バイオリサーチ 7 サービス 7 Cell 321 Testing 329

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サービス

バイオリサーチ

Cell

サービス

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Testing

サービス

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サービス

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サービス はじめに

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Clonetics™

細胞モデル

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Cells on Demand™

バイオマーカー探索サービス

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Cells on Demand™

細胞培養サービス

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Cells on Demand™

遺伝子導入サービス

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Clonetics™

条件的不死化細胞株

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多能性幹細胞サービス

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Testing

サービス 遺伝子組換え生物試験サービス

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Cell

サービス

Cell

サービス はじめに

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Clonetics™

細胞モデル

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Cells on Demand™

バイオマーカー探索サービス

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Cells on Demand™

細胞培養サービス

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Cells on Demand™

遺伝子導入サービス

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Clonetics™

条件的不死化細胞株

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多能性幹細胞サービス

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関連する推進業務 ロンザは、基礎研究から生物製剤の製造に至るまで、多岐 にわたり専門的技術を有すると評価されています。多くの 製薬市場に参入することで既存の技術の限界を見極め、 より優れたソリューションの発見・開発へと取り組んでい ます。 ロンザリサーチソリューションズは、初代細胞の生物学的研 究の分野におけるリーダーカンパニーです。この

10

年間で、 初代細胞の使用は拡大の一途を辿っています。初代細胞は細 胞株よりも取扱いが難しいため、ロンザでは詳細なプロトコ ルを提供しています。研究においては一貫性のあるツールが 重要であることに疑問の余地はありません。 ソリューション ロンザは、製品開発とサービスの改善に注力しています。 – 初代細胞の提供 病変した細胞、幹細胞由来細胞、不死 化細胞、

iPSC

の産生およびバンキング、バイオセンサー を含む細胞、遺伝子導入が困難な細胞への遺伝子導入、 および細胞増殖サービスなど。 – 細胞モデルによる予測の改善 毒性および作用機序を評 価するための細胞ベースのアッセイなど。 – カスタマーの手間を軽減 試薬の製造、

Cells on Demand™

および多能性幹細胞サービス、既存のアッセイを生物 学的に関連のある細胞に適用など。ドラッグディスカ バリーの専門チームが培ってきた細胞生物学分野での多 くの専門的技術をカスタマーに提供。ロンザは、カスタ マーの視線で価値ある製品とサービスを見極め、製品な らびにサービスについてまたカスタマーとさらに議論を 重ねて製品の開発を続けていきます。

はじめに

Disease

Discovery ClinicalTrials Commercial Production

Target

Identification

and Validation

Hit

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ZO-1細胞ジャンクションタンパク質染色像（腎臓上皮細胞）

Clonetics™

細胞モデル

γ-GTPのApical-to-basal発現比較を３ロットの腎臓上皮細胞で行った （2回の独立実験の平均値、N=3） γ

-GTP

は主に先端部で発現 先端および基底外培養細胞におけるrhodamine 123の取り込み。抽出 されたrhodamine 123の平準化は各実験の先端の濃度で行った。結果 は3ロットの腎皮質上皮細胞（N=3）、2回の独立実験の値 有機カチオンの基底部での取り込み 腎臓上皮細胞モデル

Clonetics™

腎臓上皮細胞モデルによって、

in vitro

環境でヒト の腎尿細管機能が再現されます。本モデルは、ヒトの腎皮 質より単離した初代上皮細胞から成り、細胞外マトリック スコートされたポリエステル膜挿入部上に播種されます。 そのため先端と基底部を培地に暴露させることができます。 ■ 利点 – 非形質転換、非不死化型の正常なヒト腎臓上皮細胞 – 先端刷子縁酵素ガンマグルタミルトランスペプチダーゼ （γ

-GTP

）を

14

日間発現 ■ 用途 – 能動・受動輸送の機能 – 腎毒性評価および腎尿細管の生物学的検査 0 2 4 6 8 Apical Uptake Basolateral Uptake of Organic Cations

Basal Uptake Lot 1 Lot 2 Lot 3

Re la tiv e Flu ore sc enc e U ni ts γGTP M ol ar r at io (a pi cal:b as al) 1,000 100 10 1

