのは，乳幼児は〃1勿に初感染である可能性が高く，学童には再感染例が含まれるため，再感染例では，抗体上昇が早期に強く起こるという免疫応答の相違を反映していると考えられる．既ρη感染の発症機序については，細胞性および液性免疫の関与が考えられている．気道粘膜へ吸着した砿勿は直接細胞を傷害するほか，液性抗体による抗原付着細胞に対する細胞融解性障害，免疫複合体による組織炎症，細胞性免疫による感作Tリンパ球による障害を引き起こし20》，細胞性免疫が増悪因子となる可能性もある．液性抗体の感染防御における働きについては，免疫血清やその免疫グロブリン分画の受動免疫についていくつかの報告がある．気道分泌物中の抗体価は感染防御によく対応すると言われる29．ルf．勿22）や砿勿伽0痂15）の検討において，抗体産生の場は肺と所属リンパ節であり，血清抗体はこれらの部位から拡散したと考えられる．血清の特異サブクラス抗体の中でも，受動免疫の働きには差があることが知られており，Taylorらは，ル1．勿1〃zo廊感染マウス回復期血清から精製したIgG1， IgG2 a， IgG2b， IgA抗体をル∫．ρ〃〃zo燃と混合してマウスに経鼻接種した場合，感染は防御され，この急ぎにはIgG、， IgG2 a抗体が最も強く関係したと報告している23）．ル1．勿感染においては，マウスに対する生菌または血清による受動免疫で，IgG抗体について検討されているが24），特異サブクラス抗体における検討はない．今回ヒトにおいて， IgG2およびIgG3抗体は早期に上昇し，主要な抗体であることが確認され，臨床像とも関連があることから，これがル五勿感染防御に何等かの重要な役割を果たしている可能性が考えられた． CF， PHAとの関連をみると， CFはIgG2抗体と，PHAはIgG3抗体とよく相関していた，〃1勿感染は，乳幼児は年長児に比し軽症例が多く，CF， PHAなどの血清反応も乳幼児では二値であることが多いとする報告がある12）．一方低年齢でも

CFとPHAが高値であることもあり，また両者

の抗体価は同一患者において必ずしも同程度に並行して上昇するとは限らない25）．先に述べたごとく，砿勿特異IgG3抗体価は低年齢では低値であり，CF， PHAよりも年齢による明らかな相違が認められ，初感染と再感染における免疫応答の違いを特異的に示していると考えられる．以上，屈勿感染における特異IgGサブクラス抗体の動態について臨床的検討を行った．ル1．勿は細胞壁を持たず，無細胞培地で自己増殖可能な

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最小の微生物と考えられており，その感染における免疫応答がウイルスに近いのか細菌に近いのかは興味のあるところである．今回の著者の実験の結果では，ルノ．勿感染におけるIgGサブクラス抗体は，そのどちらとも異なる反応を示した．IgG2 およびIgG3抗体は，ル∫．勿感染における主要な抗体であるが，年齢，重症度などの種々の因子の影響を受ける．特にIgG3抗体は低年齢では上昇例がなく，高年齢で著しく上昇する例があり，初感染と再感染の違いによる免疫応答の相違の可能性も考えられた．結語ル1．勿感染時に出現するIgG、， IgG2， IgG3， IgG4の各特異IgGサブクラス抗体を，単クローン

性抗ヒトIgGサブクラス抗体を用いたELISA法

で測定し，次の結果を得た． 1．患者血清では，対照に比し，IgG2抗体および IgG3抗体が有意に高値であった． IgG2抗体は発症後1週間前後より上昇を認め，1ヵ月前後で最高となり，2ヵ月後でも有意に高値であった，IgG3 抗体は，発症後2週ごろより有意の上昇を認め， 1ヵ月前後で最高となり，2ヵ月後には低下した． IgG、抗体およびlgG4抗体は有意の上昇を認めなかった． 2．対照においても，1歳以上では各サブクラス抗体で軽度上昇した例があり，感染の既往による抗体保有である可能性が考えられた． 3．IgG2およびIgG3抗体の上昇は，抑制試験の結果よりル1．ρη感染に特異的な上昇であることを証明した． 4．肺炎例では，上気道炎・気管支炎例に比し，急性期のIgG2抗体およびIgG3抗体が高値であった．特にIgG，抗体は急性期肺炎例で有意に高値であった． 5．IgG2およびIgG3抗体は，年長児で高値となる傾向にあり，IgG3抗体は4歳未満で，急性期および回復期ともに全例低値であった．これに対し 7歳以上の肺炎例では，IgG3抗体の著明高値例と低下例が認められ，年齢による差異の一因として再感染例における抗体上昇の差異の可能性も考えられた．

6．CFは急性期および回復期のIgG2抗体と

PHAは急性期のIgG、抗体，回復期のIgG3抗体との間に相関を認めた．稿を終えるにあたり，御指導，御校閲をいただいた福山幸夫教授に深謝いたします．直接の御指導をいただいた横田和子教授，また種々の御教示をいただいた微生物学教室内山竹彦教授に深謝いたします、また研究に御助力下さった平野幸子先生，荒田美奈子先生に深謝致します．また，検体採取や測定においてご協力いただいた工藤不二香検査技師に感謝致します．なお，本論文の要旨の一部は，第20回小児感染症学会，および第92回日本小児科学会において報告した．文献 1）井関幹郎：IgGサブクラスの欠乏症．「小児科医のための免疫学．小児科Mook， No43」（松本脩三編），pp103−110，金原出版，東京（1986） 2）Sd童ロr PH， Rosen F， Rorman ME：Immuno− globulin subclasses in normal children． Pediatr Res 13：181−183，1979 3）Oxelius V：Immunoglobulin G（lgG）subclas− ses and human disease． Am J Med 30：7−18， 1984 4） Hanson I，A，］Bjorkander J， Robbins JB et al： IgG subclass deficiencies． Vox Sang 51：50−56， 1986． 5）石裕一，板倉尚子，広瀬滋之ほか：水痘および水痘ワクチン接種後のVaricella−Zoster virus特異lgG subclass抗体反応の検討．日同誌 90： 1604−1611， 1986 6）Colemau RM， Nahmias AJ， Williams SC： IgG subclass antibodies to Herpes simplex virus． J Infect Dis 151：929−936，1985 7）Linde GA， Hammarstrom L， Persson MAA： Virus specific antibody activ量ty of different subclass of immunoglobulins G and A in cytomegalovirus infections， Infect Immun 42： 237−244， 1983 8）Siber GR， Schur PH， Aisenberg AC et al： Correlation between serum IgG2 concentrations and the antibody response to bacterial polysac− charide antigens。 N Engl J Med 303：178−182， 1980 9）Challacombe SJ， Biggersta貸M， Greenall C et al：ELISA detection of human IgG subclass antibodies to Streptococcus mutans． J Immunol Method 86：92−102，1986 10）Je∬eris R， Reimmer CB， Skvaril F et al： Evaluation of monoclonal antibodles having 一528一

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