Lot 1 Lot 2 Lot 3

オーダー情報

–

細胞モデル

カタログ番号 製品名 サイズ

CMS-2000 腎臓上皮細胞モデルプレート上細胞 – ポリエステルTranswell®メンブレン

Renal Epithelial Cell Model Plated cells – Polyester Transwell® Membranes 12 枚

オーダー情報

–

細胞モデル

カタログ番号 製品名 サイズ

CC-3190 _{REGM™ –} 腎臓上皮細胞増殖培地BulletKit™

REGM™ – Renal Epithelial Cell Growth Medium BulletKit™

増殖培地およびSingleQuots™ Kit

BulletKit™

CC-3191 REGM™ – 腎臓上皮細胞基本培地

REGM™ – Renal Epithelial Basal Medium 500 ml

CC-4127 REGM™ – 腎臓上皮細胞増殖培地SingleQuots™ 添加因子および増殖因子

REGM™ – Renal Epithelial Cell Growth Medium SingleQuots™ Supplements and Growth Factors

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Cells on Demand™

バイオマーカー探索サービス

Clonetics™

および

Poietics™

は、正常初代細胞の生物学の分野 で市場をリードするブランドです。近年、病変組織や病変 細胞への関心は高まってきています。これらの細胞は、特 にバイオマーカーの発見、薬物の標的の特定／評価、および

SNP

同定プログラムに使われます。ロンザが提供している バイオマーカー探索サービスは、高品質で関連性の高い疾 患状態モデルのニーズに対応するために誕生しました。 – カスタマイズされた疾患サンプルのソーシングと試験 サービスの提供 – 患者の選定基準、サンプルの収集と輸送、および高度な 実験検査を全面的にカスタマーが指定可能 – サンプルはすべて倫理的に調達されており、その手順は 独立した倫理委員会が評価済み ■ 利点 – 要望に応じてサンプルを収集 – 新鮮、凍結、または

FFPE

サンプルが入手可能 – 治療歴のない患者のサンプルを調達可能 – 受注から納品までの期間が短い：平均

10

∼

12

週間

www.lonza.com/bds

Cells on Demand™

細胞培養サービス

細胞の大量生産や細胞単離サービスに関しては、細胞培養 の専門家に相談し、ロンザの幅広い経験を活用してくださ い。細胞型とフォーマットが選択されれば、残りの業務は ロンザが行います。重要な細胞の調達が間に合わない場 合、極めて重大な損失につながる可能性があります。ぜ ひ、ロンザの優れた細胞培養技術や遅延のない納品をお試 しください。 – 細胞株の大量生産 – 初代細胞の増殖 – 多くの種からの初代細胞の単離 – 様々なフォーマットで細胞を提供 – カスタムで容量と構成を調整した培地を提供 ■ 利点 – 研究者は実験に集中できる – 初代細胞の培養が容易になる – より生物学的関連の高い細胞モデルを適用できる – 単離の失敗や低収量に対する不安を解消 – ロンザの組織調達ネットワークを活用できる

www.lonza.com/cellsondemand

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Cells on Demand™

遺伝子導入サービス

ロンザは、初代細胞や遺伝子導入が困難な細胞株に対し、圧 倒的な遺伝子導入サービスを提供しています。その結果と 専門技術については定評が得られてきています。

Nucleofection™

は、発現研究、

RNAi

ノックダウンと

shRNA

実 験、一過性タンパク質発現、標的スクリーニング、標的検 証 、 お よ び 安 定 型 ク ロ ー ン 作 成 に 使 わ れ て い ま す 。 現 在、

4000

名以上の科学者が、研究目標の達成のために

Nucleofection™

を採用しています。 – 安定型クローン作成

–

プールされたクローンまたは単一 クローン –

Nucleofection™

の最適化プロトコル – 小規模なタンパク質生産から

1

リットルの培養まで対応 可能 – 初代細胞または細胞株における一過的発現 – プレート上で凍結保存され、すぐに使用可能な細胞 ■ 利点 – 経験豊富な科学者による安定型クローンの作成と確認 – 高い遺伝子導入効率と生存率を達成 – 細胞特異的な

Nucleofection™

プロトコル – ロンザの遺伝子導入に関する専門技術を活用することに より時間と費用を節減 – プレート上で凍結保存され、すぐにアッセイ可能な細胞 を用いることにより柔軟な実験計画が実行可能

www.lonza.com/cellsondemand

Jurkat E6.1

における二重安定発現

HUVEC

で誘導可能なレポーター プレート上の凍結細胞

GFPとLuciferaseの発現比較。pmaxFP-greenNとLuciferaseプラスミ ドを共トランスフェクションし、限外希釈法により単細胞分離した

Jurkat E6.1クローン。

HUVEC（Lonza CC-2517）cAMP依存Luciferaseレポーターベクター（pGL4. 29, Promega）をNucleofection™ により一過的に導入し、異なる濃度 のForskolinで処理。

CHO-CRE-Luciferase細胞のForskolin濃度反応曲線。（青）Lonzaが独自 開発したLonza 凍結保護試薬で凍結保存した96-ウェルプレート上細胞。 （ピンク）非凍結コントロール細胞。 0 200 400 600 800 1,000 0 200 400 600 800 1,000 M ean Flu ore sc enc e In te nsi ty RLU

Clone 24 Clone 28 Clone 34 Clone 39 Clone 51 GFP

Inducible Reporter in HUVEC

Luciferase 200 400 600 800 1,000 1,200 Lumin es ce nc e p er w ell

Double Stable Jurkat E6.1

Forskolin concentration (µM) 0 0.5 1 5 10 100 Lumin es ce nc e p er w ell 0 0.5 2.5 5 7.5 10 15 Forskolin concentration (µg) Cryoprotective agent

frozen Cells on Plates

Non-frozen control 1,000 2,000 3,000 4,000 5,000

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Clonetics™

条件的不死化細胞株

条件的不死化 ヒト組織から細胞単離 Large T-antigen、 テロメラーゼを トランスフェクション 温度感受性Large T-antigen、 テロメラーゼ発現 細胞株の構築 不死化により 細胞増殖 正常遺伝子 発現型細胞へ 不死化遺伝子発現型細胞

37°C – Normal phenotype

33°C – Large T-antigen active

37°C – Normal phenotype

Immortalization Switched ON Immortalization Switched OFF 細胞株は、一般的にスクリーニングのモデルに使用されま す。細胞株では、スケールを容易に調節でき、何ヶ月間も 続くスクリーニング期間を通して一貫した生物学的反応が 得られ、バラつきが最小限に抑えられるからです。しかし 細胞株は、しばしば

in vivo

の細胞における関連表現型を欠く という欠点があります。この問題に対処するため、

Clonetics™

の 条件的不死化細胞が開発されました。このユニークな細胞は、 テロメラーゼの効果を活性化したテロメアと特別に改変した温 度制御された

T-

抗原を組み合わせて作成されました。 ■ 利点 – 初代細胞の生物学関連性 – 細胞株の使用が容易 – スケール調節が容易 – ロット間でのバラつきを最小限に抑えられる – 同じ遺伝子型の分化細胞を無制限に供給できる オーダー情報

–

細胞 カタログ番号 製品名 増殖培地 培地カタログ番号 XM13A1 条件的不死化骨格筋芽細胞

Conditionally Immortalized Skeletal Muscle Myoblasts SkGM™-2 CC-3245

XM15B1 条件的不死化骨格筋芽細胞

Conditionally Immortalized Skeletal Muscle Myoblasts SkGM™-2 CC-3245

XA15A1 条件的不死化ヒト前脂肪細胞

Conditionally Immortalized Human Preadipocytes SkGM™-2* CC-3245

XF05C1 不死化ヒト皮膚線維芽細胞

Immortalized Human Dermal Fibroblasts DMEM/M199 + GF** –

XS12C1 不死化ヒト冠動脈平滑筋細胞

Immortalized Human Coronary Artery Smooth Muscle Cells SmGM™-2 CC-3182

XSEL6C1 不死化ヒトリンパ管微小管内皮細胞

Immortalized Human Lymphatic Microvascular Endothelial Cells EGM™-2 MV CC-3202

XSEB113C1 不死化ヒト血液微小管内皮細胞

Immortalized Human Blood Microvascular Endothelial Cells EGM™-2 MV CC-3202

XSKA1B1 条件的不死化ヒト成人表皮ケラチノサイト (クローン)

Conditionally Immortalized Human Adult Dermal Keratinocytes (cloned) KGM™-2 CC-3107

XSKA9B1 条件的不死化ヒト成人表皮ケラチノサイト (プールド)

Conditionally Immortalized Human Adult Dermal Keratinocytes (pooled) KGM™-2 CC-3107

00194607 条件的不死化ヒト脳微小管内皮細胞

Conditionally Immortalized Human Brain Microvascular Endothelial Cells EGM™-2 MV CC-3202

*分化用培地 PT-8002 **FBS, L-グルタミン, GA-1000

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多能性幹細胞サービス

ロンザは再生医療業界における主力供給業者となるための新しい戦略的ビジョンを確立しました。このビジョンを実現するため、多 能性幹細胞革新センターが創設されました。多能性幹細胞（

PSC

）には、人体にある

220

種類以上の細胞を生み出す能力があります。 これらの細胞はこの特徴的性質により、基礎研究、創薬、細胞補充療法において大きな可能性を秘めています。 OCT4SSEA4 NANOG DAPI Alkaline Phosphate Alkaline Phosphate

Differentiation

Differentiation

Reprogramming

Characterization

Characterization

Tissue Acquistion

iPSCs

Growth

Expansion

Growth

Expansion

ロンザのサービスは、多能性幹細胞の組織入手から分化まで の完全な価値連鎖をカバーしています。 ■ 組織入手 – ロンザには、最高の倫理基準および政府規制に従って、 研究グレードおよび

cGMP

グレードの組織を入手する専 門チームがあります。 ■ 再プログラミング – ゼロ・フットプリントテクノロジーを使って、フィー ダーがある条件およびない条件下で、

cGMP

および非

cGMP

の

iPSC

産生を提供します。 ■ 増殖・展開・バンキング – すべての一般的な培地、基質、継代方法を用いたプロトコ ルを確立しています。

PSC

の小規模および大規模の培養お よびバンキングを支援する基盤施設と資源もあります。 ■ 特徴決定 – 解凍効率、マイコプラズマおよび無菌性試験、核型解析、 短タンデム反復遺伝子型分析、多能性マーカーの発現（フ ローサイトメトリーおよび免疫蛍光）、多能性解析（胚様 体および奇形腫形成）などの、多能性幹細胞の特徴を決定 するすべての標準的方法を提供しています。 ■ 分化 –

PSC

由来の運動神経、ドーパミン作動性ニューロン、神経 幹細胞を産生するためのプロトコルを確立しています。ま た、治療上関連する細胞種の分化製品ラインに追加するた めの開発プログラムが進行中です。 ■ 工程開発 – 数年にわたり、ロンザは高純度の機能的細胞種の分化にお いて、専門知識を築き上げてきました。ロンザのチーム は、技術の移行および製造プロトコルの最適化について熟 知しています。 ロンザのPSCサービスは、多能性肝細胞研究やそのcGMP製造への応用の中で、専門知識や能力を築き上げてきました。 研究者は現在、iPSC産生から発生・分化工程に至る当社のPSCサービスを通して、この専門知識を利用することができます。

ロンザiPSCが、DAPI（青）で対比染色したヒトESC関連マーカーである

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Notes

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Testing

サービス

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サービス 遺伝子組換え生物試験サービス

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遺伝子組換え生物（

GMO

）試験サービス

食物連鎖に従った製品の品質および完全性をサポート 欧州規制では、原材料に遺伝子組換え生物（

GMO

）が存在す る場合、最終食品の試験と、生産工程中に使用された原材 料のトレーサビリティーが必要です。食品製造業者は、

GMO

表示規制を遵守しながら、消費者の安全性および健康への 期待にこたえる必要があります。欧州連合は、食品の

GMO

含有量が

0.9%

を超える場合はラベルに表示するよう定めて います。

GMO

試験サービスはロンザ品質管理試験ソリューションから の補完的ビジネスソリューションであり、種子、食品、飼 料、最終製品などの広い範囲の製品で、遺伝子組換えイベン トのスクリーニング、同定、定量を実施します。 ■ 利点 以下により、種子から最終製品に至る製品の同一性を保持し ます。 – 不純物が混入していないことを確認する

GMO

イベントの 有無のスクリーニング – 製品の完全性とブランド価値を保護 – 最終製品の正確なラベル表示のための

GMO

の定量 ■

GMO

試験サービスが提供するもの – 広範囲に及ぶ製品の

GMO

イベントの検出および定量を目 的とした、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（

PCR

） による試験 – 欧州やその他の世界中の地域におけるサービスの提供 – 高い信頼性、再現性、正確性で規制ガイドラインを厳守 – 文書によって記録した社内熟練度試験プログラムが、高 い品質水準と試験完全性を支援

GMO

試験サービス機能に関する詳細情報については、お近 くのカスタマーサービスにお問い合わせください。

www.lonza.com/gmo

Test Name Test Type Turnaround

Time

GMO Alert™ Silver Preliminary Screening of P35S–TNOS

Quantitative Screening 48 hrs GMO Alert™ Gold Rush Screening of P35S-TNOS Quantitative Screening 24 hrs GMO Ultra™

Platinum Identification and Quantification of all Corn and Roundup Ready® Soy Events 48 hrs GMO Ultra™ Maize Identification and Quantification of All

Corn Events 48 hrs

GMO Ultra™ Soy Identification and Quantification of

Roundup® Ready Soy Events 48 hrs GMO Ultra™

Secondary Event Additional Identification and Quantification of all Corn and Roundup Ready® Soy Events after Positive Screening of 700-01 or 700-02

24 hrs

GMO Alert™

Custom Custom Analysis for Other Analysis (tobacco, rapeseed, wheat, etc.) Upon Request